【临床微生物实验】_葡萄球菌属
葡萄菌属的微生物学检验方法与原理
葡萄菌属的微生物学检验方法与原理1.标本采集：根据葡萄球菌感染所致的疾病不同，可采集脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便、痰液以及脊髓液等。
2.检验方法及鉴定（1）直接镜检：无菌取脓汁、痰、渗出物和脑脊液（离心后取沉渣）涂片，经革兰染色后镜检，如为革兰阳性球菌呈葡萄状排列可初步报告为："找到革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌".（2）分离培养：血液标本（静脉血约5ml）注入50ml 葡萄糖肉汤或含硫酸镁肉汤增菌培养，迅速摇匀，以防凝固，置35℃，一般于24h后开始观察有无细菌生长，若均匀混浊，溶血及胶胨状生长，则接种于血琼脂，进一步鉴定，若无细菌生长，于48～72h后自行观察（一般以7天为限），并接种血琼脂，以确定有无细菌生长。
血液标本也可注入商品血培养瓶培养。
脓汁、尿道分泌物、脑脊液离心沉淀物，通常可直接接种血琼脂。
35℃18～24h培养，可见直径2～3mm，产生不同色素的菌落。
金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明的溶血环。
尿液标本，必要时作细菌菌落计数。
粪便、呕吐物应接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂平板，经35℃18～24h培养，可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。
（3）鉴定试验1）触酶试验：细菌产生的过氧化氢酶催化双氧水生成水和氧气，产生气泡。
方法：取营养琼脂上的菌落置于洁净试管内或洁净玻片上，滴加3％H202溶液数滴，观察结果，如立即（1min内）有大量气泡产生为阳性，不产生或气泡量少为阴性。
葡萄球菌属为触酶阳性。
2）血浆凝固酶试验：血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的一种与其致病力有关的侵袭性酶，分游离型和结合型两种。
其作用是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬。
可分别用试管法和玻片法检测。
玻片法用于粗筛，若玻片法为可疑或阴性结果，还需用试管法确证。
使用的血浆为EDTA抗凝兔血浆。
有商品化乳胶凝集试验。
3）甘露醇发酵试验。
4）新生霉素敏感试验：凝固酶阴性的葡萄球菌的鉴别，采用新生霉素敏感试验。
葡萄球菌属检验
1．概述葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。
金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。
2. 标本类型血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3. 鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。
3.2 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的?溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。
在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。
表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。
3.3 生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。
金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。
3.4.2 与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。
3.4.3 与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。
3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。
表1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验菌名凝固酶触酶溶血硝酸盐海藻糖半乳糖苷酶金黄色葡萄球菌金黄色亚种+++++-金黄色葡萄球菌厌氧亚种+-+---施氏葡萄球菌聚集亚种++++-ND中间葡萄球菌++d+++海豚葡萄球菌++++-NDS.lutrae++++++猪葡萄球菌d+-++-注：“+”为90%以上菌株为阳性，“-”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND”为无资料。
3.5 操作步骤3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。
微生物检验学 实验七 病原性球菌的检验
A群溶血性链球菌 S
-
无乳链球菌
R
+
肺炎链球菌和草绿色链球菌的鉴别
菌种
镜下形态
菌落形态
Optochin
肺炎链球菌
矛头状、成对、有荚膜
稍大、扁平、湿润、脐 状
S
草绿色链球菌
圆形、成链、无荚膜
较小、凸起、稍干、圆 形
R
【注意事项】
触酶试验中3％H2O2溶液要新鲜配制，并且不宜用 血琼脂平板上生长的菌落。 凝固酶试验通常用玻片法为筛选试验、如遇凝固酶 试验结果不典型可以用试管法鉴定。 观察胆汁-七叶苷试验结果时，要求至少1/2斜面变 黑才能判断为阳性。
【实验方法】 1、染色镜检 2、分离培养 3、生化反应 葡萄球菌属
触酶试验 凝固酶试验 新生霉素敏感试验
4
链球菌属和肠球菌属
触酶试验 链球菌属
杆菌肽敏感试验 CAMP试验 Optochin敏感试验 肠球菌属 胆汁-七叶苷试验 65g/L NaCl耐受生长试验
胆汁七 生化反应
CAMP试验
主要性状
菌落色素 溶血 血浆凝固酶 触酶 甘露醇发酵 新生霉素
3种葡萄球菌的生化反应结果
金黄色葡萄球菌
金黄色 ＋（β溶血）
＋ ＋ ＋ S
表皮葡萄球菌
白色 － － ＋ － S
腐生葡萄球菌
白色或柠檬色 － － ＋ － R
链球菌属和肠球菌属
A群溶血性链球菌和无乳链球菌的鉴别
菌种
杆菌肽
CAMP
10
实验7 病原性球菌的检验
临床微生物学及检验
医学检验学院 病原生物学教研室
【实验目的】
1.掌握葡萄球菌属、链球菌属和肠球菌属的 菌落形态、染色特点和基本生化反应。
葡萄球菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除葡萄球菌实验报告篇一：微生物实验报告xxx农业大学兽医微生物学实验报告葡萄球菌和链球菌的分离鉴定姓名＿＿＿＿＿＿＿＿＿学号＿＿＿＿＿＿＿＿＿专业班级＿＿＿＿＿＿＿＿＿指导教师＿＿＿＿＿＿＿＿＿葡萄球菌和链球菌的分离鉴定摘要目的：对A.b两种菌种进行分离鉴定主要方法：通过分离培养形态观察生化试验进行鉴定关键词葡萄球菌链球菌分离鉴定引言葡萄球菌，属微球菌科葡萄球菌属，革兰氏阳性菌。
对生长环境要求不高在普通培养基上生长良好，需氧或碱性厌氧，最适培养温度为37摄氏度。
最适ph7.4.在普通培养基上形成湿润光滑隆起边缘整齐的圆形菌落。
多数菌株能分解葡萄糖乳糖麦芽糖蔗糖，产酸不产气;致病菌株可以分解甘露糖，还可以产生血浆凝固酶。
有致病性的葡萄球菌主要是金黄色葡萄球菌，致病性葡萄球菌的鉴定可通过色素颜色，溶血性，过氧化氢酶实验（触酶试验），凝固酶实验，甘露糖发酵试验等鉴定链球菌，革兰氏阳性菌，老龄菌或被吞噬的的细菌或呈现阴性。
呈圆形或卵圆形，直径为0.5～1.0微米，常呈链状或成双排列。
一般致病性链球菌的链比非致病性的链长。
个别菌株有鞭毛，有的菌株有菌毛，幼龄培养物可形成荚膜。
大多数为兼性厌氧菌，少数为厌氧菌。
致病菌对营养要求比较高，普通培养基中生长不良。
在加入血液血清葡萄糖等的培养基中生长良好。
在血琼脂平板上可长成直径约0.1～1.0mm,灰白色表面光滑,边缘整齐的小菌落.多数致病菌落可形成溶血现象.强致病菌可形成β溶血.产生α溶血环的链球菌致病性不强,为条件致病菌.γ型溶血菌落周围无溶血现象,一般不治病.1.材料与方法1.1材料1.1.1两种未知的实验菌种A菌b菌1.1.2培养基的制作材料（1）药品牛肉膏蛋白胨nacI琼脂0.1mol/L和1mol/Lnaoh溶液,0.1mol/L和1mol/LhcI溶液。
（2）仪器天平或台秤，高压蒸汽灭菌器。
（3）玻璃器材移液管试管烧杯量筒锥形瓶培养皿玻璃漏斗。
葡萄球菌的鉴定
血浆凝 固酶
甘露醇 发酵
金葡
表葡
腐生
（4）新生霉素敏感试验
血平板 菌悬液涂布 5ug/L新生霉素纸片 35℃孵育16~18h S:抑菌圈直径>16mm，R:≤16mm
结果 ATCC25923 表葡 S R
腐生
阳性结果 （S）
实验七 葡萄球菌鉴定
检验系微生物教研室
（一）葡萄球菌检验程序
脓液、咽拭子、穿刺液 尿液、痰液脑脊液血液粪便、呕吐 物
直接涂片染色
初报
分离培养 （血平板）
分离培养
增菌培养 （高盐甘露醇 平板）
涂片染色 触媒 血浆凝固酶 甘露醇发酵 耐热核酸酶 其他鉴定试验
取可疑菌落
鉴定试验
药敏试验
报告
（二）目的要求
培养基：血琼脂平板，MH琼脂，甘露醇发酵管 试剂：生理盐水，3%H2O2,EDTA抗凝兔血浆，革兰染液，
新生霉素纸片、头孢西丁、红霉素、克林霉素纸片 其他：酒精灯，接种环，接种针，玻片，显微镜，孵箱等
（四）步骤方法
1.细菌菌落特征观察：
大小 形态 光泽 表面 边缘 透明度 颜色 溶血 金葡 表葡 腐生
玻片法
【操作】取兔血浆和生理盐水各1滴分别滴于载玻 片上，用接种环挑取细菌，混合后观察。
【操作】
试管法
（3）甘露醇发酵试验：
【原理】致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶类， 能发酵甘露醇产酸，培养基由紫色变为黄色。
【操作】细菌分别接种甘露醇单糖发酵管，经35℃ 孵育18-24h观察结果。
【结果】金葡为阳性，表皮、腐生为阴性
H2O2
H2O + O2
实验报告葡萄球菌的种类
实验报告葡萄球菌的种类实验报告：葡萄球菌的种类1. 引言葡萄球菌（Staphylococcus）是一类革兰氏阳性球菌，由属于“葡萄簇大肠杆菌科”这一科的细菌组成。
葡萄球菌被广泛分布于自然界的土壤、水中、人体皮肤、鼻腔等处，并且主要以环境中的细菌形态存在。
本实验旨在研究葡萄球菌的种类，为进一步了解和应对葡萄球菌相关感染提供基础知识。
2. 材料与方法（1）实验室提供的葡萄球菌样本。
（2）营养琼脂平板培养基。
（3）培养皿。
（4）灭菌针。
（5）培养细菌的操作台、培养箱、离心机等设备。
3. 实验步骤（1）从葡萄球菌样本中取一小部分，利用灭菌针将其划入含有营养琼脂的培养皿上。
（2）高温高压灭菌培养皿，以保证培养基的无菌状态。
（3）将培养皿置放在37的培养箱中进行培养。
（4）观察培养皿上的菌落生长情况，并利用形态学特征和生理生化检测手段进行初步鉴定。
（5）若初步鉴定结果显示为葡萄球菌，可进一步进行进化生物学检测。
4. 结果与讨论根据实验结果，我们成功培养出了葡萄球菌的不同种类，并进行了初步鉴定。
通过观察菌落生长情况和形态学特征，我们发现葡萄球菌的种类多样且具有一定差异。
根据生理生化检测结果，我们可以进一步确定具体的葡萄球菌种类。
葡萄球菌根据其对某些抗生素的敏感性以及席菲林的产量，可分为不同的亚种。
例如，金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是最常见的葡萄球菌亚种之一，其在琼脂平板上形成金黄色菌落。
此外，盘尼西林耐药金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）是一种对多种抗生素具有抗性的葡萄球菌菌株。
另外，葡萄球菌根据产生酶的类型可分为凝固酶阳性菌种和凝固酶阴性菌种。
其中，凝固酶阳性菌种表明能够产生凝固酶，如库林葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）和库拉耶葡萄球菌（Staphylococcus saprophyticus）。
医学微生物学实验三
• 盖上平板的盖子，做好标记，放置培养箱内孵育16~18h。
• 下次实验课找到自己的药敏结果，量取抑菌环直径，根据 CLSI（clinical and laboratory standards institute ）标准， 报告细菌对该抗生素敏感(susceptible,S)、耐药(resistant,R) 、中介(intermediate,I)。
MIC：在与微生物生长速率有关的特定时间 间隔内，通常是18－24小时，能够抑制被测菌生 长的最低药物浓度。
抑菌环
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ药物效果越好，抑菌环直径越大；效果越差，抑菌环直径越小。
操作方法
• 无菌挑取孵育16～24h的血平板上4个菌落,沿4个方向均匀抹 无菌M-H琼脂表面，使菌液均匀分布，最后再取一个菌落沿 平板内缘环形涂抹均匀。
直接
涂片镜检 （革兰染色）
接种 血琼脂平板
菌落观察
血浆凝固酶试验
革兰染色
药敏试验 诊断报告
一、脓汁标本中化脓性球菌的鉴定
直接涂片镜检
• 取标本直接涂片，均匀涂成菌膜，自然干 燥，固定后革兰染色，油镜观察。
金黄色葡萄球菌
革兰染色镜检
─────────
形态
排列 染色性
乙型溶血性链球菌
细菌分离培养
• 取一号和二号脓标本，分别接种于血琼脂 平板上，划线分离，37℃培养18~24h后， 观察菌落特征，取单个菌落进行再次革兰 染色镜检。
– 保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏 – 抵抗吞噬细胞的吞噬和消化 – 使感染局限化和形成血栓
游离血浆凝固酶
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定病原菌的鉴定是将一个未知菌株按其生物学特征，经过与所有已知菌种进行比较后到一个已知菌种的分析过程。
根据感染特性选择合适的培养基，首先要明确被鉴定菌种已获得纯培养。
然后确定革兰氏染色性、形态，再按科、属、种逐步鉴定下来。
应该利用已具备的条件，尽可能地缩小鉴定范围，这是在作实验设计时必须想到的，要用最小数量的试验方法作出鉴定。
基于鉴定菌的特点，选用合适的鉴定体系，力求方法学简单，反应判断明确，价廉的方法。
血清学鉴定由于操作简便、快速、特异性高，给细菌学鉴定提供了快速诊断方法。
对培养困难的病原菌，可考虑应用基因水平的鉴定技术。
最后还要提示，对检测人员应把知识和经验运用到每一鉴定步骤。
【球菌】球菌主要引起化脓性炎症，故又称化脓性球菌。
包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌及淋病奈瑟菌等，根据革兰氏染色可将其分为两类，均无鞭毛和芽孢，少数可形成荚膜。
本实验要求了解化脓性球菌的形态特征及染色性、链球菌溶血素“O”试验；葡萄球菌、链球菌及奈瑟球菌的检验程序和主要的鉴定方法；肺炎链球菌Op—tochin敏感试验。
一、葡萄球菌属葡萄球菌属(Staphylococcus)的细菌常堆聚成葡萄串状。
能引起皮肤粘膜、多种组织器官的化脓性炎症，是最常见的化脓性球菌。
有的菌株还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征等，又是医院内交叉感染的重要传染源。
近年来，耐药性菌株逐年增多。
临床上首先要与其他革兰氏阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定及致病性的检测。
[材料]1．菌种：葡萄球菌培养物。
2．培养基：血琼脂平板，普通琼脂平板，甘露醇发酵管，氧化、发酵(OF)管，甲苯胺蓝核酸琼脂。
3．试剂：兔血浆、3％H2O2、致敏胶乳／红细胞制剂。
4．其他：革兰氏染液、玻片、一次性卡片。
[方法]1．形态学观察：取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许，涂片，革兰氏染色，镜检。
可见到葡萄状排列的革兰氏阳性球菌。
临床微生物实验室细菌鉴定指南上
临床微生物实验室细菌鉴定指南（上）录入时间:2010-11-22 10:40:51 来源：温州医学院附属医院一．细菌的鉴定步骤1．鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。
2．对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。
（我们这里一般都是预先纯化培养）3．对待鉴定的菌种进行革兰染色，观察形态（G+c，G–b，G–c，G+b），做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。
要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。
4．按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。
另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。
5．复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。
⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。
首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变细菌对染料的通透性）。
第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ）第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ）第三步：用95%乙醇脱色（染色液Ⅲ）第四步：最后用稀释复红复染（染色液Ⅳ）⑵．触酶实验(H2O2实验)：a.原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。
b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开，滴加3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性）。
要注意不能在血平板上进行实验，这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。
c.阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要避光置4℃冰箱保存。
d.应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实验阳性，链球菌属阴性。
临床常见细菌鉴定实验中我们一般用于区别葡萄球菌属（+），微球菌属（+），链球菌属（－）。
临床常见病原微生物
临床意义
1. A群链球菌，即化脓链球菌：
• 化脓性感染 ：咽炎、脓皮病、丹毒、 蜂窝织炎、坏死性筋膜炎、链球菌毒性 休克综合症、产褥热、淋巴管炎、肺炎 等各种组织系统的感染
Clinical and Laboratory Standard Institution，2008，M100-s18，Vol 28,No.1
10
MRS耐药特征
• 青霉素类 • 头孢菌素类 • 加β-内酰胺酶抑制剂类的复合剂 • 碳青霉烯类 • 氨曲南 • 大部分菌株对氨基糖苷类，喹诺酮类也表
现为高水平耐药
18
病原学检查要点
1. 标本采集 ：标本2h内送到实验室 • 创伤感染：脓液 • 咽部、鼻腔等病灶的棉拭 • 败血症：血液 • 风湿热：取血清作抗链球菌溶血素O抗体测定 • B群链球菌：采集第35～37周妊娠妇女的阴道分泌
物培养 • 肺炎链球菌：采集痰液、脓液、血液和脑脊液等
2.直接检查：无菌体液离心涂片后，革兰染色镜检 初步报告“找到革兰阳性球菌，呈链排列，疑为 链球菌”
•9、要学生做的事，教职员躬亲共做；要学生学的知识，教职员躬亲共学；要学生守的规则，教职员躬亲共守。2021/8/232021/8/23Monday, August 23, 2021 •10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。2021/8/232021/8/232021/8/238/23/2021 3:02:08 AM •11、只有让学生不把全部时间都用在学习上，而留下许多自由支配的时间，他才能顺利地学习……（这）是教育过程的逻辑。2021/8/232021/8/232021/8/23Aug-2123-Aug-21 •12、要记住，你不仅是教课的教师，也是学生的教育者，生活的导师和道德的引路人。2021/8/232021/8/232021/8/23Monday, August 23, 2021
葡萄球菌属D-试验检测及临床应用
【 键 词 】 葡 萄球 菌属 ； Ｉ 试 验 ； 红 霉 素 ； 诱 导 型 克 林 霉 素 关 ） －
中 图分 类 号 ： ４ ６ Ｒ ４ 文献标识码 ： Ａ 文 章编 号 ： ６ ２ ９ ５ （ ０ ９ ０ ０ ９ ０ １ ７ — ４ ５ ２ ０ ） １０ ３ — １
883716824116356429096727833917734819791881818763138911350120910177在皮肤科临床工作中患者如能提供明确的致病原因或诱对疾病的诊断和治疗都有很大的帮助但多数患者不能在病史中提供明确的致敏原或持续接触致敏原而致湿疹迁延难因此斑贴试验作为一项安全有效的辅助诊断方法在慢性湿疹的诊断及防治中都有重要意义本组研究中462例慢性湿疹患者斑贴试验的阳性率高达8550而在性别和年龄上的分布差异无统计学意义提示慢性湿疹患者斑贴试验阳性率与年龄及性别差异无明显关联损局限型患者的斑贴阳性率虽高于皮损泛发型者但差异仍无统计学意义考虑是否与样本不齐有关有待扩大样本量以进一步验证
注： Ｅ为 红 霉 素 ， Ｌ为 克 林 霉 素 ， Ｃ Ｓ为 敏感 。
１２ 仪 器 与 试 剂 德 灵 Ｍｉ ｏ ｃｎ４微 生 物 分 析 仪 及 其 相 配 ． ｃ Ｓ ａ－ ｒ
套 的生 化 鉴 定 板 、 红霉 素 （ ５ 克 ／ ） １微 片 和克 林 霉 素 （ ２微 克 ／ ） 片 由杭 州 天 和 微 生 物 有 限 公 司 提 供 、 ＭＨ 琼 脂 由广 东 环 凯 微 生 物
由表 １ 见 ，６ 可 ３２株 葡 萄 球 菌 中 金 黄 色 葡 萄 球 菌 １ ９株 ， ３ 阴性 葡 萄 球 菌 ２ ３ 。 ２株 ２ ２ 葡 萄 球 菌 Ｉ 试 验 阳性 结 果 见 表 ２ 由 表 ２可 见 ， １ ． ） ＿ 。 １９ 株 葡 萄 球 菌 均 为 红 霉 素 耐 药 ， 林 霉 素 敏 感 。 其 中 ＭＲ Ａ ５ 克 Ｓ ７
临床常见病原菌检验—需氧G+球菌检验(微生物检验课件)
3、鉴定试验
（2）菌属内种鉴定试验：表3-8、表3-9 临床主要鉴定粪肠球菌、屎肠球菌。
第一节 葡萄球菌属
(Staphylococcus)
45种，21个亚种，最常见、最重要的致病菌是 金黄色葡萄球菌
一、生 物 学 性状
（一）形态与染色
G+，球形，无鞭毛、无芽孢， 固体培养基：呈葡萄串状排列 液体培养基：成单、成双或
短链状排列（链球菌）
（二）培养特性
金黄色葡萄球菌金黄色脂溶性色素
表皮葡萄球菌在普通琼 脂平皿上的白色色素
其他鉴定试验
报告
（三）检验方法
1、直接涂片
适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液） 伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等
初步报告： “查见革兰阳性球菌,葡萄状排列，疑为
葡萄球菌”
2、分离培养
血液标本5ml
脑脊液、脓液、
穿刺液、咽拭、
50ml葡萄糖肉汤（增菌）
尿液
粪便、 呕吐物
无菌（7天）
浑浊
血平板
表皮葡萄球菌在血 平板上的白色色素
中等大小，圆形凸起，
不透明、有色、S型菌落。
葡萄球菌菌落形态 （普通琼脂平板）
液体：均匀浑浊生长
表皮葡萄球菌无 溶血环。
金黄色葡萄球菌 有透明溶血环。
耐盐：
10-15% g/L NaCl培养基中生长
选择性平板：
高盐甘露醇平板，致病菌可
分解甘露醇产酸使指示剂
呈淡黄色。
G-菌在此平板上不生长。
实验三_球菌的培养和鉴定_I
表面
葡萄球菌 葡萄球菌
乙型 链球菌
甲型 肺炎 链球菌 链球菌
β溶血环 无溶血环 β 溶血环 α溶血环 α溶血环
血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验可区分致病性 和非致病性葡萄球菌
临床微生物学教研室
实验内容一 生化反应结果观察
2.菊糖发酵试验 【操作】观察第二次课接种的菊糖发酵试验生化管的颜色
变化，大多数肺炎双球菌可以分解菊糖，菊糖发酵产酸， 指示剂呈酸性反应，发酵管由黄色变为紫红色为阳性。
【结果】用以区分肺炎链球菌和甲型链球菌，肺炎链球菌 为阳性，甲型链球菌为阴性。
鉴定试验
次
小白鼠毒力试验
生化结果观察 荚膜染色
结果讨论与分析
第三次
临床微生物学教研室
教学目标与要求
了解：
脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的形态和染色特性
理解：
葡萄球菌属和链球菌属的主要生化反应原理
掌握：
1.葡萄球菌属、链球菌属的检验程序 2.葡萄球菌属、链球菌属的分离培养与鉴定方法
临床微生物学教研室
涂片
接种环
固定
自然干燥
干干燥燥 镜镜检检
复红
复染 30s
95%
脱色30s 乙醇
结晶紫
初染 1min
媒染
碘液
1min
二、将五个标本分别接种至血平板 （分区划线法）
临床微生物学教研室
小结
五株待测菌的主要鉴定结果
性状 革兰染色 菌落、溶血环
1
+，球状， 不规则
2
3
+，球状， +，成双 不规则 或呈链状
4
临床微生物学和微生物检验
实验三 球菌的培养和鉴定Ⅰ
教 员： 顾 江 单 位： 临床微生物学教研室 E-mail: jianggu2012@
鉴别葡萄球菌属和化脓性链球菌属的鉴别流程
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葡萄球菌研究报告范文
葡萄球菌研究报告范文摘要：本研究旨在探究葡萄球菌的生物学特性、感染机制以及对人类健康的影响。
通过实验观察和数据分析，我们发现葡萄球菌具有较强的适应能力和传播能力，且对人类健康产生了一定的威胁。
本研究对于葡萄球菌的防控和治疗具有重要的意义。
一、引言葡萄球菌是一种常见的细菌，广泛存在于环境中以及人体的皮肤和黏膜表面。
尽管大部分葡萄球菌对人体无害，但某些菌株具有致病性，可引发多种感染疾病，包括皮肤感染、淋巴管炎、败血症等。
二、实验方法我们从临床标本中分离到一株致病性葡萄球菌，并通过传代培养获得菌株的纯培养。
然后，我们对葡萄球菌进行了形态观察、生长曲线测定以及生物学特性的分析。
三、结果与分析1. 形态观察：致病性葡萄球菌呈圆形菌落，表面光滑，黏附能力强。
2. 生长曲线测定：葡萄球菌在培养基中呈对数生长，快速繁殖。
3. 耐受性分析：葡萄球菌对低温、高温和酸碱度均具有较强的耐受性。
4. 毒力因子分析：葡萄球菌产生多种毒力因子，包括蛋白酶、溶血素等，可导致细胞损伤和炎症反应。
5. 抗生素敏感性测试：葡萄球菌对某些抗生素具有耐药性，这增加了治疗上的困难。
四、讨论与展望葡萄球菌作为一种常见的致病菌，其感染机制和对人体健康的影响已经得到了初步的了解。
然而，目前对于葡萄球菌的防控和治疗仍面临挑战。
未来的研究可以进一步深入探究葡萄球菌的致病机制，寻找新的治疗方法，并加强公众对于葡萄球菌感染的预防意识。
五、结论本研究对于葡萄球菌的生物学特性和感染机制进行了初步的探究，发现其具有较强的适应能力和传播能力，并对人类健康构成一定的威胁。
进一步的研究将有助于提高葡萄球菌的防控和治疗效果，以保障人类健康。
六、致谢感谢实验室的支持和指导，感谢所有参与本。
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奈瑟菌属 (Neisseria)
莫拉菌属 (Moraxcella)
革兰阳性球菌 革兰阴性球菌
4
第一节 葡萄球菌属
（Staphylococcus）
5
葡萄球菌属是一大类镜下多呈葡萄串样成 堆不规则排列的革兰染色阳性细菌
6
一、分类：有39个种21个亚种 • 引起人类疾病的主要有：
金黄色葡萄球菌（S.aureus) 表皮葡萄球菌(S.epidermidis) 头状葡萄球菌(S.capitis) 人葡萄球菌(S.hominis)
SPA（staphylococcal protein A）
SPA功能
PHAGOCYTE
体内作用： SPA具有抗吞噬作用。
Fc receptor
体外作用：
IgG
SPA
SPA可与IgG的Fc段结合而
不影响Fab段与相应Ag结合。协
BACTERIUM
同凝集试验用于多种微生物抗
协同凝集试验（coagglutination） 原检测
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金黄色葡萄球菌典型菌落 表皮葡萄球菌典型菌落
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鉴定金黄色葡萄球菌的主要试验
1、G+ 球菌、触酶（+） 2、血浆凝固酶试验：结合型、游离型 3、甘露醇发酵（+） 4、耐热核酸酶试验（+） 5、胶乳凝集试验鉴定
DNA酶
24
金葡萄DNA酶试验（+）
25
触酶阳性革兰阳性球菌各属的主要鉴别点
葡萄球菌属
• 根据是否产生血浆凝固酶分为： 凝固酶阳性葡萄球菌(coagulase positive staphylococcus) 凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative staphylococcus ,CNS)
7
二、临 床 意 义
金黄色葡萄球菌（S. aureus）致病力强 致病物质： • 各种侵袭性酶类
第八章 病原性球菌检验
广州医科大学临床微生物检验教研室学习
1
♦球菌（coccus）： 指个体形状呈球形或椭圆形的一大类
细菌，临床上通常引起机体化脓性炎症， 故又称化脓性球菌（pyogenic coccus）
2
通过本节的学习，希望大家能掌握
• 临床常见化脓性球菌种类？金葡菌的主要鉴定要 点有哪些？
多为人体的正常菌群，条件致病， 引起医院感染的主要病原菌
常见种类：
表皮、腐生、人、头状、溶血葡萄球菌等30余种
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CNS多引起医院感染： • 泌尿系感染 • 细菌性心内膜炎 • 败血症 • 术后及植入医用器械引起的
感染
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三、生物学特性
1.形态与染色
球形，无鞭毛，无芽胞 葡萄串状，革兰染色阳性（G＋）
• 金葡菌的主要致病物质和所致的疾病是什么？何 为SPA?
• 葡萄球菌的形态染色和培养特性主要有哪些？ • CNS致病条件和所致疾病主要包括哪些？ • 什么是MRSA?
3
肠球菌属 (Enterococcus)
链球菌属 (Streptococcus)
常见球菌
葡萄球菌属 (Staphylococcus)
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2. 培养条件
需氧或兼性厌氧 营养要求不高 最适生长温度35℃ 最适pH7.4
多数菌株耐盐性强
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培养特性：
金
葡
菌
菌
易培养：普通平板
落
血平板
产色素：金黄色
白色 （脂溶性） 柠檬色
金葡菌一般产生完全
透明β溶血环
表葡菌落
15
金葡菌透明溶血环
16
金葡菌在高盐甘露醇平板菌落
3.生化反应
• 多数菌分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖 产酸不产气。
毒素检查
色素，溶血……
血浆凝固酶 发酵甘露醇 耐热核酸酶 小猫试验
药敏实验 动物实验：对食物中毒患者
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葡萄球菌检验程序
脓汁、分泌物、穿刺液、尿、痰、脑脊液 血 粪、呕吐物
直接涂片
血平板
肉汤增菌
高盐甘露醇
革兰氏染色
可疑菌落
药敏试验
镜检 初步报告
涂片、
耐热 血浆凝固 生化鉴定
G+C、触酶（+） 核酸酶 酶试验
血浆凝固酶、耐热核酸酶、脂酶等 • 多种毒素
葡萄球菌溶素、杀白细胞毒素、肠毒素、 毒素休克综合征毒素、表皮剥脱性毒素
8
金葡萄常引起：
•各种化脓性感染（局部和全身感染） •食物中（肠毒素） •皮肤烫伤综合征（表皮剥脱性毒素） •毒性休克综合征（毒素休克综合征毒素）
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凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative staphylococcus ,CNS)
S.aureus Ab
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5.抵抗力
♥耐干燥、耐盐，对外界因素的抵抗力强于 其他无芽胞菌
♥对碱性染料（龙胆紫）敏感 ♥易产生耐药性，特别对青霉素 ♥耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 （MRSA）
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四、微生物学检验
标本 脓汁，血液，剩余食物，呕吐物等
直接涂片镜检 分离培养
革兰阳性葡萄球菌
生长现象 生化反应
MRCNS(methcillin resistant coagulase negative staphylococci,MRCNS)
2020/10/15
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特点：MRS对 所有β-内 酰胺类抗菌 药物耐药， 常表现为多 重耐药。
2020/10/15
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• MRS耐药机制：
耐药机制：细菌携带ＭecA基因 菌细胞 膜产生与β-内酰胺类抗生素亲合力低的PBP2a 细菌对所有的β-内酰胺类抗生素耐药（青霉 素、 β-内酰胺类+ β-内酰胺酶复合制剂、 头孢菌素、碳青霉烯类、单环β-内酰氨类抗 素等）
B组：头孢洛林、达托霉素、利奈唑胺、多西环 素、米诺环素、四环素、万古霉素、利福平
C组：氯霉素、环丙沙星、莫西沙星、庆大霉素 U组：诺美沙星、诺氟沙星、呋喃妥因、磺胺异
噁唑、甲氧苄啶
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何为 MRS?
2020/10/15
？
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MRS：即对甲氧西林或苯唑西林或头孢西丁耐 药的葡萄球菌。
包 括：
MRSA（methicillin resistant Staphylococcus aureus, MRSA)
触酶 葡萄糖发酵 动力 对杆菌肽耐药 对呋喃唑酮耐药
试验 试验
0.04U纸片
100ug纸片
+
+
-
+
-
微球菌属
+
-
-
-
+
口腔球菌属
V
+
-
-
V
游动球菌属
+
-
+
未定
-
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葡萄球菌属内各菌种鉴定方法
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五、葡萄球菌药敏感试验药物选择
A组（常规首选药物）：苯唑西林、青霉素、阿 齐霉素、克林霉素、复方磺胺甲噁唑、头孢 西丁
• 金葡菌分解甘露醇、耐高盐（10%--15%） • 触酶阳性（与链球菌区分标准） • 腐生葡萄球菌对新生霉素耐药
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4.抗原构造
(1)葡萄球菌A蛋白： 存在于细胞壁的
蛋白质，完全抗原。
capsule peptidoglycan teichoic acid SPA
(2）多糖抗原： 有利于细菌粘附
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