PEG诱导细胞融合

六、单元测验
一、单选题
1.目前生产中最常使用的细胞融合方法是 A.灭活病毒诱导 B.PEG诱导 C.电融合法 D.激光诱导融合法 2.PEG是 A.溶血卵磷脂 C.聚乙二醇 。 B.二甲基亚砜 D.磷脂酰丝氨酸 。
3. PEG诱导细胞融合时其 可使细胞凝集在一起。 A.醚键 B.醇键 C.碳-碳键 D.碳-氢键
4.PEG诱导细胞融合常用分子量为 。 A.100-400 B.1000-4000 C.10000-40000 D.以上均不对 5. PEG诱导细胞融合的常用浓度为 。 A.5% B. 10% C.50% D.100% 6. PEG诱导细胞融合的时间一般为 A.1min B. 2.5min C.10min 。 D.25min
• 目的：获得杂种优势
二、细胞融合的一般过程
凝集
膜融合
质融合
核融合
细胞膜的结构模式图
膜脂的主要运动方式
侧向扩散
旋转运动
摆动运动
伸缩震荡
翻转运动
旋转异构化运动
侧向扩散的频率：106/s 细胞融合关键是膜的融合，而膜融合 的关键是相邻的膜脂不稳定。
三、PEG的性质
• 中文名称：聚乙二醇 • 用于细胞融合的分子量:1000－6000 • 使用浓度:30－60％。 • PEG的处理时间:时间较短 • PEG分子量和浓度越大，其融合率越高，但它的细胞 毒性和粘度也随之增大。
第五章
细胞融合与杂交
分泌抗体 短命 脾细胞 (B淋巴细胞)
长命 不分泌抗体 骨髓瘤 细胞
杂交瘤细胞
分泌抗体 长命
1984 年 Nobel 医学奖
Köhler和Milstein, 1975
一、细胞融合的概念和目的
• 细胞融合：自然或人为条件下，两个或两 个以上细胞相互接触，发生膜融合、胞质 融合和核融合形成融合细胞的现象。
7. PEG诱导细胞融合一般与 搭配使用。 A. NaCl B. KCl C. CaCl 2 D. AlCl 3
二、简答题 1.简述动物细胞融合的一般过程。 2.简述PEG诱导细胞融合的优缺点。
四、PEG促融合作用机理
1、PEG含有大量醚键，可吸附溶液中大量的 自由水，使细胞凝集。 2、PEG可使细胞膜的脂类分子发生重排，排 开膜蛋白，并作用于膜磷脂极性基团和细胞 膜表面蛋白，使膜磷脂的表面电位下降，同 时使膜糖蛋白的排阻体积减少，最终使膜出 现缺口。
五、PEG诱导细胞融合的方法
1）亲本细胞混合，1000rpm，10min离心，弃上清。
2源自文库轻扣管底，混匀细胞， 37℃水浴。
3）60s内滴加0.6ml 50％PEG，边滴边摇动试管， 3）30s内将细胞悬液吸入吸管静置30s，再在30s内缓慢转 入离心管。
4）5min内加入10mlDMEM逐渐终止PEG的作用。
播放操作视频
• PEG诱导细胞融合的特点：
1、价格低廉，操作方便，融合能力强。 2、有毒，易损伤细胞。