04.陆姮磊--大鼠脑组织规范性取材
RT-PCR如何取大鼠脑组织

RT-PCR如何取大鼠组织
取脑组织时尽量动作迅速,在冰块上操作可减少降解,最好是取出组织后立即提取RNA,如果不能,应迅速放至液氮中,不需浸泡液体。
做Western-Blot也是这样。
如果没有液氮,也可以放在-80度冰箱中,但是保存时间没有液氮长,最好尽快提取,否则也有降解的可能。
放入-80度冰箱中保存前不需要浸泡在其它液体中。
如果脑组织足够大就可以同时做两种检测,每种检测100mg 组织就够了
处死大鼠,尽快将大鼠的脑组织,放入已经浸泡过DEPC水,并高压消毒过的冻存管中,立即入液氮保存,如果有条件,建议将组织一直保存于液氮中,这样提出的RNA效果非常好的。
取脑后30分钟之内用RNA保存液保存,随便放多久ok。
做PCR放RNA保护液。
大鼠灌注固定取脑解剖取材讲义

• 或4℃保存备用。
• 2.制作灌注装置,用两瓶塑料包装的输液瓶 装灌注液。同时配好输液器备用。
• 3.10%水合氯醛按4mL/100g的剂量腹腔注射 麻醉动物。
• 4.沿两侧肋弓剪开皮肤,打开腹腔,用止血 管钳夹持剑突并向上提拉,用弯
5.体循环与肺循环的鉴别
• 体循环时大鼠肝脏变白现象出现较早,在灌 注多聚甲醛后,四肢会出现明显的抽搐现象, 尾巴和四肢明显僵硬。若灌流针误插入右 心室,会导致灌流液沿肺循环途径灌流,这时 肝脏变白出现的较慢,四肢的抽搐现象没有 体循环明显,且鼻腔中有时会有灌流液流出。 因肺循环会影响组织器官的灌流效果,因此 进针时要准确,避免肺循环的发生。一旦出 现肺循环指征,应及时调整进针角度。
• 短期灌注:采用心脏穿刺快速灌注20 min, 其中生理盐水灌注50~100mL,4 %多聚甲醛 缓冲液灌注150 mL。
• 长期灌注:灌注时间延长到1 h,其中生理盐 水灌注200mL,4 %多聚甲醛缓冲液灌注400 mL。
• 短期灌注组脑组织结构保留基本良好,与长 期灌注组相比稍差,研究皮层和海马结构损 伤基本可以满足;长期灌注组结构保留最好, 但是耗时长、固定液用量大,致使试验进度
大鼠脑组织取材步骤
1.剪开皮肤
• 2.用钩镊再眼眶处固定大鼠颅骨,用组织剪 再颅骨和颈椎连接处剪断
• 3.组织剪头部伸入枕骨大孔,尽量贴着骨头 (不能插太深伤到脑组织)。
• 4.组织剪从枕骨大孔处伸入,朝向同侧眼眶 方向,贴着骨头剪,剪到眼眶
5.从大鼠眼眶之间剪断
6.左手持钩镊插入大鼠的眼眶固 定颅骨,用弯钳直接夹住枕骨大 孔处的骨头直接就掀起来了
阿尔茨海默病大鼠模型建立及葛根素对大鼠空间学习记忆的影响_李冬

论著·基础研究 doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.16.007阿尔茨海默病大鼠模型建立及葛根素对大鼠空间学习记忆的影响*李 冬1,田 寅2△,宫 宇1,王 曦1(佳木斯大学附属第一医院:1.药剂科;2.肿瘤外科,黑龙江佳木斯154007) [摘要] 目的 探讨葛根素对β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠空间学习记忆障碍的影响。
方法 采用双侧海马注射Aβ1-42诱导AD大鼠模型。
造模后3d起,葛根素按不同剂量灌胃给药28d,给药结束后采用Morris水迷宫测试系统,检测大鼠空间学习记忆能力。
结果 模型组大鼠表现出明显的学习记忆能力障碍,而葛根素高、中、低剂量组干预则显著地改善了AD大鼠学习记忆能力。
结论 葛根素能部分的提高AD模型大鼠的空间学习记忆能力。
[关键词] 阿尔茨海默病;葛根素;空间学习记忆[中图分类号] R965.2[文献标识码] A[文章编号] 1671-8348(2016)16-2180-02The construction of Alzheimer′s disease rats model and the effects of puerarin on rat spatial learning and memory*Li Dong1,Tian Yin1△,Gong Yu2,Wang Xi1(1.Department of Pharmacy;2.Department of Surgical Oncology,the First Affiliated Hospital ofJiamusi University,Jiamusi,Heilongjiang154002,China) [Abstract] Objective To research the effects of puerarin on Alzheimer′s disease(AD)rats spatial learning and memory dis-order induced by Aβ1-42.Methods Bilateral hippocampal injection of Aβ1-42was used to induced AD model rats.All rats under-went gavage administration with puerarin with different dose for 28dsince the 3rd day after the construction of model;and theMorris water maze was used to test the spatial learning and memory ability of rats.Results The model group rats showed obviouslearning and memory disorder,and the ability of learning and memory disorder of rats in the high,medium and low dose of puerarin interven-tion group were significantly improved.Conclusion Puerarin can improve the spatial learning and memory ability of AD model rats.[Key words] Alzheimer disease;puerarin;spatial learning and memory 阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)是一种起病隐匿的中枢神经系统退行性疾病,其主要临床表现为严重的不可逆转、渐进性的认知功能障碍和精神异常[1-2]。
【doc】大鼠脑组织中p75基因克隆及其探针制备

大鼠脑组织中p75基因克隆及其探针制备Mar.200319(1)23~26神经解剖学杂志(ChineseJournalofNeuroanatomy)大鼠脑组织中p75基因克隆及其探针制备①刘梅丁斐顾晓松(南通医学院生物技术系,江苏省神经再生重点实验室,南通226001) 摘要为了克隆大鼠p75基因并制备地高辛标记的p75cDNA探针(digp75cDNA),本研究采用RT—PCR法,从大鼠脑组织mRNA中扩增p75基因mRNA部分片段,克隆入T载体,并经序列测定.以dig—p75cDNA为探针,采用原位杂交方法观察成年SD大鼠海马组织中p75mRNA的表达.结果:RTPCR法扩增出一种特异产物与预期长度386bp相符,T载体克隆测序与p75基因100同源.原位杂交结果显示,阳性信号出现在成年大鼠海马组织中.结论:采用RTPCR和T载体技术获得了.大鼠脑组织p75基因克隆,dig—p75cDNA探针原位杂交显示正常SD大鼠海马组织中表达p75mRNA.关键词p75基因T—A克隆地高辛标记原位杂交大鼠GENECLONINGOFp75FROMRA TBRAINANDITSPROBELABELE DLiuMei,DingFei,GuXiaosong (DepartmentofBiotechnology,theKeyLaboratoryofNerveRegeneration ofJiangsuProvince,NantongMedicalCollege,Nantong226001) AbstractToobtainthecloneofp75fromratbrainandthenlabeledcDNAprobe bydigoxigenin,thepartialmRNAfragmentofp75wasamplifiedbyRTPCRfromratbrain.RT—PCRproductwasligatedint opGEM—Tvector,andwassequenced.Theexpressionofp75mRNAinhippocampusofadultratwasexaminedbyinsituhyb ridizationwithdig—p75cDNA.TheproductofRTPCRwasthe386bpwhichmatchedthelengthexpected.Thesequenceofp7 5wascompletelyhomogeneouswiththep75se—quencereported.Hybridizedsignalsofp75mRNA werefoundinhippocampu softheSDrat.Theresultsshowthatp75genecan beobtainedfromratbrainusingRT—PCRandTvectortechniques.Thestudy ofinsituhybridizationusingdigp75cDNAindi—catesthatthep75mRNAisexpressedinhippocampusofSDrat. Keywordsp75,cloning,dig—labeled,insituhybridization,rat神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)是神经营养因子家族中第一个被发现,也是迄今为止研究得最为清楚的一个.体内,外研究证实,它能够促进发育中的感觉神经元及交感神经元的存活及分化,营养成熟的神经元,维持其正常的生物学功能.近年来的研究发现,NGF能诱导细胞凋亡,这一现象的发现源于NGF的一个受体亚基p75的研究.NGF受体有两种:一种是以前克隆的p75,另一种①是2O世纪9O年代初克隆的酪氨酸激酶受体Tr—kA_1].最初的研究发现Trk为形成高亲和力结合位点以及介导NGF效应所必需,而p75在NGF信号传递中既不必要也不充分,使得p75长期以来被视为TrkA的辅助性受体(helperreceptor).但是有的实验发现,仅仅TrkA并不足以形成NGF高亲和力受体,而当p75与TrkA以合适的比例共表达时,则可观察到大量的高亲和力结合位点存在,同时p75国家自然科学基金(No.30070255),江苏省教育厅2000年高校科研项目(OOKJD31OO7)资助项目通信作者:顾晓松地址:南通医学院江苏省神经再生重点实验室,南通226001,电话:0513—5504510,E—mail:******************神经解剖学杂志第19卷第1期2003年3月的突变可使这些位点大为减少.另有实验表明,p75能够显着降低TrkA对NGF反应的阈值.l996年以来对p75功能的研究取得了很大进展,认为在完全没有TrkA的参与下,p75可以独立介导胞内信号传递,凋控细胞凋亡l_2].由此人们对P75的研究日益深入和广泛.本实验采用RT~PCR法,从大鼠脑组织mRNA中扩增出p75基因mRNA部分片段,克隆人T载体.以非同位素标记物~地高辛素(digoxigenin, Dig)标记p75基因片段为探针,并经原位杂交证实. 本文为进一步研究p75mRNA的表达提供了手段. 材料和方法1.动物与试剂健康新生SD大鼠,由南通医学院实验动物中心提供.Trizol试剂,第一链eDNA合成试剂(Omnis—cript丁MRTKit)购自Qiagen公司,还有测序试剂盒(nSequence州Kit)购自PharmaciaBiotech公司, pGEM@TEasyV ectorSystems,X—gal,IPTG购自Promega公司,地高辛标记试剂(DigDNALabeling andDetectionKit)购自Boehringer公司,TaqDNA聚合酶,EcoRI等常用试剂购自上海试剂公司.均按操作说明进行实验.2.引物合成根据P75基因序列设计上游引物sense:ccAGcccAcAcTTcTcTcTc,在1890~2009位点,下游弓I物antisense:TTcTGAcA TTAAGGGccGTG, 由中科院上海植物生理研究所Beckman示范实验室合成,预计扩增片段长度386bp.3.总RNA制备新生鼠脑组织100mg,立即置Trizol试剂中匀浆2min,按试剂操作说明提取总RNA,甲醛变性胶电泳检测其完整性.采用紫外分光光度计,测定OD26o及OD280值,计算RNA含量.4.逆转录反应反应在PTC一1()()型热循环仪(MJ公司)上按Kit操作步骤进行,反应总体积2Ol.在0.5mlEp—pendorf管内,加入总RNA2g,10/,mol/IOligo (dT)12182l,10×逆转录buffer2l,5mmol/I dNTPmix2l,加入逆转录酶1/,1(4U),再加入DEPC—treatedH.O至2OI,轻混匀,稍离心,置37C1h.93C5min灭活酶.产物在一2O保存.5.PCR扩增在冰上依次加入ddH2O36/~1,10×PCRbuffer5/,1,dNTPmix(each2mmol/L)2/,1,p75上下游引物sense和antisense(10/,mol/I)各2l,第一链cDNA2l,Taqpolymerase(2U/>I)1l.轻混匀,稍离心,预热热循环仪至8OC,将PCR扩增管迅速移至热循环仪上,执行以下程序:94C预变性3 min,94C50S,58C40S,72℃40S,循环32次后在72C延伸7min.1琼脂糖凝胶电泳检测.6.PCR产物的克隆采用胶回收Kit(Qiagen公司),胶上回收扩增带,将回收扩增片段3/,1(约50ng)与T载体连接, 即T—A克隆.按Kitprotocol操作,14C连接12~16h.用热震惊方法将连接产物转化大肠杆菌DH5a 感受态,涂于含X—gal和IPTG并具氨苄青霉素(Amp)抗性的1.5琼脂平皿上.37倒置培养12~16h,见蓝白斑.7.克隆鉴定和序列测定挑取白斑置IB(Amp)培养基中扩增.小量碱法抽提质粒DNA,EcoRI酶切鉴定.将酶切片段长度符合插入片段长度的质粒进行纯化,Sequence Kit序列测定,放射自显影,读片,送GenBank检索.8.P75探针制备p75片段回收:接种EasyT—p75于具Amp抗性LB培养基中,37C振摇过夜.1.5ml过夜菌液常规碱裂解法抽提质粒DNA,溶于2OlTE(含RNase20/,g/m1)中.EcoRI酶切,胶回收Kit回收短片段.随机引物法标记p75片段:取15/,1p75片段(约800ng),100C变性5min,置冰浴中,依次加入lO×Klenowbuffer(含随机引物)2l,l0×dNTPs(标记混合物)2/,1,Klenow酶1l(2U).轻混匀,稍离心,置37C反应1h.常规乙醇纯化后溶于25l灭菌双蒸水中.9.原位杂交SD大鼠(2月龄),麻醉,生理盐水,4多聚甲醛磷酸缓冲液灌流,取大脑组织,固定.常规冷冻切片,切片厚20/,m,依次入0.1mol/LPBS10min,0.1mol/L甘氨酸5min,lmg/L蛋白酶K30min.42C预杂交30min,换杂交液(含变性p75探针1 mg/L)42C杂交14~16h.切片经4×SSC至0.5×SSC梯度漂洗,3BSA包被30min后,滴加anti—dig—APmixture,4C过夜.以NBT,X—P显色,伊红复染.同时设无关DNA探针杂交为阴性对照.刘梅等:大鼠情组织巾p75基围克隆及其探什制备结果1.总RNA的检测经甲醛变性胶电泳,EB染色,28S和l8S条带清晰可见.5s条带隐约可见.提示RNA未降解. OD/OD为1.93.说明RNA纯度满意.2.RTPCR结果样晶见一特异扩增带,位于DNAMarker250bp与500bp之间,大小与预期结果相符(Fig.1)阴性对照未见扩增带..Fig.1l’hesu1tulRrPCRM,DNAMarker(DI,2{1(11】)1.RTPCRforp75fragmem(3882,Control3.PCR产物克隆与序列测定PCR产物经T载体直接克隆.转化.蓝白斑筛选.质粒酶切鉴定.与插入片段长度相符(Fig.z)一T7SequenceKit序列测定.放射自妲影,读片得133 bp送GenBank检索+与p75基因l.()同源其全长386bp序列测定由中科院上悔植物生理研究所Beckman示范实验室完成.Fig.2TheEasyTp75plasmiddigestedbyEcoRM.DAMarker(DI2(}00)1.EasyTP75plnsmiddigestedbyEcoR(p75{ragme~t386bg?EasyTvector3.U18kb)2.EasyTp75plasmidI.原位杂交结果正常大鼠脑组织可见蓝色阳性杂交信号.主要分布在悔马区(Fig.3).图B为图A的局部放大,箭头所示为阳性信号阴性对照未见杂交信号CA4Resuhofinsituhybridizatio.with(P7feDNAprobe0nhippocampus0{rtI1×4’Thepusitivehybridizationsignals(hIue)in hippocampu~()ResultofinⅥ|uhybridizmtionwithdig—p75cD NAprobe’)nhippocampusofr月t.]ocablowupc)fFig月A×t00讨论神经生长因子是一种在周围神经系统和中枢神经系统中具有重要作用的神经营养因子,为阐明其作用机理.对其受体的研究也日益深人.近年来.特别对NGF的低亲和力受体p75的报道日益增多由于它具有与B细胞抗原,CD40,肿瘤坏死因子(TNF)以及Fas抗原(APO1)相似的同源区域,即姐蛐神经解剖学杂志第19卷第1期2003年3月deathdomain,因此目前很多的研究集中在它独立介导信号传递在细胞凋亡中的作用.有研究表明在CNS的炎症反应和缺血损伤中,p75有别于TNF, 担任了重要的角色l3],有的研究则表明,p75可以转导抗氧化作用从而保护脑细胞受到的TNF介导的氧自由基产生的损伤_4j,说明它在细胞凋亡的调节中发挥着重要的作用.本研究作者等的研究兴趣也在于p75在神经系统损伤中的双刃剑作用. Radeke等在GenBank登录的p75mRNA全长3259bp,本研究按照其基因序列设计PCR引物, 运用T载体克隆技术克隆了p75mRNA部分片段, 测序结果与其报道一致.T载体克隆(即T—A克隆) 系统是由Invitrogen公司开发的分子生物学技术, 现已被广泛用于PCR产物的克隆和测序.其原理是利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A,而T载体是一种带有3’T突出端的载体,在连接酶作用下,可以快速地,一步到位地将PCR产物直接插入到质粒载体的多克隆位点(MCS)中.本研究使用的pGEM@一TEasyV ector在其插入位点两侧引入了EcoRI酶切位点,故可用单酶切方便地鉴定.非同位素一地高辛标记的探针具有较高灵敏度,与同位素比较不需要特殊的设备和人员培训,操作简单而且安全.标记好的探针由于不受放射衰变的影响,可以较长时间保存,使用方便.本文作者等曾以地高辛标记NGF_4],CNTF_6]和CNTFL7为探针进行过研究,此次制备的p75探针经正常大鼠脑组织原位杂交显示效果理想,可以清楚地看到杂交信号主要分布在海马,阴性对照未见杂交信号,说明用此方法制备的探针特异性较高,结果可靠,为研究p75的作用提供了有力的工具.参考文献[1]KleinR,JingSQ,NanduriV,eta1.Thetrkprotooncogene encodesareceptorfornervegrowthfactor.Cell,1991,65:189 ~197[21DechantG,BardeY A.Signalingthroughtheneurotrophinre ceptorp75NTR.CurrOpinNeurobiol,1997,7:413~418 [3]AkassoglouK,DouniE,BauerJ,eta1.Exclusivetumor necrosisfactor(TNF)signalingbythep75TNFreceptortrig—gersinflammatoryischemiaintheCNSoftransgenicmice. ProcNatlAcadSciU.S.A,2003,100:709~714[41DoppJM,SarafianTA,SpinellaFM,eta1.Expressionofthep75TNFreceptorislinkedtoTNF—inducedNFkappaB translocationandoxyradicalneutralizationinglialcells.Neu—rochemRes,2002,27:1535~1542[53RadekeMJ,MiskoTP,HsuC,eta1.Genetransferandmolec ularcloningoftheratnervegrowthfactorreceptor.Nature, 1987,325(6105):593~597[63CaoZ,LuI,DingF.eta1.Purificationanditsapplicationof thedigoxigenin—labeledhuman8一NGFDNAprobe.ChinJ Neuroscience,1995,2:141~144[7]刘梅,丁斐,顾晓松.大鼠脑组织中CNTF基因克隆及其探针制备.解剖学研究,2001,23:32~34。
大苞雪莲石油醚部位对缺氧大鼠脑组织的保护作用及其机制研究

大苞雪莲石油醚部位对缺氧大鼠脑组织的保护作用及其机制研究目的:研究大苞雪莲石油醚部位(petroleum ether extract of Saussureainvolucrata,PESI)对常压密闭缺氧大鼠脑组织的保护作用及其机制。
方法:首先采用常压密闭缺氧模型进行缺氧大鼠的PESI剂量依赖性实验,给药剂量分别为125,250,500 mg·kg-1,单次腹腔注射给药,最终确定的最佳给药剂量为PESI 高剂量。
然后取90只雄性Wistar大鼠随机分为缺氧模型组、乙酰唑胺250 mg·kg-1组和大苞雪莲石油醚部位高剂量组,每组又按不同缺氧时间分为3个亚组,各亚组10只大鼠。
采用与上述相同的方法缺氧和给药,并于缺氧处理0,3,6 h后处死大鼠,取脑组织进行常规组织学观察和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)免疫组化染色,并用Real-time RT-PCR检测HIF-1α,促红细胞生成素(EPO),血红素加氧酶(HO-1)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase-3)基因表达情况,用蛋白印迹法检测HIF-1α蛋白的表达情况。
结果:缺氧模型组脑组织随缺氧时间的延长而出现严重的病理损伤,乙酰唑胺组和PESI高剂量组的损伤情况则明显减轻。
基因表达和蛋白印迹检测均发现,PESI高剂量抑制HIF-1α的表达,单纯基因表达检测发现,PESI高剂量增强EPO和HO-1 mRNA的表达,但抑制Caspase-3 mRNA的表达。
结论:PESI对常压密闭缺氧大鼠脑组织的保护机制可能与其抑制HIF-1α表达、增强血液输氧能力和抗脑细胞凋亡有关。
标签:大苞雪莲;缺氧;缺氧诱导因子1α;促红细胞生成素;血红素加氧酶;Caspase-3随着我国西部大开发战略的深入实施、青藏铁路的开通和高原旅游业的兴起,越来越多的人需要在较短时间内由平原进入高原,但急性高原反应(acute mountain sickness,AMS)严重影响进入高原人群的身体健康,有时甚至危及生命。
采用Ⅳ 型胶原酶构建大鼠脑出血模型

按注射药 物溶 液容 积 不 同又 分 为 3个 小 组 。每组 分 为术 后 6 h 1 、 、 , 共 5个时相点 , 时相 点动物 6只。各组 间 、2h2 h3d 7d 4 每 动物体重 无显著差异 。 122 动物模型 的建立 ..
使用 Ⅳ型胶原 酶建 立脑 出血 模型
n i e n i f m t ai i cr ao i o m f u o j t t h ba adrl l,adteseo e a m orlinwt tevl eo sl i s n c di ot ri. ea b h z h o sn et hh u tn ie e n e o n
文章编 号 : 0 — O (02 1— 9 - 1 05 42O )21 4 2 0 4 3 0
采 用 Ⅳ 型 胶 原 酶 构 建 大 鼠脑 出血 模 型
张艳玲 陈康 宁 邵淑 琴 王 英 ( , , , 第三军医大学: 附属西南医院神经内科; 基础医学部病原生物学教研室 , 重庆 403) 008
Ⅳ型胶原酶 0 2U及肝 素 2U 。对 照组 ( ot 1颅 内注 射生理 . ) C no) r 盐水 20 , . Ⅳ型 胶原 酶组 ( oaeae 注 射 Ⅳ胶原 酶, 理 盐 Cl n ) l s g 生 水 溶液 20 ( 1 含 Ⅳ型胶原酶 02 U 。 . 每 . ) 12 3 标本 的取材和制备 .. 术后在 相应 时相 点过 量 乙醚麻 醉动物 , 速开胸暴露心脏 , 迅 从左心 室插管 至主 动脉根部 , 右 在
Z AN a—n ,C E 6 —ig H O S uqn H GY nlg H N I i mgnn ,S A h—i,WA G Yn ( eam n o Nu ly Su ws Hsil hdMl r Md a Ui rt N i g Dpr et f e o g, ot e o t,Ti ia ei l ne i t ro h t pa r iy t c v sy
两种脑组织取材方法的比较

n e ) 。高纯 R N A提取试 剂盒 ( R o c h e公 司 , 美 国) , 配 制 相 关
作者简 介 : 胡 利 , 女, 硕士, 助理 实 验 师 。T e l : ( 0 7 5 9) 2 3 8 8 5 7 5 ,
E— ma i l : g e n i u s h u l i @1 6 3. c o n r
的缓 冲液试剂 。
1 . 2 方 法
鲍
波, 男, 硕 士, 副教 授, 通 讯 作 者 。T e l : ( 0 7 5 9)
置及 内置 的磁力搅拌 系统 , 使微 波热量 分布均 匀一 致 , 从 而
薄、 染色质量 等) 的影响 造成难 以诊断 。涂 片太厚可导 致细
胞相互重叠 , 涂 片太薄 可 因细胞 太少 难 以做 出肯定 性 的诊 断 。胸 、 腹水 中脱 落的细胞 种类 较多 , 如组织细胞 、 白细胞和 红细胞 、 恶性 肿瘤 细胞 、 坏死物 和黏液 以及 正常 的或反 应性 的间皮细胞等可 以相互 重叠 , 退化 变形 , 在常规诊 断 中鉴别
方法 的 1 0倍 多 , 采 用 无 水 乙醇 +异 丙 醇 作 脱 水 、 透 明剂 , 逐
微波快速处理组织仪 , 不仅为临床科 室及 患者赢 得 了宝 贵 的时 间, 而且有效节省了人力资源 、 提高工作效率 , 更 减轻 了患者及家属长时 间等待结 果 的精神 压力 。此方 法操 作容
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1 . 鼠脑 组织
F344大鼠自发性肿瘤的病理学观察

F344大鼠自发性肿瘤的病理学观察尹纪业;董延生;袁本利;余寿忠;瞿文生;原野;王和枚;丁日高【期刊名称】《实验动物与比较医学》【年(卷),期】2011(31)3【摘要】目的积累本中心F344大鼠自发肿瘤背景数据,为开展新药诱癌试验做准备.方法 SPF级F344大鼠336只,雌雄各半,体重180~200 g,本中心屏障环境下饲养,随机分为4个组,即分别于6、12、18和24个月4个时间点处死动物32、64、64,176只,称量动物心、肺、肝、脾、肾、肾上腺、胸腺、脑、睾丸(或卵巢)和附睾(或子宫)等器官并计算脏器系数,常规病理学取材制片后显微镜检查,观察统计4个时间点动物自发性肿瘤的类型和发病率.结果高发的肿瘤性病变主要包括睾丸间质细胞瘤、垂体腺瘤、单核细胞白血病、皮下纤维瘤、乳腺纤维腺瘤、嗜铬细胞瘤等.结论本实验结果丰富了现有F344大鼠自发性肿瘤的发病数据,为开展新药诱癌试验提供了背景资料.【总页数】5页(P188-192)【作者】尹纪业;董延生;袁本利;余寿忠;瞿文生;原野;王和枚;丁日高【作者单位】军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850【正文语种】中文【中图分类】Q95-33【相关文献】1.雄性F344大鼠自发性不育症与精子参数及精子核成熟度关系研究 [J], 王奕森;朱萍妹;徐平;施恩;潘华;周光兴2.雄性F344大鼠自发性Leydig 细胞瘤的比较医学研究 [J], 王奕森;朱萍妹;钟高仁;徐平;施恩;乔伟伟;周光兴3.F344大鼠常见非增殖性病变病理学观察 [J], 尹纪业;董延生;袁本利;瞿文生;余寿忠;原野;王和枚;丁日高4.老年SD大鼠自发性肿瘤的病理学观察 [J], 周晓丽;张倩;高峥;钱智勇5.SPF级F344大鼠的脏器重量和自发性病变的研究 [J], 王辉;陆姮磊;盛嬅;宫丽崑;任进因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项

实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项[取材内容]大鼠肺组织、大鼠肝脏组织、大鼠胰腺组织、大鼠胃部组织、大鼠空场回肠组织、大鼠肾组织、门静脉血、淋巴组织、大鼠心脏。
[试剂及药品]戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液[器材]备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐[取材动物]大鼠[取材步骤]1. 取材前夜禁食,自由饮水。
2. 小鼠称重,按照50mg/kg的比例用5ml的注射器配合针头抽取戊巴比妥钠备用。
3. 正左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴,另外三个手指抓住大鼠的颈部,使大鼠头部向向下。
这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部,防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
右手持注射器,从腹部近腿根处刺入后再腹部皮下穿行深入,动作轻柔,缓慢注射。
注射完药物后,缓缓拔出针头,手指按住针口对小鼠腹部轻柔按摩,促进麻醉药物的吸收,掐小鼠尾部检测小鼠麻醉程度。
4.将小鼠四肢固定于解剖台上,暴露小鼠整个胸部和腹部,修剪去腹部毛发,75%酒精消毒。
5.沿腹侧正中线自阴茎上源由下而上剪开腹部皮肤直至剑突,向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织,暴露腹壁浅肌层。
沿白线钝性分离腹壁肌肉,剪开腹膜,暴露腹腔,将肝脏向上翻起,显露肝门。
6.门静脉血采集:将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉,抽取门静脉血2ml,无创血管夹夹闭门静脉止血。
将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜,4℃离心,3000-3500/min,10分钟,吸出上清液,分装,-80摄氏度保存备用。
219415363_新生SD_大鼠原代海马组织中神经干细胞的培养和鉴定

第 49 卷第 3 期2023年 5 月吉林大学学报(医学版)Journal of Jilin University(Medicine Edition)Vol.49 No.3May 2023DOI:10.13481/j.1671‑587X.20230332新生SD大鼠原代海马组织中神经干细胞的培养和鉴定张玲娣1, 赵亮2, 由涌3, 许倩4, 杨振军1(1. 承德医学院人体解剖教研室,河北承德067000;2. 承德医学院药理学教研室,河北承德067000;3. 承德医学院免疫学教研室,河北承德067000;4. 承德医学院基础医学研究所,河北承德067000)[摘要]目的目的:观察原代海马组织中神经干细胞(NSCs)的形态表现和生长规律,为NSCs提取和培养提供依据。
方法方法:提取新生SD大鼠海马组织中NSCs,观察海马组织中NSCs形态表现,流式细胞术检测海马组织中NSCs纯度,免疫荧光法检测NSCs中Nestin和EdU蛋白表达,细胞计数法和CCK-8法检测 NSCs增殖活性。
结果:培养第0天海马组织中NSCs以单细胞形式悬浮于培养基中;培养第2天海马组织中NSCs开始聚集成大小不等和形态不规则的细胞团块,悬浮生长;培养第8天神经球大小不一,呈圆形或椭圆形,边界清晰,无明显突起。
培养第8天NSCs纯度为76.50%~85.40%。
NSCs细胞质中Nestin阳性表达呈绿色,细胞核中EdU阳性表达呈红色,神经球为Nestin与EdU共染细胞构成。
培养5~11 d,NSCs处于对数生长期,细胞增殖活性较高。
结论结论:NSCs增殖能力强,培养至第8天时纯度较高,体外培养5~11 d时细胞增殖活性较高。
[关键词]神经干细胞;海马组织;增殖活性;生长曲线;免疫荧光[中图分类号]Q813.1[文献标志码]ACulture and identification of neural stem cells in hippocampustissue of newborn SD ratsZHANG Lingdi1, ZHAO Liang2, YONG Yong3, XU Qian4, YANG Zhenjun1(1. Department of Human Anatomy, Chengde Medical University, Chengde 067000,China;2. Department of Pharmacology, Chengde Medical University, Chengde 067000,China;3. Department of Immunology,Chengde Medical University, Chengde 067000,China;4. Institute of Basic Medicine, Chengde MedicalUniversity, Chengde 067000,China)ABSTRACT Objective: To observe the morphology and growth pattern of the neural stem cells neural stem cells(NSCs)in hippocampus tissue,and to provide the basis for the extraction and culture of the NSCs.Methods:The NSCs were isolated from hippocampus tissue of the newborn SD rats.The morphology of the NSCs in hippocampus tissue was observed; flow cytometry was used to detect the purities of the NSCs in hippocampus tissue; immunofluorescence method was used to detect the expressions of Nestin and EdU proteins in the NSCs;the proliferative activities of the NSCs were analyzed by cell counting and CCK-8 methods.Results:On the 0 day of culture,the NSCs in hippocampus tissue were suspended in the culture medium with the form of single cells;on the 2nd day of culture,the NSCs in hippocampus tissue suspended in the culture medium and began to gather into the cell clumps with different sizes and irregular shapes;On the 8th day of culture,the neurospheres showed round or oval neurosphere with different sizes, and showed [文章编号] 1671‑587X(2023)03‑0795‑07[收稿日期]2022‑07‑20[基金项目]国家自然科学基金项目(81700310);河北省科技厅重点研发计划项目(22377746D)[作者简介]张玲娣(1995-),女,山东省潍坊市人,在读硕士研究生,主要从事神经损伤与修复方面的研究。
04.陆姮磊--大鼠脑组织规范性取材

rostral to the midpoint of the cerebellum (level G), 小脑绒球
through the caudal portion of the cerebellum (level H).
CP
SP
SN
HY
At the level of optic chiasm including the basal ganglia, septum, cortex, anterior hypothalamus( including the cerebrum at the frontal cortical level )
Reference: Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice.
Section 1, cerebrum
Ac: anterior commissure (前联合) Cc: cerebral cortex 大脑皮质 Cca: corpus callosum(胼胝体) O: optic chiasm(视神经交叉) Sr: striatum(纹状体) CP – Caudate Putamen(尾状核) (basal ganglia) SN – Septal Nuclei(隔核) (limbic system) SP- septum隔膜 HY- hypothalamus下丘脑
For each level, anatomical structures of interest are shown: aca =anterior commissure; Acb =accumbens nucleus; Amy =amygdala; Arc =arcuate nuclei; Au =auditory cortex; B =basal nucleus; CA1, CA2, CA3 =cornu ammonis 1, 2 and 3; cc =corpus callosum; Cer =cerebellum; Cg =cingulate cortex; cg =cingulum; cic =inferior colliculi commissure; cp =cerebral peduncles; Cpu =caudate putamen; csc =superior colliculi commissure; DG=dentate gyrus; DR =dorsal raphe nucleus; Ect =ectorhinal cortex; Ent =entorhinal cortex; Fl =flocculus; fmi =forceps minor of the corpus callosum; f =fornix; fi =fimbria; GP =globus pallidus; Hb =habenular nuclei; Hyp =hypothalamus; ic =internal capsule; IC =inferior colliculi; ICj =Calleja islands; icp =inferior cerebral peduncles; Lc =limbic cortex;
大鼠灌注取脑培训资料

大鼠灌注取脑大鼠灌注取脑用途:1.用于常规HE染色,免疫组化分析。
2.冰冻切片可以不做脑组织固定。
3.不可用于western blot和PCR。
4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时,不作灌注固定,而是在取出脑组织后作固定,将大大影响效果。
原理:心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。
多聚甲醛使组织蛋白发生交联,以保持蛋白的原位和表面结构不变,从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
必要性:1.脑组织较软,且细胞成分不易保留,脑组织是较易软化的组织之一,血供也较为丰富,所以最好是在取脑组织前用4%多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后,取脑操作时,可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在,HE染色后,可去除红细胞背景影响。
大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP):流程:1)麻醉 2)开胸 3)心脏左心室穿针,剪开右心耳 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.具体过程:大鼠经深度麻醉后,固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL,直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。
Tips:1.多聚甲醛的配置:一般方法为:4%多聚甲醛PBS缓冲液配法:称取40g PFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器(烧杯或烧瓶)中,持续加热磁力搅拌至60~65℃,使成乳白色悬液。
用1.0mol/L的NaOH值至7.4,使呈清亮状(滴加),再加入约500ml PBS,充分混匀(在冰浴或冷水浴中),可再检测一下pH,过滤后定容至1000ml,室温或4℃保存备用。
简便方法:先配好PBS,称好相应的多聚甲醛,37℃水浴或温箱密封放置2天,就能全溶。
若是很急,55℃水浴一天,期间不时震荡。
200只大鼠内眦取血的操作体会

EDTA 钾抗凝,目前,生化测定采用肝素钠抗凝。
熟练掌握不同采血管的功能和要求,就会杜绝1.3中第二次采血和1.4中第一次采血出现的错误。
1.3中第二次采血由于使用了EDTA 钾抗凝管,血中的Ca 2+、M g 2+被EDTA 钾络合,测出的Ca 2+、M g 2+明显降低。
M g 2+又是ALT 的必须辅助因子,ALT 的活性受到抑制,所以结果较第一次明显降低。
1.4中第一次采血出现的结果是因为抗凝剂与血的比例高造成。
有文献证明,随着血液和抗凝剂比例的逐步下降,首先表现为TT 检测时间缩短[2]。
笔者曾做过10例30个凝血试验的观察(每例血各与3.2%枸橼酸纳5∶1、7.5∶1、9∶1比例抗凝),发现随着血液与抗凝剂比例的逐步下降(由5∶1※7.5∶1※9∶1),PT 和TT 时间缩短,Fib 值增高。
因此,护士要按要求采集抗凝血,避免由于抗凝剂与血的比例不合格带来的错误结果。
2.3 注意事项 (1)采血要准确,避免溶血,因为溶血可使心肌酶学、TT 、K +、胆红素等项目发生改变或测不出;(2)急诊分析时,一定要用抗凝管采血,因为血样分离的快才能早出结果,注意血与抗凝剂的比例并混匀;(3)标本要及时送检,避免标本放置时间过长造成血糖、CO 2、Na +、K +等的改变。
护理工作的规范采血关系到检验结果的准确可靠,二者要互相配合才能使医院的服务质量不断提高。
【参考文献】[1] 徐涛,王荣廷.临床检验基础[M ].北京:人民卫生出版社,1986,150.[2] 陈俊,王利建,吴健媛,等.抗凝比例对凝血检测项目T T的影响[J ].江西医学检验,2003,21(1):59.(收稿日期:2005-09-20)(护理学栏目编辑:张玉亭)技术方法200只大鼠内眦取血的操作体会周晓春,陈 龙,刘绍晨(承德医学院,河北承德 067000)【关键词】大鼠;内眦;采血【中图分类号】R -332 【文献标识码】B 【文章编号】1004-6879(2005)04-0328-02 大鼠是科研常用的实验动物,在实验中要采集大量的血液标本比较困难[1]。
基于嗅球摘除模型大鼠柴当薄组方挥发油抗抑郁作用及Nrf2

网络出版时间:2023-07-2510:37:43 网络出版地址:https://link.cnki.net/urlid/34.1086.R.20230724.1343.032基于嗅球摘除模型大鼠柴当薄组方挥发油抗抑郁作用及Nrf2/HO 1机制胡靖文1,谢志强1,曾九僧1,秦甜甜1,谢红潇1,刘 蓉1,曾 南1,2(1.成都中医药大学药学院,2.西南特色中药资源国家重点实验室,四川成都 611137)收稿日期:2023-02-10,修回日期:2023-05-20基金项目:国家自然科学基金资助项目(No81503277,82074094);四川省科技厅应用基础研究项目(No2020YJ0388)作者简介:胡靖文(1998-),男,硕士生,研究方向:中药精神药理学,E-mail:893216006@qq.com;曾 南(1969-),男,教授,博士生导师,研究方向:中药药理与毒理学,通信作者,E-mail,zengnan966@126.comdoi:10.12360/CPB202211031文献标志码:A文章编号:1001-1978(2023)08-1507-08中国图书分类号:R 332;R289 5;R322 81;R749 41;R749 42摘要:目的 采用嗅球摘除(olfactorybulbectomy,OB)抑郁样模型大鼠探究逍遥散精简方柴当薄(ChaiHu,DangGui,BoHe,CDB)组方挥发油部位的抗抑郁作用及其干预Nrf2/HO 1通路的作用机制。
方法 GC MS分析CDB挥发油部位主要成分。
大鼠实施OB造模后14d,分为模型组、盐酸氟西汀(10mg·kg-1)、CDB水煎液(15 33g生药·kg-1)、CDB挥发油部位高、低剂量(46、23mg·kg-1)、假手术6个组。
大鼠连续灌胃28d,d14、28进行糖水偏好与旷场试验,d28进行飞溅试验。
肝细胞生长因子对大鼠大脑中动脉梗塞后凋亡变化的实验分析

网络出版时间:2021-4-2310:09 网络出版地址:https://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20210422.1104.012.html肝细胞生长因子对大鼠大脑中动脉梗塞后凋亡变化的实验分析许璐璐1,汤 宏2,高 宁2,沈 倩1,陈 杰1,吴海波1摘要:目的 探讨大鼠大脑中动脉栓塞(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)模型中肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfac tor,HGF)对凋亡影响的作用。
方法 62只SD大鼠随机分为Sham组、MCAO组及HGF组,MCAO组及HGF组均采取线栓法建立MCAO模型。
各组大鼠分别采用行为学评分、TTC染色、免疫荧光、TUNEL染色、Westernblot等方法检测大鼠行为学功能、梗塞面积及凋亡病理等变化。
结果 大鼠MCAO模型建立后HGF的受体c Met表达升高;免疫荧光共染显示,c Met在大鼠脑组织神经元中表达,HGF给药组梗塞面积较MCAO组减小且神经功能评分升高,TUNEL凋亡细胞在HGF给药组明显少于MCAO组。
结论 HGF在大鼠脑梗塞后能经过c Met受体产生抗凋亡作用,其可能是治疗脑梗塞机制之一。
关键词:大脑中动脉栓塞;肝细胞生长因子;凋亡;大鼠中图分类号:R743;R 33 文献标志码:A 文章编号:1001-7399(2021)04-0434-05doi:10.13315/j.cnki.cjcep.2021.04.012接受日期:2020-12-01基金项目:中央高校基本科研业务费专项资金(WK911000004)作者单位:1中国科学技术大学附属第一医院(安徽省立医院)病理科,合肥 2300362中南大学湘雅医学院附属海口医院神经外科,海口 570000作者简介:许璐璐,女,技师。
E mail:1649291610@qq.com吴海波,男,博士,副主任医师,通讯作者。
《藁本内酯对缺糖缺氧诱导大鼠海马神经元凋亡的保护作用》

《藁本内酯对缺糖缺氧诱导大鼠海马神经元凋亡的保护作用》一、引言随着神经科学的发展,人们逐渐认识到脑部疾病中神经元凋亡的重要性。
其中,缺糖缺氧(OGD)诱导的神经元凋亡是导致多种神经系统疾病的关键因素之一。
藁本内酯作为一种具有广泛生物活性的化合物,近年来在神经保护方面的研究备受关注。
本文旨在探讨藁本内酯对缺糖缺氧诱导大鼠海马神经元凋亡的保护作用。
二、材料与方法1. 材料实验采用SD大鼠海马神经元作为研究对象,藁本内酯、相关试剂及实验仪器均购自正规渠道。
2. 方法(1)细胞培养:将SD大鼠海马神经元进行原代培养,并分别进行正常组、缺糖缺氧组及藁本内酯处理组的培养。
(2)缺糖缺氧处理:采用无糖DMEM培养基及缺氧环境对神经元进行缺糖缺氧处理。
(3)藁本内酯处理:在缺糖缺氧前、中、后不同时间点给予藁本内酯处理。
(4)指标检测:采用MTT法、流式细胞术等方法检测细胞活性、凋亡率等相关指标。
三、实验结果1. 藁本内酯对细胞活性的影响实验结果显示,藁本内酯处理组在缺糖缺氧环境下的细胞活性明显高于缺糖缺氧组,说明藁本内酯能够显著提高大鼠海马神经元在缺糖缺氧环境下的存活率。
2. 藁本内酯对神经元凋亡的影响流式细胞术检测结果显示,藁本内酯处理组的大鼠海马神经元凋亡率明显低于缺糖缺氧组,表明藁本内酯能够显著抑制缺糖缺氧诱导的神经元凋亡。
3. 藁本内酯的作用机制通过相关实验,我们发现藁本内酯能够上调抗凋亡蛋白的表达,下调促凋亡蛋白的表达,从而发挥其神经保护作用。
此外,藁本内酯还能够减轻缺糖缺氧导致的氧化应激反应及炎症反应。
四、讨论本研究表明,藁本内酯对缺糖缺氧诱导的大鼠海马神经元凋亡具有显著的保护作用。
其作用机制可能与上调抗凋亡蛋白、下调促凋亡蛋白以及减轻氧化应激和炎症反应有关。
这一发现为进一步研究藁本内酯在神经系统疾病中的应用提供了重要的理论依据。
同时,我们也应进一步探讨藁本内酯的最佳使用时机及剂量,以期为临床治疗提供更多参考。
药物安全性评价研究中的大鼠骨髓涂片的评价

药物安全性评价研究中的大鼠骨髓涂片的评价
王辉;盛嬅;陆姮磊;任进
【期刊名称】《毒理学杂志》
【年(卷),期】2007(21)4
【摘要】骨髓涂片评价是对造血系统评价的重要方法。
大鼠为常用的研究用实验动物,而且常常进行骨髓涂片评价。
现对大鼠骨髓涂片的评价进行综述,旨在为药物的安全性评价的骨髓涂片评价提供参考。
【总页数】2页(P294-295)
【关键词】骨髓;造血细胞;大鼠
【作者】王辉;盛嬅;陆姮磊;任进
【作者单位】中国科学院上海药物研究所国家重点实验室药物安全性评价研究中心【正文语种】中文
【中图分类】R994
【相关文献】
1.去甲基化药物治疗中高危骨髓增生异常综合征的疗效分析和安全性评价 [J], 费飞;王文生;王月
2.骨髓涂片细胞形态学误诊分析及对策--2000~2005年骨髓细胞形态学室间质量评价分析 [J], 乐美萍;张伟民;单志民;夏晓华
3.骨髓涂片与骨髓活检的临床应用价值评价 [J], 程洪波;张胜敏;张水生;刘婷婷;罗敏智;符环
4.重组人粒细胞集落刺激因子动员急性心肌缺血大鼠自体骨髓干细胞归巢缺血心肌
的短期安全性评价 [J], 杨洋;吴迪;王颜;刘全
5.骨髓涂片评价在药物安全性评价中的操作流程 [J], 郭景玥;王晶晶;裴天仙;蔡国栋
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大白鼠听皮质脑组织移植神经元的体视学研究

大白鼠听皮质脑组织移植神经元的体视学研究
朱新安;王怀星
【期刊名称】《新疆医学院学报》
【年(卷),期】1990(013)002
【摘要】选用体积密度(Vv)、表面积密度(Sv)和数密度(Nv),对大白鼠听皮员移植脑组织内神经元进行体视学研究。
结果表明:移植组织内的三项指标
(Vv:0.0898±0.0032,Sv:0.0269±0.0007,Nv:73±2)低于正常脑听皮质
(Vv:0.1202±0.0031,Sv:0.0410±0.0012,Nv:92±3),P<0.01。
【总页数】3页(P76-78)
【作者】朱新安;王怀星
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R329.481
【相关文献】
1.大白鼠大脑新皮质组织移植形态学及神经纤维联系的研究 [J], 黄剑;吴克兰;彭杰青
2.大鼠听皮质(41区)胼胝体神经元轴突在胼胝体内的定位——HRP法研究 [J], 张培建;苏克俭
3.脑组织移植物神经元形态学变化的研究 [J], 王怀星;克力
4.大白鼠听皮质脑组织移植初步研究:移植组织的细胞构筑和纤维联系 [J], 朱新安;王怀星
5.大白鼠胎脑组织移植治疗脑皮层损伤性瘫痪的实验研究 [J], 曹家义;吴佐泉;余泽;张积志;马廉亭;李玫珠;姜蕴;戚沛霖
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重要的神经系统功能结构
Regions that perform critical neurological functions should be sampled routinely.
Motor sensory
Cognition
Homeostasis
common neurotoxicity target sites
For each level, anatomical structures of interest are shown: aca =anterior commissure; Acb =accumbens nucleus; Amy =amygdala; Arc =arcuate nuclei; Au =auditory cortex; B =basal nucleus; CA1, CA2, CA3 =cornu ammonis 1, 2 and 3; cc =corpus callosum; Cer =cerebellum; Cg =cingulate cortex; cg =cingulum; cic =inferior colliculi commissure; cp =cerebral peduncles; Cpu =caudate putamen; csc =superior colliculi commissure; DG=dentate gyrus; DR =dorsal raphe nucleus; Ect =ectorhinal cortex; Ent =entorhinal cortex; Fl =flocculus; fmi =forceps minor of the corpus callosum; f =fornix; fi =fimbria; GP =globus pallidus; Hb =habenular nuclei; Hyp =hypothalamus; ic =internal capsule; IC =inferior colliculi; ICj =Calleja islands; icp =inferior cerebral peduncles; Lc =limbic cortex;
CP
SP
SN
HY
At the level of optic chiasm including the basal ganglia, septum, cortex, anterior hypothalamus( including the cerebrum at the frontal cortical level )
through the midbrain (3rd cranial nerve level; level F) 中脑
rostral to the midpoint of the cerebellum (level G), 小脑绒球
through the caudal portion of the cerebellum (level H).
(typically rostral forebrain [cerebral cortex and basal nuclei],
Section 2, cerebrum
Cc: cerebral cortex Cca: corpus callosum H: hypothalamus Hc: hippocampus T: thalamus ChP – Choroid Plexus RS – Retrosplenial Cortex (压后皮质)
through the frontal pole (level B)额极
at the optic chiasm (level C) 视神经交叉
level rostral to the infundibulum (level D)漏斗管
level rostral to the caudal margin 乳头体尾部 of the mamillary body (level E),
大脑 Bregma 前囟点 大脑小脑分界处(前缘骨缝)
松果体
解剖时,最容易损伤三处: 嗅球、垂体和小脑绒球
脑的解剖结构
•嗅球 •前额皮质 •尾状核 •穹隆-胼胝体后端向下弯纤维束 •胼胝体-两大脑半球之间弧形白 色神经纤维带 •海马 •丘脑上部 •丘脑下部 •横窦 •小脑
•嗅球脚 •前联合(连接同一半球不同部位) •梨状叶 •视神经交叉 •乳状体 •脚间窝 •副海马皮质区 •锥体
Brain, lateral view Brain, ventral view
1) Cerebrum at the optic chiasm(视交叉神经处大脑) 2) Cerebrum at the base of the posterior hypothalamus (下丘脑后部处
的大脑)
3) Mid-cerebellum and medulla oblongata(中脑和延髓) Optional: 4) Pons at the middle of its protrusion(脑桥) (recommended for special investigations of the pons.) 5)A sample of the cranial cervical cord can be removed together with the brain (location 5). Alternatively, it can be taken together
Reference: Revised guides for organ sampling and trimming in ebrum
Ac: anterior commissure (前联合) Cc: cerebral cortex 大脑皮质 Cca: corpus callosum(胼胝体) O: optic chiasm(视神经交叉) Sr: striatum(纹状体) CP – Caudate Putamen(尾状核) (basal ganglia) SN – Septal Nuclei(隔核) (limbic system) SP- septum隔膜 HY- hypothalamus下丘脑
下丘脑前部)
2. the second section at the level of hippocampus containing the cortex and brain stem at the transition of diencephalon to mesencephalon(间脑到中脑的过渡) 3. the third section containing the cerebellum and brain stem (medulla oblongata)(延髓).
Brain matirx
To achieve precise vertical cuts, brain matrix moulds can be used. Different sizes are available for different laboratory species. For rodents, the brain can be sliced at 1 mm intervals.
the mid-infundibular level)
Caudal forebrain [cerebral cortex and hippocampus with either diencephalon or rostral midbrain]
Section 3:cerebellum and medulla oblongata
nigra黑物质)
Nerve神经 olfactory bulb (rodents only)-嗅球 Pons脑桥 spinal cord-脊髓 Thalamus-丘脑
固定和制片
• 解剖时剥离头盖骨,固定于10%中性福尔马林溶液,24小时后换液 • 继续固定2-3天后进行取材。 • 取材后固定2天,进行脱水处理。 • 常规脱水60%乙醇溶液开始。 • HE染色 • 封片
RS
ChP
the second section at the level of hippocampus containing the cortex and brain stem at the transition of diencephalon to mesencephalon(thalamus at
with the cranial vertebral column to avoid artifacts .
1. the first section at the level of optic chiasm including the basal ganglia, septum, cortex, anterior hypothalamus(包括基底核、隔膜、皮质和
Certain structures should be sampled regularly: Caudate putamen纹状体 Cerebellum小脑
Cerebral cortex(frontal额区, parietal顶区, cingulate-扣带回, temporal颞区, occipital枕区, retrospenial压后皮质, piriform梨状叶, entorhinal内皮层) Choroid plexus脉络丛 Eye (with optic nerve)眼含视神经 Hippocampus海马 (Cornu Ammonis 海马角and Dentate gyrus齿状回) Hypothalamus下丘脑 medulla oblongata延髓(Trigeminal三叉神经, Vagal & Facial nuclei迷走和面部神经, Area Postrema后极区) Midbrain中脑(Rostral and Caudal colliculus前丘和后丘, Medial Geniculate nuclei内侧膝状体核, Red nucleus红核, Raphe nucleus中缝核, Substantia