多柔比星长循环脂质体经乳腺导管注射后患者体内血药浓度变化的研究_陈喆

为(118±016),(314±018),(215±015)h 。

本试验与该研究相同剂量组ρmax 结果接近,AUC 0212明显小于该试验的结果。

该试验结果表明,其各剂量组间
t 1/2有显著差异,而本试验中12名健康志愿者注射
不同剂量的兰索拉唑后,各剂量组间t 1/2无显著差
异。

国外已上市注射用兰索拉唑(PREVAC I D λI 1V )说明书中报道静脉滴注兰索拉唑30mg 后(滴
注时间大于30m in ),ρmax 为(1170±
0129)mg ・L -1
,AUC 0212为(312±017)mg ・h ・L -1
,t 1/2为(113±
015)h 。

本试验中单剂量注射兰索拉唑30mg (滴注
时间30m in )所测得ρmax 、
AUC 0212与国外报道接近,所测得t 1/2明显大于国外报道结果。

此外,本试验发现,不同受试者间,同一时间点血浆药物浓度也存在较大差异。

以上结果提示兰索拉唑体内动力学特征在不同人种以及同一人种的不同个体间存在较大差异。

分析原因可能与兰索拉唑的主要代谢酶美芬妥
因4′2羟化酶(CYP2C19)的基因多态性有关[8]
,该酶在不同基因型个体中活性不同,导致了兰索拉唑在不同基因型个体中代谢快、慢的差异。

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(收稿日期:2010203216)
作者简介:陈喆,女,主管药师 研究方向:医院药学 3通讯作者:梅丹,女,主任药师 研究方向:医院药学 Tel:(010)65296527 E 2mail:meidanpumch@yahoo 1com 1cn;gigiduck@s ohu .com 多柔比星长循环脂质体经乳腺导管注射后患者体内血药浓度变化的研究
陈喆
1,3
,梅丹
23
,戴媛媛3,汤致强
3
(11中国医学科学院2北京协和医学院,北京100730;21中国医学科学院2北京协和医学院北京协
和医院药剂科,北京100730;31中国医学科学院肿瘤医院药剂科,北京100021)
摘要:目的　探讨多柔比星长循环脂质体经乳腺导管给药后患者体内血药浓度变化的情况。

方法　15名女性乳腺癌患者随机分为50、20、10mg 3个剂量组,经乳腺导管给药,于规定的时间点采集外周静脉血,通过本实验室建立的高效液相荧光检测法测定血药浓度。

结果　低剂量和中剂量组血样采集时间最长至给药后96h,给药后72h 血药浓度平均值分别达到852191和1148159ng ・mL -1,高剂量组血样采集至用药后72h,血药浓度平均值达到3921188ng ・mL -1。

结论　患者体内血药浓度与多柔比星长循环脂质体乳腺导管给药量之间存在正相关性;与传统的外周静脉滴注相比,经乳腺导管给药后,多柔比星长循环脂质体呈现不同的药动学特征。

关键词:多柔比星长循环脂质体;给药方式;血药浓度;高效液相色谱法
中图分类号:R969111 文献标志码:A 文章编号:1001-2494(2010)20-1585-04
Pl a s ma Concen tra ti on of D oxorub i c i n after I n traduct a l Ad m i n istra ti on of D oxorub i c i n L ong 2C i rcul a ti n g L i 2poso m e i n Pa ti en ts w ith Brea st Cancer CHE N Zhe
1,3
,ME IDan
23
,DA I Yuan 2yuan 3,T ANG Zhi 2qiang 3
(11Peking U nion M edical College,Chinese A cade m y of M edi 2
cal Science,B eijing 100730,China;21D epart m ent of Phar m acy,Peking U nion M edical College Hospital,Peking U nion M edical Col 2lege,Chinese A cade m y of M edical Science,B eijing 100730,China;31D epart m ent of Phar m acy,Cancer Institute &Hospital,Chinese
A cade m y of M edical Science,
B eijing100021,China)
ABSTRACT:O BJECT I VE　To study the distributi on of doxorubicin in hu man bl ood after intraductal ad m inistrati on1M ETHOD S　Doxorubicin l ong2circulating li pos ome was given thr ough intraductal ad m inistrati on in three different dose gr oup s of10,20and50mg t o 15fe male breast cancer patients random ly,and bl ood was collected and the concentrati on was deter m ined by HP LC with fluorescence detect or1RESUL TS　I n the gr oup treated with l ow and m iddle doses,the bl ood sa mp les were collected f or96h after ad m inistrati on, and the average p las ma concentrati ons at96h were760126and1199190ng・mL-1res pectively1I n the gr oup treated with high dose, the bl ood samp les were collected f or72h after ad m inistrati on,and the average p las ma concentrati on of doxorubicin was3921188ng・mL-1at72h1CO NCL US I O N　The p las ma concentrati on of doxorubicin was positively correlated with the dosage1Compared with in2 travenous injecti on,the phar macokinetic p r ofile of doxorubicin l ong2circulating li pos ome shows significant difference1
KE Y WO R D S:doxorubicin l ong2circulating li pos ome;intraductal adm inistrati on;p las ma concentrati on of medicati on;HP LC
多柔比星为蒽环类抗肿瘤抗生素,对多种实体瘤如肝癌、乳腺癌、淋巴肉瘤、骨肉瘤、胃癌、食管癌等均有抗肿瘤活性。

但外周静脉注射多柔比星普通制剂易产生心脏毒性、骨髓抑制等严重不良反应,患者耐受性不好,限制了其在临床上的使用。

多柔比星长循环脂质体组成中含有亲水性聚合物甲氧基聚乙二醇(M PEG),可以延长药物在血循环中的时间,此制剂的半衰期长,有靶向性,与普通制剂相比不良反应明显减少[124]。

虽然如此,通过外周静脉滴注给予此药物仍可引起骨髓抑制、恶心、呕吐等多种全身性不良反应[5],本试验试图探索新的给药途径,达到增强药物疗效,减轻不良反应的目的。

本试验通过建立简单、灵敏的高效液相荧光法测定患者血浆中多柔比星总浓度,对经乳腺导管给药后药物在患者血液中的动态变化进行初步分析,为临床制定合理的用药方案提供药学支持。

1　材　料
111　药品与试剂
对照品多柔比星(9714%,批号1305092 200301);内标柔红霉素对照品(9110%,批号1305592200501)购于中国药品生物制品检定所;多柔比星长循环脂质体(美国先灵葆雅制药公司,批号062133308);阿霉素醇(>95%,批号AQ666, Qventas公司)。

甲醇、乙腈为色谱纯;异丙醇、磷酸、三乙胺等其他化学试剂均为国产分析纯。

112　仪器
高效液相色谱系统:515泵,717自动进样器,柱温箱,474荧光检测器,Enpower色谱工作站(美国W aters公司);低温冰箱(Sanyo公司)、A llegra21R 低温离心机(Beck man公司),M illi pore超纯水系统, AB135-S电子天平(梅特勒2托利多公司)。

2　方法与结果
211　试验设计
本试验按照试验方案共入选15名具有手术指征的女性乳腺癌患者,随机分入低、中、高3个给药剂量组,给药剂量分别为10、20、50mg,经乳腺导管给予试验药物,分别于给药前(0h)、给药后015、1、4、12、24、48h及手术后24h(以手术结束时间开始计算)采集5mL外周静脉血;给药至少48h后方可进行手术,具体手术时间依患者病情确定。

若用药48h后未手术,则此后每间隔24h采集5mL外周静脉血至手术。

血样经离心分离出血浆,保存于-20℃至测定。

所有受试者均签署知情同意书,试验方案经伦理委员会审批通过。

给药前清洁需施行手术一侧的乳头,并注射10%利多卡因溶液(含蓝色染料)1mL进行局部麻醉。

通过染料的流向确定并标记出5～8根通畅的乳腺导管并插入用于输注药液的医用导管。

根据受试者的剂量组别和通畅的乳腺导管数量的不同,每根导管给药量在01625～5mL之间。

212　色谱条件
色谱柱:Sy mmetry C
18
(416mm×250mm,5
μm),流动相:NH
4
H2P O4(0101mol・L-1,015%三乙胺,磷酸调pH值为310)2乙腈=70∶30,流速:1 mL・m in-1,激发波长Ex=487nm,发射波长Em= 593n m,进样体积10μL。

213　储备液和工作液的配制
精密称取多柔比星对照品0101026g,用水及乙腈的混合液(50∶50)溶解并定容至50mL,为多柔比星储备液;精密称取柔红霉素对照品0101031g,用水和乙腈的混合液(50∶50)溶解并定容至50mL,为内标柔红霉素储备液。

精密量取适量柔红霉素储备液,以水和乙腈混合液(50∶50)稀释至8g・L-1,作为内标工作液。

214　血浆样品的处理取血浆样品015mL,加入30μL 内标工作液,混匀,加入1%磷酸溶液100μL,315mL 异丙醇,涡旋振荡1m in,4000r ・m in -1
离心10m in,上清液于37℃氮气吹干,残渣用200μL 流动相复溶,取上清10μL 进样分析。

215　标准曲线制备
用空白血浆将多柔比星储备液稀释成质量浓度分别为2010、4010、10010、20010、100010、200010
μg ・L -1
的标准血浆样品,按照“214”项下操作并测定,进样量10μL,以待测物质量浓度为横坐标,待测物与内标的峰面积比为纵坐标绘制标准曲线并进行线性回归。

216　方法学评价
21611　专属性　多柔比星保留时间为612m in 左
右,内标柔红霉素保留时间为1318m in 左右,多柔
比星的体内代谢物阿霉素醇的保留时间为412m in 左右,阿霉素醇、血浆内源性物质及其他杂质不干扰样品的分离测定,见图1。

图1　多柔比星测定色谱图
A -空白血浆;
B -含多柔比星对照品、内标柔红霉素及代谢物阿霉素醇的空
白血浆;C -给药前受试者血浆样品;D -给药后受试者血浆样品
F i g 11　HP LC Chr omat ogram s of doxorubicin
A -blank p las ma;
B -blank p las ma containing dox orubicin,daunorubicin and doxorubicinol ;
C -p las ma sa mp le of v olunteer bef ore ad m inistrati on;
D -p las ma sa mp le of v olunteer after ad m inistrati on
21612　标准曲线和最低定量限　回归方程为y =01985x +1152,相关系数r 为019985,最低定量限
为5μg ・L
-1
(S/N =10)。

21613　精密度和回收率　取空白血浆和多柔比星
储备液,配制成质量浓度分别为40、500、1500μg ・
L -1
高、中、低3个浓度的质控样品,每个浓度进行5个样本分析,根据标准曲线,计算质控样品的测得浓度,计算相对回收率和日内精密度;按照此方法连续考察5d,计算日间精密度;与血浆样品的峰面积相比,计算绝对回收率。

结果见表1。

21614　稳定性　配制高、中、低浓度的血浆质控样
品若干份,分别对室温存放的稳定性(室温放置0、1、3h 后处理测定)、处理后进样液在自动进样器中的稳定性(放置0、6、12h 后进样分析)、反复冻融稳定性(冻融0、1、3次)、长期保存稳定性(-70℃条件下存放0、10、30d 后,进行样品处理和分析)进行考察,显示稳定性良好。

21615　稀释因素的影响　取空白血浆和多柔比星储备液,配制成质量浓度为8mg ・L -1
的血浆样品2份,再分别用空白血浆稀释5倍和10倍,与标准曲线和质控样品平行处理、测定。

5倍稀释的精密度(n =5)和准确度(n =5)分别为4131%和104153%;10倍稀释的精密度(n =5)和准确度(n =5)为6157%和106158%。

217　血浆样品测定结果
高、中两个剂量组每组各完成5例受试者的药物浓度检测,低剂量组中,有一位受试者由于乳腺导
管堵塞,药物未能注射进入体内,病例因此被排除。

低剂量和中剂量组各有2例给药96h 后手术,血样采集至用药后96h,高剂量组有2例血样采集至72h 。

血药浓度结果见表2。

3　讨　论
本试验建立了HP LC 荧光法检测多柔比星血药浓度,方法简便快速,特异性好,能排除内源性物质和代谢产物阿霉素醇的干扰,提取过程中所使用的试剂毒性小,对操作人员及环境伤害小。

表1　方法的精密度和回收率1n =5
Tab 11　Precisi on and recovery of the method 1n =5
Plas ma
concentrati on /
μg ・L -1I ntra 2day RS D /%I nter 2day RS D /%Relative recovery/%Abs olute recovery/%403.742.9194.0581.325001.671.6293.6083.751500
0.91
4.56
99.58
80.62
表2　受试者血药浓度测定值1 x±s
Tab12　Concentrati ons of doxorubicin in volunteers1 x±s
t /h
Concentrati on of dox orubicin/μg・L-1
10mg gr oup
n=4
20mg gr oup
n=5
50mg gr oup
n=5
015ND1)64161±129197247198±240176
1ND1)66140±133106285108±289168
424176±29146103141±189177357104±356116
12124123±104180200114±297110655142±607122
24359194±263174184179±1261641484167±1320130
48548185±304103695136±6831452270187±2280113
72852191±1631672)1148159±9741742)3921188±12771812)
96760126±1661122)1199190±8191122)-3)
After operati on24277139±346174507175±3401021816184±1192141注:1)表示未检测到多柔比星,2)n=2,3)表示没有采集血浆样本
Note:1)the concentrati on of dox orubicin is not detected,2)n=2,3):no p las ma sa mp le
本试验希望通过乳腺导管注射这一新的给药方式提高药物在乳腺肿瘤及组织中的浓度,减少进入全身循环的药量,达到减轻全身性不良反应的目的,外周血血药浓度可以直接反映进入全身循环的药量,故选择其作为反映受试者安全性的观察指标。

由于此种给药方式是初次应用于患者,基于患者利益和伦理的考虑,为了不延误外科治疗,低剂量组和中剂量组中只各选择2例采集血样至96h,高剂量组2例采集血样至72h后行乳腺切除手术。

给药量和血药浓度之间存在正相关性,各剂量组之间相关系数大于0196,但每个剂量组内个体差异较大,可能与受试者肿瘤分布、给药部位局部环境等多种因素相关;本试验样本数较少,也可能造成个体差异较大;另外,静脉输注的给药剂量是按照患者体表面积计算的,而本试验是每个剂量组中不同患者给予相同的药物总量,由于患者体表面积不同,也可能造成一定的个体差异。

与传统的外周静脉滴注后的药动学参数相比[6],经乳腺导管给药后,多柔比星长循环脂质体呈现不同的药动学特征。

外周静脉滴注多柔比星长循环脂质体后药物在体内呈二相分布,半衰期分别为5和55h;而经乳腺导管给药后,低剂量组在给药后1h内未在患者血浆中检测到药物,而且3个剂量组血药浓度的上升趋势在用药72h后才显著放缓,推测达峰时间应在用药72h 以后,提示此种给药方式可能存在较长吸收相。

经乳腺导管给药后,检测到的血药浓度较静脉滴注低,说明进入外周血液循环的药量较少,推测药物经注入后较多地分布在乳腺肿瘤及组织中,从而具有更好的靶向作用。

行乳腺切除术后24h,血药浓度下降明显,推测有以下原因:一是经乳腺导管给药后药物大量聚集在乳腺肿瘤及组织中,缓慢释放进入外周血,行切除术后药物储库消失,外周血中药量相应减少;二是达峰时间在给药后72h至术后24h之间,药物在体内进入消除相,血药浓度逐渐下降。

阿霉素醇是多柔比星在体内的活性代谢物,在本次试验的受试者血浆中未检测到相应的色谱峰,说明在采血时间内受试者外周血中没有活性代谢物阿霉素醇。

本试验是初次将乳腺导管给药的方式应用于乳腺癌患者,试验目的主要在于对比全身用药的方式,获得患者安全性和耐受性数据。

由于经验、成本等多种因素所限,同时考虑到患者的肿瘤组织及标本采集部位的差异会进一步加剧由于样本量小而导致的个体差异较大、组内可比性较低的情况,故没有进行肿瘤组织药物浓度的测定。

在今后的工作中需要增加此项研究,完善这方面的数据。

本试验进行了多柔比星长循环脂质体在乳腺癌患者体内经乳腺导管给药的探索,收集了药学方面的相关数据,为今后进行药动学及其他进一步的研究提供了参考。

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