4种灰树花多糖测定方法的比较
灰树花子实体多糖的微波提取及絮凝纯化工艺
灰树花子实体多糖的微波提取及絮凝纯化工艺满宁;孙盼;韩伟【摘要】以得率为指标,去离子水为溶剂,微波提取灰树花多糖,得到最佳提取工艺为:药材粒径840～2 000 μm,液固比30 mL/g,微波提取210 s,溶剂pH=6;以脱蛋白率和多糖保留率为指标,壳聚糖为絮凝剂纯化灰树花多糖提取液,得到最佳工艺参数为:壳聚糖1.0 mL/g,絮凝1h,液药比40 mL/g,药液pH=6,温度控制在45℃.与其他工艺相比,本文采用的微波提取及絮凝纯化方法操作高效,能有效提高灰树花多糖的得率和纯度.【期刊名称】《南京工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(037)006【总页数】6页(P99-104)【关键词】灰树花;多糖;微波;絮凝【作者】满宁;孙盼;韩伟【作者单位】华东理工大学药学院中药现代化工程中心,上海 200237;华东理工大学药学院中药现代化工程中心,上海 200237;华东理工大学药学院中药现代化工程中心,上海 200237【正文语种】中文【中图分类】R284.2灰树花（Grifola frondosa）是一种药食两用非褶菌目、多孔菌属大型真菌，又名千佛菌、贝叶多孔菌、栗子蘑等，属担子菌亚门，层菌纲，无隔担子菌亚纲［1－3］。
灰树花的主要生物活性物质灰树花多糖含丰富的β-1，6-糖苷键及β-1，3-糖苷键［4］，具有抗艾滋（HIV）病毒，抗肿瘤，降血压，调节血糖、血脂及胆固醇水平，增强免疫系统功能的作用［5］，对艾滋病、高血压、糖尿病等疾病防治及免疫系统功能下降具有一定的疗效，且无毒副作用［6－9］。
传统的多糖提取方法有热水提取法、酸提法和碱提法等［10］。
一般的脱蛋白纯化方法为醇沉法、Sevage法和三氯乙酸法等［11］。
这些提取和纯化方法存在操作时间长、试剂用量大、效率低、效果差等缺点。
微波萃取是一项新型提取技术，具有节省时间，提高提取效率，降低耗能，提升产率等优点［12］。
絮凝纯化法能有效除去中药材中酚类物质、蛋白质、色素等杂质，不破坏有效成分，具有絮凝剂用量少、无残留、高效等特点。
测定多糖含量测定方法
测定多糖含量测定方法
多糖含量的测定方法有多种，以下列举几种常用的方法：
1. 酚-硫酸法：将待测样品加入酚-硫酸混合液中，经强酸催化后，产生深棕色或褐色色素，根据其吸收波长测定其光密度，即可得到多糖含量。
2. 比色法：将待测样品加入反应液中，经过酸或碱催化后，与磷钨酸等试剂发生比色反应，测定吸收波长，计算多糖含量。
3. 全甘蔗多糖含量测定法：利用全甘蔗多糖的特性，在酸性条件下能与硫酸基团结合产生黄色化合物，根据其吸收波长测定光密度，计算多糖含量。
4. 中性多糖含量测定法：利用中性多糖的特性，在加酸或碱后，能够水解为单糖，利用安替比林反应或酶法，测定水解产物里的糖含量，根据比例关系计算多糖含量。
5. 光学活性低分子糖含量测定法：利用光学活性低分子糖所具有的旋光性质，通过测定样品的旋光度，计算出其中低分子糖的含量，进而计算多糖含量。
灰树花糖蛋白中总糖含量的测定
灰树花糖蛋白中总糖含量的测定
灰树花糖蛋白中总糖含量的测定
探讨糖蛋白中总糖含量测定的简捷方法,以2种灰树花糖蛋白(GF6A,GF6B)为原料,分别以硫酸-苯酚法和次亚碘酸钠法对其中的总糖含量进行了比较分析.结果显示,应用前者方法测定多糖含量分别为85.45%和38.46%,采用后者方法测定结果分别为87.03%,36.51%, 2种方法测定的结果相近,其中以硫酸-苯酚法因不需对样品进行预水解,方法简便、可靠,更适合于糖蛋白中总糖含量测定.
作者：杨晓华于广利赵峡宋乐天高昊东 YANG Xiao-Hua YU Guang-Li ZHAO Xia SONG Le-Tian GAO Hao-Dong 作者单位：中国海洋大学海洋药物与食品研究所,山东,青岛,266003 刊名：中国海洋大学学报（自然科学版）ISTIC PKU英文刊名：PERIODICAL OF OCEAN UNIVERSITY OF CHINA 年，卷(期)：2006 36(6) 分类号：Q936 关键词：灰树花糖蛋白硫酸-苯酚次亚碘酸钠总糖。
灰树花多糖物质的提取及体外抗氧化活性评价
机体免疫调节作用，即通过增强巨噬细胞的吞噬作用，促进免疫球蛋白的形成，提高机体本 身的抗病能力或增强机体对放疗和化疗的耐受性，是一种非直接杀伤癌细胞作用[6]。 多糖广泛存在于自然界, 是来自高等植物、动物细胞膜、微生物细胞壁中的天然大分子 物质, 是构成生命活动的四大基本物质之一, 并与维持生命所需的多种生理功能密切相关。 多糖具有复杂的的生物活性与功能[11], 如作为其他海洋生物的营养物资源、降血脂及抗氧化 作用、免疫调节活性、抗突变、抗病毒及抗肿瘤等, 而且对正常的细胞没有毒副作用, 已逐 渐发展成为一种免疫疗法, 越来越受到研究人员的重视[13]。多糖具有多种生物活性, 在生物 体内起着重要作用, 现已成为国内外众多学科领域研究的热点之一。多糖又称多聚糖, 是由 单糖缩合成的多聚物, 它是生物体内除蛋白质和核酸以外的又一类重要的信息分子[2]。研究 表明多糖具有多种生物功能如:增强机体免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、降血糖等 纪将是多糖的时代” 。 灰树花多糖是灰树花中的一种提取物，是由葡萄糖、丰乳糖、木糖组成的杂多糖[16]。目 前，国内对灰树花多糖的研究主要集中在其抗癌症、降血糖以及体外抗氧化性等方面[4]，虽 然有一些相关文献对于灰树花多糖的提取以及纯化有相关的报道，但是对于这方面的研究相 对较少的。学者们对于灰树花菌丝粉多糖物质的提取及体外抗氧化活性的研究已经有了比较 深入的探讨，今后将会有更多的学者对此进行深入探讨和研究。并且会对人类未来医学上、 生命学上有更进一步的提升。 三、本课题研究内容 采用热水浸提法，正交法优化灰树花子实体中多糖物质提取工艺。并对灰树花子实体中 多糖提取物进行体外抗氧化活性评价。 （一）灰树花子实体中多糖物质提取工艺研究 1．单因素实验：分别考察提取温度、提取时间、料液比对灰树花子实体中多糖物质提 取率的影响。 2．正交实验：在单因素实验的基础上，设计三因素三水平的正交试验，建立灰树花子 实体多糖物质含量测定方法，以多糖物质提取率为评价指标，得到最佳提取工艺条件。 （二）灰树花子实体中多糖提取物的体外抗氧化活性评价 分别测定灰树花子实体多糖还原力、对 DPPH 自由基、超氧阴离子、羟自由基的清除能 力，对灰树花子实体多糖物质的体外抗氧化活性进行综合评价。 四、 本课题研究方法 1.本次实验先采用单因素实验法，热水浸提法提取苦瓜多糖的关键影响因素 具体步骤如下： 灰树花子实体→加入蒸馏水→微波处理→热水浸提→离心→干燥→去蛋白→无水乙醇 沉淀→离心→去沉淀→乙醇洗涤沉淀→干燥→灰树花多糖（粗多糖）
多糖含量测定的几种不同方法比较
多糖含量测定的几种不同方法比较系别:信息学院专业:生物工程学号:姓名:指导教师:指导教师职称: 讲师多糖含量测定的几种不同方法比较摘要：本文综述了多糖含量测定的几种常用方法，主要有苯酚-硫酸法、3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法)、蒽酮-硫酸法、色谱法、红外光谱定量分析多糖法等。
并对这些方法的优缺点进行了分析和比较。
这些方法可为多糖含量测定提供一定的参考，并为多糖含量测定的更深入研究提供一定的理论基础。
关键词：多糖；含量；测定；方法A review of different methodsto the determination of polysaccharidesAbstract: Paper reviewed some different methods to the determination of polysaccharides, in it phenol-vitriol method, 3, 5-two nitro salicylic acid (DNS) method, anthrone-vitriol method, chromatography, infrared spectrum quantitative analysis and etc had been dealed with. And the advantages and disadvantages of these methods are analyzed and compared. It provided some related information and based theories to the determination of polysaccharides content.Key words：polysaccharides; content; determination; methods目录中文摘要 (I)英文摘要 (II)1前言 (1)2化学法测定多糖含量 (1)2.1苯酚-硫酸法 (1)2.2 3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法) (2)2.3蒽酮-硫酸法 (2)3色谱法测定多糖含量的研究 (3)3.1气相色谱法(GC) (3)3.2 液相色谱法(HPLC) (3)3.3薄层色谱法(TLC) (4)4其他方法 (4)4.1红外光谱定量分析多糖法 (4)4.2生物传感器法 (5)5结论 (5)6展望 (6)参考文献 (6)致谢 (9)1前言多糖(polysaccharides，PS)是由10个以上的单糖聚合而成的生物高分子[1]。
不同产地灰树花多糖含量测定
不同产地灰树花多糖含量测定
隆毅;李万芳;石俊英
【期刊名称】《食品与药品》
【年(卷),期】2012(000)009
【摘要】目的测定不同产地灰树花多糖含量，为灰树花多糖的综合开发利用提供科学依据.方法采用蒽酮-硫酸法，正交试验确定最佳工艺，测定不同产地灰树花粗多糖、可溶性糖含量.结果18批不同产地灰树花粗多糖含量8.17%~34.82%，可溶性糖含量27.46%~55.65%.结论不同产地灰树花多糖含量具有显著差异.
【总页数】3页(P331-333)
【作者】隆毅;李万芳;石俊英
【作者单位】山东中医药大学药学院,山东济南250355;山东中医药大学药学院,山东济南250355;山东中医药大学药学院,山东济南250355
【正文语种】中文
【中图分类】Q539
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1.不同部位、不同产地及不同采集时间连翘中连翘酯苷A的含量测定 [J], 靖会;李教社;杨银京
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3.不同产地丫蕊花不同部位中3种皂苷成分含量测定及差异分析 [J], 陈帅; 张美; 袁崇均; 罗森; 王笳
4.不同产地不同采集期滇桂艾纳香中总黄酮及原儿茶酸的含量测定 [J], 周江煜;侯
小涛;韦宏官;戴航
5.不同种不同药用部位不同产地千斤拔中总黄酮的含量测定 [J], 任朝琴;刘圆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
灰树花多糖咀嚼片中多糖含量测定
２ ． ３ ． ４重现性 ： 精称灰树花多糖 咀嚼片细粉 ６份 ， 照２ ． ２ 项 下制 备， ２ ． ３ ． ６项 下方法 测定 ， 葡糖 糖含 量的 Ｒ Ｓ Ｄ ％＝ Ｉ ． ２ ， 表明重 现
性 良好 。
２ ． ３ ． ５回收率 ： 精取供试液（ 含多糖 ８ ． ４ ２ ５ ６ ｍ￣ ｍ１ ） ０ ． ４ ｍ ｌ ， ６份 ， 加 标准液 １ ５ ｍ ｌ ， 于 １ ０ ０ ｍｌ 量瓶 中混匀并 稀释至刻度 。精取 ｌ ｍ ｌ ， ７ ２ １ — １ ０ ０分光光度计 （ 上海第三分析仪 器厂 ） ； 高 速离 心机 照含量测定项 下方法测定 ， 结果见表 １ 。 （ 上海医疗器械三 厂 ） ； Ｆ Ａ１ １ ０ ４型电子分析天 平 （ 上海精 密科 ２ ． ３ ． ６含量 测定 ： 精取供 试液 ０ ． ８ ｍ ｌ ， 置人 １ ０ ０ ｍ ］ 量瓶 并加水至 学 仪 器 有 限公 司 ） 。 刻度 ， 取 ｌ ｍｌ 。放入 １ ０ ｍ ］ 具塞试管 中， 按照 ２ ． ４ ． ３项下 自“ 放入 葡萄糖 、 硫酸 、 乙醇 、 乙醚 、 蒽酮 （ Ａ Ｒ国药集 团化学试剂有 冰水 ” 始， 进行测定 ， 计 算多糖含量 。 表 １ 多糖 咀 嚼 片 多 糖 含 量 测 定 结 果 限公 司） 。其 与试 剂均 为分析纯 。灰树花多糖咀嚼片 自制。
北方药学 ２ ０ １ ４年第 １ １ 卷第 ２期
ｌ ９
灰树 花 多糖 咀嚼片 中多糖含量测定
张 华 （ 山东中医药大学 济南 ２ ５ ０ ３ ５ ５ ）
摘要 ： 目的： 建立 简单 易行的 多糖含 量测定方法， 测定灰树花 多糖 咀嚼 片中多糖 的含量 。 方法： 采用硫 酸一 蒽酮法， ６ １ ８ ｎ ｍ测定 ， 葡 萄糖作对照。结果 ： 线性 关系为 Ｙ ＝ ０ ． １ ２ ５ ９ Ｘ ＋ ０ ． １ ２ ４ ８ （ Ｒ ＝ Ｏ ． ９ ９ ９ １ ） ， 线性 范围为 ０ ． ０ ２ ３ ２ ～ ０ ． １ ３ ９ ２ ｍ￣ ｍ ｌ ， 回收率 ９ ９ ． ６ ％， 制 剂中 多糖含 量７ ３ ． ０ ％。结论 ： 该方法简单易行 ， 能用 于灰 树花 多糖 咀嚼 片 中多糖 的含量测定。 关键 词 ： 灰 树 花 多糖 咀 嚼 片 多糖 含 量
不同食用菌多糖含量的比较研究_宁慧青
处测吸光度 , 以试剂空白对照 , 分别测得灵芝多糖 、
香菇多糖 、虫草多糖 、灰树花多糖和羊肚菌多糖的吸
光度值 。 从标准曲线上查出样品测定液中葡萄糖的
含量 , 再计算多糖含量 。
1 .2 .4 样品多糖含量的计算
多糖含量(%)=c
×V1 ×0 .000 m ×V2
0 01
×100
%
式中 :c ———从标准曲线上查得样品测定管中 葡萄
中图分类号 :O 657.31 ;S567.3 文献标识码 :A 文章编号 :1004-7050(2007)03-0044-02
灵芝(ganoderma lucidum)、香菇(lentinus edodes)、虫 草(cordyceps sinensis)、灰 树 花(polyporus frondosus)和羊肚菌(morchella conica pers .)五种食 用菌的有效成分均为多糖 。多糖是多种醛糖和酮糖 通过糖苷缩合而成的天然多聚体 , 具有复杂而全面 的生理活性和功能 , 如免疫调节功能 、抗肿瘤作用 、 延缓 衰老 作用 及降 血脂 、抗 血栓 作用 等[ 1] 。 近 年 来 , 对多糖的研究引起了人们极大的兴趣 。
(上接第 35 页)
[ 36] 刘兢科 , 刘 孝 .低 成本水性带锈防腐涂 料的研制[ J] .
[ 34] 王世泰 .D4-丙烯酸酯水性胶黏剂的研 制[ J] .中 国胶黏
涂料工业 , 2006 , 36(4):54-56 .
剂 , 2000, 9(6):10-12 .
[ 37] 水 星 .水 性 聚 酯 涂 料 简 介 [ EB/ O L] .2004-07-21.
样品液中葡萄 糖质量/μg
1 9 .5
几种测定灰树花多糖中蛋白质含量方法的比较研究
表 9 项 目
双缩脲法对样品中 杂蛋白含量的检测结果
0
1
2
3
O1D∶540
0
0
0
01798
蛋白含量 (mg/ mL)
0
0
0
01212
测量误差
0 % 100 % 100 % 5119 %
(注 : 表中所列 O1D 值为三次重复所测结果的平均 值 ; 蛋白含量为 O1D 值对应曲线上的蛋白含量值乘上牛 血清蛋白的纯度 9815 %后所得 。)
2 方法
211 样品制作 : 准确称取粗多糖 11000g 用蒸馏水 定溶至 1L 。 212 牛血清蛋白 (标准品) 的校正 : 采用微量凯 氏定氮法[10] 。
213 微量凯氏定氮法[5] 测定样品中杂蛋白含量 : 按表 1 , 采用微量凯氏定氮法确定三个不同浓度的 样品中蛋白质的准确含量 , 以此做为衡量其它蛋白 质含量测量方法准确性的标准 。
0
1
2
3
4
5
6
7
8
标准蛋白 (mL)
0
1
2
3
4
5
6
7
8
水 (mL)
8
7
6
5
4
3
2
1
0
蛋白浓度 (mg/ mL)
0
01125 01250 01375 01500 01625 01750 01875
110
O1D∶280
0
01295 01654 01901 11123 11323 11523 11831 21201
响光吸收的物质 , 以及设备本身可能引起的误差 , 其真正原因尚需做进一步的研究 。
314 考马斯亮蓝 G- 250 染色法对样品中杂蛋白含 量的检测 考马斯亮蓝 G - 250 染色法对样品中杂 蛋白含量的检测结果及其测量误差见表 11 。
灰树花胞外多糖(GFP)的降血糖活性检测
灰树花胞外多糖（GFP）的降血糖活性检测摘要】灰树花胞外多糖具有较好的降低血糖、改善糖耐量的功能，并且具有无毒副作用、不易反弹的良好效果。
【关键词】灰树花胞外多糖降低血糖本文较为系统地研究了灰树花胞外多糖的降低血糖、改善糖耐量以及对机体脏器的保护作用，为进一步探讨其降血糖活性机理提供理论依据。
1 仪器与材料灰树花胞外多糖由本实验室自制。
昆明种小白鼠：中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。
试验中用到的试剂均为分析纯，药品购自Sigma试剂公司。
2 方法2.1 模型小鼠的建立小鼠禁食16h后以200mg/kg.w腹腔注射2%四氧嘧啶，1h 后恢复饮食。
72h后再禁食2h断尾采血，血糖浓度大于11.1mmol/L即造模成功。
2.2 动物分组和处理Ⅰ期：60只小鼠分为正常组、模型组、阳性组（拜糖平）、GFP 低剂量组（30mg/kg.w）、中剂量组（100mg/kg.w）、高剂量组（300mg/kg.w）。
正常组和模型组每天灌胃等体积生理盐水，阳性对照组以300mg/kg.w灌胃拜糖平。
Ⅱ期试验：40只小鼠分为正常组、模型组、多糖组、阳性对照组。
当给药小鼠的血糖降低至正常范围后，再以最佳剂量的一半灌胃7天，照此连续三次减量灌胃后开始停药，停药两周后测定小鼠血糖。
2.3 测定指标及测定方法测定指标：血糖、糖耐量。
糖耐量曲线下面积= 0.5×空腹血糖值+ 30min血糖值+1.5×60min血糖值+120min血糖值。
血糖的测定：采用葡萄糖氧化酶法。
2.4 胸腺指数、脾指数及肾脏指数的测定计算方法：脏器指数=器官重量（mg）/体重（g）。
2.5 数据统计学处理先对数据进行方差齐整性检验，然后用SPSS统计分析软件对各组数据及数据间差异显著水平进行统计学分析，数据以 ±sd表示。
3 结果3.1Ⅰ期实验结果3.1.1 小鼠血糖变化实验开始时，正常组、模型组和三个给药组血糖无显著性差异(P >0.05)；造模后3d，腹腔注射四氧嘧啶使模型组小鼠血糖值急速升高，与正常组比较有极显著性差异(P <0.01)，造模成功。
超临界CO_2提取灰树花中多糖的研究
斛下套种鸡腿菇等菌类的新模式，短短半个月时间，1 000 多袋食用菌进入了采
收期。目前，第一潮能采摘食用菌 100 kg，市场价 9~12 元/kg，解决了先期投入部
带剂乙醇浓度对灰树花多糖提取率影响显著，分析原因可能
是由于灰树花多糖极性较大，单纯通过改变提取压力和温度
仍很难溶解到 CO2中，而适当乙醇的加入可以改变多糖在超
临界 CO2中的溶解度，从而使多糖得以提取出来。同理，该方
法也可以应用到其它食药用菌及中草药活性物质的提取中，
尤其是热敏感性活性物质的提取。
限公司；XW-80A 漩涡混合器，上海精科实业有限公司；TDL40B 台式离心机，上海安亭科学仪器厂；UV-2450 紫外可见光 分光光度计，日本岛津公司；24 L/32 MPa 超临界 CO2 提取装 置，美晨高新分离技术有限公司。 1.3 多糖提取及计算 1.3.1 样品处理及超临界 CO2提取方法 去掉灰树花子实体 泥土较多的菌柄部分，切碎，烘干后粉碎，过 20 目筛。称取 1.1 kg 灰树花子实体颗粒，用 9 L 夹带剂浸泡过夜。
夹带剂浓度进行正交试验因素水平设计，结果如下：
表 2 L（9 34）正交试验设计与结果
编号
A
B
一种从灰树花中提取高活性多糖的方法
专利名称：一种从灰树花中提取高活性多糖的方法
专利类型：发明专利
发明人：魏贤勇,宗志敏,教富伟,赵厚宽,赵炜,刘光辉,麻志浩,魏丰华
申请号：CN202010776720.2
申请日：20200805
公开号：CN114057903A
公开日：
20220218
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种从灰树花中提取高活性多糖的方法，解决高活性多糖得率和纯度的技术问题，方法是：萃取灰树花中脂类及小分子物质‑萃取强非极性物质‑极性物质‑萃取弱非极性物资‑同时萃取非极性和极性物资‑萃取高活性多糖‑高活性多糖溶解在水中‑蒸发浓缩高活性多糖水溶液‑凝胶色谱纯化‑得搞纯度高活性多糖。
有益效果是：工艺路线简单、成本低、效率高，不破坏灰树花高活性多糖的结构、高活性多糖得率达到7.12%和高活性多糖纯度可达到99.37%。
申请人：辽宁国重重质碳资源产业工程技术研究院有限公司
地址：110000 辽宁省沈阳市沈抚新区金枫街75-1号1501
国籍：CN
代理机构：深圳市智科友专利商标事务所
代理人：曲家彬
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灰树花多糖提取工艺研究
灰树花多糖提取工艺研究作者：薛小兰陈少美来源：《福建农业科技》2019年第01期摘要：研究灰树花多糖的最佳提取工艺条件，采用单因素试验研究pH值、提取时间、料液比、提取温度4个因素对灰树花多糖提取率的影响，在单因素试验基础上设置四因素三水平正交试验，以灰树花多糖提取率为指标，优化最佳提取工艺。
结果表明：各试验因素影响主次顺序为提取时间>pH值>料液比>提取温度；灰树花多糖的最佳提取工艺条件为：pH值7.5，提取时间 2.0 h，料液比1∶20，提取温度为90℃，采用此工艺条件提取灰树花多糖提取率为20.94%。
关键词：灰树花；多糖；提取工艺；正交试验DOI： 10.13651/ki.fjnykj.2019.01.009Abstract： The optimal extraction conditions of Grifola frondosa were studied. The effects of pH value， extraction time， solidliquid ratio and extraction temperature on the extraction rate of polysaccharides from Grifola frondosa were studied by single factor test. On the basis of single factor test， four factors and three levels orthogonal experiments were set up to optimize the extraction process with the extraction rate of Grifola frondosa polysaccharides as the index. The results showed that the order of influencing factors was extraction time>pH value>solidliquid ratio>extraction temperature. The optimum extraction condictions were pH 7.5， extraction time 2.0 h， solidliquid ratio 1∶20，and extraction temperature 90℃. With these conditions， the extraction rate was20.94%.Key words： Grifola frondosa； polysaccharides； extraction technology； orthogonal experiment灰树花是一种食药两用菌[1]。
多糖含量测定的方法有哪些
多糖含量测定的方法有哪些多糖是指由若干简单糖分子通过糖苷键连接而成的聚合物，具有较高的相对分子质量。
多糖广泛存在于自然界中，主要分布在动植物体内。
含有多糖的食物可以提供能量，也是人们膳食中不可或缺的一部分。
因此，准确测定多糖的含量对于食品工业、生物医药和科研领域具有重要意义。
下面将介绍几种常见的多糖含量测定方法。
1. 甲基糖酚法（Phenol-Sulfuric Acid Assay）：该方法主要用于测定简单糖和寡糖的含量，对多糖如淀粉等不适用。
将待测样品与硫酸进行加热处理，使多糖降解为简单糖，然后再与糖酚溶液反应生成稳定的化合物，通过比色法或荧光法进行测定。
该方法简单、快速，但对于含有酸性糖的样品准确性较差。
2. 高性能凝胶渗透色谱法（HPSEC）：高性能凝胶渗透色谱法是一种常用的测定多糖含量的方法。
该方法通过将样品溶液通过高性能凝胶柱进行分离，根据不同分子量的多糖在柱中的滞留时间进行定量。
该方法操作简单、准确性较高，但需要高性能凝胶柱设备，且对多糖的分子量范围有一定限制。
3. pH-酚硫酸法（Phospho-Uronic Acid Method）：该方法主要用于测定多糖中的酸性糖含量，如果胶、半乳糖等。
通过将样品与磷酸进行加热处理，使多糖中的酸性糖转化为酚硫酸盐，然后再与酚硫酸试剂反应生成稳定的化合物，通过比色法进行测定。
该方法操作简单，但仅适用于酸性糖。
4. 还原糖测定法（Reducing Sugar Assay）：该方法主要用于测定含有还原糖的样品，如葡萄糖、麦芽糖等。
通过将样品与还原剂如费林试剂进行加热处理，使还原糖发生氧化还原反应生成可检测的产物，通过比色法或电化学法进行测定。
该方法操作简单、灵敏度高，但对于非还原性糖如蔗糖的测定不适用。
5. 毛细管电泳法（Capillary Electrophoresis, CE）：毛细管电泳法是一种高效分离技术，常用于测定多糖的分子量和含量。
该方法通过将样品在电场作用下在毛细管内迁移分离，根据不同分子量的多糖在电泳过程中的迁移速度进行定量。
灰树花粗多糖提取物体外抑菌及抗氧化活性初步探究
灰树花粗多糖提取物体外抑菌及抗氧化活性初步探究作者：薛小兰范瑜珊来源：《福建农业科技》2021年第09期摘要：为明确灰树花粗多糖的抑菌和抗氧活性，以灰树花为原料，采用热水浸提、醇沉得到灰树花多糖，同时采用牛津杯法研究灰树花粗多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果，通过DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、总还原力测定研究灰树花粗多糖的抗氧化活性。
结果表明：灰树花粗多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑菌效果，抑菌圈直径分别为12 mm和14 mm;灰树花粗多糖对DPPH自由基的清除作用较强，在浓度为0.2～1.6 mg·mL-1范围内，清除率随着浓度的增加而明显上升，浓度为1.6 mg·mL-1时清除率达到78.13%，当浓度增加到2.0 mg·mL-1时清除率降低（72.32%）。
灰树花粗多糖对羟基自由基的清除能力较弱，浓度0.2 mg·mL-1时的清除率为5.96%，浓度为2.0 mg·mL-1时清除率为23.57%。
灰树花粗多糖的总还原力也比较弱，在浓度0.2～2.0 mg·mL-1，总还原力（OD）值为0.2～0.4。
关键词：灰树花;粗多糖;抑菌;抗氧化中图分类号：S 646文献标志码：A文章编号：0253-2301（2021）09-0015-05DOI： 10.13651/ki.fjnykj.2021.09.003Preliminary Study on Antibacterial and Antioxidant Activities ofCrude Polysaccharide Extract from Grifola FrondosaXUE Xiaolan， FAN Yushan（Fujian Vocational College of Bioengineering， Fuzhou， Fujian 350007， China）Abstract： In order to determine the antibacterial and antioxidant activities of crude polysaccharides in Grifola frondosa， by using Grifola frondosa as the raw material， the polysaccharides were prepared from Grifola frondosa by hot water extraction and alcohol precipitation. Meanwhile， the oxford cup method was used to study the antibacterial effect of crude polysaccharides in Grifola frondosa on Escherichia coli and Staphylococcus aureus， and the antioxidant activity of crude polysaccharides in Grifola frondosa was determined by DPPH free radical scavenging capacity， hydroxyl radical scavenging ability and total reducing power. The results showed that crude polysaccharides in Grifola frondosa had antibacterial effects on Escherichia coli and Staphylococcus aureus， and the diameters of inhibition zone were respectively 12 mm and 14 mm. The crude polysaccharides in Grifola frondosa had strong scavenging effect on DPPH free radical， and the scavenging rate increased with the increase of concentration in the range of 0.2-1.6mg·mL-1. The scavenging rate reached 78.13% when the concentration was 1.6mg·mL-1， while decreasedto 72.32% when the concentration was 2.0mg·mL-1. The total reducing power （OD） of crude polysaccharides in Grifola frondosa was also weak. The total reducing power （OD） value was 0.2-0.4at the concentration of 0.2-2.0mg·mL-1.Key words： Grifola frondosa; Crude polysaccharide; Bacteriostatic; Antioxidant灰樹花俗称舞菇，是最近几年开发起来的一种食药两用菌，属于真菌类。
4种灰树花多糖测定方法的比较
冲洗干净后 ， 置于干燥箱 中 ７ ０℃烘干至恒 重 ， 干菌丝体 粉 取
末 ２ｇ 按 １ｇ： ０ｍ ， ４ Ｌ料 液 比加 入 蒸 馏 水 ， 于 微 波 炉 中 ， 置 中
高火 （ ５ 加热 １ ｉ， ７ ０Ｗ） ０ｒ ｎ 放入沸水浴中 ３ ｉ， ００ｒｒｎ ａ ０ｒｎ １ ０ ａ ａ ／ｉ
１ ２． 多 糖 提取 ． ３
收稿 日期 ：００— ９－ １ ２ １ ０ ０ 基金项 目： 现代农业产业技术体系建设专项 （ 编号 ：ｙｙ ｎｃｔ ８ 。 ｘ一４ ） 作 者 简介 ： 华 杰 （ ９ １ ） 男 ， 苏 苏州 人 ， 士 ， 验 师 ， 顾 １８ 一 ， 江 硕 实 主要 从 事 食 用菌生理生化研究 。Ｅ一 ｌｌ ：ｏ ｉ ｍ积． ．ｄ ．ｎ ｕ ｅｕ ｅ 。
（ ． 州 科 技 学 院 化 学与 生 物 工 程 学 院 ， 苏 苏 州 ２ ５ ０ ； ． 国水 产 科 学 研 究 院 淡水 渔 业 研 究 中心 ， 苏 无 锡 ２４ ８ ） １苏 江 １０ ９ ２ 中 江 １０ １
摘要 ： 采用苯酚 一 硫酸法 、 蒽酮 一 酸法 、 ， 硫 ３ ５一二硝基 水杨 酸法 、 费林滴定法等 ４种方法测定 了液 体发酵法培养 的灰树花菌丝体的胞内多糖 和胞 外多糖 ， 测定了每种方法的最佳吸 收波长 、 准曲线 ， 标 比较了仪器精密度 、 重现性 、 稳
硫酸法 、 ， 二硝基水杨 酸法、 ３ ５一 费林滴定法 等 ４种方法测
定 了液体发酵法培养 的灰 树花菌 丝体 的胞 内多 糖和胞 外多
糖 ， 对这 ４种 测定 方 法 进 行 了 比较 ， 准 确 测定 灰 树 花 多 糖 并 为
提供依据。
１ 材 料 与方 法
灰树花胞内粗多糖提取条件的优化及其提取物的抑瘤作用
灰树花胞内粗多糖提取条件的优化及其提取物的抑瘤作用摘要:采用Box-Behnken试验优化灰树花(Grifola frondosa)胞内多糖提取条件，结果表明，实验范围内多糖最佳提取条件为提取温度92.53 ℃，浸提时间2.24 h，水料比35.76∶1，在此条件下多糖的理论提取率为7.28%，验证值为7.15%。
S180荷瘤昆明小鼠的连续灌胃试验结果表明，灰树花多糖能显著抑制S180肉瘤的生长，低剂量多糖组（200 mg/kg/d）、高剂量多糖组（500 mg/kg/d）和环磷酰胺阳性对照组（20 mg/kg/d）的抑瘤率分别为61.51％、44.42％和73.75％。
关键词:灰树花；胞内多糖；Box-Behnken试验；S180肉瘤灰树花(Grifola frondosa) 又名贝叶多孔菌、栗子蘑、叶状奇果菌、莲花菌、千佛菌等，日本称舞茸［1］。
灰树花多糖是一种生物活性多糖，具有明显的抗肿瘤［2］、抗氧化［3］、改善免疫系统功能以及抗病毒等作用［4］。
灰树花多糖可以从子实体提取，也可以从菌丝体提取。
由于灰树花子实体栽培周期长、成本高。
因此，利用深层液体发酵的方法获得菌丝体并提取多糖显得尤为重要。
灰树花液体培养物中，胞外多糖较易获取，然而胞内多糖的提取则困难较大，提取溶剂、提取温度、提取时间及水料比等因素对多糖提取率均有较大的影响。
本文利用液体发酵法获得灰树花菌丝体，采用响应面法（Response Surface Methodology，RSM）中的Box-Behnken试验对菌丝胞内多糖的提取条件进行了研究，并测试了菌丝胞内多糖对小鼠S180肉瘤的抑制作用，为其提取以及应用提供实验依据。
1 材料与方法1.1材料1.1.1菌种灰树花菌株GF270由山东省应用真菌实验室保存。
1.1.2供试动物昆明小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，购自山东大学实验动物中心，动物生产许可证号：SCXK（鲁）20030004。
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顾华杰,黄金汇,金 琎,等.4种灰树花多糖测定方法的比较[J].江苏农业科学,2011,39(4):400-402.4种灰树花多糖测定方法的比较顾华杰1,黄金汇1,金 琎1,胡翠英1,王桃云1,陈家长2(1.苏州科技学院化学与生物工程学院,江苏苏州215009; 2.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,江苏无锡214081)摘要:采用苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法、3,5-二硝基水杨酸法、费林滴定法等4种方法测定了液体发酵法培养的灰树花菌丝体的胞内多糖和胞外多糖,测定了每种方法的最佳吸收波长、标准曲线,比较了仪器精密度、重现性、稳定性及加样回收率。
结果表明:苯酚-硫酸法测定胞内多糖较好,最佳吸收波长为485nm;3,5-二硝基水杨酸法测定胞外多糖较好,最佳吸收波长为490n m。
关键词:灰树花;多糖;苯酚-硫酸法;蒽酮-硫酸法;3,5-二硝基水杨酸法;费林滴定法中图分类号:R284.2 文献标志码:A 文章编号:1002-1302(2011)04-0400-03(上接第399页)3 结论料液比、超声波辅助提取时间、提取温度均会影响马齿苋粗多糖提取量,其中提取温度影响最大,其次是固液比,提取时间的影响最小。
通过单因素试验和L9(33)正交试验得出马齿苋粗多糖的最佳提取工艺条件为:固液比1g 30mL,温度70 ,浸提时间30m in。
在最佳工艺条件下,开花期野生马齿苋草粉中粗多糖提取量为(10.1919 0.0403)%(风干基础)。
开花期野生马齿苋草粉中粗多糖相对常规饲料而言其含量较高,预计将马齿苋草粉添加到动物饲料中可以起到类似中草药饲料添加剂的某些功能,在提高动物免疫力方面能起到一定作用,但是作用程度还需通过动物试验进行深入研究和验证。
参考文献:[1]孔 娟,刘晓宇,王蕊霞,等.葛根多糖和黄酮综合提取工艺优化[J].食品科学,2010,31(6):43-47.[2]朱建飞,吴谋成,冯 睿,等.菜籽粕中水溶性多糖提取工艺优化[J].农业工程学报,2006,22(12):251-254.[3]肖美添,杨军玲,林海英,等.紫菜多糖的提取及抗流感病毒活性研究[J].福州大学学报:自然科学版,2003,31(5):631-635. [4]王亚飞,毕红梅.超声波法提取香菇多糖的研究[J].内蒙古科技与经济,2004(14):124-125.[5]王 莉,刘志勇,鲁建江,等.微波技术辅助测定马齿苋中总黄酮和多糖的含量[J].食品工业科技,2002,23(5):70,73.[6]田光辉,刘存芳,赖普辉.马齿苋多糖的超声提取及活性试验研究[J].食品研究与开发,2007,28(2):7-10.灰树花(Grifola frondosa)是多孔菌属的一种大型真菌,别称贝叶多孔菌、栗子蘑、佛菌、重菇等[1]。
经过大量的化学和药理分析发现,灰树花多糖具有明显的抗肿瘤,抗H I V病毒,改善免疫系统,调节血糖、血脂及胆固醇水平,降血压等作用,可防止癌细胞的生成和转移,对艾滋病、高血压、肥胖症、糖尿病以及免疫系统功能的紊乱都有一定的疗效,且无任何毒副作用[2]。
灰树花多糖是富含 -1,6-糖苷键及 -1,3-糖苷键的真菌多糖,生理活性显著[3]。
因此,对灰树花及其提取物中多糖含量的测定就显得十分重要。
测定多糖的方法很多,但不同方法适用的范围不同,对不同来源多糖测定的准确性、稳定性、重现性也不同。
本研究采用苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法、3,5-二硝基水杨酸法、费林滴定法等4种方法测定了液体发酵法培养的灰树花菌丝体的胞内多糖和胞外多糖,并对这4种测定方法进行了比较,为准确测定灰树花多糖提供依据。
1 材料与方法1.1 试验材料收稿日期:2010-09-01基金项目:现代农业产业技术体系建设专项(编号:nycyt x-48)。
作者简介:顾华杰(1981 ),男,江苏苏州人,硕士,实验师,主要从事食用菌生理生化研究。
E-m ai:l li ongu@m ai.l us 。
灰树花菌种购自江苏省高邮市食用菌研究所。
PDA液体培养基:马铃薯20%,葡萄糖2%,磷酸二氢钾0.3%,硫酸镁0.15%,维生素B10.001%,p H值自然。
1.2 试验方法1.2.1 液体培养条件 500mL锥形瓶,200mL液体培养基,恒温振荡培养箱27 160r/m in培养7d。
1.2.2 多糖提取 胞内多糖测定采用微波辅助热水浸提法[4-5]:将培养好的菌液经4层纱布过滤后得菌丝体,蒸馏水冲洗干净后,置于干燥箱中70 烘干至恒重,取干菌丝体粉末2g,按1g 40mL料液比加入蒸馏水,置于微波炉中,中高火(750W)加热10m i n,放入沸水浴中30m in,1000r/m i n 离心取上清液即为胞内多糖水溶液。
胞外多糖测定采用醇沉法[5]:取纱布过滤后的液体培养基加入4倍体积的95%乙醇,混匀后4 下放置24h,4 4000r/m i n离心20m in,沉淀中加入80mL蒸馏水,沸水浴溶解30m in,1000r/m i n离心取上清液即为胞外多糖水溶液。
还原糖测定采用酸水解法[6]:取制得的胞内多糖或胞外多糖水溶液15mL,加入6m ol/L盐酸10mL,搅拌均匀后在沸水浴中水解30m i n,冷却至室温后用6mol/L Na OH中和至中性,蒸馏水定容至100mL,即得胞内或胞外的还原糖水溶液。
1.2.3 多糖提取1.2.3.1 苯酚-硫酸法[7-8] 最大吸收波长的选择:吸取400江苏农业科学 2011年第39卷第4期0.1m g/mL葡萄糖标准品溶液0.6mL,加蒸馏水至1mL,在冰水浴中加入5%苯酚水溶液0.5mL、浓硫酸5mL,混匀,沸水浴2m i n,冷水浴冷却;以相应溶液作为空白对照,于400~ 600n m波长范围内扫描。
标准曲线制作:分别吸取0.1m g/mL葡萄糖标准品溶液0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL各3份,按最大吸收波长项下方法测定,以浓度(C)为横坐标,吸光度(D)为纵坐标,绘制标准曲线。
精密度试验:精确吸取葡萄糖标准品溶液0.4mL,按最大吸收波长项下方法测定5次D值。
重现性试验:分别取1mL的胞内多糖水溶液(稀释100倍)和胞外多糖水溶液(稀释10倍)各5份,按最大吸收波长项下方法测定D值。
稳定性试验:分别取1mL的胞内多糖水溶液(稀释100倍)和胞外多糖水溶液(稀释10倍)各1份,按最大吸收波长项下方法显色后,分别在10m i n、30m in、1h、1.5h、2h时测定D值。
加样回收率试验:取胞内多糖水溶液(稀释100倍)和胞外多糖水溶液(稀释10倍)各10mL,分别加入1mL葡萄糖标准品溶液后,各取5份1mL样液,按最大吸收波长项下方法测定D值,计算加样回收率。
1.2.3.2 蒽酮-硫酸法[7,9] 最大吸收波长的选择:吸取0.1m g/mL葡萄糖标准品溶液0.6mL,加蒸馏水至1mL,在冰水浴中加入0.1%蒽酮-硫酸溶液6mL,混匀,沸水浴10m in,冷水浴冷却;以相应溶液作为空白对照,于500~ 700n m波长范围内扫描。
按最大吸收波长项下的测定方法,进行标准曲线的制作、精密度试验、重现性试验、稳定性试验和加样回收率试验。
1.2.3.3 3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)[6,10] 最大吸收波长的选择:吸取1mg/mL葡萄糖标准品溶液0.6mL,加蒸馏水至1mL,加入DNS溶液2mL,混匀,沸水浴5m i n,冷水浴冷却后,加入9mL蒸馏水;以相应溶液作为空白对照,于400~600n m波长范围内扫描。
标准曲线制作:分别吸取1mg/mL葡萄糖标准品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL各3份,按最大吸收波长项下方法测定,以浓度(C)为横坐标,吸光度(D)为纵坐标,绘制标准曲线。
使用胞内还原糖水溶液(稀释5倍)和胞外还原糖水溶液,按最大吸收波长项下的测定方法,进行精密度试验、重现性试验、稳定性试验和加样回收率试验。
1.2.3.4 费林滴定法[10-11] 空白滴定:吸取费林甲、乙液各5mL于250mL锥形瓶中,加入蒸馏水10mL及1mg/mL葡萄糖标准溶液9mL,加热至沸腾,保持30s,趁热以每2s1滴的速度滴加葡萄糖标准溶液,至溶液蓝色刚好褪去为终点,记录消耗葡萄糖标准溶液体积(V0)。
样品滴定:吸取费林甲、乙液各5mL于250mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL及胞内还原糖或胞外还原糖样品稀释液5mL,滴定管加入比预备滴定量少0.5mL左右的葡萄糖标准液,摇匀后加热至沸腾,保持30s后匀速滴入葡萄糖标准液,至蓝色刚好褪去为终点,记录消耗葡萄糖标准溶液体积(V)。
还原糖(m g/mL)=(V0-V) 葡萄糖标准液浓度/参加反应的样液量 样品稀释倍数重现性试验:分别取5mL胞内还原糖水溶液(稀释5倍)和胞外还原糖水溶液各5份进行滴定,记录每次耗用的葡萄糖标准液的量。
加样回收率试验:样品滴定时,在加入费林甲、乙液各5mL及蒸馏水10mL后,再加入胞内还原糖水溶液(稀释5倍)或胞外还原糖水溶液5mL+葡萄糖标准溶液1mL,然后进行滴定操作,重复5次,记录每次葡萄糖标准液的用量。
1.2.4 数据处理 试验数据均采用Excel进行处理分析。
2 结果与分析2.1 苯酚-硫酸法最大吸收波长的选择:测得最大吸收波长为485nm。
标准曲线制作:绘制标准曲线,得回归方程为y= 0.0082x+0.0352(r2=0.9996),表明葡萄糖浓度在5~ 100 g/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。
精密度试验:测得吸光值分别为0.376、0.375、0.377、0.376、0.376,平均值为0.376,RSD=0.188%,表明仪器的精密度良好。
重现性试验:对于胞内多糖,根据测得的吸光值计算得烘干菌丝体中多糖(以葡萄糖计)含量分别为0.182、0.179、0.177、0.174、0.170g/g,平均值为0.176g/g,RSD= 2.743%,表明该方法重现性良好;对于胞外多糖,根据测得的吸光值计算得液体培养基中多糖(以葡萄糖计)含量分别为21.659、26.780、23.610、25.073、22.878 g/mL,平均值为24.000 g/mL,RS D=8.275%,表明该方法重现性不好。
稳定性试验:对于胞内多糖,测得的吸光值分别为0.392、0.393、0.392、0.391、0.391,平均值为0.392,RS D=0.214%,表明胞内多糖溶液的测定在2h内基本稳定;对于胞外多糖,测得的吸光值分别为0.138、0.139、0.139、0.137、0.137,平均值为0.138,RSD=0.725%,表明胞外多糖溶液的测定在2h 内基本稳定。