高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊含量.ppt
反相高效液相色谱法测定阿莫西林、盐酸环丙沙星可溶性粉
图 !" 对照品溶液 （ "） 和样品溶液 （ #） 的色谱图
6 注： 以上分析结果为实际含量与标示量的比值 ’
收稿日期： !""% )"’ )(’ 作者简介： 张小华， 男， 讲师， 从事分析化学和药物分析教学研究工作， *+& ： （ "$!% ） )))&#(* ， ,)-".& ： #///012 -34’ 5%-’
!" 实验部分
! ! !" 主要仪器与试剂 6 6 岛津高效液相色谱仪 （ 配 有 9:;)(" 8<= 系 统 控 制 器， ;:)(" 8*<= 泵， >:$)(" 8;<= 梯 度 比 例 阀， ?@A)(# 8 在 线 脱 :*7)(" 8*<= 柱温 箱， 9B?)(" 8$<= 紫 外 检 测 器， ’’!$ . 气机， 进 样 器， !" ! ; 定 量 环， :;899)$B $, "! 色 谱 工 作 站 ） 。 ’$) :C* 紫外 ) 可见 分 光 光 度 计 （上海精密科学仪器有限公 司） 。乙 腈 （ 色谱纯） ， 磷 酸、 三乙胺 （ 分析纯） ， 水为重蒸馏 水； 阿莫西林和盐酸环丙 沙 星 对 照 品 （ 中国药品生物制品检 定所） ； 阿莫西林和盐酸环丙沙星可溶性粉 （ 标 示 量 都 是 $D （ 质量分数） ， 江苏畜牧兽医职业技术学院丰达动物药品厂 提供） 。 ! ! #" 实验方法 6 6 （(） 色 谱 条 件 6 90.-)="5E :(* 色 谱 柱 （ ($" -- F ) -- ., G, ，$ ! - ） ； 流 动 相 为 ($ --%& H ; 三 乙 胺 溶 液 （用磷 酸调 =I 至 %, " ） ) 乙 腈 （ 体 积 比 为 *$ - ($ ） ，流 速 (, " -; H -.4 ； 柱温 #" J ； 进样量 !" ! ; ； 检测波长 !!& 4- 。 6 6 （!） 对照品溶液的配制 6 精密称取阿莫西林、 盐酸环丙 沙星各 $" -K ， 置 于 $" -; 容 量 瓶 中。 用 流 动 相 先 超 声 溶 解， 再稀 释 至 刻 度， 摇 匀， 作 为 储 备 液。 从 中 吸 取 !, " -; 置 于 !$ -; 容量瓶中， 再以流动相稀释至刻度， 摇匀。 6 6 （%） 供试品溶液的配制 6 精 密 称 取 阿 莫 西 林、 盐酸环丙 沙星 可 溶 性 粉 适 量 （ 约 相 当 于 阿 莫 西 林、 盐 酸 环 丙 沙 星 $" -K ） ， 置于 $" -; 容 量 瓶 中。 用 流 动 相 先 超 声 溶 解， 再稀释 至 刻度， 摇匀， 过滤， 弃去初滤液， 精密吸取续滤液 !, " -; 置 于 !$ -; 容量瓶中。再以流动相稀释至刻度， 摇匀。 6 6 （#） 测定方 法 6 分 别 取 经 ", #$ ! - 滤 膜 滤 过 的 对 照 品 溶液及供试品溶液 各 !" ! ; 进 样， 测 定 峰 面 积， 按峰面积外 标法定量。其色谱图如图 ( 所示。
高效液相色谱法测定阿司匹林片的含量
高效液相色谱法测定阿司匹林片的含量
一、目的
1.熟悉HPLC法测定的原理及操作。
2.掌握外标法测定阿司匹林片含量。
二、仪器与试药
1.仪器
美国PE型高效液相色谱仪Mettler AL204电子天平
容量瓶规格：50mL、100mL 刻度移液管规格：5mL
漏斗定量滤纸（直径10cm）
超声仪
2.试药
阿司匹林片规格：0.3g 阿司匹林对照品冰醋酸
氢氧化钾色谱甲醇超纯水
三、实验内容
1.色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%冰醋酸（50：50）为流动相；流速为每分钟约1.0mL；检测波长280nm。
理论板数按阿莫西林峰计算应不低于1500。
2.对照溶液配制：取阿莫西林对照品适量，精密称定后，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含50μg的溶液
3.样品测定：精密称取细粉适量（约相当于阿司匹林细粉0.05g），置50mL量瓶中，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取续滤液3mL,置50 mL量瓶中，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，取续滤液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿司匹林对照溶液同法测定。
按外标法以峰面积计算出样品中阿司匹林（C9H8O4）的含量。
本品含阿莫西林（C9H8O4）应为标示量的93.0%～107.0%。
四、注意事项：
1.高效液相色谱仪严格按照仪器操作规程操作。
2.小心进样操作，以免进样失败或损坏进样器。
五、思考题
高效液相色谱仪操作的注意事项有哪些？
六、参考文献
《中国药典》2010年版二部，285，化学工业出版社。
论高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊的溶出度
论高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊的溶出度【摘要】目的：对阿莫西林胶囊的溶出度采用高效液相色谱法进行测定。
方法：采用水、色谱柱、流动相等进行测定。
结果：当浓度范围为0.3034～0.8946 mg／mL-1的时候，阿莫西林的线性较为良好；回收率为99.67%，RSD为1.27%。
结论：该方法操作简单、方便、可靠，所测出的结果精准，值得广泛的推广和使用。
【关键词】高效液相色谱法；阿莫西林胶囊；溶出度测定阿莫西林是临床治疗中青霉素类的最常用的药物。
该药又名为安莫西林，该药是广谱β-内酰胺类抗生素，该药具有较强的杀作用，能有效的穿透细胞壁，是目前临床上使用比较广泛的口服的青霉素之一。
本文笔者主要是对该药的溶出度采用高效液相色谱法进行测定。
1使用的仪器和试药主要是采用的Agilent 1200高效液相色谱仪器[1]。
采用的试药主要有：色谱纯：乙腈，分析纯试剂：氢氧化钾和磷酸二氢钾。
2测定方法和测定结果2.1色谱的条件所使用的色谱柱主要为200 mm×4.60 mm，5μm的Diamonsil TMC18；其流动相主要是：磷酸盐缓冲液（制备方法：在容量瓶内称取磷酸二氢钾6.8g，再在瓶内加入1000ml的水，混合的摇匀，使用氢氧化钾溶液来调节pH值为5.0±0.05）-乙腈（95∶5）；其流速控制在1.0ml／min-1；其进样量为50ul；检测波长为254nm，色谱柱温度控制在35℃左右；其理论搭板数是根据阿莫西林计算为5500[2]。
2.2制备对照品溶液在50ml的容量瓶内装入30mg的阿莫西林对照品，在瓶子内加入清水，稀释片刻之后混合摇匀。
2.3干扰性的实验各取出规格为250mg的阿莫西林胶囊样品一颗、不含有阿莫西林的空胶囊一颗、阿莫西林的空胶囊一颗，将它们分别装入溶出杯子内，根据本文中溶出度的测定方法，将溶液取出并滤过之后，各取出50ul的续滤液和对照品溶液分别进样，同时，还要做好色谱图。
阿莫西林胶囊含量测定
欢迎共阅实验四HPLC法测定阿莫西林胶囊的含量
实验目的： 1. 熟练掌握安捷伦1100液相色谱仪的操作
2. 对液相色谱仪出现的一些故障和维护会进行简单维护
3. 通过外标一点法计算药物浓度
3.实验方法及结果
参照2010年中国药典二部收载阿莫西林胶囊剂的含量测定采用HPLC法（页码
401-404），阿莫西林峰与杂质峰的分离度需大于1.5。
3.1流动相的配制称取6.8 g磷酸二氢钾固体粉末，用1 L纯水溶解；量筒精密量取975 mL磷酸二氢钾水溶液于试剂瓶中，精密量取25 mL乙腈溶液，两相混合，超声10 min后用于流动相；
3.2 对照品溶液的制备精密称取阿莫西林对照品适量, 置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成0.5 mg/mL的标准溶液, 备用。
3.3 样品溶液的制备取阿莫西林胶囊5粒，准确称量后取出内容物，研匀。
精密称
）
4.5 所有进样结束后，需对管路进行用色谱甲醇或乙腈进行冲洗，色谱柱也用色谱甲醇或色谱乙腈进行冲洗至少10 min后，保存色谱柱待下次使用。
5. 实验解答题
5.1 采用HPLC－UV法进行含量测定对化合物结构的要求？如何确定紫外最大吸收波长？
5.2 简答采用HPLC法对某一药物进行含量测定的基本思路。
HPLC法测定阿莫西林胶囊中阿莫西林的含量共4页
HPLC法测定阿莫西林胶囊中阿莫西林的含量阿莫西林又名安莫西林或安默西林，分子式为C16H19N3O5S，是一种最常用的青霉素类广谱β-内酰胺类抗生素。
阿莫西林杀菌作用强，穿透细胞壁的能力也强，是目前应用较为广泛的口服青霉素之一。
阿莫西林适用于溶血链球菌、肺炎链球菌、葡萄球菌或流感嗜血杆菌所致中耳炎、鼻窦炎、咽炎、扁桃体炎等上呼吸道感染、溶血链球菌、葡萄球菌或大肠埃希菌所致的皮肤软组织感染、急性单纯性淋病、溶血链球菌或葡萄球菌或流感嗜血杆菌所致急性支气管炎、治疗伤寒、伤寒带菌者及钩端螺旋体病等。
本文用高效液相法对阿莫西林胶囊中的阿莫西林的进行了含量测定。
1.仪器与试药KHW-D-1LC精密拉伸水浴锅（上海科恒实业发展有限公司）；UPLC 超高效液相色谱系统（沃特世科技（上海）有限公司）；R-1001-VN旋转蒸发仪（郑州长城科工贸有限公司）TU-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；QT3120K脱气可调型超声波清洗器（天津市瑞普电子仪器公司）；TGL-18C高速台式离心机（上海楚柏实验室设备有限公司）；XYG-H帕恩特痕量分析级超纯水机（北京湘顺源科技有限公司）；DOA-P504-BN无油隔膜真空泵（上海洽姆仪器科技有限公司）；瑞士梅特勒-托利多MS精密天平（梅特勒-托利多中国公司）。
甲醇（深圳市中原化工科技有限公司）、冰乙酸（衡阳市迅源化学试剂有限公司）、乙腈（盖州市鹏圣化工有限公司）、磷酸（南京盛庆和化工有限公司）、醋酸（山东高密高源化工有限公司）、磷酸二氢铵（深圳市中原化工科技有限公司）、盐酸（深圳市中原化工科技有限公司）。
2.含量测定2.1色谱条件依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-11]。
色谱柱为依利特hypersil BDSC18色谱柱（4.6*250*5u ）；乙腈-甲醇-0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液-冰醋酸（10∶10：80：0.1）为流动相；检测波长为254nm；流速1.0mL?min-1；柱温：30℃。
阿莫西林
阿莫西林AmoxilinAmoxicillinC16H19N3O5S·3H2O 419.46 本品为（2S,5R,6R）-3，3-二甲基-6-﹝（R）-（-）-2-氨基-2-（4-羟基苯基）乙酰氨基﹞-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环［3.2.0］庚烷-2-甲酸三水合物。
按无水物计算，含C16H19N3O5S不得少于95.0%。
【性状】本品为白色或类白色结晶性粉末；味微苦。
本品在水中微溶，在乙醇中几乎不溶。
比旋度取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含2㎎的溶液，依法测定（附录53页），比旋度为+290°至+315°。
【鉴别】（1）取本品与阿莫西林对照品各约0.125g，分别加4.6%碳酸氢钠溶液溶解并稀释制成每1ml中约含阿莫西林10mg的溶液，作为供试品溶液与对照品溶液；另取阿莫西林对照品和头孢唑啉对照品各适量，加 4.6%碳酸氢钠溶液溶解并稀释制成每1ml中约含阿莫西林10mg和头孢唑啉5mg的溶液作为系统适用性试验溶液。
照薄层色谱法（附录33页）试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-冰醋酸-水-（5：2：2：1）为展开剂，展开，晾干。
置于紫外灯254nm下检视。
系统适用性试验溶液应显两个清晰分离的斑点，供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液主斑点的位置和颜色相同。
（2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
（3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。
以上（1）、（2）两项可选做一项。
【检查】酸度取本品，加水制成每1ml中含2mg的溶液，在50℃水浴中微温使溶解后，依法测定（附录56页），pH值应为3.5～5.5。
溶液的澄清度取本品5份，各1.0g，分别加0.5mol/L盐酸溶液10ml，溶解后立即观察，另取本品5份，各1.0g，分别加2mol/L氨溶液10ml溶解后立即观察，溶液均应澄清。
实验十二阿莫西林胶囊的分析
实验十二阿莫西林胶囊的分析AmoxilinA moxiciHinCjiHijNjOjS * SHrO 419*46一、实验目的1熟悉高效液相色谱仪的结构及正确使用。
2 •掌握阿莫西林胶囊分析的原理及方法。
二、实验原理阿莫西林为B-内酰胺类抗生素，其母核部分与侧链部分均有共轭体系，有紫外吸收, 因此阿莫西林胶囊的鉴别、有关物质的检查、含量测定均采用反相高效液相色谱法。
有关 物质的检查方法为外标法和不加校正因子的主成分自身对照法，含量测定采用外标法定量。
三、实验方法本品含 C 16H 19 N 3O 5S 应为标示量的 90.0% ~110.0%。
【鉴别】 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时问应与对照品溶 液主峰的保留时间一致。
【检查】 水分 取本品的内容物，照水分测定法 （附录M 第一法A ）测定，含水分不得 过 16.0%。
有关物质取本品的内容物适量， 精密称定，用流动相A 溶解并制成每1ml 中含2mg 的溶液，滤过，取续滤液照阿莫西林有关物质项下的方法测定。
单个杂质的峰面积不得大 于对照溶液主峰面积的2倍（2.0 % ），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的 5倍 （5.0% ）。
供试品溶液中汪何小于对照溶液主峰面积 0.05倍的峰可忽略不计） 溶出度 取本品，照溶出度测定法（附录X C 第一法），以水900ml 为溶出介质，转速 为每分钟100转，依法操作，经 45分钟时，取溶液适量，滤过，精密量取续滤液适量，用 溶出介质稀释成缈"ml 中约含130⑷的溶液，照紫外一可见分光光度法（附录W A ），在272nm 的波长处测定吸光度；另取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于平 均装量），按标示量加溶出介质溶解并稀释成每1ml 中约含130⑷的溶液，滤过，取续滤液 作为对照溶液，同法测定，计算每粒的溶出量。
限度为80%，应符合规定。
其他 应符合胶囊片剂项下有关的各项规定（附录I A ）。
高效液相法对比紫外分光光度法测定阿莫西林胶囊含量
高效液相法对比紫外分光光度法测定阿莫西林胶囊含量目的HPLC及UV测定阿莫西林胶囊的含量对比。
方法高效液相色谱法选择色谱柱为Agilent C18（4.6×250 mm，5 μm），流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=5）-乙腈（97.5：2.5），流速为1.0 ml/min，检测波长为254 nm，紫外法选择254 nm波长测定含量。
结果HPLC法中阿莫西林在 2.56 ～56.15ug/ml范围内线性关系良好，回归方程：Y=65257X-3244531（r=0.9996），加样回收率平均值为100.68%，RSD 1.7%。
结论HPLC法对比紫外分光光度法测定阿莫西林含量更为准确，重复性高，专属性强标签：阿莫西林；高效液相色谱法；紫外分光光度法阿莫西林因其耐酸、口服吸收快、生物利用度高等特点，使其在临床上深受医生和患者的厚爱[1]。
2015版药典中推荐使用高效液相色谱法来分析本品[2]，但相对来说紫外分光光度法仪器设备要求简单，检测时间快捷，该法是否可以作为本品基层药物监测的备选方法值得考察。
本文由此出发，对比分析高效液相及紫外分光光度法测定阿莫西林含量。
1临床资料岛津LC-2010CHT 型高效液相色谱仪；岛津UV-2450型紫外分光光度计；乙腈由霍尼韦尔贸易（上海）有限公司提供，为色谱醇；氢氧化钾、磷酸二氢钾、N-溴代丁二酰亚胺均为色谱纯；阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130409-201011，纯度85.80%）；阿莫西林胶囊（武汉健民集团随州药业有限公司）。
2实验方法2.1高效液相色谱法2.1.1色谱条件[2] 色谱柱选择Agilent C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（用 2 mol/LKOH调节pH值5.0）-乙腈（97.5：2.5），检测波长：254 nm，进样量10 μl，1.0 ml/min流速，柱温为室温（25℃）。
中国药典-高效液相色谱PPT医学课件
21
再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪 器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质 的峰面积或峰高，按下式计算含量：
Ax 含量（Cx）＝f·─────
式中 t R2为相邻两峰中后一峰的保留时间； tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1、W2及W1，h/2、W2,h/2分别为此相邻两峰的峰宽及半高峰宽。 当对测定结果有异议时，色谱柱的理论板数（n）和分离度（R）
均以峰宽（W）的计算结果为准。
18
重复性
用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复 性能。采用外标法时，通常取各品种项下的对 照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其 峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0％ ；采用内标法时，通常配制相当于80％、100 ％和120％的对照品溶液，加入规定量的内标 溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别至少进 样2次，计算平均校正因子。其相对标准偏差 也应不大于2.0％。
25
美国药典还讨论了多波长检测器，特别是二极管阵列多波长检测 器的特点，指出，二极管阵列检测器比固定波长检测器或可变波 长检测器的信噪比低，不适宜于低浓度化合物的分析。在讨论示 差折光检测器中，认为该检测器不如紫外光检测器灵敏，且受溶 剂组成、流速、温度变化的影响大，要得到满意的基线，需用参 比柱。
由于C18链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于十 八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动 相中有机溶剂的比例通常应不低于5%，否则C18链的 随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系统不稳 定。
14
二、系统适用性试验
高效液相色谱法测量药物中阿莫西林含量的分析
高效液相色谱法测量药物中阿莫西林含量的分析摘要：目的：利用高效液相色谱法，对阿莫西林的含量进行测定。
方法：对阿莫西林应用高效液相色谱法测定，并运用各种分析方法以确定高效液相色谱法对阿莫西林药物检测的可利用性和有效性。
结果：最终测量结果表明，利用高效液相色谱技术测定，阿莫西林的回收率约为88.4％-99.7％左右，在测量的实验样本中检测出阿莫西林的浓度于0.48-1.43mg-1之间时，浓度和峰面积之间表现出良性线性关系。
结论：阿莫西林应用高效液相谱法测量的可实施性较高，具有良好应用的价值，可在临床多实践。
关键词：高效液相色谱法；药物；测量；阿莫西林；含量阿莫西林属于西药，主要针对大部分革兰阴性菌、阳性菌有较强的杀菌、灭菌功能，其中也包含杆菌和球菌，是一种广谱青霉素，临床常用于消化道感染、泌尿道感染、呼吸道感染、软组织和皮肤感染等治疗中[1]。
和青霉素的功能相似，同时让细胞凋零死亡(通过对细菌细胞壁生物合成来实现)，本试验使用了高效液相色谱法来对阿莫西林药品中的浓度进行检测，以此来明确该方式的作用和功能，具体内容如下。
1研究方法与材料1.1实验仪器和试剂采用日本岛津公司LC-2030C 高效液相色谱仪（配备紫外检测器)；奥豪斯EX125DZH型十万分之一电子天平；上海康仪 PHS-3 酸度计；而实验试剂主要就是阿莫西林对照样本；色谱级纯或优级纯甲醇或乙腈。
1.2实验参数指标调整应用高效液相色谱法检测时，得合理调整实验参数指标。
其中包含流动相和固定相。
流动相选择：将6.8g磷酸二氢钾固体粉与1000ml纯水搅拌后溶解，从而形成磷酸二氢钾溶液。
然后，把25ml乙腈溶液与975ml已溶解过的溶剂相混合，随后进行10分钟超声处理。
此外，还需要把阿莫西林对照样品放在大量瓶内(50ml)，采用流动相稀释和溶解，将其溶液摇晃均匀后，制备为0.5mg mL-1的对照溶液。
固定相的指标调整为AgillentSB-C18色谱柱(4.7×150mm，3.5μm)，预柱为(22×3.8mm)，流动相：0.06moL·L-1磷酸盐缓冲液(将它和13.4g磷酸二氢钾共溶并稀释至2000mL，最后采用10个moL l-1氢氧化钾水溶液在调节pH值4.9±0.2)；乙腈(97.5：2.5，v/v)，将流速调整至1min/ml，柱温调整至30℃左右，检测波长度253nm，进样量20μL。
采用高效液相色谱法测定药物中阿莫西林含量
对 照品溶液制备 ：实验使用标准 溶液 、稀释溶 液等 。溶 液 制备过 程 ：精 密称 取适量阿莫 西林对 照品适 量 ，置 ５０ｍＬ量 瓶 中 ，用流 动相 溶解 并稀释 至刻 度 ，充分摇 匀后 ，制 成 ０．５ｒａｇ· ｍＬ 对照溶液备用 。
张 荣琴 （河南 省 平顶 山市 食 品药 品检 验所 平顶 山 ４６７０００）
摘 要 ：目 的 对高效液相 色谱 法进行 药物 中阿莫西林含 量测定的方法进行研 究。方 法 进行 高效液相 色谱 检测 系统构建基础 上，对其各 项参 数 进 行 设 定 后 进 行 药 物 中阿 莫 西林 含 量测 定 试验 ，并 对 试 验 结 果 进 行 观 察 ，以 对 高效 液 相 色谱 检 测 在 药 物 阿莫 西 林 含 量 检 测 应 用 的 可 行 性 进 行 验证。结 果 实验检 测显示 ，高效液相 色谱检 测试验 药物的阿莫西林含量提取 回收 率约为 ８７．２％ 至 ９８．１％之 间，阿莫 西林线性 范 围在 ０．４８～ １．４４ｒ ａｇ·ｍＬ～ ，ｒ＝０．９９９７，回收率 １００．２４％ 。结 论 对 药物 中阿莫西林含 量应用 高效液相 色谱 法测定具有一 定的可靠性 。 关 键 词 ：高效液相 色谱法 ；药物 ；阿莫西林 ；含 量 ；测定 中图分类号 ：Ｒ９２７ 文献标 识码 ：Ａ 文章编号 ：１００６．３７６５（２０１８）－０８—１８８４９－００７２－０２
阿莫 西林作为一种抗 生素药物 ，具有较为广泛 的应用 ，且 由于其较强 的抗菌 性效果 ，针 对阿莫 西林药 物作用 开展 的研 究相对 较多 ｌ 。其 中，高效液 相色谱 检测 是进 行阿莫 西林 含 量检测 的常用方式 ，在 实际检 测 中具有 较多 的应用 。下 文将 以药物 中阿莫西林 含量 检测为 例 ，采用 高效液相 色谱法 通过 实验方式进行测定 ，具有较 好的应用意义 。 １ 实验 方 法 １．１ 实验仪器 与试 剂 本次实 验采用高效液相 色谱 仪 （生 产 厂家 ：上 海俊齐仪 器设备 有 限公司 ；型号 ：Ａｇｉｌｌｅｎｔｌ１００），配套 设备包含 Ｇ１３１３Ａ自动进样器 （生产厂家 ：上 海思达 分析仪 器 有限责任公 司 ；型 号 ：ＨＳ￣２Ａ）与柱 温箱 （生产 厂家 ：上海济 成 分析仪器有 限公司 ；型号 ：ＨＰ５０２５）、四元 泵 （生 产厂 家 ：上 海 俊齐仪器设备 有限公 司 ；型号 ：Ａｇｉｌｌｅｎｔｌ２００）、检测 器 （生产 厂 家 ：上海 俊齐仪器设 备有限公 司 ；型号 ：Ｇ１３１３ＡＤＡＤ）、色谱 工 作站 （生产厂家 ：上海思达分 析仪器有 限责 任公 司）以及脱 气 机 （生产厂家 ：大连依 利特 分析 仪器 有 限公 司 ；型号 ：ＤＧ２３０） 等 ；实验试剂包括 阿莫西林对 照 品 （监制 ：中检 院；产 品批 号 ： １３０４０９—２００８１０；规格 ：１００ｍｇ）、阿莫新 林咀嚼片 （生产 厂家 ：华 北制药股份 有限公 司；批准文号 ：国药准 字 Ｈ２００００４６９）、色谱 纯 乙 腈 （生 产 产 家 ：南 京 化 学 试 剂 股 份 有 限 公 司 ；批 号 ：
实验四 高效液相色谱法.ppt
1．色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相； 水-甲醇（40：60）为流动相； 流速为1ml/min； 检测波长为254nm。
2．对照品溶液的制备
精密称取阿莫西林对照品适量，置50ml 容量瓶中，加磷酸盐缓冲液（PH5.0） 溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品 溶液。（实称阿莫西林对照品0.0308g）
3．供试品溶液的制备
取阿莫西林胶囊(平均装量0.2498g）内 容物，混合均匀，精密称取细粉适量， 置 100 ml容量瓶中，加磷酸盐缓冲液 （PH5.0）溶解并稀释成每1ml中约含 0.6mg的溶液，用0.45µm孔径的滤膜滤 过，取续滤液，即得供试品溶液。
（实称细粉0.0659 g）
4．测定
实验四 高效液相色谱法测定 阿莫西林胶囊中阿莫西林的含量
一Hale Waihona Puke 目的要求 1．掌握高效液相色谱外标法含量测 定的原理。
2．熟悉高效液相色谱仪的操作、使 用及注意事项。
二、操作步骤
本品为阿莫西林的胶囊剂（标示量 为250mg），含阿莫西林 （C16H19N3O5S）应为标示量的 90%～110.0%。
精密吸取供试品溶液10µL与对照品溶 液3、6、9、12、15µL进样， 测定 ，即 得。
5．计算
按标准曲线法以峰面积计算出供试品 中阿莫西林（C16H19N3O5S）占标示量的百 分含量。
三、思考题
1.中国药典HPLC法常用的固定相及流动相有 哪些？
2.HPLC法系统适用性试验内容有哪些？ 3.HPLC法常用的检测器有哪些？ 4.含量测定方法的效能指标有哪些？
液相色谱流程图
进样器 溶剂 输液泵 柱温箱 检测器 数据处理
高效液相色谱工作站
阿莫西林原料药
武汉贝尔卡生物医药有限公司产品简介阿莫西林阿莫西林，又名安莫西林或安默西林，是一种最常用的半合成青霉素类广谱β-内酰胺类抗生素，为一种白色粉末，半衰期约为61.3分钟。
在酸性条件下稳定，胃肠道吸收率达90%。
阿莫西林杀菌作用强，穿透细胞膜的能力也强。
是目前应用较为广泛的口服半合成青霉素之一，其制剂有胶囊、片剂、颗粒剂、分散片等等，现在常与克拉维酸合用制成分散片。
药品名称：阿莫西林别名：羟氨苄青霉素外文名称：Amoxicillin主要适用症: 细菌感染用法用量：成人一次0.5g，每6～8小时1次不良反应： 1.恶心、呕吐、腹泻药品类型：抗生素分子式：C16H19N3O5S·3H2O分子量：419.46CAS：26787-78-0性状本品为白色或类白色结晶性粉末；味微苦。
本品在水中微溶，在乙醇中几乎不溶。
本品耐酸，在胃肠道吸收好，且不易受大部分食物影响。
纤维会影响吸收，降低药效。
在服用此药期间不要吃高纤维食品，如燕麦，芹菜，胡萝卜等。
比旋度取本品精密称定，加水溶解并稀释成每1ml中含1mg的溶液，依法测定，比旋度为+290度至+310度。
药物分析方法名称：阿莫西林原料药－阿莫西林－高效液相色谱法应用范围：本方法采用高效液相色谱法测定阿莫西林原料药中阿莫西林的含量。
本方法适用于阿莫西林原料药。
方法原理：供试品经流动相溶解并定量稀释，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测阿莫西林的峰面积，计算出其含量。
试剂：1.乙腈2. 磷酸二氢钾溶(0.05mol/L)3. 氢氧化钾溶液(2mol/L)仪器设备：1. 仪器1.1 高效液相色谱仪1.2 色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按阿莫西林峰计算应不低于2000。
1.3紫外吸收检测器2. 色谱条件2.1 流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用2mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5.0）乙腈=97.5 2.52.2 检测波长：254nm2.3 柱温：室温.2.4 流速：1mL/min试样制备：1. 对照品溶液的制备精密称取阿莫西林对照品约25mg，置50mL量瓶中，加流动相溶解并定量稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。
高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊含量
二 操作方法
（3）样品测定：取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量，加磷 酸盐缓冲液（pH=5.0）溶解并稀释成每mL中约含0.6mg的溶液，滤过，取续 滤液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿莫西林对照溶液同法测定。按 外标法以峰面积计算出样品中阿莫西林（C19H19N3O5S）的含量。
（2）对照溶液配制：取阿莫西林对照品约30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液（pH=5.
峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。 药典收载的相关制剂主要有片剂、胶囊剂及注射用阿莫西林钠。
0）溶解并稀释至刻度，摇匀即得。 药典收载的相关制剂主要有片剂、胶囊剂及注射用阿莫西林钠。
取本品内容物适量，在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。
0）溶解并稀释成每mL中约含0. 6g，加水溶解后稀释到2000ml，用8mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5. （2）对照溶液配制：取阿莫西林对照品约30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液（pH=5. 另取阿莫西林对照溶液同法测定。
0）（取磷酸二氢钾13. 取本品内容物适量，在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。
本品含阿莫西林（C19H19N3O5S）应为标示量的90.0%～110.0%。
谢 谢！
1、鉴别 0）（取磷酸二氢钾13.
6g，加水溶解后稀释到2000ml，用8mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5. 6g，加水溶解后稀释到2000ml，用8mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5.
以熟磷悉酸 HP盐LC缓法冲测液定取（的p原H本理=5及. 品操作内； 容物适量，在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主
高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊中的高分子杂质
高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊中的高分子杂质摘要：目的：高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊中的高分子杂质的效果。
方法：通过高效液相色谱法对阿莫西林胶囊中的高分子杂志进行检测，色谱柱为Sephadex G-10凝胶柱。
结果：高效液相色谱法检测结果显示，不同批号的阿莫西林胶囊中高分子杂质存在一定的差异。
阿莫西林A（批号：20171202）含量106.9，高分子杂质检测显示0.098%；阿莫西林B（批号：20171203）含量105.4，高分子杂质检测显示0.078%；阿莫西林C（批号：20171204）含量105.0，高分子杂质检测显示0.086%。
阿莫西林胶囊中的高分子杂质含量＜0.2%。
结论：高效液相色谱法检测阿莫西林中高分子杂志的准确率较高，且操作简单，可以作为产品的质量控制方法。
关键词：高效液相色谱法；阿莫西林胶囊；高分子杂质阿莫西林是半合成广谱青霉素，具有耐酸性强、抗菌谱广、口服吸收良好等特点，在临床中有广泛的应用[1]。
但阿莫西林在治疗过程中，可能会出现过敏反应，这主要是由于药物中含有一定量的高分子杂质[2]。
因此，对阿莫西林中高分子杂质的检测，是降低过敏反应、保证临床疗效的重要环节。
本次研究通过高效液相色谱法对阿莫西林胶囊中的高分子杂质进行检测，具体报告如下。
1. 实验1.1仪器及试剂仪器采用Waters HPLC仪（美国Waters），1525泵，2487UV检测器，色谱工作站（Waters Breeze）。
试药采用阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，含量86.2%）。
阿莫西林原料及胶囊为市售品，蓝色葡萄糖2000（Pharmacia公司），其他试剂为分析纯。
1.2色谱色谱柱为Sephadex G-10凝胶柱。
流动相：流动相A为pH值7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液，流动相B为重蒸馏水。
检测波长为254nm，流速为0.6-0.9ml/min，进样量为20μL。
1.3系统适用性检验通过蓝色葡萄糖2000溶液测定色谱柱的理论塔板数以及拖尾因子。
1阿莫西林胶囊的分析与检验
阿莫西林的分析与检验1阿莫西林化学式化学名为（2S,5R,6R）-3,3-二甲基-6[(R)-（-）-2-氨基-2-(4-羟基苯基)乙酰胺基]-7-氧代-4硫杂-1-氮杂双环[3,2,0]庚烷-2-甲酸散水合物。
又名羟苄西林，是氨苄西林的衍生物。
2药理特性：本品为半合成广谱青霉素，对革兰氏阴性菌如淋球菌，流感杆菌，百日咳杆菌，大肠杆菌，布氏杆菌等作用强，对革兰氏阳性菌的作用与青霉素相同或稍低，其耐酸可口服但不耐酶，可产生抗药性。
3性状：本品为白色或类白色粉末，味微苦，本品在水中微溶，在乙醇中几乎不溶，4采用胶囊剂型的优势4.1阿莫西林味微苦，将阿莫西林密封于胶囊内，可掩盖该药物的苦味，使其外形美观易于携带。
4.2阿莫西林在一定条件的水溶液下不稳定4.2.1可发生降解，引起聚合反应4.2.2水中有磷酸盐，山梨醇，硫酸锌，二乙醇氨等存在时，则会发生分子内成环反应，生成2，5吡嗪二酮。
4.2.3将阿莫西林包入胶囊中，可提高其对水分的稳定性，4.3本品阿莫西林结构中有酚羟基，易发生自动氧化，在光热及重金属催化下，氧化反应加速，将阿莫西林包入胶囊剂，可提高其对光线和空气的稳定性。
5阿莫西林胶囊项下胶囊的检验，5.1外观：胶囊剂应整洁不应有粘连，变形和破损现象，并应无异臭。
5.2装量差异：除另有规定外，应取供试品20粒，分别精密称重后，倾出内容物，（不得损害胶囊壳），用小刷或其它适宜用具拭净，再分别精密称定囊壳重量，求出每粒内容物的装量，每粒的装量与平均的装量相比较，超出装量差异，限度的胶囊，不得多于2粒，并不得有一粒超出限度值的一倍。
平均装量为0.3克以下的，装量差异限度为±10%，平均装量为，0.3g或0.3g以上的，装量差异限度为±7.5%。
5.3崩解时限的检查崩解时限的检查，采用生降式崩解仪，其主要结构为一能升降的金属支架与下端镶有筛网的吊篮，并附有挡板。
测定时使用胶囊剂在液体介质中，若胶囊剂漂浮在页面，可加挡板，阿莫西林胶囊剂应在30min内崩解，如有一粒不能完全崩解，则另取6粒重复试验，均应符合规定。
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阿莫西林结构
药典收载的相关制剂主要有片剂、胶囊剂及注射用阿莫西林钠。
一 实验目的
1.熟悉HPLC法测定的原理及操作； 2.掌握外标法测定阿莫西林胶囊含量。
二 操作方法
1、鉴别 取本品内容物适量，在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主
峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。
二 操作方法
（3）样品测定：取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量，加磷 酸盐缓冲液（pH=5.0）溶解并稀释成每mL中约含0.6mg的溶液，滤过，取续 滤液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿莫西林对照溶液同法测定。按 外标法以峰面积计算出样品中阿莫西林（C19H19N3O5S）的含量。
本品含阿莫西林（C19H19N3O5S）应为标示量的90.0%～110.0%。
谢 谢！
二 操作方法
2、含量测定 （1）谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓 冲液（pH=5.0）（取磷酸二氢钾13.6g，加水溶解后稀释到2000ml，用8mol/L 氢氧化钾溶液调节pH值至5.0±0.1）-乙腈（96∶4）为流动相；流速为每分钟约 1.0ml；检测波长254nm。理论板数按阿莫西林峰计算应不低于1700。 （2）对照溶液配制：取阿莫西林对照品约30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加 磷酸盐缓冲液（pH=5.0）溶解并稀释至刻度，摇匀即得。