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血清分离胶促凝采血管的理论基础及临床应用
当今分析仪器的自动系列集约化或条型码的运用，增加了系列化项目直接上机检测量。但是由于过去采血后血液自然凝固，血液从离心到测定放置时间长，影响了分析仪的多种功能的充分发挥。为了迅速推进检测技术的快速化，往采血管中添加分离胶、促凝剂缩短了血液凝固时间。分离胶促凝采血管的应用，是采血初级阶段重要质量控制，同时也制备了高品质的血清标本。从保护室内外环境角度考虑，血清分离胶采血管的应用，减少血清杯及塑料试管的用量。目前国内许多公司提供的真空系列采血试管，规范了检验科采血技术，减少了多种多样交叉感染。但是，分离胶促凝采血管的临床实践应用中，出现了涉及到分离胶、促凝剂的基础理论及值得注意的有关问题。必须从基础理论上去理解才能解决实践中出现的问题。本文就血清分离胶促凝管基础理论及临床应用讨论如下。
1 分离胶分离血清、血块的机理
血清分离胶是由疏水有机化合物和硅石粉组成，具有触变性的粘液胶体，其结构中含有大量氢键，由于氢键的缔合作用形成网状结构，在离心力的作用下用网状结构被破坏变为粘度低的流体，当离心力消失之后又重新形成网状结构这种性质被称为触变性(thizotropy)。即在温度不变的情况下，对这种粘液胶体施加一定的机械力，可从高粘度的凝胶状态变为低粘度的溶胶状态，如果机械力消失又恢复原来高粘度的凝胶状态。由机械力作用产生的凝胶和溶胶的互变现象首先由Freundlich 和Petrifi 命名。为什么由机械力的作用会产生凝胶与溶胶的互变现象呢?触变性是因为分离胶的结构内部含有大量氢键网状结构之故。在常温下氢键比较容易被切断引起再结合。硅石表面具有硅羟基(SiOH)，形成SiO 分子凝聚体(初级粒子)，在这种初级粒子间以氢键连结成链状结合粒子。这种链状硅石粒子与构成分离胶的疏水有机化合物的粒子间更进一步形成氢键而产生网状结构，构成具有触变性的凝胶状分子。分离胶比重维持在1.05，血清比重约1.02，血块比重约1.08，当分离胶与凝固后的血液在同一试管中离心时，由于对分离胶施加离心力而引起硅石凝聚体中的氢键网状结构被破坏变成链状结构，分离胶就成为粘度低的物质，比分离胶重的血块就移到管的底部，分离胶发生返转现象，形成管底部血块/分离胶/血清三层。当离心机停止转动失去离心力后，分离胶中硅石凝聚体的链状粒子间再次由氢键构成网状结构，恢复初始高粘度凝胶状态，在血清和血块间形成隔离层。另外，检验医学实验室广泛采用了一次性疏水性塑料试管，延长了凝血时间。其塑料试管在与Ⅺ、Ⅻ凝血因子接触时，被激活能力非常弱，采血后2～4h血液还没有完全凝固，为此要在塑料试管内壁喷涂促凝剂加速血液凝固，能得到高品质的血清标本。
2 血清分离胶促凝管、血浆分离胶抗凝管
血液促凝剂是为了临床检验中快速分离血清标本而研制的促凝剂，一般常用硅石粉、玻璃粉、炭素粉末及蛇毒等促凝成分，特殊加工成粉剂与球型。粉剂制成无水乙醇悬浮液，喷涂在血清分离胶真空试管内壁上，放鼓风干燥箱中(35℃)使无水乙醇蒸发干。如果血清分离胶返转性不好，会出现分离胶隔层和
血清、血块之间分离不完全，其原因往往是离心前血液没有完全凝固所致，因为血液凝固不完全可使纤维蛋白混杂在隔离层。要使血液完全凝固，必须按说明书正确使用血清分离胶促凝管，才能制备高品质的血清标本。血浆分离胶抗凝管是为了快速血浆生化急诊检验所需，即在分离胶采血管内壁喷涂肝素锂。
3 采血管的材质与采血管壁粘附性
分离胶采血管的管壁必须与分离胶之间具有牢固的粘附性，其粘附性与采血管的材质有关。玻璃试管的主要成分是亲水性的硅酸盐，采血后玻璃试管内壁可出现吸着水分子的吸水层，所以，分离胶不能直接粘附于玻璃试管的内壁。随着放置时间的延长，红细胞中的钾或者酶等物质，可以通过水分子吸水层向血清中扩散，所以，玻璃采血管在原状态下保存血清的期限以2～3天为宜。塑料采血管材质是疏水性质，其管壁不产生水分子层，分离胶可牢固地粘附着内壁上，红细胞中的钾不能扩散到血清中，因而冷藏保存8天血清钾含量不变。
4 血液凝固时间和促凝剂
全自动化分析仪每小时可检测600～1000个标本，而实验室分离血清标本的速度与全自动分析仪很不同步，采血技术停留在初始阶段。因为血液凝固速度与玻璃试管和塑料试管和温度密切相关。实验证明：凝血因子中的Ⅺ、Ⅻ因子接触玻璃试管壁后被激活，一般采血后在23℃～25℃室温条件下，30 min大部分血液已凝固，完全凝固需要1h。但是，疏水性的塑料试管壁接触Ⅺ、Ⅻ因子时，被激活的能力非常弱，需要2～4h血液才能完全凝固，为解决此问题需要向两种试管内壁喷涂促凝剂和加入促凝球，采血后轻轻倒转试管混合3~4次，置室温立放待血液完全凝固后离心。血液收缩呈现血块状，可观察到有血清渗出现象，证明血液完全凝固。
5 血清分离胶采血管离心操作的要求
如何正确使用分离胶促凝管制备高质量血清标本，离心是至关重要的环节，要采用水平离心机。各个公司的分离胶采血管通常要求：离心速度3 000r/min 5～15min。BD 公司投放中国市场的分离胶采血要求操作步骤：采血后立即轻轻倒转采血试管5次混匀标本，等待标本充分凝固需要放置30min，离心力维持在3000r/min，离心10～15min，使血清与血凝块完全被分离胶分隔；血清标本可直接上机检测或转移至仪器配套试杯中。具备这个条件才能制备出高品质血清标本。如果离心力过低作用于分离胶的力比较弱，而使分离胶返转不佳。相反如离心时间过长，在分离胶凝聚体中由于氢键被切断后再难以形成网状结构，而失去触变性。
6 现市场上的分离胶采血管
目前国内真空系列试管公司全部采用玻璃采血试管为主流，灌注血清分离胶。目前进入中国市场的
三家外国公司部分更新换代塑料采血管，关于塑料采血管材质与检测结果密切相关，日高等用4种分离胶塑料采血管对12种血中抗癫痫药物浓度检测表明：由于塑料试管的材质不周，血清保存数日后药物浓度有所下降。其原因不是分离胶所致而是治疗药物中含有的疏水性化合物吸附干塑料度管壁所致。现今各公司几乎都采用PET(polyethlene terephthalate)即：聚对苯二甲酸乙二(醇)酯，其它也有采用polyprp yrene(聚丙烯)、polyester(聚酯)制造的塑料采血管。都是以优越的素材成型的技术生产的，持有特质的密闭的塑料制品，具有好的密闭性较长时间保持负压度，塑料真空采血的功能发挥得更充分，日本最大参考实验室(SRL)全国有70余所网络营业所，采血的方式、标本、贮存、运输、检查业务等已走向效率化。解决了采血初始阶段塑料试管负压度，管壁破损机率及离心过程发生泄漏等现象在国外有些公司采用强化玻璃试管，防止在运输及试验过程中试管破损率，保护实验室内外环境。
7 关于血清分离胶
分离胶的成分对血液为不活性物质，对以血清检测为对象的临床化学及免疫学、RIA及EIA 检测项目测定值均无影响。现市场上销售的分离胶基本材料的有机化合物有：聚烯系列(polyolefine)、聚酯系列(polyester)、丙烯基系列(acryl )等，各个公司都有各异，使用最多的是聚烯系列。这些用有机化合物调整比重，持有触变性。因为每个公司硅石粉的混合比列各异，并加入独特的物质混合之以保持其稳定性。所以各个公司的分离胶的透明度、色泽等有多少差异。用灌机灌注血清分离胶时，需要20℃室温条件下灌注最为理想，因为在室温低的条件下，分离胶粘度大，灌胶机的差异等因素，可出现速度慢、有气泡的产生。血清分离胶要避免直射日光，在室温条件下保存。
8 血液促凝球和血液促凝剂促凝机理
凝血机制和促凝剂的关系，是一系列凝血因子相继被激活，最后形成纤维蛋白凝块的过程。由于实验室广泛的采用一次性塑料试管延长了凝血时间的过程，尤其是冬季气温偏低的条件下凝血时间更长，给临床检验及时分离高质量血清标本带来麻烦。
首先需要说明玻璃试管壁和塑料试管壁与凝血因子的关系，一般是以离心后的血清中纤维蛋白块的容积率，来观察血液凝固效果，玻璃试管壁与凝血因子Ⅺ、Ⅻ接触时被激活。实验证明：采血后约30 min(23℃)几乎完全凝固，此时纤维蛋白块容积率为20、1h纤维蛋白块容积率为10 、1个半小时为0.
5 。但疏水性的塑料试管壁与Ⅺ、Ⅻ凝血因子接触时，被激活能力非常弱，血液凝固时间需要2～4h，采血后2h纤维蛋白块容积率几乎80，是血液没有完全凝固所致。血液促凝球和促凝剂是硅石粉、玻璃粉以及其它非生理性的促凝成分经特殊加工制成，它可以激活血浆和血小板中的部分凝血因子，生成凝血活酶(thromboplastin)、纤维蛋白酶(throbin)，促使血液凝固，血液促凝球使用方法：加一粒干试管中，加血液3～4ml 轻轻倒转混合3～4次，放置25～30min，血液促凝剂是喷涂干试管内壁所用。9 血清分离胶促凝采血管与环境保护
由于检验科的全自动化和检验项目系列化，每日用一次性塑料注射器采血，塑料试管用量增多，从
采血到检验结束需要5种塑料用品，每天如此多的用量对交叉感染，对实验室内、外环境卫生造成更大隐患血液标本采取和血液分离血清在临床检验质量控制中是至关重要的一环。为了减少医学检验废弃物，国内外许多医院采用一次真空塑料采血试管系列，离心后不需分离标本，可直接上机实现一管操作，使用后可直接高压灭菌或焚烧销毁防止污染环境，是目前减少医学检验塑料用品废弃物最理想的方法。
各种真空采血管的使用及注意事项
真空采血管的分类、添加剂原理及作用真空采血装置具有采血量准确、安全性能好、分离血清/血浆效果好、操作使用方便及可一针采多管血样等特点,是临床上替代一次性注射器进行采集血 标本的最佳选择。真空采血器由真空采血管、采血针组成。真空采血管是其主要组成部分，主要用于血液的采集和保存，在生产过程上预置了一定量的负压，当采血针穿刺进入血管后，由于采血管内的负压作用，血液自动流入采血管内；同时采血管内预置了各种添加剂，完全能够满足临床的多项综合的血液检测，安全、封闭、转运方便，现在厂家生产的各种采血管利用不同颜色的头盖加以区分。 真空采血管一般分为以下几种： 1.红色头盖管（无添加剂的干燥真空管）：采血管内壁均匀涂有防止挂壁的药剂（硅油）。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固，等血清自然析出后，离心使用。主要用于血清生化（肝功、肾功、心肌酶、淀粉酶等）、电解质（血清钾、钠、氯、钙、磷等）、甲状腺功能、药物检测、艾滋病检测、肿瘤标志物、血清免疫学。 2.橘红色头盖管（促凝管）：采血管内壁均匀涂有防止挂壁的硅油，同时添加了促凝剂。促凝剂能激活纤维蛋白酶，使可溶性纤维蛋白变成不可溶性的纤维蛋白多聚体，进而形成稳定的纤维蛋白凝块，如果想快点出结果时，可采用促凝管，一般5分钟内可使采集的血液凝固。一般用于急诊生化。 3.金黄色头盖管（含有惰性分离胶及促凝剂的采血管）：管壁经过硅化处理，并涂有促凝剂可加速血液的凝固，缩短检验时间。管内加有分离胶，分离胶管具有很好的亲和性，起到隔离作用，一般即使在普通离心机上，分离胶能将血液中的液体成分（血清）和固体成分（血细胞）彻底分开并积聚在试管中形成屏障。离心后血清中不产生油滴，因此不会堵塞机器。主要用于血清生化（肝功、
SDS-PAGE分离胶配方表-及其原理
SDS-PAGE电泳原理： 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。 SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。由于SDS-PAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带。 TEMED：通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。 过硫酸铵（AP）：提供驱动丙烯酰胺与双丙烯酰胺所必须的自由基。 SDS—PAGE 可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。本实验采用垂直板状不连续系统。所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH 和凝胶孔径等所组成。 1.蛋白样品浓缩效应 在不连续电泳系统中，含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly，、浓缩胶缓冲液(Tris—HCl，、分离胶缓冲液(Tris—HCl，，两种凝胶的浓度(即孔径)也不相同。在这种条件下，缓冲系统中的HCl 几乎全部解离成Cl－，两槽中的Gly (pI＝，pK a=只有很少部分解离成Gly 的负离子，而酸性蛋白质也可解离出负离子。这些离子在电泳时都向正极移动。C1—速度最快(先导离子)，其次为蛋白质，Gly 负离子最慢(尾随离子)。由于C1—很快超过蛋白离子，因此在其后面形成一个电导较低、电位梯度较陡的区域，该区电位梯度最高，这是在电泳过程中形成的电位梯度的不连续性，导致蛋白质和Gly 离子加快移动，结果使蛋白质在进入分离胶之前，快、慢离子之间浓缩成一薄层，有利于提高电泳的分辨率。 2.分子筛效应 蛋白质离子进入分离胶后，条件有很大变化。由于其pH 升高(电泳进行时常超过，使Gly 解 离成负离子的效应增加；同时因凝胶的浓度升高，蛋白质的泳动受到影响，迁移率急剧下降。此两项变化，使Gly 的移动超过蛋白质，上述的高电压梯度不复存在，蛋白质便在一个较均一的pH 和电压梯度环境中，按其分子的大小移动。分离胶的孔径有一定的大小，对不同相对分子质量的蛋白质来说，通过时受到的阻滞程度不同，即使净电荷相等的颗粒，也会由于这种分子筛的效应，把不同大小的蛋白质相互分开。 SDS-PAGE电泳胶配制：
血清分离胶介绍技术特征详解 [兼容模式]
血清分离胶技术特征详解解清分离胶技术特征详 成都众睿达科技有限公司王德永
血清分离胶 血清分离胶应用于真空采血管中，是用于临床血清或血浆检验样本制备时隔离血凝块与血清，或者隔离血细胞与血浆，使离心分离后的样本保持稳定，便于样本保存并确保检查结果的准确性。
? 血清分离胶应具有的特点血清样本表面无油珠，无析出物。长期使用不会堵塞吸样针；无爬杆（蹿胶）。分离胶加胶完成，静止小时（或℃烘烤小时）后无爬杆现象； 惰性。最大程度地减小对检测结果的干扰。性能稳定。老化和实时实验均应表明，年内存放稳定，不会影响分离效果。优良的耐辐照灭菌性。可以耐受的辐照灭菌。分离效果好，离心力适中，易于离心。最小离心力不大于，离心时间只需要分钟，无需二次离心。 运输储存过程中低于℃时不会发生倒流。高性价比。进口分离胶的效果，接近国产分离胶的价格。血清分离胶 l l l l l l l l 724524225kGy 1300g 555
血清分离胶 技术特征详解密度离心力与离心时间分隔效果堵针与油珠爬杆（蹿胶）稳定性耐辐射性检测结果可靠性高温储运时防倒流? l l l l l l l l l
血清分离胶 技术特征详解 密度 ±℃ 介于血清和血凝块之间。 、积水和众睿达的血清分离 胶密度均在该范围内。 。?l 1.05 0.005 25 1.02 1.08BD
血清分离胶 技术特征详解离心力与离心时间 ≥，离心时间； 推荐离心力：，离心时间不少于。市场上的离心力稍大，大概要—，。众睿达和积水的一般在—离心中即可。 注意：当选择小的离心力时，应选用较长的离心时间。 ? l 1300g 5min 1300g-2000g 5min BD 15001800g 10min 13001500g 5min
SDS-PAGE凝胶配方表
浓缩胶（5% Acrylamide） 各种组分名称1ml 2ml 3ml 4ml 5ml 6ml 8ml 10ml 双蒸水0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 30%Acrylamide 0.17 0.38 0.5 0.67 0.83 1.0 1.3 1.7 1.0M Tris-HCl(PH 6.8) 0.13 0.25 0.38 0.5 0.63 0.75 1.0 1.25 10%过硫酸铵(AP) 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08 0.1 10% SDS 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08 0.1 TEMED 0.001 0.002 0.003 0.004 0.005 0.006 0.008 0.01 分离胶 (3) 10%Gel 各种组分名称5ml 10ml 15ml 20ml 25ml 30ml 40ml 50ml 双蒸水 1.8 4.0 5.9 7.9 9.9 11.9 15.9 19.8 30%Acrylamide 1.7 3.3 7.9 6.7 8.3 10.0 13.3 16.7 1.5M Tris-HCl(PH 8.8) 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.5 10%过硫酸铵(AP) 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 (4) 12%Gel 各种组分名称5ml 10ml 15ml 20ml 25ml 30ml 40ml 50ml 双蒸水 1.6 3.8 4.9 6,6 8.2 9.9 13.2 16.5 30%Acrylamide 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 16.0 20.0
采血管系统
谈真空采血管的相关知识 字体大小：大| 中| 小2010-12-29 07:47 阅读(474) 评论(0)分类：真空采血管在国内外的历史发展以及现状： 本世纪40年代初，真空采血技术被发明，它省略了抽拉针管和推血入试管等不必要的步骤，利用真空管中预先制造的真空自动吸血入管，很大程度上减少了溶血的可能。40年代美国BD公司率先推出商品真空型采血系统，其它医疗器械公司也先后推出自己的真空采血产品，至80年代，一种称为安全管盖(HEMOGARDTM)的全新管盖问世。安全管盖由套在真空管外的特殊塑料罩和新设计的橡胶管塞组成。二者结合在一起，减少了医疗工作者与管中内容物接触的可能，也减少了管盖拔出后内容物外溅的机会。塑料罩形成一个双井形凹陷结构，防止手指与管塞顶端及尾端残留血液的接触。这种带有安全管盖的真空采血管极大地减少了医疗工作者从采血到血样处理的全过程中沾染血样的可能，当年安全管盖荣获全美最佳工业设计大奖。真空采血系统由于其干净安全、简单可靠的特点已在世界范围内被广泛采用，并被NCCLS推荐，成为采血的标准器械。 真空采血管90年代中期开始在我国部分医院使用。目前，大多数大中城市中型以上的医院已普遍接受了真空采血方式。作为临床血液采集和检测的新方式，真空采血器是对传统采血、储血方式的一场革命。 真空采血系统主要由三部分构成：(1)双向无菌针头：一端连接真空管，另一端进行皮肤穿刺。由于双向无菌针头专为采血特别设计而成，与注射用针头不同，针尖斜面成15度，表面特殊润滑，更锋利、进针方便。一次静脉穿刺后，可以抽取单个或多个血样。(2)持针器：持针器内径13 mm。配合规格统一的采血管使用，一端连接双向针头，另一端接真空管。持针器可以重复使用. (3)真空管：真空采血管标准直径13 mm，长75 mm或100 mm，由高质量玻璃或塑料制成。虽然大小恒定，但由于管内真空度不同，可以抽取不同体积。管内含各种添加剂(抗凝剂和促凝剂等)，无需自己配制、添加，减少了工序，方便、快捷；避免了自行配备添加剂的不准确，并且可以满足各种检验对血样的要求;新型PET材质的真空采血管避免了玻璃试管破损后血液外溢的不安全。 真空采血管分类和制作原理 目前医院使用的真空采血管主要有以下几个类别： 1.无添加剂的干燥空管(白头管)：采血管内壁均匀涂有防止挂壁的药剂（硅酮），避免血细胞附壁,防止离心时细胞破碎,释放细胞内物质至细胞外,影响试验结果。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固，等血清自然析出后，离心使用。主要用于血清生化（肝功、肾功、心肌酶、淀粉酶等）、电解质（血清钾、钠、氯、钙、
采血管分类及用途说明
采血管分类及说明 1. 普通血清管红色头盖，采血管不含添加剂，用于常规血清生化，血库和血清学相关检验。 2. 快速血清管橘红色头盖，采血管内有促凝剂，加速凝血过程。快速血清管可在5分钟内使采集的血液凝固，适用于急诊血清系列化试验。 3. 惰性分离胶促凝管金黄头盖，采血管内添加有惰性分离胶和促凝剂。标本离心后，惰性分离胶能够将血液中的液体成分(血清或血浆)和固体成分(红细胞，白细胞，血小板，纤维蛋白等)彻底分开并完全积聚在试管中央而形成屏障，标本在48小时内保持稳定。促凝剂可快速激活凝血机制，加速凝血过程，适用于急诊血清生化试验。 4. 肝素抗凝管绿色头盖，采血管内添加有肝素。肝素直接具有抗凝血酶的作用，可延长标本凝血时间。适用于红细胞脆性试验，血气分析，红细胞压积试验，血沉及普能生化测定，不适于做血凝试验。过量的肝素会引起白细胞的聚集，不能用于白细胞计数。因其可使血片染色后背景呈淡蓝色，故也不适于白细胞分类。 5. 血浆分离管浅绿色头盖，在惰性分离胶管内加入肝素锂抗凝剂，可达到快速分离血浆的目的，是电解质检测的最佳选择，也可用于常规血浆生化测定和ICU等急诊血浆生化检测。血浆标本可直接上机并在冷藏状态下保持48小时稳定。 6. EDTA抗凝管紫色头盖，乙二胺四乙酸(EDTA，分子量292)及其盐是一种氨基多羧基酸，可以有效地螯合血液标本中钙离子，螯合钙或将钙反应位点移去将阻滞和终止内源性或外源性凝过程，从而防止血液标本凝固。适用于一般血液学检验，不适用于凝血试验及血小板功能检查，亦不适用于钙离子，钾离子，钠离子，铁离子，碱性磷酸酶，肌酸激酶和亮氨酸氨基肽酶的测定及PCR试验。 7. 枸橼酸钠凝血试验管浅蓝头盖，枸橼酸钠主要通过与血样中钙离子螯合而起抗凝作用。适用于凝血实验，国家临订实验室标准化委员会推荐的抗凝剂浓度是3.2%或3.8%(相当于
血清分离胶
血清分离胶 血清分离胶是一种粘性流体，其结构中含有大量氢键，由于氢键的缔合作用形成网状结构。在离心力的作用下，网状结构被破坏，变成粘度低的流体。当离心力消失之后又重新形成网状结构．恢复成粘度高的流体．这种性质被称为触变性(thixotropy)．利用这一特性可制成一种血清分离胶。当分离胶与凝固后的血液在同一试管中离心时，分离胶便在血清和血块之间形成胶状的隔离层将血清和血块隔开。从而提高了血清的收得率，并在原状态下保存血清，简化了临床检验过程，提高了工作效率。现今医学检验技术已步入全自动化，微机管理的新时代．在临床检验领域内，不论临床化学．血清学，免疫学等检测中。所甩标本大都需要分离血清。如何船快速、足量地分离血清、并能简化操作，就是一个医学检验界迫切需要解决的课题。血清分离胶的应用为这一问题的解决提到希望日程。血清分离胶是一种疏水性的有机化合物，其作用原理是：一般血清比重约1.02、血块比重约1.08、分离胶比重维持在1.05。在离心力的作用下，分离胶在血清和血块间形成隔离层．早期的分离胶是往硅油中加入硅石粉．再调整比重而制成．1973年美国PECTON公司以硅油和硅石为原料树成凝胶并装入玻璃试管中投放市场．1982年日本积水化学工业及其同行用塑料试管代替玻璃试管实现商品化。1991年中国科学院大连化学物理研究所和大连临床检验中心遁力协作，在国内首次研制出国产的血清分离胶。并受到卫生部临床检验中心的重视，投入临床应用后，证明完全达到分离胶标准要求。现今的分离胶采血管其原料为聚酯或聚丙烯。分离胶原料为聚烯烃、聚酯和丙烯。促凝剂为硅石粉、硅石炭素及蛇毒等喷徐于管壁．分离胶置于试管底部，注入血样待血液凝固后置离心机中离心，分离胶即在血清、血块之间形成隔离层。并使血清保持原状，无改变。此隔离层紧密地粘附在试管璧上，可在原状态下由自动分析仪直接吸取血清，或冷藏保存，远途运输均不影响检测结果，也避免了纤维蛋白和溶血的影响。此外，自血样注入采血管、血清分离、分析仪直取血清、血样保存，废弃物处理的全过程都在同一支管中进行，避免血样沾沾污操作者，防止血液中病毒的感染，减少了医疗废物，提高了工作效率。所以，血液分离胶的应用是医学检验的一项重要发展。
血清分离胶促凝采血管的理论基础及临床应用
血清分离胶促凝采血管的理论基础及临床应用 当今分析仪器的自动系列集约化或条型码的运用,增加了系列化项目直接上机检测量。但就是由于过去采血后血液自然凝固,血液从离心到测定放置时间长,影响了分析仪的多种功能的充分发挥。为了迅速推进检测技术的快速化,往采血管中添加分离胶、促凝剂缩短了血液凝固时间。分离胶促凝采血管的应用,就是采血初级阶段重要质量控制,同时也制备了高品质的血清标本。从保护室内外环境角度考虑,血清分离胶采血管的应用,减少血清杯及塑料试管的用量。目前国内许多公司提供的真空系列采血试管,规范了检验科采血技术,减少了多种多样交叉感染。但就是,分离胶促凝采血管的临床实践应用中,出现了涉及到分离胶、促凝剂的基础理论及值得注意的有关问题。必须从基础理论上去理解才能解决实践中出现的问题。本文就血清分离胶促凝管基础理论及临床应用讨论如下。 1 分离胶分离血清、血块的机理 血清分离胶就是由疏水有机化合物与硅石粉组成,具有触变性的粘液胶体,其结构中含有大量氢键,由于氢键的缔合作用形成网状结构,在离心力的作用下用网状结构被破坏变为粘度低的流体,当离心力消失之后又重新形成网状结构这种性质被称为触变性(thizotropy)。即在温度不变的情况下,对这种粘液胶体施加一定的机械力,可从高粘度的凝胶状态变为低粘度的溶胶状态,如果机械力消失又恢复原来高粘度的凝胶状态。由机械力作用产生的凝胶与溶胶的互变现象首先由Freundlich 与Petrifi 命名。为什么由机械力的作用会产生凝胶与溶胶的互变现象呢?触变性就是因为分离胶的结构内部含有大量氢键网状结构之故。在常温下氢键比较容易被切断引起再结合。硅石表面具有硅羟基(SiOH),形成SiO 分子凝聚体(初级粒子),在这种初级粒子间以氢键连结成链状结合粒子。这种链状硅石粒子与构成分离胶的疏水有机化合物的粒子间更进一步形成氢键而产生网状结构,构成具有触变性的凝胶状分子。分离胶比重维持在1、05,血清比重约1、02,血块比重约1、08,当分离胶与凝固后的血液在同一试管中离心时,由于对分离胶施加离心力而引起硅石凝聚体中的氢键网状结构被破坏变成链状结构,分离胶就成为粘度低的物质,比分离胶重的血块就移到管的底部,分离胶发生返转现象,形成管底部血块/分离胶/血清三层。当离心机停止转动失去离心力后,分离胶中硅石凝聚体的链状粒子间再次由氢键构成网状结构,恢复初始高粘度凝胶状态,在血清与血块间形成隔离层。另外,检验医学实验室广泛采用了一次性疏水性塑料试管,延长了凝血时间。其塑料试管在与Ⅺ、Ⅻ凝血因子接触时,被激活能力非常弱,采血后2～4h血液还没有完全凝固,为此要在塑料试管内壁喷涂促凝剂加速血液凝固,能得到高品质的血清标本。 2 血清分离胶促凝管、血浆分离胶抗凝管 血液促凝剂就是为了临床检验中快速分离血清标本而研制的促凝剂,一般常用硅石粉、玻璃粉、炭素粉末及蛇毒等促凝成分,特殊加工成粉剂与球型。粉剂制成无水乙醇悬浮液,喷涂在血清分离胶真空试管内壁上,放鼓风干燥箱中(35℃)使无水乙醇蒸发干。如果血清分离胶返转性不好,会出现分离胶隔层与血清、血块之间分离不完全,其原因往往就是离心前血液没有完全凝固所致,因为血液凝固不完全可使纤维蛋白混杂在隔离层。要使血液完全凝固,必须按说明书正确使用血清分离胶促凝管,才能制备高品质的血清标本。血浆分离胶抗凝管就是为了快速血浆生化急诊检验所需,即在分离胶采血管内壁喷涂肝素锂。
真空采血管使用及原理
真空采血管使用及原理 红色 临床用途：血清生化血库试验 所制备标本类型：血清 制备标本步骤：采血后立即颠倒混匀5次---静置30分---离心 添加剂：促凝剂：纤维蛋白酶 采血量(ml) ：3ml 5ml 金黄色 临床用途：快速血清分离生化免疫 所制备标本类型：血清 制备标本步骤：采血后立即颠倒混匀5次---静置30分---离心 添加剂：惰性胶体+促凝剂 采血量(ml) ：3ml 5ml 金黄色长管 临床用途：血铜，血锌 所制备标本类型：血清 制备标本步骤：采血后立即颠倒混匀5次---静置30分---离心 添加剂：惰性胶体+促凝剂 紫色 临床用途：血液血常规试验、血型鉴定、糖化血红蛋白 所制备标本类型：全血 制备标本步骤：采血后立即颠倒混匀8次--实验前混匀标本 添加剂抗凝剂：K2-EDTA 或K3-EDTA 采血量(ml)： 1ml 2ml 浅兰色 临床用途：血液凝血试验 PT，TT，凝血因子试验 所制备标本类型：血浆 制备标本步骤：采血后立即颠倒混匀8次 --离心 添加剂抗凝剂：枸橼酸钠与血样比为1：9 采血量(ml) ：1.8ml 2.7ml 黑色
临床用途：血细胞沉降率试验 所制备标本类型：全血 制备标本步骤采血后立即颠倒混匀8次 --实验前混匀标本 添加剂：抗凝剂：枸橼酸钠与血样比为1：4 采血量(ml)： 1.6ml 2.4ml 灰色 临床用途：血液葡萄糖试验 所制备标本类型：血清 制备标本步骤：采血后立即颠倒混匀8次---离心 添加剂：抗凝剂：氟化钠+草酸钾 采血量(ml)： 2ml 紫红色 临床用途： PCR试验 所制备标本类型：血清 制备标本步骤采血后立即颠倒混匀5 次 --静置30分---离心 添加剂：抗凝剂：K2-EDTA 采血量(ml)： 3ml 5ml 绿色长管 临床用途：血流变的检测 所制备标本类型：全血 添加剂：肝素钠或肝素锂 绿色 临床用途：血铅 所制备标本类型：全血 添加剂：肝素钠或肝素锂 真空采血管的分类、添加剂原理及作用
SDS-PAGE分离胶-浓缩胶配方
SDS-PAGE 1、SDS-PAGE：聚丙烯酰胺凝胶电泳 2、Acr：丙烯酰胺；配胶时用30%Acr（质量比Acr：Bis=29:1） 3、Bis：甲叉双丙烯酰胺 4、DDW：超轻水 5、SDS：十二烷基硫酸/磺酸钠，阴离子去污剂（配胶时用10%） 6、APS：过硫酸铵NH4S2O4配胶时用10% 7、TEMED：四甲基乙二胺，促凝剂 8、Tris-Hcl：3羟基氨基甲烷盐酸缓冲液，配胶时（分离胶ph=8.8，浓缩胶ph=6.8） 9、DTT：二硫苏糖醇，DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的 半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。 10、IMA：碘乙酰胺，碘代乙酰胺用于有机合成，在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷 基化试剂，用于多肽测序以及酶抑制剂等，蛋白组学级试剂。CH>2ICONH>2，是和碘乙酸一样，可通过下列反应不可逆地抑制SH酶类的物质。
1)根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的 分离胶(即下层胶)：
注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。 1)按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)： TBST 缓冲液 每2L体积中含： 1)抗体去除液 每50mL抗体去除液中含：
SDS-PAGE电泳的基本原理： SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
血清分离胶试管在临床检验中的应用
血清分离胶试管在临床检验中的应用 新疆和静县人民医院，陈巍，841300 【摘要】：血液标本的采取用真空采血管系列已成为主流，由于过去采血后血液自然凝固，血液从离心到测定时间长，影响分析结果和速度。为了迅速推进检测技术的快速化，往采血管中添加分离胶、促凝剂缩短了血液凝固时间，血清(血浆)分离胶抗凝采血管的应用，为急诊干化学分析提供了更快速的检测标本并在最短时间报告结果。同时减少了交叉感染等生物安全隐患，规范了检验科采血技术，提高了检测标本的质量，方便了就诊患者。但是，随着分离胶促凝采血管等在临床实践应用不断增加，出现许多误区及使用中值得注意的有关问题，有必要作一介绍。 【关键词】：血清分离胶试管血清使用注意问题 Blood serum separation rubber test tube,s in clinical examination application 【Abstract】：Blood preparation,s adopting picks the blood vessel series with the vacuum to become the mainstream，because after the past picked the blood，the blood natural coagulation，the blood was long from the offcenter to the survey time，the impact analysis result and the speed．To advance the examination technology fast rapidly，toward picked in the blood vessel to increase the separation rubber，the ulant agent to reduce the blood coagulation time，the blood serum (blood plasma)has separated the rubber antifreeze to pick blood vessel’s application，analyzed for the emergency medical treatment desiccation school grades has provided the faster examination specimen and in the shortest time report result．Simultaneously reduced biological safe hidden dangers and so on cross infection，the standard inspection department has picked the blood technology，improved the examination specimen quality，has facilitated the seeing a doctor patient．But，presses along with the separation rubber to congeal picks the blood vessel and so on to increase unceasingly in the clinical practice application，has related problem which in many erroneous zones and the use are noteworthy，it is necessary to make an introduction． 【Keywords】：The blood serum separation rubber test tube Blood serum Use Pays attention to the question
真空采血管的正确使用
真空采血管的正确使用 一、临床检验标本采集 1.病人准备 标本采集前病人的状态对检测结果会有一定的影响，因此，各种不同检测项目对标本采集前病人的状态有不同的要求。如：血脂测定须病人禁食12-14h后采血（否则出现脂血）；情绪紧张会使血糖升高；吗啡、可待因可使淀粉酶（AMS）升高；吃香蕉能使尿液5-羟吲哚乙酸升高等。所以，在病人要做某些化验检查之前，必须嘱咐病人做好相应的准备。 实验室接受标本后的处理应注意以下事项： （1）时间：实验室接受标本后应尽快予以分类和离心。①促凝标本采血后5-15min尽早处理；②抗凝标本可采血后立即离心；③非抗凝（无促凝）标本采血30-60min后离心；④抗凝全血标本（测Li、Zn、原卟啉、原孢菌素）可以不离心。 （2）温度：一般标本为室温（最好是22-25oC）放置；冷藏标本（对温度依赖性分析物）应保持2-8oC直到温度控制离心。 （3）采血管放置：应管口（盖管塞）向上，保持垂直立位放置。 （4）采血管必须封口：管塞移去后会使血PH改变，影响结果，如可使PH、Ca2+增高，使ACP减低；封口可以减少污染、蒸发、喷溅和溢出等。
二、临床常用检验项目的标本 （一）血常规检验标本 一般用EDTA-2K（EDTA-K2-2H2O）1.5～2.2mg/ml 抗凝（EDTA抗凝管）采血。采血注意事项为： 1. 采血后立即上下颠倒混匀（5-10次，不可用力震荡）； 2. 应按抗凝管刻度准确采血； 3. 采血后应尽快送检（需显微镜观察形态的标本采血后应及时推片固定，因为超过2h WBC 形态会发生改变）。 （二）红细胞沉降率（血沉，ESR）测定标本 静脉采集枸橼酸钠（109mmol/L，即32.06g/L）抗凝血（枸橼酸钠抗凝管采血）。采血注意事项： 1.采血后立即上下颠倒混合5-10次； 2.准确采血至刻度线（抗凝剂：全血= 1：4）； 3.采血后应尽快送检（必须2h内检测）。 （三）凝血检测（PT、APTT 、TT 、FBG 、DD ）标本 静脉采集抗凝血（最好真空负压系统采血），抗凝剂用枸橼酸钠（109mmol/L，即32.06g/L,抗凝剂:全血= 1：9 ）。 采血注意事项： 1.空腹采静脉血（餐后脂血影响检测结果，使因子Ⅶ活化，导致PT延长）； 2.采血时患者应保持平静状态30min以上（剧烈活动可使因
2.1SDS-PAGE配制表
SDS-PAGE浓缩胶/堆积胶/上层胶配方表 成分配制不同体积SDS-PAGE浓缩胶所需各成分的体积（毫升）5%胶235681015 蒸馏水 1.4 2.1 3.5 4.1 5.5 6.810.3 30% ACR-Bis（29:1）0.330.50.831 1.3 1.7 2.53 1M Tris Buf.，pH6.80.250.380.630.751 1.25 1.88 10% SDS0.020.030.050.060.080.10.15 10% AP（过硫酸铵）0.020.030.050.060.080.10.15 TEMED0.0020.0030.0050.0060.0080.010.015 SDS-PAGE分离胶配方表 成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升）6%胶5101520253050 蒸馏水2468101220 30% ACR-Bis（29:1）12345610 1M Tris Buf.，pH8.8 1.9 3.8 5.77.69.511.419 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.5 10% AP（过硫酸铵）0.050.10.150.20.250.30.5 TEMED0.0030.0060.0090.0120.0150.0180.03成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升）8%胶5101520253050 蒸馏水 1.7 3.35 6.78.31016.7 30% ACR-Bis（29:1） 1.3 2.74 5.3 6.7813.3 1M Tris Buf.，pH8.8 1.9 3.8 5.77.69.511.419 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.5 10% AP（过硫酸铵）0.050.10.150.20.250.30.5 TEMED0.0030.0060.0090.0120.0150.0180.03成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升）10%胶5101520253050 蒸馏水 1.3 2.74 5.3 6.7813.3 30% ACR-Bis（29:1） 1.7 3.35 6.78.31016.7 1M Tris Buf.，pH8.8 1.9 3.8 5.77.69.511.419 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.5 10% AP（过硫酸铵）0.050.10.150.20.250.30.5 TEMED0.0030.0060.0090.0120.0150.0180.03成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升）12%胶5101520253050 蒸馏水12345610 30% ACR-Bis（29:1）2468101220 1M Tris Buf.，pH8.8 1.9 3.8 5.77.69.511.419 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.5 10% AP（过硫酸铵）0.050.10.150.20.250.30.5 TEMED0.0030.0060.0090.0120.0150.0180.03成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升）15%胶5101520253050 蒸馏水0.51 1.52 2.535 30% ACR-Bis（29:1） 2.557.51012.51525 1M Tris Buf.，pH8.8 1.9 3.8 5.77.69.511.419 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.5 10% AP（过硫酸铵）0.050.10.150.20.250.30.5 TEMED0.0030.0060.0090.0120.0150.0180.03 备注：如配制非变性胶，参考上述配方不加10% SDS即可。
血清分离胶常见问题及原因分析
血清分离胶常见问题及原因分析 血清分离胶是采血管分离血液常用的试剂，杰安生物根据采血管厂家在分离胶使用常见的问题进行分析解答，常见问题有以下几点： 一、检测值不准:血清钾离子等偏高 可能原因： 1.溶血（离心或其它）； 2.间壁稳定性不好； 3.分离胶的油滴堵塞影响吸样导致。 解决方案： 1.相对离心力或离心时间适当缩短； 2.提高分离胶的粘度； 3.和前面相同。 二、分离胶残胶在管壁上 可能原因： 1.分离胶配方或工艺原因； 2.分离胶发生老化，触变性能下降； 3.分离胶的初始离心力过大； 4.离心力过小，离心时间过短。 解决方案： 1.定义分离胶翻转标准和检验和检验方法--优化分离胶 配方--严格控制分离胶合成工艺； 2.验证和确认在有效期内分离胶的触变性符合要求； 3.提高分离胶的触变性能，选择合适的供应商； 4.按照制造商推荐的离心要求进行操作。
三、分离胶不翻转或翻转不良 可能原因： 1.分离胶配方或工艺原因； 2.分离胶发生老化，触变性能下降； 3.分离胶的初始离心力过大； 4.离心力过小，离心时间过短； 5.分离胶的最低反转离心力过高。 解决方案： 1.定义分离胶翻转标准和检验和检验方法--优化分离胶配方--严格控制分离胶合成工艺； 2.验证和确认在有效期内分离胶的触变性符合要求； 3.提高分离胶的触变性能，选择合适的供应商； 4.按照制造商推荐的离心要求进行操作； 5.提高触变性。 四、分离胶流动 可能原因： 1.分离胶配方或工艺原因； 2.储存温度过高； 3.不当的运输转运颠簸，触发分离胶的触变性； 4.分离胶供应商质量不稳定。 解决方案： 1.定义分离胶流动性标准和检验方法； 2.避免运输和储存高温； 3.避免剧烈的抛掷和颠簸； 4.选择合格的供应商并进行监控。
SDS-PAGE凝胶配方
SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 产品简介： 碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。 SDS-PAGE凝胶配制试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶，也可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。 本试剂盒约可配制30-50块常规大小的PAGE胶。 保存条件： 1M Tris-HCl, pH8.8、10% SDS、Ammonnium persulfate (过硫酸铵)和1M Tris-HCl, pH6.8室温保存。30% Acr-Bis (29:1)和TEMED 4℃避光保存。过硫酸铵配制成10%溶液后，分装成小管-20℃保存，通常半年内有效。 注意事项： 过硫酸铵配制成10%溶液后，应当-20℃保存。同时应尽量减少室温存放时间，以防失效。 TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节TEMED的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1. 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)：
使用本产品的文献： 1. Deng XQ, Chen LL, Li NX. The expression of SIRT1 in nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in rats. Liver Int. 2007 Jun;27(5):708-15. 2. Wang PH, Gu ZH, Huang XD, Liu BD, Deng XX, Ai HS, Wang J, Yin ZX, Weng SP, Yu XQ, He JG. An immune deficiency homolog from the white shrimp, Litopenaeus vannamei, activates antimicrobial peptide genes. Mol Immunol. 2009 May;46(8-9):1897-904. 3. Liang QL, Wang BR, Li GH. DcR3 and survivin are highly expressed in colorectal carcinoma and closely correlated to its clinicopathologic parameters. J Zhejiang Univ Sci B. 2009;10(9):675-82. 4. Deng XQ, Cheng JL, Zhang YP, Li NX, Chen LL.
电泳条件及不同胶浓度配制
试剂配制： （1）30%聚丙烯酰胺贮液：将聚丙烯酰胺（电泳级）150g，N,N′—甲叉双丙烯酰胺（电泳级）4g溶剂于400ml双蒸水中，补充双蒸水至500ml，滤纸过滤后，于棕色瓶中4℃避光保存。 （2）1.5mol/l Tris碱（pH8.8）：将90.75Tris碱溶解于400ml双蒸水中，用1mol/l HCl调至pH8.8，补充双蒸水定容至500ml，4℃冰箱保存。 （3）1.0mol/l Tris碱（pH6.8）：将12.1Tris碱溶解于80ml双蒸水中，用1mol/l HCl调至pH6.8，补充双蒸水定容至100ml，4℃冰箱保存。 （4）10%SDS：将10gSDS溶剂于100ml双蒸水中，混匀后，室温保存。 （5）10%过硫酸铵：将0.1过硫酸铵（电泳级）溶解于1ml双蒸水中（用时加水溶解），4℃冰箱保存。 （6）10倍电泳缓冲液（25mmolTris,192mmol甘氨酸，0.1%SDS，pH8.3）：在10L大玻璃管中加8L双蒸水，303gTris碱，1442g甘氨酸，100gSDS溶解后调pH8.3补水至10L，混匀后，室温保存。 （7）样品缓冲液：将1.6ml10%SDS，0.8ml甘油，1.0ml1.0mol/l Tris（pH6.8），加入到4.0ml 双蒸水中，加0.01%溴酚蓝，0.4ml巯基乙醇。 （8）染色液配制 0.25%考马斯亮蓝（CCB）染色液：考马斯亮蓝R-250甲醇-醋酸混合液。取1.25g考马斯亮蓝R-250，溶于227ml蒸馏水中，加甲醇227ml，再加入冰乙酸46ml（近似5:5:1）搅拌使其充分溶解，室温保存备用。 （9）脱色液配制：甲醇：水：醋酸=5:5:1混合备用。或用20%乙醇水溶液。 实验步骤 1待测蛋白样品制备 （1）根据每种方法提取的蛋白，用含SDS的样品缓冲溶液溶解，充分溶解后沸水加入3-5min，1600r/min离心5min，取3上清液进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。 （2）用不含SDS的样品缓冲液溶解蛋白，充分溶解后沸水加入3-5min，1600r/min离心5min，取上清液进行无SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。 垂直板状SDS聚丙烯酰胺凝胶的灌制 1 安装：根据电泳仪说明书安装在灌胶架上。 2根据下表配制分离胶溶液 加入1过硫酸铵，立即摇匀，将其迅速、联系地灌注在两块玻璃板的间隙中，高度据玻璃上边2cm。之后，用带有针头的注射器小心的在丙烯酰胺溶液的上部覆盖上一层去离子水（不要冲击胶面），在室温下垂直放置30min左右，使其完全聚合凝固。 吸出覆盖层溶液，用去离子水洗涤顶部1-2次，弃去多余的溶液。将配置好的浓缩胶溶
真空采血管使用中应注意的几个问题
1．真空采血管的选择：应本着安全有效，质优价廉，保证检验结果稳定准确，减少病人负担的原则去选择适合自己医院的产品。目前除了部分小厂的质量还不能达到使用要求外，许多国产的品牌的质量已经接近或达到同类进口 1．真空采血管的选择：应本着安全有效，质优价廉，保证检验结果稳定准确，减少病人负担的原则去选择适合自己医院的产品。目前除了部分小厂的质量还不能达到使用要求外，许多国产的品牌的质量已经接近或达到同类进口产品的要求，而且更具价格优势，很大程度上可以减少病人不少的医疗开支。所以我们不能一味追求或依赖进口产品，那些质量好价格优惠的国产品牌同样可以胜任于日常的临床应用。但是，在应用前必须进行小样本量（至少100例）各种类型真空采血管必要的试用和评价后才能正式在临床应用。 2.推荐的采血顺序为凝血管(血清管)→枸橼酸钠管→肝素或EDTA管→草酸钾2氟化钠管→血沉管。主要原因是第一管内往往含有组织液,易造成凝血,不适于做血凝测定。 3.取血时患者应松弛,环境温暖,防止静脉挛缩，束膊时间不可过长,禁止拍打手臂,否则可造成局部血液浓缩或激活凝血系统。观察采血是否顺利，采血量是否符合要求。由于实验室样本量的不断增加，传统实验室分离血清标本的速度与全自动化分析仪很不同步,因为血液凝固速度与玻璃试管和塑料试管的激活能力、温度密切相关。实验证明,凝血因子中的Ⅺ、Ⅻ因子接触玻璃试管壁后被激活,一般采血后在23~25℃室温条件下,30min大部分血液已凝固,完全凝固需要1h。但是,疏水性的塑料试管壁接触凝血因子Ⅺ、Ⅻ时,被激活的能力非常弱,需要2~4h血液才能完全凝固,影响了分离血清的速度。在采血试管内壁表面喷涂血液促凝剂才能解决上述存在的问题。采血后轻轻倒转试管混合4~5次,置室温立放待血液完全凝固后离心，血液呈现收缩状态,可观察到有血清渗出现象,证明血液完全凝固。 4．血清分离胶促凝采血管离心操作的要求：如何正确地使用分离胶促凝管制备高质量血清标本,血液完全凝固和离心条件是至关重要的两个环节,离心要求采用水平式离心机。具
一次真空采血管种类及用途
大连大学附属中山医院·理化协作项目文件（2010第一版）一次真空采血管种类及用途管帽 颜色添加剂种类和临床应用检测项目备注在4℃葡萄糖分子可保存48小时。 不能用于尿素酶法测定尿素、碱性磷酸酶和淀粉酶的测定。 草酸钾/氟化钠，氟化钠是一种弱效抗凝剂，一般 常同草酸钾或乙碘酸钠合并使用，其比例为氟化 灰色血糖、葡萄糖耐量试验钠1份，草酸钾3份。此混合物4mg可使1ml 血 液在23天内不凝固和抑制糖分解。 肝功、血糖、血脂、无机离子、血清蛋白，各种酶类测定。血清不含添加剂，用于常规血清生化，血库和血清学 红色学试验：免疫球蛋白、补体、免相关检验。 疫复合物、C反应蛋白、自身抗体、肿瘤免疫、各种病毒检测。 惰性分离胶和促凝剂。标本离心后，惰性分离胶 肝功、血糖、血脂、无机离子、能够将血液中的液体成分（血浆）和固体成分（红 血清蛋白，各种酶类测定；血清细胞，白细胞，血小板，纤维蛋白等）彻底分开 黄色学试验：免疫球蛋白、补体、免并完全积聚在试管中央而形成屏障，标本在48小 疫复合物、C反应蛋白、自身抗时内保持稳定。促凝剂可快速激活凝血机制，加
体、肿瘤免疫、各种病毒检测。 速凝血过程，适用于急诊血清生化试验。 乙二胺四乙酸（EDTA）及其盐是一种氨基多羧基红/白细胞、血小板、嗜酸性粒细酸，可以有效地螯合血液标本中钙离子，螯合钙胞、网织红细胞计数、白细胞分紫色 或将钙反应位点移去将阻滞和终止内源性或外源类计数，血红蛋白、红细胞比积、性凝过程，从而防止血液标本凝固。出血时间、凝血时间测定。 枸橼酸钠，其主要通过与血样中钙离子螯合而起 高铁血红蛋白还原试验、凝血因抗凝作用。适用于凝血实验，国家临订实验室标 蓝色子纠正试验、凝血四项、D-二聚准化委员会（NCCLS)推荐的抗凝剂浓度是3.2%或 体测定等血液凝固试验。 3.8% 肝素钠/锂抗凝剂，可快速分离血浆，是电解质检 适用于红细胞脆性试验，血气分测的最佳选择，也可用于常规血浆生化测定和ICU 绿色析，红细胞压积试验，血沉及普等急诊血浆生化检测。血浆标本可直接上机并在 通生化测定及血液流变学试验。 冷藏状态下保持48小时稳定。 枸橼酸钠，血沉试验要求的枸橼酸钠浓度是 黑色血沉试验。