分子生物学实验报告
医学分子生物学pcr实验报告
医学分子生物学pcr实验报告医学分子生物学PCR实验报告一、实验目的•理解PCR原理及其在医学分子生物学中的应用•掌握PCR实验操作流程及技巧•学会分析实验结果并撰写实验报告二、实验原理•PCR是聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction) 的缩写•通过使用DNA聚合酶对特定DNA片段进行指数级扩增•用于诊断疾病、基因检测、基因表达分析等领域三、实验材料•被测样本DNA•引物 (Primer) 对•2x Taq Master Mix•无水乙醇•DNase/RNase-free deionized water•加热式PCR仪•凝胶电泳设备及相关试剂四、实验步骤1.设计并合成引物•根据目标序列选择特异性引物•检查引物的特异性和二聚体形成情况2.准备PCR反应混合液•按照实验设计，计算并配置各试剂的浓度和体积•将样本DNA、引物、2x Taq Master Mix和DNase/RNase-free水混合3.PCR扩增•设定PCR仪的温度和循环次数参数•将反应混合液放入PCR仪，开始扩增4.PCR产物检测•准备1%琼脂糖凝胶，加入适量甲醛•将扩增后的PCR产物进行凝胶电泳•观察电泳结果，分析PCR产物的分子量和条带强度5.结果分析及报告撰写•根据实验结果，分析样本中目标基因的存在与否•撰写实验报告，并对实验过程和结果进行讨论五、实验注意事项•避免引物二聚体的产生，以提高实验特异性•掌握PCR扩增的温度、时间和循环次数参数•减少实验中的污染，以提高实验准确性•正确分析实验结果，避免误判六、实验结果分析•经过PCR扩增后，观察到目标基因片段的明显条带•结果符合预期，证明实验成功•对异常结果进行讨论，分析可能的原因及改进措施七、结论•PCR实验在医学分子生物学中具有重要意义•通过本次实验，我们掌握了PCR实验的操作流程和技巧•实验结果可为疾病诊断、基因检测等提供有力依据Hello! How can I help you today? If you have any questions or need assistance, feel free to ask.。
分子生物学试验报告
分⼦⽣物学试验报告分⼦⽣物学实验报告实验⼀真核基因组DNA的制备与分析⼀、实验步骤1、材料处理（1）取0.5cm的⽼⿏尾巴组织块，⽤⽣理盐⽔洗净，剪碎⾄糜状。
（2）将上述组织碎末加⼊盛有500uL裂解液的2mL离⼼管中，37℃⽔浴1h。
2、⽤蛋⽩酶K和苯酚处理细胞裂解液（1）加50uL蛋⽩酶K，温和的将酶混⼊粘滞的溶液中。
（2）将裂解细胞的悬浮液置于55℃⽔浴3h，不时的温和旋动该粘滞溶液，⾄看不到明显的组织块为⽌。
（3）将溶液冷却⾄室温，加500uL的Tris平衡酚，缓慢的来回颠倒离⼼管⾄两相混合形成乳浊液，于室温以5000g离⼼10min，使两相分开。
（4）⽤⼤⼝径移液管将上层粘稠的⽔相移到⼀洁净的离⼼管中，⽤酚重复抽提2次。
（5）第三次酚抽提后，将⽔相移⾄另⼀离⼼管中，于室温加100uL的10M⼄酸铵和1000uL 的⼄醇，转动离⼼管使溶液充分混合，DNA⽴即形成沉淀，通常可⽤吸管将沉淀从⼄醇溶液中移除。
如果DNA沉淀为碎⽚，则与室温离⼼收集。
（6）DNA沉淀⽤70%的⼄醇洗涤，离⼼收集。
将离⼼管于室温下放置实验台上，直⾄⼄醇挥发殆尽。
不要使DNA沉淀完全⼲燥，否则极难溶解。
（7）待沉淀将近透明后加适量的TE溶解DNA，通常需要12-24⼩时使DNA完全溶解，将DNA 溶液存于4℃.3、DNA琼脂糖凝胶电泳检测（1）制备0.6%的琼脂糖凝胶。
（2）取适量DNA样品，与凝胶上样缓冲液混合，加⾄上述凝胶上样孔内。
（3）取适量标准DNA溶液同样加⾄凝胶上样孔内。
（4）电泳，电压为1V/cm，距离以阳极⾄阴极为准。
（5）电泳结束后，将凝胶放⼊含溴化⼄锭（0.5ug/mL）的⽔中室温浸染10min，⽤紫外灯观察凝胶和照相。
⼆、实验结果如上图所⽰，基因组DNA在0.6%琼脂糖凝胶上跑出30kb左右的单⼀条带（λDNA/Hin d III Marker），但有个别组的样没有明显的条带出现。
三、结果分析提取的基因组DNA⽚段只有30kb左右，偏⼩。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告分子生物学实验报告引言分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手段揭示生命现象的分子机理。
本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。
实验一：DNA复制DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。
本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。
材料：- DNA模板- DNA聚合酶- 引物- dNTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。
结果：通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。
这表明DNA聚合酶能够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。
讨论：DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。
DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。
这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。
实验二：RNA转录RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。
本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。
材料：- DNA模板- RNA聚合酶- 引物- NTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。
结果：凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。
这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。
讨论：RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。
RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。
这种选择性转录是基因调控的关键。
实验三：蛋白质翻译蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关键步骤。
分子生物学实验报告
生命学院09级分子生物学实验报告目录：实验一质粒DNA 的小量制备（P2-P4）实验二DNA 的含量、纯度与分子量的电泳法测定（P4-P7）实验三感受态细胞的制备及转化（P7-P9）实验一质粒DNA的小量制备一、实验目的1．掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法。
2．了解制备原理及各种试剂的作用。
3. 制取质粒以备大肠杆菌的培养和电泳。
二、实验材料及试剂材料：大肠杆菌E.coli，含pBR322质粒。
试剂：1.LB培养基：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，10g/L NaCl，用NaOH调pH至7.3左右。
如固体培养基则添加15g/L琼脂。
2.溶液Ⅰ（pH8.0G.E.T缓冲液）：50 mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris-HCl，10mmol/L EDTA。
灭菌后存放。
3.溶液Ⅱ（0.2mol/LNaOH(内含1％SDS)）：预先配制1％SDS母液，临用前一天晚上加入0.2mol/LNaOH，4℃保存。
4.溶液Ⅲ（pH4.8乙酸钾溶液）：5mol/L乙酸钾60mL、冰乙酸11.5mL、双蒸馏水28.5mL。
5.酚/氯仿液(V/V＝1/1)：酚为重蒸酚，配制时，先将氯仿中加入异戊醇，使其体积比为24:1，然后等量的加入重蒸酚，混匀，并用0.1mol/LTris-HCl (pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，于棕色瓶中存放，并在上面覆盖等体积的0.01 mol/LTris-HCl(pH7.6)，4℃保存。
6.无水乙醇7.70％乙醇8.pH8.0 TE缓冲液：10mmol/LTris-HCl、1mmol/LEDTA，其中含RNA酶20μg/mL。
仪器：恒温培养箱、恒温摇床、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、台式高速离心机、台式小型振荡器、EP管(1.5mL微量离心管)、加样器(20uL～lmL)、吸头。
三、实验步骤从菌落中快速提取制备质粒DNA1．取1.5mL(750uL取两次)菌液置于1.5mL Ep管中，7500rpm离心1min。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告重组质粒的pcr验证（目的基因的pcr扩增）姓名:xxx学号：xxx专业：xxx界别：xxx同组者：xxxx一．实验目的（1）自学掌控pcr反应的基本原理和实验技术。
（2）了解引物设计的基本要求。
1.pcr基本原理聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)，简称pcr，是一种分子生物学技术，用于在体外快速扩增dna，类似dna的细胞内复制过程:由一对引物介导，通过温度的调节，使双链dna变性为单链dna、单链dna能与引物复性（退火）成为引物-dna单链复合物、以及在dntps存在下dna聚合酶能使引物沿单链模板延伸成为双链dna（引物的延伸）；这种热变性-复性-延伸的过程，就是一个pcr循环；一般通过20-30个循环之后，就可获得大量的要扩增的dna片段。
pcr技术的基本原理类似dna的天然激活过程，其特异性依赖与靶序列两端优势互补的寡核苷酸引物。
pcr由变性--淬火--延展三个基本反应步骤形成：①模板dna的变性：模板dna经加热至90~95℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板dna与引物的淬火(复性)：模板dna经冷却变性成单链后，温度降到55℃左右，引物与模板dna单链的优势互补序列接合融合；③引物的延伸：dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的复制链。
经过“变性—淬火—延展”三个过程就可以赢得代莱dna分子，而且这种崭新dna分子又可以沦为下次循环的模板。
因此，变性、淬火和延展循环反复25~30次后，即可从少量的模板dna中扩充出来大量的目的产物。
pcr引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板dna序列，因此，引物的优劣直接关系到pcr的特异性与成功与否。
分子生物学实验报告
PCR扩增HBV-S1.实验原理1.1采用PCR扩增出HBV-S基因。
PCR是一种体外由引物介导的特定DNA序列的酶促扩增技术。
其前提是一对人工合成的15-20bp的寡核苷酸引物，其序列与待扩增的DNA两侧的碱基序列互补。
PCR包括下列三个基本步骤：变性、复性、延伸。
经过上述变性、退火、延伸步骤的25-35次循环，导致特异的靶序列的2n指数扩增。
1.2此次扩增的目的基因用于后续的表达，为了保证碱基不发生错配，不采用无矫正功能的Taq酶，而用高保真酶。
1.3为了使目的基因能和载体正确连接，本次实验选择在目的基因末端加尾（A）的方法。
2.实验目的获得HBV-S基因，为后续克隆做准备。
3.实验材料3.1模板3.2 PCR扩增引物3.3二甲基亚砜3.410×PCR 缓冲液（含Tris-HCl 100mmol/L; MgCl2 15mmol/L 、KCl 500mmol/L, pH8.3，0.1%明胶）3.5脱氧核苷三磷酸dNTPs：配成10mM- dATP，dTTP，dGTP，dCTP各10mM，用NaOH溶液调节至pH8.3。
）3.6水：要求不含DNA聚合酶抑制剂，不含离子，一般为去离子二蒸水（ddH2O）, 灭菌以后即可使用。
4.实验仪器4.1PCR仪Thermo Hybaid4.2水平式琼脂糖凝胶电泳槽4.3恒压电泳仪Bio-Rad4.4凝胶成像仪JY04S—3C北京君毅东方4.5垂直流超净工作台上海智域分析仪器制造有限公司4.6微量加样器5.1获得模板5.1.1取100ul血清，加入50ul裂解液，颠倒混匀，100℃金属浴10min；5.1.2 12000rpm的转速下离心5min；取2ul作为模板。
5.2扩增HBV-S基因（PCR）5.2.1PCR体系材料体积5*buffer 2.5mMdNTP Phire模板HBV-S1 HBV-S2 ddH2O总体积4ul 1.6ul 0.4ul 2ul 1 ul 1 ul 10ul 20 ul5.2.2 PCR设置参数1）98℃预变性30s；2）98℃变性5s、60℃复性5s、72℃延伸10s，循环30次；3）72℃终延伸1min.6.琼脂糖凝胶电泳6.1量取100ml5×TBE电泳缓冲液加蒸馏水至1000ml，配置成0.5×TBE电泳缓冲液；6.2称取琼脂糖3g，加入0.5×TBE电泳缓冲液200ml，加热熔化，当凝胶冷却至60℃左右时，加入溴化乙锭溶液5ul，充分混匀；6.3先用透明胶带封固胶托边缘，放好梳子，然后再倒入凝胶（凝胶厚度在5～10mm左右）；6.4在凝胶完全凝固后，小心移去透明胶带，将凝胶放入电泳槽中，加入电泳缓冲液，再小心取出梳子；6.5取已制备好的DNA样品10ul，加入染料2ul，充分混匀后用移液器将样取加入点样孔，在另一点样孔中，加入maker10ul；6.6盖上电泳槽，打开电源，电泳40～60分钟；（注意：DNA样品从负极向正极泳动）；6.7将凝胶置于紫外仪下观察；将剩余的10ul保存于4℃扩增的HBV-S基因片段长度为750bp框内所标识的条带为本组实验结果（从左置右，前两管的引物体积为1ul，后两管的引物体积为0.5ul）。
分子生物学实训报告
一、实训背景分子生物学是研究生物大分子如蛋白质、核酸的结构与功能的一门学科。
随着生命科学技术的不断发展，分子生物学在医学、农业、环境保护等领域发挥着越来越重要的作用。
为了更好地理解和掌握分子生物学的基本理论和技术，我们开展了为期两周的分子生物学实训课程。
本次实训旨在通过实际操作，加深对分子生物学理论知识的理解，提高实验技能，培养科研素养。
二、实训目的1. 熟悉分子生物学实验室的基本操作规程和安全规范。
2. 掌握DNA提取、PCR扩增、酶切、电泳等分子生物学实验技术。
3. 理解基因克隆、基因表达、蛋白质分析等分子生物学实验原理。
4. 提高团队协作和沟通能力，培养科研素养。
三、实训内容1. 实验室基本操作与安全规范（1）熟悉实验室布局，了解各种仪器的使用方法。
（2）学习实验室安全操作规程，掌握实验室废弃物处理方法。
（3）进行实验前的准备工作，如配制试剂、消毒、无菌操作等。
2. DNA提取（1）了解DNA提取的原理和常用方法。
（2）学习酚-氯仿法提取DNA。
（3）对提取的DNA进行质量检测，如A260/A280比值、琼脂糖凝胶电泳等。
3. PCR扩增（1）了解PCR扩增的原理和步骤。
（2）设计PCR引物，进行PCR反应。
（3）对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。
4. 酶切（1）了解酶切原理和酶切反应条件。
（2）学习限制性内切酶的用法。
（3）进行酶切反应，对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。
5. 电泳（1）了解电泳原理和电泳技术。
（2）学习琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等电泳技术。
（3）对DNA、蛋白质等生物大分子进行电泳分离和检测。
6. 基因克隆、基因表达、蛋白质分析（1）了解基因克隆、基因表达、蛋白质分析的基本原理。
（2）学习相关实验技术，如载体构建、重组表达、蛋白纯化等。
（3）对克隆的基因、表达的蛋白进行检测和分析。
四、实训过程1. 实验前准备（1）查阅相关文献，了解实验原理和操作步骤。
（2）配制实验试剂，确保实验用品齐全。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告实验目的：探究基因在DNA复制过程中的作用及其表达机制。
实验材料与方法：材料：1. DNA模板：提取自大肠杆菌细胞中的质粒DNA。
2. DNA聚合酶：用于合成新的DNA链。
3. 引物：用于DNA聚合酶的引导和定向合成DNA。
4. dNTPs：脱氧核苷酸三磷酸盐，提供新的核苷酸单位供DNA聚合酶使用。
方法：1. DNA复制反应：将DNA模板、DNA聚合酶、引物和dNTPs混合在一起，加入适量缓冲液和镁离子，并在适温条件下进行DNA复制反应。
2. DNA扩增：通过PCR技术，利用引物的特异性，从DNA模板中扩增目标序列。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳：用于分离和检测PCR产物，通过电泳迁移率差异判断扩增产物的大小。
实验结果：1. DNA复制反应成功进行，获得了新的DNA链。
2. PCR反应成功扩增目标序列，观察到明显的放大带。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳显示PCR产物的大小符合预期。
实验分析与讨论：本实验通过模拟DNA的复制过程，成功合成了新的DNA链，并通过PCR技术扩增了目标序列。
这一结果验证了基因在DNA复制过程中的作用。
在DNA复制过程中，DNA聚合酶是关键的酶类。
DNA聚合酶能够识别DNA的模板链，并根据模板链的信息合成新的互补链。
在实验中，添加了引物和dNTPs，引物可以定向和引导DNA聚合酶的合成，dNTPs则提供了能量和碱基单位，支持DNA聚合酶的复制活动。
PCR技术是一种重要的生物分子技术，其通过引物的特异性识别和引导，扩增目标序列。
实验中，选择了适当的引物序列，使其能够与目标序列特异性地结合，并保证扩增反应的特异性和选择性。
PCR反应可以在短时间内扩增大量的目标DNA序列，为后续的分析和研究提供了足够的样品。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的分析方法，通过电场驱动DNA分子在凝胶中迁移，根据分子大小的差异来判断扩增产物的大小。
在实验中，聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示出明显的PCR产物带，与预期的目标序列大小相符，说明PCR扩增反应成功，目标序列得到了扩增。
分子生物学实验报告全解(有图有真相)
分子生物学实验报告慕蓝有志班梦想学院目录实验一细菌的培养 (2)实验二质粒DNA的提取 (4)实验三琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (7)实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (9)实验五聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (11)实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (14)实验七RNA分离与纯化 (17)实验八RT-PCR扩增目的基因cDNA (19)实验九质粒载体和外源DNA的连接反应 (21)实验十感受态细胞的制备及转化 (23)实验十一克隆的筛选和快速鉴定 (25)实验十二地高辛标记的Southern杂交 (27)实验十三阿拉伯糖诱导绿色荧光蛋白的表达 (31)思考题 (32)分子实验心得总结 (33)实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。
二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。
特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。
它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。
当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。
然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。
此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。
培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。
实验室中最常用的是LB培养基。
三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料大肠杆菌（二）试剂1. 胰蛋白胨2. 酵母提取物3. 氯化钠4. 1mol/L NaOH5. 琼脂粉6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等）（三）仪器1. 培养皿2. 带帽试管3. 涂布器4. 灭菌锅5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等）6. 恒温摇床四、操作步骤（一）LB培养基的配制配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：细菌培养用胰蛋白胨10g细菌培养用酵母提取物5gNaCl 10g摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。
分子生物学检验实习报告
实习报告一、实习背景及目的随着生物科学和医学技术的快速发展，分子生物学检验在疾病诊断、治疗和科研等领域发挥着越来越重要的作用。
本次实习旨在通过在分子生物学检验实验室的实际操作，掌握分子生物学检验的基本原理、技术方法和实验操作，提高自己的实验能力和专业素养。
二、实习内容及过程1. 实验室基本原理及操作学习在实习初期，我在导师的指导下，学习了分子生物学检验实验室的基本原理和操作方法，包括实验室的安全操作规范、实验仪器的使用和维护、实验试剂的配制和保存等。
同时，我还学习了实验室常用的分子生物学技术，如PCR、DNA提取、电泳、基因克隆等。
2. 实际操作及实验项目在基本原理和操作学习的基础上，我开始参与实验室的实际操作和实验项目。
我参与了一系列分子生物学检验实验，如基因突变检测、基因表达定量分析、病原体检测等。
在实验过程中，我严格遵循实验操作规程，确保实验数据的准确性和可靠性。
3. 实验数据分析和报告撰写实验完成后，我对实验数据进行了分析和处理，并根据实验结果撰写了实验报告。
在报告撰写过程中，我充分展示了实验设计、实验操作和实验结果的分析，并对实验中遇到的问题进行了总结和反思。
三、实习收获及反思1. 实习收获通过本次实习，我掌握了分子生物学检验的基本原理、技术方法和实验操作，提高了自己的实验能力和专业素养。
同时，我也学会了如何分析和处理实验数据，提高了自己的科研能力。
2. 实习反思在实习过程中，我认识到理论知识与实际操作的重要性。
只有扎实的理论基础和丰富的实际操作经验，才能在实验过程中得心应手，确保实验的顺利进行。
此外，我也意识到团队合作和沟通在实验过程中的重要性。
在以后的学习和工作中，我将更加注重团队合作和沟通能力的培养。
四、实习总结本次分子生物学检验实习让我受益匪浅，不仅提高了自己的实验能力和专业素养，也让我对分子生物学检验有了更深的理解和认识。
在今后的学习和工作中，我将继续努力，不断提高自己的综合素质，为医学事业的发展贡献自己的力量。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告实验二从 cDNA 文库中靶片断扩增（ 4h ）一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。
2.掌握移液枪和PCR 仪的基本操作技术。
二、实验原理：PCR 技术，即聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ，PCR）。
经典的PCR 过程包括：变性（denaturing step ）、退火（annealing step ）和延伸（extension step ）三个步骤。
变性过程，即在高温94℃ ~98 ℃下，模板DNA 双链或经PCR 扩增形成的双链DNA 解离，使之形成两条单链ssDNA 。
随后，模板DNA 与引物的退火（复性）过程中，温度降至55℃左右，特异序列的引物与模板DNA 单链的互补序列配对结合；之后，引物的延伸过程，DNA 模板-引物结合物在耐热的DNA 聚合酶（如：Taq 酶）的作用下，以dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需2～4 分钟，2～3 小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
PCR 反应的成分和作用：总体积：一般为25μ l ～100 μl（一）无Mg2+buffer ：由纯水、kcl 、Tris 组成。
Tris 用于调节反应体系pH 值，使Taq 酶在偏碱性环境中反挥活性。
kcl 可降低退火温度，但不能超过50 mmol/L ，否则会抑制DNA 聚合酶活性。
（二）Mg2+: 终浓度为 1.5 ～ 2.0mmol/L ，其对应dNTP 为200 μ mol/L ，注意Mg2+ 与dNTPs 之间的浓度关系，由于dNTP 与Taq 酶竟争Mg2+ ，当dNTP 浓度达到 1 mmol/L 时会抑制Taq 酶的活性。
Mg2+能影响反应的特异性和产率。
分子生物学实验报告试剂
一、实验背景分子生物学是一门研究生物大分子如核酸、蛋白质等结构与功能的科学。
在分子生物学实验中，试剂的选择和使用对实验结果的准确性至关重要。
本实验报告将详细介绍分子生物学实验中常用的试剂及其作用。
二、实验试剂1. 核酸提取试剂（1）酚/氯仿：用于从细胞中提取DNA和RNA，具有强烈的蛋白变性作用。
（2）异丙醇：用于DNA的沉淀，降低DNA的溶解度。
（3）无水乙醇：用于RNA的沉淀，降低RNA的溶解度。
（4）RNA酶抑制剂：防止RNA降解，保证实验结果的准确性。
2. DNA提取试剂（1）Tris-HCl缓冲液：用于DNA的提取，调节pH值，保持酶的活性。
（2）EDTA：抑制金属离子与DNA结合，防止DNA降解。
（3）SDS（十二烷基硫酸钠）：用于蛋白质的变性，使蛋白质与DNA分离。
（4）蛋白酶K：降解蛋白质，去除蛋白质杂质。
3. DNA纯化试剂（1）琼脂糖凝胶：用于DNA的分离和纯化。
（2）DNA纯化试剂盒：用于DNA的纯化和回收。
4. DNA扩增试剂（1）PCR反应缓冲液：提供反应所需的pH值、盐浓度等。
（2）dNTPs（脱氧核苷三磷酸）：作为PCR反应的原料。
（3）引物：用于PCR反应的特异性扩增。
（4）Taq酶：DNA聚合酶，负责DNA的合成。
5. DNA检测试剂（1）溴化乙锭（EB）：用于DNA的染色，便于在紫外光下观察。
（2）琼脂糖凝胶电泳缓冲液：用于DNA的电泳。
（3）DNA标记物：用于DNA的定量分析。
6. 蛋白质提取试剂（1）裂解缓冲液：用于蛋白质的提取，保证蛋白质的完整性。
（2）蛋白酶抑制剂：防止蛋白质降解。
（3）SDS：使蛋白质变性，便于与核酸分离。
7. 蛋白质纯化试剂（1）柱层析：用于蛋白质的纯化。
（2）凝胶过滤：用于蛋白质的纯化。
8. 蛋白质检测试剂（1）考马斯亮蓝G-250：用于蛋白质的定量分析。
（2）BCA法：用于蛋白质的定量分析。
（3）SDS-PAGE凝胶：用于蛋白质的分离和纯化。
分子生物学实验报告
实验报告科目：分子生物学实验姓名：实验组：学号：单位：学院：生命科学学院班级：201205132012年9月至11月实验一从cDNA文库和克隆质粒中扩增靶片段第一部分准备实验一、介绍实验室的规章制度、注意事项二、准备实验1.分组，分发实验服、试验用具2.讲解注意点：戴手套操作3.准备枪头：装盒，灭菌4.各个型号的EP管和PCR管的灭菌5.双蒸水灭菌6.洗净培养皿、摇菌小三角瓶、试剂瓶等第二部分利用PCR技术从特定质粒中扩增靶片段一、实验目的通过本实验学习PCR反应的基本原理，掌握PCR的基本操作技术。
二、实验原理一）引物的设计：PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。
因此，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。
我们可以归纳十条PCR引物的设计原则：1.引物的特异性引物与非特异扩增序列的同源性不要超过70%或有连续8个互补碱基同源。
2.避开产物的二级结构区某些引物无效的主要原因是引物重复区DNA二级结构的影响，选择扩增片段时最好避开二级结构区域。
3.长度寡核苷酸引物长度为15～30bp，一般为20～27mer。
引物的有效长度：Ln=4（G+C）+2（A+T），Ln值不能大于76，因为>76时，最适延伸温度会超过Taq DNA聚合酶的最适温度（74℃)，不能保证产物的特异性。
4.G+C含量G+C含量一般为40%~60%。
其Tm值是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度，有效启动温度，一般高于Tm值5~10℃。
若按公式Tm=4（G+C）+2（A+T）估计引物的Tm值，则有效引物的Tm为55~80℃，其Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。
5.碱基础随机分布引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。
尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在G+C富集序列区错误引发。
6.引物自身引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹状结构牙引物本身复性。
分子生物学实验报告
分⼦⽣物学实验报告分⼦⽣物学实验报告----绿⾊荧光蛋⽩(GFP)基因的克隆、表达和纯化⼀、实验背景绿⾊荧光蛋⽩（green fluorescent protein，GFP）是⼀类存在于包括⽔母、⽔螅和珊瑚等腔肠动物体内的⽣物发光蛋⽩。
当受到紫外或蓝光激发时，GFP发射绿⾊荧光。
它产⽣荧光⽆需底物或辅因⼦发⾊团是其蛋⽩质⼀级序列固有的。
GFP由3个外显⼦组成，长2.6kb；GFP是由238个氨基酸所组成的单体蛋⽩，相对分⼦质量为27.0 kMr，其蛋⽩性质⼗分稳定，能耐受60℃处理。
1996年GFP的晶体结构被解出，蛋⽩质中央是⼀个圆柱形⽔桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11个围绕中⼼α螺旋的反平⾏β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的，桶的顶部由3个短的垂直⽚段覆盖，底部由⼀个短的垂直⽚段覆盖，对荧光活性很重要的⽣⾊团则位于⼤空腔内。
发⾊团是由其蛋⽩质内部第65-67位的Ser-Tyr-Gly⾃⾝环化和氧化形成。
1996年GFP的晶体结构被解出，蛋⽩质中央是⼀个圆柱形⽔桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11个围绕中⼼α螺旋的反平⾏β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的,桶的顶部由3个短的垂直⽚段覆盖，底部由⼀个短的垂直⽚段覆盖，对荧光活性很重要的⽣⾊团则位于⼤空腔内。
实验使⽤的EGFP蛋⽩取⾃原核-真核穿梭质粒pEGFP-NB3B的蛋⽩质编码序列。
此质粒原本被设计于在原核系统中进⾏扩增，并可在真核哺乳动物细胞中进⾏表达。
本质粒主要包括位于PCMV真核启动⼦与SV40 真核多聚腺苷酸尾部之间的EGFP 编码序列与位于EGFP上游的多克隆位点；⼀个由SV40 早期启动⼦启动的卡那霉素/新霉素抗性基因，以及上游的细菌启动⼦可启动在原核系统中的复制与卡那抗性。
在EGFP编码序列上下游，存在特异的BamH I及Not I限制性内切酶位点，可切下整段EGFP编码序列。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告学院班级：创新生技1802班姓名：闫茜茜学号：2018015239第一部分：Southern杂交一、概述：通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。
该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA指纹分析和PCR产物判断等研究中。
其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。
实验整个过程包括质粒DNA的提取、酶切和扩增，地高辛标记的Southern 杂交（探针的标记、Southern转移、Southern杂交、BCIP/NBT显色检测法）。
二、基本步骤与方法：2.1 待测DNA样品的制备2.1.1质粒DNA的提取利用质粒小提试剂盒（离心柱型）从大肠杆菌DH5α提取质粒，将质粒收集到离心管中，取6μL提取好的质粒与2μLloading buffer均匀混合，进行琼脂糖凝胶电泳检测。
2.1.2质粒DNA的酶切将 ddH2O（10μL），酶切 Buffer（10×，3μL），质粒（15μL），EcoRI酶液（2μL），加入一个离心管，离心 10000rpm×2min，置于37℃培养箱培养2h以上。
取出后在管中加入 3μL Loading Buffer，与加了3μL Loading Buffer的质粒一对一点样、跑电泳并分析鉴定。
2.1.3 PCR 扩增所采用引物是PBGD片段两边序列的非特异性引物 M13F/R，加入试剂并小心混匀。
PCR反应94℃ 180s，32cycles（94℃ 45s，55℃ 45s，72℃ 45s），72℃ 600s，反应结束后取 20μL PCR 产物进行1％琼脂糖凝胶电泳分析。
2.2 地高辛标记的Southern杂交2.2.1探针标记取PCR 扩增产物于离心管，将DNA置于沸水浴中 5min 热变性，然后迅速插入碎冰3min ，加入4μL DIG Random Labeling Mix（高效），置37℃培养24h。
分子生物实验员实习报告(最新版)
分子生物实验员实习报告一、实习背景作为一名大学生，我非常珍惜每一次实习的机会，以期在实践中不断提高自己的专业能力和综合素质。
此次实习，我来到了海南生物公司分子生物学部，担任实验员一职，主要负责分子生物学相关实验，包括基因克隆、载体构建、DNA及RNA等相关工作，以及分子生物学相关数据整理分析、实验室各项记录的汇总和审查，还有各种表达系统蛋白的纯化及其他蛋白方面的相关实验设计和实施。
二、实习内容1. 分子生物学相关实验在实习期间，我参与了一系列分子生物学实验，如基因克隆、载体构建、DNA及RNA等相关工作。
这些实验让我更深入地理解了分子生物学的基本原理和方法，同时也锻炼了我的动手能力和实验技能。
2. 数据整理分析除了实验操作，我还负责分子生物学相关数据的整理分析。
这包括对实验数据的收集、整理和分析，以及撰写实验报告。
通过这个过程，我提高了自己的数据分析能力，也对分子生物学实验有了更深刻的理解。
3. 实验室记录汇总和审查我还需要负责实验室各项记录的汇总和审查。
这包括对实验记录的整理、归档和审查，以确保实验室工作的规范性和数据的可追溯性。
4. 蛋白纯化及其他蛋白方面实验此外，我还参与了各种表达系统蛋白的纯化及其他蛋白方面的相关实验设计和实施。
这让我对蛋白纯化和蛋白功能有了更深入的了解，同时也提高了我的实验设计能力和实验操作技能。
三、实习感悟通过这段实习经历，我对分子生物学实验有了更深入的理解和掌握，同时也锻炼了自己的动手能力和实验技能。
此外，我还学会了如何整理和分析实验数据，以及如何规范地记录和审查实验室工作。
这些经验对我未来的学习和研究工作都将产生积极的影响。
四、实习总结这次实习让我收获颇丰，不仅提高了我的专业能力，也让我对分子生物学实验有了更深入的理解。
我相信，这次实习将对我的未来学习和研究工作产生积极的影响，我会继续努力，不断提高自己的专业素养。
分子生物学检验室实习报告
实习报告一、前言在过去的三个月里，我有幸在分子生物学检验室进行实习。
在此期间，我不仅学到了分子生物学实验的方法和技术，还深刻体会到了实验室工作的严谨和细致。
本文将对我实习期间的学习和体会进行总结，以期对今后的学习和工作有所启发。
二、实习内容1. 实验技能的学习在实习期间，我参与了分子生物学实验室的日常工作和多个实验项目。
通过实习，我掌握了实验室的基本操作技能，如细胞的培养、DNA的提取、PCR技术的应用等。
同时，我还学会了使用各种分子生物学仪器，如PCR仪、凝胶成像仪、离心机等。
2. 实验项目的参与在实习期间，我参与了多个实验项目，如基因克隆、基因表达、基因突变检测等。
通过实际操作，我深入了解了实验原理和实验步骤，并学会了如何处理实验数据和撰写实验报告。
3. 实验室管理在实习期间，我了解了实验室的日常管理工作，包括实验室安全管理、实验耗材的采购和保管、实验室设备的维护等。
通过参与实验室管理，我认识到实验室工作不仅要注重实验技术的学习，还要关注实验室的运营和管理。
三、实习收获1. 提升了实验技能通过实习，我的分子生物学实验技能得到了很大的提升。
我学会了如何设计实验、如何处理实验数据、如何撰写实验报告。
这些实验技能对我今后的科研工作具有很大的帮助。
2. 增强了团队协作能力在实习期间，我与实验室的其他成员密切合作，共同完成各项实验任务。
通过团队协作，我学会了如何与他人沟通、如何协调工作、如何解决问题。
这些团队协作能力对我今后的职业生涯具有很大的意义。
3. 培养了对科研的兴趣实习期间，我深入了解了分子生物学的研究内容和前沿动态。
我发现自己对分子生物学的研究充满了兴趣，并决心将来继续深造，从事分子生物学方面的研究。
四、实习体会通过这次实习，我深刻体会到了实验室工作的严谨和细致。
在实验过程中，每一个步骤都关系到实验结果的准确性，因此必须严格按照实验规程进行操作。
同时，实验过程中可能会遇到各种问题，如实验失败、数据异常等，这时需要冷静分析问题，积极寻找解决办法。
分子生物学实验技术
《分子生物学实验技术》实验报告实验一碱裂解法小量提取质粒DNA一、实验原理在碱性环境中，细菌膜破裂释放内容物。
染色体DNA变性分开，而质粒DNA虽变性但仍处于缠绕状态。
将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。
通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，最后用酚、氯仿抽提纯化得到质粒DNA。
二、操作步骤主要步骤1.细菌的培养2.细菌的收集和裂解3.质粒DNA的分离和纯化4.质粒的鉴定具体操作如下：1. 取1.5 ml过夜菌液于EP管中，12 000 r/min离心1min，弃去上清液。
2. 加100 μl 溶液Ⅰ，剧烈震荡使菌体悬浮均匀，室温放置5min 。
3. 加200 μl 溶液Ⅱ（现配现用），轻柔颠倒混匀4~6次，室温放置5min 。
4. 加150μl预冷溶液Ⅲ，轻柔颠倒混匀4~6次，冰上放置10分钟。
5. 12 000 r/m离心10 分钟(如果上清液仍然浑浊，可将上清液移出，再次离心5分钟）。
6. 吸出上清液，加2.5倍体积的无水乙醇，混匀，室温放置10分钟，12 000r/min离心10分钟，沉淀DNA 。
7. 弃上清，挥干，所得DNA溶于30μlddH2O中，用于后续试验。
三、实验结果获取极少量白色固体，主要为DNA，也不排除有蛋白质等杂质，但是不影响后续实验的继续进行。
实验二氯化钙法进行质粒转化及筛选一、实验原理细菌处于0 ℃，在CaCl2低渗溶液中，菌体细胞膨胀成球形，DNA则与CaCl2形成抗Dnase的羟基－磷酸钙复合物粘附于细胞表面，经42 ℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖，重组子的基因在被转化的细菌中得到表达，在选择性培养基平板上，可选出所需的转化子。
1. 氯化钙（二价钙离子）的作用：提高细胞壁（膜）的通透性。
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分子生物学综合实验实验报告本次试验报告分为三个部分：第一：每个基本实验的目的，原理，材料，试剂与仪器。
第二：以GFP质粒，P38质粒，植物DNA和植物RNA为材料的四个综合试验的实验过程。
第三：试验总结。
第一部分：每个基本实验的目的，原理，材料、试剂与仪器：质粒DNA的提取一、目的学习碱裂解法提取质粒的原理二、原理质粒是一种染色体外的稳定遗传因子，具有双链闭环结构的DNA分子。
它具有自主复制能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。
目前，经人工改造的质粒已广泛用作基因工程中目的基因的运载工具——载体。
质粒DNA的提取是依据质粒DNA分子较染色体DNA分子小，且具有超螺旋共价闭合环状的特点，从而将质粒DNA与大肠杆菌染色体DNA分离。
现在常用的方法有：碱裂解法、密度梯度离心法、煮沸裂解法等。
实验室普遍采用的碱裂解法具有操作简便、快速、得率高的优点。
其主要原理：利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。
在碱变性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=4.8的乙酸钠将其pH调到中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的构型，而染色体DNA不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA与大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料含质粒的大肠杆菌DH5α（二）试剂1. LB液体培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，溶解于1000mL蒸馏水中，用NaOH调pH至7.0。
高压灭菌20分钟。
2. LB平板培养基：在每1000mL LB液体培养基中中加入15g琼脂，高压灭菌20分钟。
3. 溶液Ⅰ：50mmol/L 葡萄糖,10mmol/L EDTA,25mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)。
4.溶液Ⅱ：0.2mol/L NaOH,1% SDS。
（必须新鲜配制）5.溶液Ⅲ：pH4.8的醋酸钾溶液（5mo1／L乙酸钾60 ml，冰乙酸11.5 ml，水28.5ml）。
6. TE缓冲液（pH 8.0）：10 mmol/L Tris-HCl,1mmol/ L EDTA。
7. 无水乙醇和70%乙醇。
（三）仪器1. Eppendorf管、离心管架2. 10，100，1000μl微量加样器3. 台式高速离心机4. 摇床、高压灭菌锅琼脂糖凝胶电泳法检测DNA一.目的学习琼脂糖凝胶电泳，检测DNA的纯度，DNA的构型，含量以及分子量的大小。
二.原理琼脂糖凝胶电泳是基因工程操作中最常规的实验方法，它简单易行，只需少量的DNA 就能检测。
其原理是溴化乙啶在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳时，琼脂糖凝胶中的EB就插入DNA分子中形成荧光络合物；使得DNA发射的荧光，增强几十倍。
而荧光的强度正比于DNA的含量，如将已知浓度的标准样品做琼脂糖凝胶电泳的对照，就可比较出待测样品的浓度。
电泳后的琼脂糖凝胶块直接在紫外光下照射拍照，只需5~10ng DNA，就可以从照片上比较鉴别。
如肉眼观察，可检测到0.01~0.1ng的DNA。
在凝胶电泳中，DNA分子的迁移速度与分子量的对数值成反比。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应，前者由分子所带净电荷的多少而定，后者则主要与分子大小及构型有关。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电荷。
在电场中向着正极移动，在用电泳法检测DNA分子时，应当尽量减少电荷效应。
增加凝胶的浓度可以在一定程度上降低电荷效应，使得分子的迁移速度主要由分子受凝胶阻滞程度差异所决定，提高分辨率。
同时适当降低电泳时的电压，也可以使分子筛效应相应增强而提高分辨率。
当然也可以用同样的方法检测RNA。
三、试剂与主要仪器（一）试剂1. DNA样品2. TBE缓冲液（5×）：用时需稀释10倍（配制见附录）3. 点样缓冲液Loading buffer（10×）：0.25%溴酚蓝，40%甘油4. 溴乙啶(EB)：10mg/ml溴乙啶（注意：该试剂具致癌作用，用时要小心）5. 琼脂糖（二）仪器1. 电泳仪系统2. 紫外灯3. 恒温水浴箱质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定一、目的学习质粒的酶切及电泳分析。
二、原理限制性内切酶可以识别双链DNA特定位点，并产生特异的切割，形成粘性末端或平末端，这样有利于DNA片段再连接。
限制性内切酶对环状质粒DNA有多少切点，酶切后就能产生多少个片段。
因此，鉴定酶切后的片段在电泳凝胶的区带数，就可以推断切点的数目；从片段迁移率的大小可以判断酶切片段大小的差别。
用已知相对分子量DNA为对照，通过电泳迁移率的比较，可以粗略地测出分子形状相同的未知DNA的相对分子质量。
质粒DNA在细胞内有三种构象：①共价闭环DNA，常以超螺旋形式存在；②如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，形成开环DNA；③线状DNA，双链DNA断开成线状。
电泳时，三种构象中，共价闭环DNA迁移率最大，其次是线状DNA和开环DNA。
因此在本实验中，质粒在电泳中呈现2~3条区带。
三、试剂与主要仪器（一）试剂1.EcoRⅠ酶2.λDNA3.TBE缓冲液（5×）：用时需稀释10倍4.点样缓冲液Loading buffer（10×）：0.25%溴酚蓝，40%甘油5.溴乙啶(EB)：10mg/ml溴乙啶（注意：该试剂具致癌作用，用时要小心）6.琼脂糖（二）仪器1.电泳仪系统2.紫外灯3.恒温水浴箱聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA一、目的1.学习PCR反应的基本原理和实验技术。
2.了解引物设计的一般要求。
二、原理聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是体外酶促合成DNA片段的一种技术。
利用PCR技术可在数小时之内大量扩增目的基因或DNA片段，以用于基因工程操作。
PCR进行的基本条件：⑴DNA模板（在RT-PCR中模板是RNA）⑵引物⑶dNTP（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）⑷Taq DNA聚合酶⑸反应缓冲体系PCR循环由三个步骤组成：⑴变性使模板DNA解离成单链；⑵退火使引物与模板DNA所需扩增序列结合；⑶延伸DNA聚合酶利用dNTP合成与模板碱基序列互补的DNA链。
每一个循环的产物可作为下一个循环的模板，通过30个左右循环后，目的片段的扩增可达106倍。
引物设计：要保证PCR反应能准确，特异，有效的对引物DNA进行扩增，通常引物设计要遵循以下原则：⑴引物长度：15~25个核苷酸；⑵GC含量为40%~60%；⑶Tm值为55℃（Tm=4（C+G）+2（A+T）计算；⑷引物与非特异配对位点的配对率小于70%；⑸引物自身配对形成的茎环结构，茎的碱基对小于3，⑹两条引物间配对碱基数小于5个。
由于影响引物的设计的因素比较多，所以常常利用计算机来辅助设计。
本实验以实验二中提取的质粒DNA为模板，进行PCR扩增，大量得到目的DNA片段。
三、试剂与仪器（一）试剂1. Taq DNA聚合酶2.10×反应缓冲液（含25mmol MgCl2）3.dNTP4.引物（P1、P2）5.溴乙啶(EB)：10mg/ml溴乙啶。
注意：该试剂具致癌作用，用时要小心。
6.点样缓冲液Loading buffer（10×）：0.25%溴酚蓝，40%甘油。
（二）仪器1. PCR扩增仪2.电泳仪3.台式离心机4.紫外分析仪5.恒温水浴6.凝胶成像系统植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析一、目的掌握植物基因组DNA提取的一般方法及注意事项。
大分子量DNA分子的酶切分析。
二、原理十六烷基三甲基溴化胺（CTAB）是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中是可溶的,当降低溶液盐浓度到一定程度时,从溶液中沉淀。
在本实验方案中，首先通过含有CTAB高盐抽提液使DNA充分溶出，然后加入氯仿使蛋白和细胞碎片沉淀，离心后，溶液分为三层，上层为CTAB与核酸的复合物的高盐溶液，中层为蛋白质和细胞碎片，下层为氯仿。
取出上清加入异丙醇使核酸沉淀。
由于CTAB能溶解于乙醇，在洗涤过程中CTAB即可被除去。
三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料小麦幼苗（二）试剂1. DNA 抽提液用时将下述三种溶液按1:1:0.4 (V/V)比例混匀，加入亚硫酸氢钠（3.8g/L），即为抽提液。
① DNA extraction（500ml）：31.885g sorbitol (山梨醇)6.05g Tris pH8.2 (一般不调)② Nuclei lysis buffer（500ml）:100ml 1M Tris pH7.5100ml 0.25M EDTA200ml 5M NaCl10g CTAB100ml ddH2O③ 5% sarkosyl (N-月桂酰肌氨基钠盐) 500ml2.氯仿：异戊醇（24：1）3 70% 乙醇4.异丙醇5.HindIII酶6.EcoRⅠ酶（三）器材1.台式离心机2.恒温水浴3.紫外分析仪4.微量加样器RNA分离与纯化一、目的掌握RNA提取的基本技术，了解RNA提取过程中的各种注意事项。
二、原理RNA提取是分子生物学实验中难度较大的实验技术。
RNA提取和DNA提取有类似的地方，因为它们都是核酸，都具有较好的水溶性。
提取RNA首先破碎细胞，然后用提取液将RNA溶出，反复抽提去除蛋白质，加入乙醇沉淀RNA，将RNA沉淀溶解备用。
那么如何区分DNA和RNA分开？DNA和RNA的溶解性不同，DNA在1M的盐溶液中具有最好的溶解度，而RNA在0.14M的盐溶液中具有最好的溶解度，所以可以利用它们的溶解性将它们进行区分。
另外，RNA的分子量一般比较小，而DNA 分子很大且和蛋白结合成复合体，所以DNA更容易随蛋白沉淀，而RNA具有较好的溶解性。
RNA提取的另一个关键问题就是如何抑制或去除环境中RNA酶。
所有的玻璃、陶瓷和铁器具在180℃×6 h以上。
所有的塑料器皿用0.1％的DEPC水37℃过夜浸泡，然后湿热灭菌80℃烘干备用。
配制溶液所需的水也要用DEPC处理过的水，而配置Tris相关的缓冲液时Tris会与DEPC发生反应，应避免用DEPC处理。
另外操作过程中应戴手套。
判断RNA 的质量主要有两个标准，一是纯度，二是完整性（是否被降解）。
RNA的纯度可以通过分光光度计进行测定的A260／A280值来判断。
RNA的完整性主要通过电泳分析来阐明，未降解的总RNA电泳时在凝胶中会出现18S和28SrRNA对应的条带（如果有DNA污染则在RNA后会发现基因组DNA对应的条带）。