随机扩增多态性DNA反应体系优化的研究

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禽波氏杆菌RAPD-PCR反应体系的建立与优化

ｐｒｉｍｅｒ，０．２ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｓ，ｌｍｍｏｌ／ＬＭｇ “ａｎｄ１ＵＴａｑＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ．Ｉｔｃａｎｇｅｎｅｒａｔｅｃｌｅａｒ，ｓｔｅａｄｙａｎｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｅＤＮＡｌａｆｇ —
ｖａｒｉｅｔｙｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｓ．ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｓｕｉｔａｂｌｅＲＡＰＤｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｏｒｆＢｏｒｄｅｔｅｌｌａａｖｉｕｍ，ｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｓｏｆＢｏｒｄｅｔｅｌｌａａｖｉｕｍｗｅｒｅｅｘ — ｔｒａｃｔｅｄａｓｔｅｍｐｌａｔｅｓａｎｄ２０ｒａｎｄｏｍｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄ．ＳｅｖｅｒａｌｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆＲＡＰＤ— ＰＣＲｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｗｅｒｅｓｔｕｄ — ｉｅ（１ａｎｄｏｐｔｉｍｉｚｅｄｂｙｓｅｔｔｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｏｒｆｓｉｎｇｌｅ — ｆａｃｔｏｒａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｒｏｕｇｈａｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｏｆｒｅｐｅａｔｅｄｔｒｉａｌｓ．６ｓｕｉｔａｂｌｅｒａｎｄｏｍｐｒｉｍｅｒｓ

狗脊蕨(Woodwardia japonica(L.f.)Sm)基因组DNA提取与随机扩增多态性DNA(RAPD)的优化

醇）６ ℃水浴ｌｈ期间每隔几分钟摇动一次；，５，ｌｈ后，入６０氯仿和异戊醇混合液（加５ｌ体积比２：）振４１，
荡摇匀， ℃１０ ×ｇ离心１ｎ取上清液４０ｌ至另一干净ｅｐｎｏｆ中，加入４０ｌ４００００ｍｉ；０转ｐｅｄｒ管再０的氯仿
１材料和方法
１１植物材料．
狗脊嫩叶采自于浙江宁波天童国家森林公园，放人封口袋中，壶保存，胶快速干燥后带回实验室冰硅
内，贮存于一７ ℃ 的超低温冰箱中．０
１２狗脊基因组Ｄ．ＮＡ提取及检测
（．５ｌＯ１ｍｍｏ／）扩增程序为：４ｕｌＬ，９ ℃预变性１ｒｉ，后９ ℃ 变性１ｒｉ，９退火ｌｎ７ ℃ 延伸２ｒｉ，０个ｎ然ａ４ｎ３℃ ａｍｉ，２ｎ４ａ
循环，最后７ ℃延伸１ｉ，℃保存．２０ｒｎ４ａ狗脊ＲＤ条件优化为分析狗脊蕨的遗传多样性打下稳定的基础．ＡＰ
ＶｏＩ６Ｎｏ２＿．
Ｍａ．２０ｒ０７
文章编号：０８９Ｏ（Ｏ７Ｏ－０２ —０１０ — ４３２Ｏ）２１９４
狗脊蕨（ｏｗｒｉｏｉａ（．ｆ）Ｓ基因组ＷｏｄａｄａｊｐｎｃＬ．ｍ）ａＤＮ提取与随机扩增多态性ＤＮＡ（ＡＰ的优化ＡＲＤ）
１２１狗脊基因组Ｄ．．ＮＡ提取（良的Ｃ改ＴＡＢ法）取新鲜叶子ｌｇ左右，加入适量液氮研磨，转移至６ ℃预热的６０２ＣＡＢ提取液中（ＣＡＢ；５５１Ｔ２Ｔ１４ｍｏ／Ｎａ１２．ｌＬＣ；Ｏｍｍｏ／ＤＴ（Ｈ．）１０ｍｍｏ／ｉＨＣ（Ｈ．）２（Ｖ）［巯基乙ｌＬＥＡｐ８０；０ｌＬＴｒ — １ｐ８０；Ｖ／的｝ｓ＿

佛手种质资源遗传多样性的随机扩增多态性DNA分析

佛手种质资源遗传多样性的随机扩增多态性DNA分析（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的研究佛手种质资源多样性和遗传关系。

方法采用随机扩增多态性随机扩增多态性DNA（RAPD）技术分析了佛手13份种质材料的亲缘关系。

结果从110条引物中筛选出16条多态性高的引物，共扩增出185条DNA带，其中多态性带有168条，多态率为90.8%。

通过聚类分析，在相似系数0.67的水平上将13份材料分为3类。

结论佛手种质间存在较丰富的遗传多样性，聚类结果与以产地为依据对佛手进行品种类群划分较为一致。

【关键词】佛手随机扩增多态度性DNA分析遗传多样性佛手Citrus medica L. var. sarcodactylis (Noot.) Swingle(CMS)为芸香科柑桔属植物，其干燥果实入药，具有舒肝理气、和胃止痛的功效［1］。

佛手悠久的栽培历史，形成了一些各具特色的地方品种，药材现行规格按产地主要分为广佛手、川佛手和浙佛手［2］。

目前，有关佛手种质资源的研究很少，对其种质资源的多样性和遗传结构缺乏系统的研究。

随机性扩增多态性DNA（RAPD）技术是20世纪90年代发展起来的一种快速便捷的分子标记技术，已被证明是研究植物遗传多样性及种质鉴定的有效手段，广泛应用于药用植物种内、种间及近缘属间系统学研究［3～5］。

本文拟采用RAPD技术分析佛手不同产地、不同栽培品种的亲缘关系及遗传多样性，旨在探究其基因组上的差异，为佛手种质资源的评价和育种提供分子依据。

1 器材和方法1.1 材料佛手Citrus medica L. var. sarcodactylis (Noot.) Swingle(CMS)的叶片，经广州中医药大学鉴定教研室张丹雁教授鉴定。

样品来源见表1。

1.2 仪器与试剂Beckman -15CSR冷冻高速离心机；PCR仪(Applied Biosystems 2720 Thermal cycler)；UVP GDS7600型凝胶成像仪；ECAN Spectra FLUOR plus多功能酶标仪。

【国家自然科学基金】_随机扩增多态性dna(rapd)_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140730

2009年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
推荐指数 14 3 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
2008年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
科研热词推荐指数 rapd 10 遗传多样性 4 随机扩增多态性dna 2 ssr 2 rflp 2 aflp 2 鸢尾属 1 鸡白痢沙门菌 1 鸡 1 鲍氏志贺菌 1 非混交雌体 1 霜霉病 1 雄体 1 随机扩增多态dna(rapd) 1 野生植物资源 1 郁金香 1 遗传距离 1 遗传背景 1 遗传相似性系数 1 螨类系统学 1 萼花臂尾轮虫 1 苦丁荼 1 苔藓植物 1 胡杨 1 肥披碱草 1 肠致病性大肠杆菌 1 聚类分析 1 系统关系 1 粗壮女贞 1 种间杂种 1 种质资源 1 磷脂酶 1 短花针茅 1 白色念珠菌 1 痢疾志贺菌 1 物种组成 1 浮游生物群落 1 沙皮犬 1 核酸序列分析 1 核桃 1 松花江 1 晚实 1 早实 1 新疆 1 抗病基因 1 差异性 1 多元回归 1 基因组dna 1 地理隔离 1 地理种群 1 加拿大披碱草 1 人参 1

玉米种质资源RAPD分子标记优化体系的建立

玉米种质资源RAPD分子标记优化体系的建立摘要：玉米是我国重要的作物之一，在我国农业生产中占有重要的地位。

吉林省玉米生产条件优越，推广面积广，品种的多样性丰富，为实现品种的管理高效科学，本实验以用玉米为材料进行rapd 的研究。

建立并优化了高效、稳定的玉米rapd实验体系，为后续玉米品种的管理提供了理论基础和实验支持。

关键词：玉米；rapd；体系中图分类号：s513 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-10-0050-1rapd（random amplified polymorphic dna，rapd）也称之为ap-pcr （arbitrary primer pcr），即随机扩增多态性dna技术，是由williams和welsh等发明的分子标记技术，是一项基于pcr技术的分子生物技术[1，2]。

是以基因组dna为模板，常以一个10mer随机的寡核苷酸序列作引物，通过pcr扩增，产生许多不连续的dna 产物，以检测dna序列的多态性。

它可以在物种遗传背景没有任何分子生物学研究的情况下，对其进行基因组指纹图谱进行研究，还可用于检测体细胞杂种和微生物分型[3]。

玉米是最为古老的栽培作物之一，目前为我国栽培作物的第二位。

吉林省是我国的玉米大省，玉米种植面积在全国位于前五，每年审定的新品种数目为全国第一。

由于目前玉米为品种检定手段还不完善，导致品种管理有一定的难度。

故本文进行了玉米rapd分子标记体系的相关研究。

1 材料与方法1.1 供试材料购买市售玉米主推品种种子。

1.2 试验试剂和仪器taqdna聚合酶、10×pcr buffer（含mg2+）、10碱基随机引物、dntps；琼脂糖、dna分子量标准（d2000maker）等购自上海生工。

1.3 rapd方法1.3.1 dna的提取以玉米种子产生的嫩芽为材料，使用植物基因组试剂盒提取。

dna回溶于灭菌水中，-20℃保存备用，1%琼脂糖凝胶电泳检测质量。

何首乌及其混伪品序列相关扩增多态性反应体系的优化

何首乌及其混伪品序列相关扩增多态性反应体系的优化（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的建立何首乌及其混伪品序列相关扩增多态性（SRAP）分子鉴定技术体系。

方法正交优化影响SRAP-PCR 的Mg2+、dNTPs、引物浓度与Taq聚合酶量。

结果20 μl反应体系的优化组合为：Mg2+ 2.5 mmol/L，dNTPs 0.4 mmol/L，引物0.35μmol/L，Taq酶1U。

结论Mg2+、dNTPs、引物浓度与Taq聚合酶量对不同物种SRAP-PCR结果有不同程度影响，利用SRAP分子鉴定前应对此4因素进行优化。

【关键词】何首乌混伪品序列相关扩增多态性优化Abstract：ObjectiveIn order to characterize Polygonum multiflorum Thunb. and its adulterants, the SRAP molecular marker system was established.MethodsOrthogonal design was used to optimize the concentrations of Mg2+, dNTPs, primers and Taq DNA olymerase. ResultsThe optimum system of 20 μl was as follows: Mg2+ 2.5 mmol/L, dNTPs 0.4 mmol/L, primer 0.35 μmol/L,Taq DNA polymerase 1 U. ConclusionThe concentrations of Mg2+, dNTPs, primers, Taq DNA olymerase have different effect in the result of SRAP-PCR in different species. It is necessary to optimize these four factors before using SRAP to identity different species.Key words：Polygonum multiflorum Thunb.; Adulterants; SRAP; Optimize何首乌Polygonum multilorum Thunb.是我国传统名贵中药，广东十大“道地药材”之一。

随机扩增多态性DNA

SCAR （Sequencecharacterized Amplified Region）标记是 Paran 和 Miehelmore(1993) 提出的，首次在 RAPD(random amplified polymorphic DNA)标记基础上转化并应用。发展该标记的初衷是为了提高RAPD标记在应用上的稳定性。其基本原理是将RAPD标记片段从凝胶上回收并进行克隆测序，根据其测得的序列结果设计一对特异引物，以此特异引物对基因组 DNA进行再扩增，便可以得到能反映标记性状的特异DNA片段，这种经过转化的特异DNA分子标记成为 SRAP。
无需专门设计扩增反应引物
仅加单个引物，扩增无特异性
退火温度低，有较高的检出率
技术简便易行、省时省力
分析所需的DNA 样品量，可在严谨条件下进行扩增，结果稳定
性好、可重复性强
1 引物设计不合适
产生 RAPD 多态性位点发生在随机引物的退火区，当引
物在3'端加长后，加长的碱基有足够的同源性而克服了原来RAPD引物而不能完全匹配基因组上许多DNA序列是多拷贝的，如果获得的标记是多拷贝，在SCAR 标记转化过程中，原来的标记位点多
2 序列相似或多拷贝 3 DNA甲基化
4 其他原因
态性在特异引物扩增后消失原始标记具有的多态性在转化 SCAR 时多态性消失，
而且不同材料扩增核苷酸序列完全相同，DNA甲基化，虽然基因表达调控发生变化，但核苷酸序列没有变化 SCAR标记表现为共显性，而且不同材料间扩增片段长度差异较小，在琼脂糖凝胶上可能检测不到差异回收的多态性片段中可能存在相同大小片段或存在邻近 DNA片段污染
“
SCAR标记一般表现为扩增片段的有无，为一种显性标记；但有时

东北细毛羊随机扩增多态DNA与产毛性状及体重的相关性研究

来，形成技术含量较高的服务队伍。为中、小型靠的动物疾病的第一平台，也为制定动物防疫工动物养殖企业和个体养殖户服务，以减少企业非作预警、预报提供第一手资料。兽医站在开展动生产人、财、物上的投入。物诊疗工作之外，还可协助国家官方兽医做好动从动物养殖产业的发展趋势看，从动物防疫物防疫工作，并可收取相应的服务费（强制免疫注射
．Ｎ的提取及检测参考单雪松博以后的双辽种羊场东北细毛羊种群的羊毛品质及１２全血基因ＤＡ２］，用酚一氯仿法从１ｌ．ｍ冻溶血样中提取５遗传特点的变化，本课题组于２０和２００４０５连续士论文１
两年对该场细毛羊羊毛纤维品质进行分析并做出基因组ＤＡＮ，溶于８Ｔ０Ｅ中，浓度约为２０ｎ。０ｇ１
［日期］０６０—１收稿２０—７１
） ◇ ◇ ｌ ◇ ◇ ０ ◇ ◇ 、０ ◇ ◇ ◇ ◇
径、自然长度及净毛率进行测量，按国家技术监
＞ｏｏＯＯＯｏｏＯＯｏｏＯＯｃ
法出具动物产地检疫合格证明。除此以外，区域取替个体动物散养生产模式。所以从长远的观点所还要承担其他６项职能，所以区域所的编制应看，村级防疫员的动物防疫工作，应充分发挥乡根据动物养殖、屠宰加工的规模设定６８。～名
种，主要分布在辽宁、吉林和黑龙江省的西北部方面的依据。
地区和部分丘陵地区ｌ双辽种羊场是东北细毛羊的１ｌ。１材料与方法．主要育种场之一，为了适应市场对于细羊毛的需１１样本的采集

11实验十一 RAPD扩增和检测分析

放置5min，6000g离心10min。
的氯仿:异戊醇(24:1)，混匀，６000g转离心5min；
⑤ 重复步骤④ 2-3次，直至无白色界面物质； ⑥ 将上层水相吸入另一干净的离心管中，加入2/3体积的预冷异丙醇，轻轻混匀使核酸沉淀下来。在-20℃下放置30min， 4℃、10000g转离心10min，弃上清液； ⑦ 沉淀用加入1ml洗涤缓冲液，10000g离心1-2min； ⑧ 沉淀用无水乙醇洗1次， 10000g离心1-2min； ⑨ 沉淀置于空气中3-5min，晾干后加入15-20 l无菌水溶解； ⑩ DNA含量测定及电泳检测，琼脂糖浓度为0.8%。取2-5lDNA溶液稀释至100l，于紫外核酸蛋白检测仪上测定A260、A280和A320的OD值，并计算DNA浓度和得率。注：核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm，在波长 260nm紫外线下，1g/mL的DNA溶液A260=0.020，1个OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50g/ml，单链DNA或RNA为40g /ml，单链寡核苷酸为20g/ml。纯的DNA的A260/A280在1.8左右。
中，加入0.7ml 60℃水浴中预热的2×CTAB提取液和20l 巯基乙醇，轻轻转动使之混匀； ② ③ ④ 样品于60℃温浴45min，每5min将Eppendorf管上下颠倒加入等体积氯仿:异戊醇(24:1)，轻轻颠倒混匀，室温下上层溶液转入另一个干净Eppendorf 管中，加入等体积混匀；
3. 凝胶谱带的判读与分析
用“1”(有) 和“0”(无) 记录谱带，把图形资料转换成数据资料。根据Jacard相似系数法，求得品种i 和j 之间的遗传相似性系数(F)，再根据D=1-F, 用SPSS软件进行聚类分析，构建分子进化系统树，进行遗传多样性和遗传关系分析。

木豆随机扩增多态性DNA的反应体系研究

关键词木豆；随机扩增多态性ＤＡ；Ｎ分子标记；反应体系中图分类号Ｓ８文献标识码Ａ１８文章编号０１６１（０８２０４９０５７— ６１２０）０— ８８ — ３
ＳｕｄｎｈｅＲｅｃｉｎＳｓｅｏｎｄｔｙｏｔａｔｏｙｔｍｆＲａｏｍｌｙＡｍｐｌｅｌｍｏｐｉｉｄＰｏｙｉｆｒｈｃＤＮＡｎＰｉｏｅｉｇｅｎｐａ
Ａｂｔａｔ『ｊｃｖ］Ｔｅａｍａｎｌｅｍｉｃｏｓｆｃｉｇ山ｅＲＤ—Ｃｅｃｉｎｏｉｅｎｅｎｐｉｚｅｃｉｎｃｎｉｏ．ｓｒｃ０ｂｅｔｅｈｉｗｓｔａａｙａｎｆｔｒａｆｔｉｏｚａｅｎＡＰＰＲｒａｔｆｇｏｐａａｄｏｔｅｒａｔｏｄｔｎｏｐｍｉｏｉ
ｄＴ，ＧＰ，ＴＰ）各０２ｍｌＬ，浓度２０ｍｍｏＬ，ＣＰｄＴｄｒ．ｍｏ／Ｍｇ．ｌ／酶１０Ｕ，应体积为２ｌ循环体系为：９１ｍｉ３２ｍｎ．反５。先４ｎ，５ｉ，
７２℃ ２ｍｎ５个循环；ｉ，然后９４℃ ３，７℃ １ｍｎ７０ｓ３ｉ，１ｉ。［０ｍｎ结论］用这一反应体系可有效利地进行木豆随机扩增多态性ＤＡ分析，大地提高了实验结果的可重复性。Ｎ极
ＪＡＧＨｉｉｇｅａ（ＢｏｃｎｌｙＩｓｔｔ，ｕｎｘＡａｅｙｏＡｒｕｕａＳｉｃｓＮｎｉ，ｕｎｘ５００）ＩＮｕ－ｎｔｌｐｉｅｈｏｇｔｅＧａｇｉｃｄｍｇｃｌｒｌｃｎｅ，ａｎｇＧａｇｉ３０７ｔｏｎｉｕｆｉｔｅｎ

rapd反应体系

rapd反应体系RAPD（随机扩增多态性DNA）反应体系是一种快速、简便且广泛应用于遗传多样性研究的分子生物学方法。

它通过扩增DNA片段上的随机位点，从而揭示物种或个体间的遗传差异。

RAPD反应体系主要包括模板DNA、引物、酶和核酸扩增的缓冲液等组成部分。

在RAPD反应体系中，模板DNA是进行扩增的起始材料。

它可以来自于不同个体或物种的基因组DNA。

为了获得较好的扩增效果，模板DNA需要经过一系列的操作，如提取、纯化和定量等。

引物是RAPD反应体系中的另一个关键组成部分。

它是一段短的DNA序列，能够与目标DNA特定区域的序列互补配对。

在RAPD 反应中，引物的选择非常重要，它需要具备一定的特性，如长度适中、GC含量合适、序列唯一等。

合适的引物可以提高扩增的特异性和效率。

酶在RAPD反应中起到催化作用，常用的酶是DNA聚合酶。

它能够识别引物与模板DNA的互补序列，并在适当的条件下引导DNA 的扩增。

为了保证酶的活性和稳定性，RAPD反应体系中需要添加适量的酶和相关的缓冲液。

除了上述主要组成部分外，RAPD反应体系还包括一些辅助成分。

例如，反应体系中需要加入适量的核酸扩增缓冲液，以维持反应的pH和离子强度。

此外，还需要添加适量的dNTPs（四个脱氧核苷三磷酸盐），作为DNA合成的原料。

在RAPD反应体系中，各个组成部分相互作用，共同完成DNA的扩增。

首先，通过在高温下使DNA两条链解开，形成单链模板。

然后，引物与模板DNA互补配对，形成引物-模板复合物。

接着，DNA聚合酶开始合成新的DNA链，从引物的3'端开始，一直到模板DNA的末端。

这样，就得到了两条与模板DNA互补的新DNA 链。

随着循环反应的进行，扩增产物会呈指数级增加。

RAPD反应体系具有许多优点。

首先，它不需要事先了解物种的基因组序列信息，只需要设计合适的引物即可进行扩增。

其次，RAPD反应快速、灵敏，可以在较短的时间内获得大量的遗传信息。

川木通的随机扩增多态性DNA与序列特征性扩增区域标记研究

鉴定提供了一种新方法。【关键词】川木通；随机扩增多态性ＤＮ序列特征性扩增区域Ａ；【中图分类号】Ｒ８．２２５【文献标志码】Ａ【文章编号】１７—２７２１）４０８ —４６４２５（０１０ —２３０
ＳｕｉｏｒｎｏｔｄｅｓｎａｄｍａｌｅｐｌｍｏｐｉＤＮＡａｄｓｑｕｎｅｃａａｔｒｚｄａｌｆｄｒｇｏｓｏＣａｌｍｐｉｄｉｆｏｙｒｈｃｎｅｅｃｈｒｃｅｉｅｍｐｉｅｅｉｎｆｉｕｉｓ
［ｅｏｄｌＣｕｉＣｅｔｉＡｍａｄｉＲｎｏａｌｉｏｙｎｒｈｃＤＫｙｗｒｓａｌｌｍａｉｓｒｎｉａｄｍｍｐｉｅｐｌｏｐｉＮＡ；ｅｕｎｅｃａａｔｒｅｓｄ；ｆｄｒＳｑｅｃｈｒｃｅｉｄｚ
・
Байду номын сангаас
中药品质研究专题・
川木通的随机扩增多态性ＤＮＡ与序列特征性扩增区域标记研究
国锦琳，远，唐裴瑾，万德光
（成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地中药资源系统研究与开发利用成都６１３）１１７四川
ａｌｉｏｙｒｈｃＤｍｐｉｅｐｌｆｄｍｏｐｉＮＡ（ＡＰ．ｔｏｓＴｈａｍｅｔｇｎｒｔｄｂｓｌｔｄｐｉｒ（ｍｎ０ｒｒ）ＲＤ）Ｍｅｈｄｅｒｇｎｓｅｅａｅｙ５ｅｅｅｒｆｃｍｅｓａｏｇ１０ｐｉｓｍｅｏ０ｄｆｒｎｐｃｅｒｍｅｅｃｔｎ．ｒｅｓｑｅｃｈｒｃｅｉｄａｌｉｅｉＳＡＲ）ｒｅｓｗｒｎ１ｉｅｅｔｓｅｉｆｏｓｖｎｌａｉｓＴｈｅｅｕｎｅｃａａｔｒｅｍｐｉｅｒｇｏＣｆｓｏｏｚｆｄｎ（ｍａｋｒｅｅ

白色念珠菌分子生物学分型方法研究进展

动物医学进展,2006,27(11):427Progress in Veterinary Medicine白色念珠菌分子生物学分型方法研究进展3王惠芳1,2,陆慧君1,贺文琦1,刘立国1,张素阁2,邓旭亮33(1.吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062;2.济南军区总医院,山东济南250031;3.北京大学口腔医院口腔医学院,北京100081)中图分类号:S852.661;R519.3文献标识码:A文章编号:100725038(2006)1120004204摘　要:白色念珠菌是一种致病性酵母真菌,可引起人畜口腔、上呼吸道、阴道黏膜及全身性感染。

随着抗真菌药物的长期大量使用,真菌的耐药性越来越严重。

临床调查结果表明,白色念珠菌感染在真菌感染病例中跃居第2位。

正确鉴定与分类有利于对白色念珠菌感染进行及时诊断、预防和治疗。

文章主要对白色念珠菌的分子生物学分型方法进行综述。

关键词:白色念珠菌;分型;随机扩增多态性DNA技术念珠菌属(Genus Candida)包括大约150种不产生芽孢的酵母菌种属,现已命名的有81种。

由于它们没有能力形成有性生殖阶段,所以属于真菌超纲(Eumycetes)、不全菌纲(Deuteromycetes or f ungi imperfecti)、隐球菌科(Family cryptococcaceae)。

对人类有致病作用的有11种念珠菌,包括白色念珠菌(C.albicans)、热带念珠菌(C.tropicalis)、近平滑念珠菌(C.para psilosis)、星形念珠菌(C.stell atoi dea)等[1]。

其中,白色念珠菌、热带念珠菌和近平滑念珠菌是经常从医学标本中分离出来的3个菌种,白色念珠菌的致病力最强。

而在医院临床感染的致病菌中,白色念珠菌感染已跃居第4位[2]。

对白色念珠菌感染进行正确的诊断、有效的治疗及预防,首先需要可靠的菌种鉴定分类方法,特别是菌株间关系的分析判断,对确定传染源和传播途径十分重要。

道地药材浙玄参的随机扩增多态性DNA研究

进
３０５）１０３
摘要：目的探讨道地药材浙玄参与非道地药材之间遗传变异大小，并建立道地药材浙玄参的品质鉴定方法。方法运用
随机扩增多态性ＤＡ（ＡＤ法对产于浙江、ＮＲＰ）山东、湖北的玄参科植物玄参进行了子标记研究。结果共筛选出９条有
效引物，获得１２条ＤＡ带，４Ｎ通过聚类分析，构建ＤＡ分子系统树图，Ｎ确定不同居群间的亲缘关系。结论同种异地药材
时珍国医国药２１００年第２１卷第８期
ＬＨＺＥＥＩＩＥＡＤＭＴＲＡＭＤＣＥＥＲＨ２１ＶＬ２Ｏ８ＩＩＮＭＤＣＮＮＡＥＩＥＩＡＲＳＡＣ０Ｏ．１．ＳＨ０Ｎ
１８９９：２４３．本实验所建立方法可以快速检测ｊ聿草中总黄酮与木犀草素［］周萍，３胡碧波，朱倩，花生壳总黄酮及木犀草素含量［］等．Ｊ．的含量，并对不同居群薇草中黄酮类化合物含量进行了比较，为中药材，０６２（）７９２０，９８：６．蓓草资源的深度开发提供了参考。
中图分类号：２２５Ｒ５Ｒ８．；７
文献标识码：Ｂ
文章编号：０８００（０００ —９６２１０－８５２１）８１３－０
玄参别名元参、黑参、浙玄参，为玄参科植物玄参Ｓｒｈｌｒ２１基因组ＤＡ提取方法采用改良ＳＳ法提取基因组，ｃｐｕａ－．ｏＮＤ具ｉｉｐｅｓｍ１的干燥根，ｕｎｇｏｎｉＨｅｓｎｓ．具有滋阴降火、解毒之功效。主体操作如下：１ｇ取叶片，剪碎后加入适量ＰＰ一起于液氮中研Ｖ，０提取缓冲液的离心管中，轻轻产于浙江，另外在山东、湖北、四川、陕西等也有栽培。其中以浙磨成粉。转移粉末到加有５０ｌ

南北五味子随机扩增DNA多态性(RAPD)指纹图谱研究

ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＲＡＰＤｓｈｏｕｌｄｂｅａｓｉｍｐｌｅ，ｅｆｆｅｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｍｅｔｈｏｄｏｒｆｔｈｅｉｄｅｎｔｉｉｃｆａｔｉｏｎｏｆＳｃｈｉｓａｎｄｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓａｎｄＳｃｈｉｓａｎｄｒａｓｐｈｅｎａｎｔｈｅｒａ．
ｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｌｉａｂｌｅｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｉｄｅｎｔｉｉｃｆａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍ．ＭｅｔｈｏｄＣＴＡＢｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｅｘｔｒａｃｔａｎｄｐｕｒｉｆｙＤＮＡｏｆＳｃｈｉｓａｎｄｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓａｎｄＳｃｈｉｓａｎｄｒａｓｐｈｅｎａｎｔｈｅｒａｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｒｅａｓ，ａｎｄｔｈｅＲＡＰＤｏｆｇｅｎｏｍｅ
苑广信，孙绩岩，范新田
（北华大学药学院，吉林吉林摘要：目的１３２０１３）
建立南北五味子随机扩增ＤＮＡ多态性标记（（ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｉｆｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ，ＲＡＰＤ）指纹图谱，采用ＣＴＡＢ法从不同产地的南北五味子样品中提取基因组ＤＮＡ并北五味子和南五味子基因组ＤＮＡ随机引物

吐鲁番果蝇随机扩增DNA多态性初步分析

１４ＰＲ扩增反应及检测［１．Ｃ９１－
ＰＲ扩增反应在ＰｒｉＥｍｅＮＡＴｈｒｌｙｌ６０型扩增仪上进行．２ＣｅｋｎｌｒＤｅｍａＣｃｅ９０ｒＯ条１ｐ随机引物（１０ｂＳ
一
Ｓ０以及所用试剂均为北京生物工程公司产品。２）
［收稿日期］ｏ９７５２Ｏ一ｏ —１
［作者简介］谢红桃（９１，，１７一）女河南封邱人，硕士，讲师，主要从事遗传学方向的研究。
８０
新疆师范大学学报（自然科学版）
参照陈燕茹，许秀华，中明琼脂糖凝胶电泳检测Ｄ赵ＮＡ的方法］ｎ。
Ｖｏ．９Ｎｏ１１２，．
Ｍａ．２０ｒ０１
２１００年３月
吐鲁番果蝇随机扩增ＤＮＡ多态性初步分析
谢红桃，王泽蒲
（疆师范大学生命科学与化学学院，疆乌鲁木齐８０５）新新３０４
摘要：由于吐鲁番地区独特的气候特点，对吐鲁番果蝇和实验室野生型果蝇进行随机引物扩增ＤＡ多态性的Ｎ初步研
７９
第２卷９
第１期
《新疆师范大学学报》自然科学版）（
ＪｕｎｌｆＸｉａｇＮｏｍａｉｅｓｔｏｒａ￣ｉｎｒｌＵｎｖｒｉｙｏ
（ｔｒｌＳｉｎｅｉｏ）ＮａｕａｃｅｃｓＥｄｔｎｉ
１材料与方法
１１样品的采集．
２００８年７月到９月，吐鲁番地区采集并在遗传学实验室２在５℃恒温箱中培养一段时间的吐鲁番果蝇。

金钗石斛遗传多样性研究的随机扩增多态DNA-PCR反应体系的建立与优化

Ｍｅｉ，ｈｎｈｉｎｖｒｔｄｔｎｌｈｎｓＭｅｉｎ，ｎ：．Ｓａｇａ＆ｅｔｒｔｎａｄａｄｃＳａｇａＵｉｓｙｏａｅｉｆｉｏａＣｉｅｄｃｅＣｉａ２ｈｎｈｉＤＣｎｒｆａｄｒｉ — ｉｅｉＲｅｏＳｚ
ｔｎｏｈｎｓＭｅｉｎ．ｈｎｈｉ０３．ｈｎ）ｉＣｉｅｄｃｅＳａｇａ０Ｃｉａｏｆｅｉ２１２
ＡｂｔａｔＯｂｅｔｅＴｓｂｉｎｐｉｉＡＤＰＲｓｓｍｏ．ｎｂｅＬｎ１ＭｅｈｄｈｅａｌＲＰｓｒｃ：ｊｃｉｏｅｔｌｈａｄｏｔｚＲＰ — ＣｙｔｆｖａｓｍｅｅＤｏｉｉｄ．ｔｏｓＴｅｒｉｅＡＤ—ＰＲｓｓｌｌｂＣｙ
ｔｓｏｈｅｆｃｏｓＲｅｕｌｓｉｆｔａｔｒ．ｏｎｓｔＴｈｅｃｎｄｔｏｓｔａｒｕｔｂｅｆｒＲＡＰＤ — ＰＣＲｆＤ．ｎｂｌｉｄ．ｗｅｅａｌｏｏｉｉｎｈｔｗｅｅｓｉａｌｏｏｏｉｅＬｎ１ｒｓｆｌｗｓ：１ｘｏ０ＩｌＰＣＲｒａｔｏｙｔｍｏａｎｅ～２ｅｌｔｅｃｉｎｓｓｅｃｎｔｉｄ５０ｎｇｔｍｐａｅＤＮＡ，３．ｍｏ０ｍｌ・ＬＭｇ“ ，０．４ｍｍｏ３ｌ・Ｌ～ｄＮＴＰｓ，０．Ｔａ６ＵｑＤＮＡｏｙｍｅａｅｐｌｒｓ
ａｄ１５ｎ．ｕｍ０ｌ・Ｌ～ｐｉ．ＴｅｓｉｂｅａｎａｉｇｔｍｐｒｔｒｎｔｅＲＤ —ＰＲｒａｔｎｓｓｅｗｓ３ ℃ ．ＣｏｃｕｉｎＴｅｒｍｅｈｕｔｌｎｅｌｅｅａｕｅｉｈＡＰａｎＣｅｃｉｙｔｍａ６ｏｎｌｓｏｈ

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ｓｅｍｐｒＤＮＡｆｇｎａｉｎａｎｘｅｔｄａｖｒｅｅｆｃ［］Ｒ — ｒｍｅｔｔ：ｎｕｅｐｃｅｄｅｓｆｔＪ．ｅａｏｅ
ｐｒｄｔｖｏＭｅｉｉｅＯＭｉｅ，０７，４４：１ — ２．ｏｕｃｉｅＢｉｄｃｎｎ２０１（）４８４１
（）：３ — ４．１３１３５
为性官腔内人工授精、ＶＩＦ和单精子卵细胞质内注射治疗没有
怀孕或妊娠率很低＿］１。而该项检测与精液常规中的精子前
２９２．
［］Ｅｇｒ，ｅｓｅＣｏｔ，ｔ１Ｈｉｈｒｋｏｍｐｒｒｌ５ｒｅｉＭＭｉｕｓｔｅＲ，ｒｕｅＦｅ．ｇｉｆｅｏａｙａａｓｔ —
ｔｒｔｎｏｅｎｐｒｍｅｅｓａｔｒｒｃｎｃｔｂｉｌｅｓＪ．ｅａｉｆｍｅａａｔｒｆｅｅｅｔａｕｅｆｒｅｉｎｓ［］ｏｓｅｌｌ
［］ＢｎｕＭ，ｍａａＡｘｎＡ，ｔａ．ｐｒＤ７ｕｇｍＨｕｉｎＰ，ｍｏｅ１ＳｅｍＮＡｔｇｉｄｉｅｒｙｎｔ
ａｓｓｍｅｔｉｒｄｃｉｎｏｓｉｔｄｒｐｏｕｔｏｅｈｏｏｙｏｓｅｓｎｎｐｅｉｔｏｆａｓｓｅｅｒｄｃｉｎｔｃｎｌｄＰｏｉＤ，ｔａＳｕｙｏｐｐｏｉＤ３ｎｉｉＬｍｂｒｏＦ，ａｌｅ１ｔｄｆａｏｔｔＮＡ．ｃｆａｍｅｔｔｎｉｈｍａｐｒｔｚａＪ．ｍｐｏ，００１ｒｇｎａｉｎｕｎｓｅｍａｏｏ［］ＨｕＲｅｒｄ２０，ｏ５
Ｆｅｔｅｉ，０７，８４ｅ．７一７９０ｒｉＳｔｒ１２０８（）：１９０ｅ．７．ｌ
［］Ｍ６６ｏＹＪＨａｏｔＡ，ａｔｉｅ１Ａｎｉｘｄｎｓｔｅｕｅ６ｎｚＲ，ｚｕＰｎｅＧ，ｔａ．ｔｉａｔｏｒｄｃｘｏ
性检测对于诊断男性不育患者的病因及采取相应治疗措施非
常必要。
ｃｍｅＪ．ｍｅｒｄ２０，２１：７ —７．ｏ［］ＨｕＲｐｏ，０７２（）１４１９
［］ＡｇｒｌＳｉＴ．ｏｅｏｐｒｃｒｍａｉｂｏｍａｔｓａｄ８ａｗａＡ，ａｄＭＲｌｆｅｍｈｏｔａｎｒｌｉｎｓｎｉｅ
随着年龄增长，Ａ碎片阳性率呈增高趋势，使得辅助ＤＮ也
生殖技术的成功率大大降低＿，阳性率大于２时一般认】当７
ＤＮＡｄｍａｅｉｍａｅｉｆｒｉｔ［］ＨｕＲｐｏｄｔ，０３９ａｇｎｌｎｅｔｉＪ．ｍｅｒｄＵｐａｅ２０，ｌｙ
（）：３－３．４８０８９
核蛋白组型转换、二硫键交联等一系列过程，易受到环境因容素、物因素、物接触、染、烟等作用会导致染色质结构生药感吸异常］同时，，高度浓缩的结构造成精子缺乏修复ＤＮＡ缺陷的能力，构损伤比较稳定，一直存在。染色质结构异常的结可发生机制假说包括染色质包装缺陷、亡异常及氧化应激凋等［，现为核蛋白组型异常和Ｄ８表］ＮＡ链碎片化。核蛋白核型
・７４１２・
国际检验医学杂志２１７月第３０２年３卷第ｌ４期
ＩｔａｎＬｂＭｅ，ｌ２１，１３Ｎｏ１ＪｄＪｙ０２Ｖｏ３，．４ｕ．
响较大。
ｕｉｇｔｅｓｅｍｈｏｔｔｕｔｒｓａ［］ＲｅｒｄｃｉｅＢｏｓｈｐｒｃｒｍａｉｓｒｃｕｅａｓｙＪ．ｐｏｕｔｉｎｎｖ
３讨
论
Ｍｅｃｎｌ，０６，２４，ｒｉｌ０３）：６ — ７．ｄｉｉｅ０ｎｉ２０１（ａｔｃｅ２７４６４２ｎｅ
精子染色质具有由ＤＮＡ双链和碱性鱼精蛋白相结合形
成的高度浓缩的特殊结构，种结构的形成涉及精子发生中的这
ＤＮＡ链断裂。而这种损伤较难由传统的如精子密度、子活精力、率等指标来反映，种由Ｄ活这ＮＡ损伤导致的男性不育在原发性不育患者中占有较大比例ｌ，此进行精子Ｄ＿因９］ＮＡ完整
异常的精子由于核蛋白对ＤＮＡ的保护作用减低，容易出现更
［］ＺｎＳｇｎＭ．ｅｔｓｓｏｐｒＤＮＡｄｍａｅｃｉｉｌｓ～４ｉｉＡ，ｉｍａＡｒｅｔｆｓｅｍａｇｌｃｌｕｅｎａｙｆｌＪ．ｒｓａｄＣｎｏｒａｏｄｏｏｙ２０，０（）２９ｕＥ］ＰｏｎｏｓＪｕｎｌｆＡｎｒｌｇ，０９３３：１—