脂肪酶活测定

一．脂肪酶活测定

原理：脂肪酶在一定条件下，将甘油三酯水解。在不同水解阶段可分别产生脂肪酸、甘油二酯、甘油一酯及甘油。水解所产生的脂肪酸可以用标准的氢氧化钠滴定，用滴定值表示酶活力。

酸碱滴定法 :

酶活力以国际单位表示，即在一定条件下，脂肪酶水解脂肪每分钟产生1微克分子脂肪酸的酶量定为一个国际单位。脂肪酶活力单位＝(A-B)*nf/t*v

式中：A为样品耗碱液ml数，B为对照组耗碱液ml数，n为每毫升碱液微克分子数

(n=cM=0.05x23x1000)，f为稀释倍数，t为作用时间(分),v:反应的酶液的体积

二．挥发性脂肪酸（VFA）的测定

滴定法分析

1原理：将废水以磷酸酸化后，从中蒸发出挥发性脂肪酸，再以酚酞为指示剂用NaOH 溶液滴定馏出液。废水中的氨态氮可能对测定形成干扰，因此应当首先在碱性条件下蒸发出氨态氮。

4．计算

挥发性脂肪酸含量计算如下：

VFA=V (NaOH)*C*1000/Vs (mmol/L)

式中：V(NaOH)-----滴定消耗的NaOH标准溶液的体积，ml;

c ------ 滴定消耗的NaOH标准溶液的准确浓度，mol/L;

Vs--------被测废水水样的体积，ml.

酶活力定义：40℃,ph为5.6的条件下，每分钟酶解淀粉释放出lmg的还原糖(葡萄糖)所需酶量为一个酶活力单位。1U=1mg还原糖\min.ml酶

三．淀粉水解酶活性

原理：淀粉的水解产物麦芽糖及其他还原性糖能与3，5-二硝基水杨酸试剂反应，使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比，可用麦芽糖(或葡萄糖)浓度表示，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位体积样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。

四.纤维素酶酶活力测定：

原理：纤维素酶水解纤维素，产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3,5-二硝基水杨酸中硝基还原成橙黄色的氨基化合物，在550nm波长处有最大光吸收，在一定的范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度成比例关系，利用比色法测定其还原糖的量

就可测定纤维素酶的活力。

酶活单位定义为;在上述反应条件下，每分钟酶解CMC释放出lug的还原糖(葡萄糖)所需酶量为一个酶活力单位。

纤维素水解酶单位(U\ml)=b.n.1000\vt

b:从标准曲线查得的葡萄糖含量(mg)

n：稀释倍数

1000：毫克换算成微克的换算系数

V：测定时吸取的稀释酶液体积

t：反应时间