分光光度计的校正和检验

4.稳定性的检验

稳定性通常检验如下：将仪器预热后， 精确调节投射比为0%，在规定时间内观 察其变化量是否符合要求。0%T稳定性 是与暗电流有关的指标。在0%T检验合 格后，再检验100%T稳定性。紫外-可见 分光光度计应在紫外区和可见光各测一 次。
分光光度计的矫正和检验
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721可见分光光度计
使用方法

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721型分光光度计其波长范围360～800nm，色散元件为 三角棱形. 1.检查仪器各调节钮的起始位置是否正确，接通电源开 关，打开样品室暗箱盖，使电表指针处于“0”位，预 热20min后，再选择须用的单色光波长和相应的放大灵 敏度档，用调“0”电位器调整电表为T=0%。 2.盖上样品室盖使光电管受光，推动试样架拉手，使参 比溶液池（溶液装入4/5高度，置第一格）置于光路上， 调节100%透射比调节器，使电表指针指T=100%。 3.重复进行打开样品室盖，调0，盖上样品室盖，调透 射比为100%的操作至仪器稳定。
1.波长校正


分光光度计常需要波长校正，检查仪器的波长刻度与 实际波长是否能较好的保持一致，以减小误差。 稀土玻璃（镨钕玻璃，钬玻璃）在相当宽的波长范围 内特征吸收峰，如通常采用镨钕玻璃在573nm和586nm 的双峰以及741nm和808nm等处的吸收峰来对分光光度 计的波长刻度进行校正。一般情况下，可见分光光度 计的波长误差允许在±3nm范围内。利用某些本身有较 强特征谱线的光源也可对波长进行校正，如氘灯和汞 灯广泛用于紫外线分光光度计的校正。此外，苯蒸汽 在紫外区有很强的特征吸收峰，用它来校正波长也很 方便。


4.盖上样品室盖，推动试样架拉手，使样品溶液池置于 光路上，读出吸光度值。读数后应立即打开样品室盖。 5.测量完毕，取出比色皿，洗净后倒置于滤纸上晾干。 各旋钮置于原来位置，电源开关置于“关”，拔下电 源插头。 6.放大器各档的灵敏度为：“l” ×1倍；“2”×10倍； “3”×20倍，灵敏度依次增大。由于单色光波长不同 时，光能量不同，需选不同的灵敏度档。选择原则是 在能使参比溶液调到T= 100%处时，尽量使用灵敏度较 低的档，以提高仪器的稳定性。改变灵敏度档后，应 重新调“0”和“100”。
3.散杂光的检验

由于仪器光源表面对光的反射和散射， 单色光中有一定的杂散光。杂散光可影 响摩尔吸光系数与吸光度之间的直线关 系。在仪器的光路系统中，往往采用一 定的措施避免杂散光的影响。如在721型 分光光度计中就装有保护玻璃片，以减 少杂散光的影响。杂散光的检验是在较 短波长下，测定某选定溶液的透射比。 药典规定用一定浓度的NaI或NaNO3溶液 检查，其投射比应小于规定值。


4.盖上样品室盖，推动试样架拉手，使样品溶液池置于 光路上，读出吸光度值。读数后应立即打开样品室盖。 5.测量完毕，取出比色皿，洗净后倒置于滤纸上晾干。 各旋钮置于原来位置，电源开关置于“关”，拔下电 源插头。 6.放大器各档的灵敏度为：“l” ×1倍；“2”×10倍； “3”×20倍，灵敏度依次增大。由于单色光波长不同 时，光能量不同，需选不同的灵敏度档。选择原则是 在能使参比溶液调到T= 100%处时，尽量使用灵敏度较 低的档，以提高仪器的稳定性。改变灵敏度档后，应 重新调“0”和“100”。
2.吸光度校正

在实际工作中，有时需要对仪器的吸光 度标准进行检查和校正。校正的方法是 将0.0303g干燥衡重的K2Cr2O7 溶于 1L0.05mol.L-1 的H2SO4溶液中，用1cm吸 收池，在25°C测定不同波长下的吸光度。
表3-6 重铬酸钾溶液吸光度
波长/nm
吸光度 0.446 0.171 0.295 0.496 0.663
投射比/(%) 35.8 67.4 50.7 31.9 23.3
波长/nm 340 350 360 370 380
吸光度 0.316 0.559 0.830 0.987 0.932
投射比/(%) 48.3 27.6 14.8 10.3 11.7
220 230 240 250 260
270
280 290 300 310 320 330
0.745
0.712 0.428 0.149 0.048 0.063 0.149
18.0
19.4 37.3 70.9 89.5 86.4 71.0
390
400 420 440 460 480 500
0.695
0.396 0.124 0.054 0.018 0.004 0.000
20.2
40.2 75.1 88.2 96.0 99.1 100