实验七氨基酸的分离鉴定精修订
氨基酸的鉴定(纸层析法)
氨基酸的鉴定(纸层析法)1、掌握纸层析法的基本原理2、通过对氨基酸的分离，掌握纸层析的操作方法并学会分析未知样品中的氨基酸组分。
实验原理：1、层析法又称色谱法(Chromatography)，是一种物理的分离方法。
利用混合物中各组分物理化学性质的差异(如吸附办、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等)，使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中，并使各组分以不同速度移动，从而得到有效的分离。
操作方式: 纸层析、薄层层析、柱层析等。
分离机理: 分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等。
2、纸层析法是用滤纸作为情性支持物的分配层析法，展层溶剂由有机溶剂和水组成。
滤纸纤维上的羟基具有亲水性，在滤纸上水就被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相。
当有机溶剂(流动相)沿纸流动经过层析点时，层析点上溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。
由于溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
物质被分离后在纸层析图谱上的移动速率用Rf值来表示：3、在一定条件下，物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
4、本实验利用纸层析法分离氨基酸，利用茚三酮反应将氨基酸层析点显色来鉴定氨基酸的种类。
试剂：1、酸性展层剂正丁醇：88%甲酸:水=15:3:2<V/V>2、显色储备液：0、4mol/L茚三酮-异丙醇:甲酸:水=20:1:5<V/V>3、标准氨基酸溶液(6mg/ml,苯丙氨酸Phe、甘氨酸Gly、脯氨酸Pro、组氨酸His)4、未知样品液：上述4种氨基酸中的一种或几种混合液(每组任选一个样品)实验器材：1、滤纸2、烧杯3、剪刀4、毛细管5、层析缸6、微量注射器7、电吹风8、保鲜膜操作方法：1、点样1、量取30ml层析溶剂、1ml显色贮备液于层析缸中，混匀密闭，静置。
（展层缸洗净后应除去多余的水，否则会影响展层溶剂的比例而影响展层）2、戴好手套，在桌上铺好一层保鲜膜。
氨基酸的分离鉴定 纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究生物化学和生物学具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定是了解其性质和结构的关键步骤之一。
本实验旨在通过纸层析法对混合氨基酸溶液进行分离和鉴定，以探究纸层析法在氨基酸分析中的应用。
实验步骤：1. 实验前准备：准备好混合氨基酸溶液、纸层析纸、色谱槽和色谱溶液。
2. 制备纸层析纸：将纸层析纸剪成适当大小的长方形，用铅笔在距离底部1.5cm处画一条水平线，再在该线上距离左边1cm处画一个小点。
3. 装置纸层析槽：将纸层析纸的底端浸入色谱槽中，确保纸层析纸上方的溶液不超过纸层析纸的底端。
4. 样品加载：用微量吸管将混合氨基酸溶液滴在纸层析纸上的小点上，尽量避免溶液滴到纸层析纸以下的溶液中。
5. 开始分离：将色谱槽盖好，待溶液上升至纸层析纸的顶端时，取出纸层析纸，迅速标记各个斑点的位置。
6. 斑点分析：将纸层析纸放入紫外灯下观察，记录各个斑点的颜色和位置。
结果与讨论：通过纸层析法，我们成功地将混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
在紫外灯下观察，我们可以清晰地看到在纸层析纸上出现了多个斑点。
根据斑点的颜色和位置，我们可以初步判断其中的化合物。
在本次实验中，我们使用的混合氨基酸溶液包含了苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸三种氨基酸。
根据实验结果，我们可以看到在纸层析纸上出现了三个主要的斑点。
根据颜色和位置的初步判断，我们可以推测第一个斑点为苏氨酸，第二个斑点为甘氨酸，第三个斑点为丙氨酸。
然而，仅凭颜色和位置的初步判断还不足以确定化合物的身份。
为了进一步确认各个斑点的化合物，我们可以利用已知标准物质进行对照。
通过比较已知标准物质的斑点与实验样品的斑点，我们可以准确地鉴定各个斑点所代表的氨基酸。
结论：通过纸层析法，我们成功地对混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
根据初步判断，我们可以推测出混合溶液中的苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸的存在。
实验七氨基酸的分离鉴定
实验七氨基酸的分离鉴定(总6页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除实验七氨基酸的分离鉴定——纸层析法一、目的通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，它是利用不同的氨基酸在展层溶剂中的分配系数不同而得以分离的一种方法。
惰性支持物是新华一号滤纸，其上含有很多的羟基，与水有较强的亲和力因此把它看成是含有静止水相的惰性支持物。
水相因此称为静止相（固定相），有机溶剂称为流动相。
展层溶剂由两个互不相溶的有机溶剂和水组成，它们互相混合时便分成两相：一相是以水饱和了的有机相，另一相是以有机溶剂饱和了的水相。
分配系数(α)＝溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
当用滤纸进行分配层析时，流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使氨基酸在两相之间不断分配而得以分离。
不同的氨基酸在一定的条件下，有其一定的Rf值，故可根据Rf值定性鉴定氨基酸，但通常用已知的标准氨基酸层析作对照，本实验就是如此。
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
层析溶剂由有机溶剂和水组成物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移值）来表示的：Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、材料与方法（1）、材料：层析缸；毛细管；喷雾器；培养皿；层析滤纸；正丁醇；冰醋酸；分液漏斗；烧杯；培养皿；赖氨酸；脯氨酸；氨酸；苯丙氨酸；亮氨酸；茚三酮（2）操作步骤1. 配置层析液置于密闭的层析缸中。
2．准备滤纸：取层析滤纸一张。
在纸的一端距边缘2cm处用铅笔划一直线，在直线上每间隔2cm做一记号，标出5个原点。
3．点样：用毛细管将各氨基酸样品点在5个原点上，用量10～20μl，每点在纸上扩散的直径，最大不超过3 mm，边点样边用电吹风吹干，越小越好。
氨基酸的分离鉴定 纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定则是研究蛋白质的前提和基础。
本次实验使用纸层析法对氨基酸进行了分离鉴定。
首先，我们需要了解一下纸层析法的原理。
纸层析法是一种基于分子大小和亲水性的分离技术，常用于生化分析中。
其原理是通过纸张上固定的固定相（通常是硅胶或纤维素）与待分离物质之间的相互作用来实现分离。
待分离物质在移动相（溶液）的推动下，根据其与固定相的亲水性和大小的差异，以不同的速度在纸上移动，从而实现分离。
在实验中，我们使用了两种氨基酸溶液进行分离鉴定。
首先，我们需要准备好实验所需的材料和试剂，包括纸层析纸、氨基酸溶液、显色剂等。
然后，将纸层析纸剪成适当大小的条状，用铅笔在纸上标记出起点线和终点线。
接下来，我们将纸层析纸的一端浸入移动相（溶液）中，使其吸满溶液后取出，待溶液在纸上上升到起点线时立即停止。
然后，将氨基酸溶液滴在起点线上，待其渗透进纸层析纸后将纸张平放在容器中，盖上盖子，保持相对湿润的环境。
随着时间的推移，溶液将在纸上上升，并逐渐分离成不同的组分。
不同的氨基酸在纸上的迁移速度受到其亲水性和分子大小的影响。
亲水性较强的氨基酸会更容易被纸上的固定相吸附，从而迁移速度较慢，而亲水性较弱的氨基酸则会迁移得更快。
当溶液上升到终点线时，我们将纸张取出，用显色剂处理。
显色剂可以与氨基酸发生反应，产生可见的色带。
通过比较色带的位置和颜色，我们可以确定不同氨基酸的迁移速度和存在量。
实验结果显示，我们成功地将两种氨基酸分离开来，并且确定了它们的相对迁移速度。
这为进一步的氨基酸分析和蛋白质研究提供了基础数据。
同时，我们还发现，在纸层析过程中，一些氨基酸可能会发生相互作用，导致它们的迁移速度发生变化。
这提示我们在进行氨基酸分析时需要考虑到可能的相互作用因素。
总结起来，纸层析法是一种简单、经济且有效的氨基酸分离鉴定方法。
通过该方法，我们可以快速地分离出不同的氨基酸，并确定它们的相对迁移速度。
氨基酸工艺学PPT课件(共10单元)07 氨基酸分离提取和精制
4、凝聚
➢ 氨基酸发酵液中含有大量的胶体物质，该类物质可使发酵液黏 度增加，使发酵液过滤速率显著降低。
➢ 凝聚是指在电解质的作用下，通过降低胶体系统的扩散双电层 排斥电位，使胶体系统的分散状态发生破坏，从而使胶体粒子 聚集的过程。
➢ 氨基酸发酵液中的微生物细胞和碎片、菌体和蛋白质等胶体粒 子均存在扩散双电层的结构，该扩散双电层结构和所带的相同 电荷可使胶体粒子保持分散状态。
3、错流过滤
❖ 螺旋卷式膜组件 ➢ 螺旋卷式膜组件是一类将膜、多孔膜支撑材料和悬浮液通道网
等组合旋转，一并装入具有一定承压能力的外壳管内而制成的 膜组件。 ➢ 螺旋卷式膜组件的结构：
三、离子交换工艺
❖ 离子交换的基本概念 ❖ 离子交换的基本原理 ❖ 离子交换树脂对氨基酸的吸附规律 ❖ 离子交换的操作过程
3、沉淀
➢ 除含有微生物细胞和碎片、蛋白质和某些胶体物质外，氨基酸 发酵液中还含有一定量的无机离子，如高价的金属离子Ca2+、 Mg2+和Fe3+ 。
➢ 无机离子不仅会影响氨基酸产品的质量，还会显著降低离子交 换树脂吸附氨基酸的吸附量和吸附效率。
➢ 常采用沉淀剂：草酸或草酸钠（ Ca2+ 、 Mg2+ ）、磷酸盐 （ Mg2+ ）、黄血盐（ Fe3+ ）、三聚磷酸钠（ Ca2+、Mg2+和 Fe3+ ）。
2、离子交换的基本原理
➢ 氨基酸是两性电解质，在酸性发酵液中，氨基酸是含有-NH3+基 团的阳离子，能被阳离子交换树脂交换吸附；在碱性发酵液中， 氨基酸是含有-COO-基团的阴离子，能被阴离子交换树脂交换 吸附；在pH值为氨基酸等电点（pI）的发酵液中，氨基酸不电 离，此时氨基酸的兼性离子静电荷为零，不能被阳离子和阴离 子交换树脂交换吸附。
氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)
氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告一、实验目的通过纸层析法将混合氨基酸分离并鉴定其种类及含量。
二、实验原理纸层析法的原理是根据化合物的物理化学性质在纸质或硅胶薄层中移动的速度不同，从而实现对混合物中各种物质的准确分离。
对于氨基酸而言，其分子结构均包含有羧基和氨基，因此都是具有弱酸和弱碱性的。
通过没食子酸和氯化钠的混合缓冲液，可使氨基酸在纸层析板上逐渐向上移动，从而实现了混合氨基酸的分离。
三、实验步骤1. 准备滤纸、混合氨基酸标准溶液、混合缓冲液、酸性洗涤液、碱性洗涤液及定量分装棒。
2. 在滤纸的底端画一个以棕色标识的线，表示样品的注入位置。
3. 用定量分装棒把混合溶液从注入位置滴入滤纸中，约需滴入 5 μl。
4. 将悬浊液放在平台上，加入具有吸附性但不溶于缓冲液的薄层纸片，等待它变成透明状态。
5. 将滤纸放入盒中，使其完全覆盖盒底，并加入混合缓冲液。
6. 等待溶液上升至顶端时立即取出滤纸，并在溶液升至预定高度后标注液位高度。
7. 筛选并选择相应的染色剂将其喷在纸层析板上，以便于观察分离效果。
四、实验分析通过对实验纸层析图的分析，可以确定混合溶液中所含有的氨基酸种类及各种氨基酸的比例。
在该纸层析图上，靠近底部的区域标示着杂质的位置，应当忽略不计。
通过纸层析图，我们得到了以下氨基酸的分离和鉴定结果：1. Alanine（6μg）2. Leucine（4μg）3. Isoleucine（3μg）4. Phenylalanine（1μg）5. Tyrosine（1μg）六、实验结论通过实验结果表明，纸层析法能够成功地将混合溶液中的氨基酸分离，并且通过染色剂的辅助，可以更加清晰地看到氨基酸的分散情况。
此外，通过对实验结果的分析，我们可以得出混合溶液中所含有的各种氨基酸的种类及含量，为进一步的实验提供了帮助和指导。
实验七 氨基酸的分离鉴定
实验七氨基酸的分离鉴定——纸层析法一、目的通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，它是利用不同的氨基酸在展层溶剂中的分配系数不同而得以分离的一种方法。
惰性支持物是新华一号滤纸，其上含有很多的羟基，与水有较强的亲和力因此把它看成是含有静止水相的惰性支持物。
水相因此称为静止相（固定相），有机溶剂称为流动相。
展层溶剂由两个互不相溶的有机溶剂和水组成，它们互相混合时便分成两相：一相是以水饱和了的有机相，另一相是以有机溶剂饱和了的水相。
分配系数(α)＝溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
当用滤纸进行分配层析时，流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使氨基酸在两相之间不断分配而得以分离。
不同的氨基酸在一定的条件下，有其一定的Rf值，故可根据Rf值定性鉴定氨基酸，但通常用已知的标准氨基酸层析作对照，本实验就是如此。
●纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
●层析溶剂由有机溶剂和水组成●物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移值）来表示的：Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、材料与方法（1）、材料：层析缸；毛细管；喷雾器；培养皿；层析滤纸；正丁醇；冰醋酸；分液漏斗；烧杯；培养皿；赖氨酸；脯氨酸；氨酸；苯丙氨酸；亮氨酸；茚三酮（2）操作步骤1. 配置层析液置于密闭的层析缸中。
2．准备滤纸：取层析滤纸一张。
在纸的一端距边缘2cm处用铅笔划一直线，在直线上每间隔2cm做一记号，标出5个原点。
3．点样：用毛细管将各氨基酸样品点在5个原点上，用量10～20μl，每点在纸上扩散的直径，最大不超过3 mm，边点样边用电吹风吹干，越小越好。
干后再点一次。
4．扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告嘿，大家好！今天咱们聊聊一个特别有趣的实验，那就是氨基酸的分离鉴定纸层析法。
听起来高大上吧？别急，咱们一步一步来，轻松愉快地聊聊这玩意儿。
什么是氨基酸呢？简单来说，氨基酸就像是构成蛋白质的小积木，是咱们身体里不可或缺的营养成分。
它们在咱们的饮食中扮演着超级重要的角色，没了它们，咱们可真是没法“搭建”身体啦。
那这个实验就是要从一堆混合的氨基酸中，把它们一个个分开来，看看每种氨基酸都长啥样。
这就好比一群朋友在聚会上，咱们要找出每一个人的名字和特点。
纸层析法，乍一听是不是觉得有点复杂？它就像一场化学界的“寻宝游戏”。
我们准备一些特殊的纸，涂上一层薄薄的吸附剂，然后把混合好的氨基酸样品放在纸上，接着让溶剂在纸上慢慢爬。
这就像在纸上画一幅画，溶剂就像水彩笔，慢慢把氨基酸分开。
哎呀，那个过程可是精彩极了，等溶剂跑到纸的顶端，咱们就能看到不同的颜色带，像极了彩虹，五颜六色的，真让人眼前一亮。
在实验开始之前，咱们得先准备一些材料。
准备好氨基酸混合物、溶剂、吸附剂，当然还有那张神奇的层析纸。
哎呀，别忘了安全第一哦，实验室里的化学品可得小心翼翼。
准备好一切后，咱们就可以开始“探险”了。
把样品点在纸上，别点得太多，得掌握好量，太多可就闹笑话。
点好后，咱们把纸条放进装有溶剂的容器里，让它们开始亲密接触。
此时，你就得耐心等待，静静看着溶剂爬升。
这个过程有点像看电影，心里总有些小期待，究竟哪种氨基酸会最先出来，哪个又会拖拖拉拉。
等到溶剂爬到纸的顶端，咱们小心翼翼地把纸拿出来，哇，简直像一幅美丽的艺术作品！不同的氨基酸形成了不同的斑点，有些淡淡的，有些鲜艳的，就像小精灵在纸上跳舞。
咱们得计算一下每种氨基酸的Rf值，这个值可以帮助咱们确定它们的身份。
Rf值计算起来其实也不复杂，记住，Rf值就是迁移距离除以溶剂前沿的距离。
简单吧？计算的时候得集中精神，别让自己的小脑袋跑偏了。
在整个过程中，最有趣的莫过于跟同学们讨论结果了。
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告一、实验目的1、掌握纸层析法分离和鉴定氨基酸的基本原理和操作方法。
2、学习如何根据氨基酸在层析纸上的迁移率（Rf 值）来鉴定氨基酸。
二、实验原理纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
滤纸纤维上的羟基具有亲水性，能吸附一层水作为固定相，而有机溶剂作为流动相。
当有机相沿滤纸经过样品点时，样品点中的溶质在水和有机相之间进行分配。
由于不同的氨基酸在两相中的分配系数不同，导致它们在滤纸上的迁移率不同，从而实现分离和鉴定。
Rf 值（比移值）是氨基酸在层析中的特征值，计算公式为：Rf ＝溶质移动的距离／溶剂移动的距离。
三、实验材料与仪器1、实验材料标准氨基酸溶液：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸。
混合氨基酸溶液。
展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝ 4:1:5（体积比）。
显色剂：025%茚三酮溶液。
2、实验仪器层析缸。
毛细管。
喷雾器。
烘箱。
直尺。
四、实验步骤1、准备滤纸选用一张大小合适的滤纸，在距底边 2cm 处用铅笔轻轻画一条横线，作为起始线。
2、点样用毛细管分别吸取标准氨基酸溶液和混合氨基酸溶液，在起始线上轻轻点样，每个点的直径不超过 2mm，点样后自然风干。
3、层析将滤纸垂直放入装有展开剂的层析缸中，滤纸下端浸入展开剂约1cm，注意滤纸不要与缸壁接触，盖上盖子，进行层析。
当展开剂前沿上升至距滤纸顶端约 1cm 时，取出滤纸，用铅笔标记展开剂前沿的位置，自然风干。
4、显色用喷雾器将显色剂均匀地喷在滤纸上，放入烘箱中，在 80℃左右烘 5 10 分钟，直至斑点显色清晰。
五、实验结果与分析1、测量并计算 Rf 值用直尺分别测量标准氨基酸和混合氨基酸斑点中心到起始线的距离（a）以及展开剂前沿到起始线的距离（b），计算 Rf 值。
2、结果分析根据计算得到的 Rf 值，对照标准氨基酸的 Rf 值，鉴定混合氨基酸溶液中的成分。
六、注意事项1、点样时要避免毛细管的尖端刺破滤纸，且点样量要适中，过多会导致斑点扩散，影响分离效果。
纸层析法—氨基酸的分离与鉴定
纸层析法—氨基酸的分离与鉴定纸层析法——氨基酸的分离与鉴定⼀、实验⽬的1、了解纸层析法的使⽤原理。
2、掌握⽤纸层析法分离蛋⽩质的操作步骤。
⼆、实验原理1、纸层析法是以滤纸作为惰性⽀持物的分配层析⽅法，滤纸上的纤维具有羟基，是亲⽔基团，滤纸吸附⽔作为固定相，其上流经的有机溶剂即展层剂作为流动相。
当展层剂流经固定相时，固定相上的样品由于亲⽔、疏⽔能⼒不同，在两相之间不断分配，疏⽔能⼒强的多溶于流动相，随流动相移动距离较远，亲⽔能⼒强的移动距离则较近。
2、所有的氨基酸的α碳上均连接⼀个氢原⼦和两个亲⽔基团羧基（—COOH）与氨基（—NH2），唯⼀的不同则在于R基团。
因此R基团在氨基酸的亲⽔疏⽔能⼒对⽐中起到了决定性的作⽤。
本实验采⽤丙氨酸，苯丙氨酸，天冬氨酸，其R基团分别是—CH3，—CH2—C6H5，—CH2—COOH，其亲⽔疏⽔能⼒迥异，能在滤纸上明显分开。
3、Rf值表⽰原点中⼼⾄显⾊斑点中⼼的距离与原点中⼼⾄流动相前沿的距离⽐。
在⼀定条件下，Rf值为定值，其影响的因素有物质本⾝的性质，溶剂的性质，PH值，温度，滤纸的性质等等，本实验不予探究。
在测量原点中⼼⾄显⾊斑点中⼼的距离时，由于斑点的形状不规范（近似圆形），所以，⼀般取斑点的重⼼，测量出重⼼与起点的距离即可。
4、显⾊原理：茚三酮在弱碱性溶液中与α—氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氧，脱羧反应，最后茚三酮与反应产物——氨和还原茚三酮发⽣作⽤⽣成紫⾊物质。
三、试剂（⼀）提前配制试剂8*10-3mol/L丙氨酸溶液：精确称取0.356g晶体，溶解后定容到500ml。
8*10-3mol/L苯丙氨酸溶液：精确称取0.661g晶体，溶解后定容到500ml。
8*10-3mol/L天冬氨酸溶液：精确称取0.532g晶体，溶解后定容到500ml。
（将上述三种溶液装于⼩瓶中实验时，每两组共⽤⼀组试剂）正丁醇88%甲酸蒸馏⽔茚三酮晶体注：实验时，以上试剂均为每两组同学共⽤⼀组试剂。
实验七 氨基酸的分离鉴定
（二）实验器具
锥形瓶 、碱式滴定管、移液管洗耳球、天平
容量瓶、试剂瓶、量筒、玻棒与烧杯
实用文档
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四、操作步骤
1、取5只50ml锥形瓶，按下表加入试剂。
锥形瓶编号 1
2
3
4
试剂
0.1mol/L甘氨酸溶液 0 /mL
1
1
0
中性甲醛溶液/mL 1
1
1
1
水/mL
3
2
2
2
0.5%酚酞酒精溶液 （滴）
4
4
4
一次。尽量点成圆形，并在各点表上样品名。
3 手通过纸将滤纸卷成圆筒形，并用针缝，共3针。每缝一针打
个结，第三针的线留长一点。
4 将缝好的纸（装入）垂直放入装有扩展剂的层析缸内（点样的
一端朝下，滤纸不应碰到缸壁）
5 约2个小时后，将滤纸取出，拆掉线后，放入烘干机内烘干，约 10分 钟后取出即显色。
6 画出溶液前沿线，确立个实层用析文点档中心，计算各氨基酸的Rf值
实用文档
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若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴 定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨 基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基 酸的含量。 脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致 滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结 果偏高。
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三、材料、试剂与器具
（一）试剂
实验七 氨基酸的分离鉴定
——纸层析法
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一 目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法
二 原理 纸层析法是利用各物质不同的分配系数，使混合物随流动相时而得
到分离的方法。 纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的。滤纸纤维与水亲和力较强，
氨基酸的分离鉴定实验报告
氨基酸的分离鉴定实验报告实验室的氨基酸分离鉴定实验，哎呀，听起来就很专业对吧？做起来也不复杂，咱们先把氨基酸这玩意儿搞清楚。
氨基酸是咱们身体的“小工人”，它们负责合成蛋白质，咱们吃的各种食物，都是它们的材料。
所以，搞清楚氨基酸的种类和特性，简直是给自己补充营养的第一步。
在实验开始之前，先准备好需要的材料。
比如说，咱们得有氨基酸样品、缓冲液、色谱柱之类的玩意儿。
嘿，你可能会问，色谱柱是什么？简单来说，就是咱们分离氨基酸的小工具，像个细长的管子，里面填满了能“吸附”氨基酸的材料。
听起来是不是很神奇？然后，咱们得把样品溶解在缓冲液里，记住，这一步很重要，得搅拌均匀。
咱们可不能把氨基酸“丢”到水里就完事，得让它们彻底溶解，像小鱼在水里游得自在那样。
把溶液慢慢倒入色谱柱，哇，真是“万事开头难”，这时你就得耐心等待，看看氨基酸们是如何排队出场的。
每种氨基酸在柱子里都有不同的“出场时间”，就像参加选秀节目一样，个个都想争当“明星”。
当氨基酸一一流出时，咱们得用“紫外光检测器”来识别。
这个小家伙可是非常聪明，能识别每种氨基酸的“身份证”。
你知道吗？有些氨基酸在紫外光下会发光，就像明星在舞台上闪闪发光一样。
每当看到一个个氨基酸冒泡，真是让人激动得像打了鸡血！咱们得记录每种氨基酸的出现时间和浓度。
这就像做日记，记下每个小细节，越详细越好。
然后，咱们就能把这些数据分析出来，画出一张“氨基酸分布图”。
说实话，这一过程还真是考验耐心，有时候还得来几次“复测”，才能确保结果的准确性。
不过，别担心，结果一出来，绝对让你心里美滋滋的。
咱们得对实验结果进行讨论。
这一步也很重要，得看看咱们的分离结果和理论结果是否一致。
氨基酸的分离效果可能不如预期，别灰心，科学就是这么神奇，有时候让你意想不到。
你还会发现一些不常见的氨基酸，简直就像在挖宝一样，兴奋得不得了。
大家肯定好奇，这些氨基酸到底有什么用。
氨基酸可不是“吃了就算”，它们在咱们的身体里起着举足轻重的作用，比如促进新陈代谢、修复组织等等。
氨基酸鉴定实验报告
氨基酸鉴定（纸层析法）醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白一．实验目的1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。
2.学习氨基酸纸层析法的基本原理3.掌握氨基酸纸层析的操作技术二．实验原理二．实验原理1）氨基酸的分离鉴定——纸层析法纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。
在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。
物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rate of flow, Rf）来表示。
所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值：在一定条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。
2）血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳电泳的概念：带电物质在电场中向相反电极移动的现象称为电泳.醋酸纤维是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而成。
涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，有强渗透性，厚度约为120微米。
醋酸纤维素薄膜电泳有以下优点：微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象蛋白质是两性电解质。
在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。
氨基酸的分离鉴定薄层层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定薄层层析法实验报告1. 引言嘿，大家好！今天我们来聊聊氨基酸的分离和鉴定，特别是通过一种叫薄层层析法的实验。
你可能会想，这玩意儿跟我有什么关系？其实，它不仅在实验室里大显身手，还能帮助我们理解生命的基本构件——氨基酸。
就像是咱们的身体要有砖头才能建房子，氨基酸就是咱们身体的“砖头”！这次实验就像一场侦探游戏，我们要通过一些小技巧，把氨基酸找出来，真是让人兴奋。
2. 实验准备2.1 材料首先，咱们得准备一些材料。
我们需要一片薄层层析板，它就像咱们的舞台，氨基酸在上面展现风采。
还有些溶剂，通常是醇和水的混合物，像是给我们的“演员”们准备的背景音乐。
然后，当然少不了氨基酸的样品，可能是牛奶、蛋白质粉什么的，没错，这些都是天然的氨基酸来源。
2.2 设备接下来是设备。
我们得有一个显微镜，得让我们看到更细小的东西；还有一个小瓶子，用来装溶剂；最后，一些基本的实验器材，比如量筒、烧杯等。
这些东西就像是咱们的“战斗装备”，没有它们可不行哦！3. 实验步骤3.1 制备层析板好了，实验要开始啦！首先，我们得把薄层层析板裁剪成适合的大小，就像是准备一块巧克力蛋糕，切得太大了吃不下，切得太小了也不够分。
然后，用铅笔在板上划出一条线，别用墨水哦，毕竟咱们不想让它变得花里胡哨。
3.2 点样和展开接下来，就是点样啦。
我们用微量吸管把氨基酸样品一滴滴地放在铅笔线的上面，就像撒盐一样，讲究均匀。
点完样后，把层析板放到盛有溶剂的小瓶里，溶剂开始往上爬，就像是在攀登高峰。
等到溶剂爬到顶端，咱们就可以拿出来了。
3.3 观察和记录现在最期待的时刻来了！我们把层析板放在显微镜下观察，哇塞！这些氨基酸就像是舞台上的明星，一个个跳出来，各自展示自己的风采。
不同的氨基酸在层析板上会跑到不同的位置，真是好不热闹！我们赶紧记录下每个氨基酸的位置，简直像是在写一本明星榜单。
4. 结果分析4.1 数据整理看完之后，我们就得整理数据。
根据氨基酸在层析板上的位置，计算它们的Rf值，简单说就是它们“跑”的远近。
氨基酸含量的测定及分离鉴定
锥形瓶 、碱式滴定管、移液管洗耳球、天平 容量瓶、试剂瓶、量筒、玻棒与烧杯
四、操作步骤
锥形瓶编号 试剂
0.1mol/L甘氨酸溶液/mL 中性甲醛溶液/mL 水/mL 0.5%酚酞酒精溶液（滴） 未知浓度的 氨基酸混合溶液/mL
12345
01100 11111 32222 44444
实验原理
01
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的 结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨基酸（如 蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。
02
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定 后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
（一）试剂 1、0.5%酚酞酒精溶液
甲醛法测定氨基酸含量的原 理是什么？
三．为什么氢氧化钠溶液滴 定氨基酸的—N+H3基上 的H+，不能用一般的酸 碱指示剂？
二．根据滴定结果，总结分 析此法在实际应用中的 优缺点。
思考题
物质被分离后在纸层析图上的位置用Rf值表示
Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿距离
在一定条件下某种物质的Rf值是常数
目录
CONTENTS
01 溶液前沿层析点 02 原点 03 溶剂前沿 04 苯丙氨酸 05 丙氨酸 06 天冬氨酸
01 器材
02
层析缸 毛细管 雾器
2 3喷
03
培养皿
5
层析滤纸
——纸层析法
实验七
氨基
酸的分离鉴定
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01 目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法
02
原理
纸层析法是利用各物质不同的分配系数，使混合物随流动相时而得
氨基酸的分离鉴定实验报告
氨基酸的分离鉴定实验报告氨基酸的分离鉴定实验报告引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，对于生物体的正常生长和发育至关重要。
因此，了解氨基酸的性质和分离鉴定方法对于生物化学研究具有重要意义。
本实验旨在通过一系列实验手段，对氨基酸进行分离和鉴定。
实验一：氨基酸的提取首先，我们选择了一种常见的食物来源——鸡蛋，作为提取氨基酸的样品。
将鸡蛋清与硫酸钠混合，用醋酸钠调节酸碱度，然后用乙醇沉淀蛋白质，最后用氯化钠溶液洗涤沉淀。
通过这一步骤，我们成功地将氨基酸从鸡蛋中提取出来。
实验二：氨基酸的分离接下来，我们使用离心管中的层析柱进行氨基酸的分离。
将提取得到的氨基酸溶液注入层析柱，通过不同溶剂的渗透作用，不同的氨基酸会以不同的速率通过层析柱，从而实现分离。
通过观察溶液的颜色变化，我们可以初步判断不同氨基酸的分离程度。
实验三：氨基酸的鉴定为了进一步确定分离得到的氨基酸的类型，我们使用了二氯化二硼试剂进行鉴定。
将分离得到的氨基酸溶液与二氯化二硼试剂混合，观察溶液的颜色变化。
不同氨基酸与二氯化二硼反应后会产生不同的颜色，从而可以鉴定氨基酸的类型。
结果与讨论：通过实验一，我们成功地从鸡蛋中提取出氨基酸，并得到了一定浓度的氨基酸溶液。
实验二中，我们使用层析柱对氨基酸进行了初步分离，观察到溶液中出现了不同颜色的带状区域，表明氨基酸已经分离开来。
在实验三中，通过与二氯化二硼试剂的反应，我们进一步确定了分离得到的氨基酸的类型。
根据颜色的变化，我们可以推断出溶液中存在的氨基酸种类。
结论：通过本实验，我们成功地提取、分离和鉴定了氨基酸。
这一系列实验手段为我们深入了解氨基酸的性质和结构提供了基础。
在今后的研究中，我们可以利用这些方法来分析不同食物中的氨基酸成分，进一步探索氨基酸在生物体内的功能和作用机制。
总结：氨基酸的分离鉴定实验是生物化学领域中非常重要的一部分。
通过本实验，我们不仅学习到了提取、分离和鉴定氨基酸的实验技术，还对氨基酸的性质和结构有了更深入的了解。
氨基酸的分离鉴定--纸层析法
实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法一、目的：通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理：层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。
层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。
如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。
层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。
纸层析属于分配层析法。
分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。
纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。
水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。
当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。
当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。
溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。
在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。
氨基酸的分离鉴定实验报告
氨基酸的分离鉴定实验报告
《氨基酸的分离鉴定实验报告》
实验目的：通过对氨基酸的分离和鉴定实验，掌握氨基酸的分离技术和鉴定方法，提高实验操作能力和数据分析能力。
实验原理：氨基酸是生命体系中的重要有机分子，它们是蛋白质的组成单位。
在实验中，我们将利用离心分离、薄层色谱等技术，对氨基酸进行分离和鉴定。
实验步骤：
1. 将混合氨基酸样品溶解在适量的溶剂中，得到氨基酸溶液。
2. 利用离心技术，将氨基酸溶液中的杂质分离出来，得到纯净的氨基酸溶液。
3. 将纯净的氨基酸溶液加载到薄层色谱板上，进行薄层色谱分离。
4. 根据薄层色谱结果，对氨基酸进行鉴定和定量分析。
实验结果：
经过离心分离和薄层色谱分离，我们成功地分离出了混合氨基酸样品中的各种
氨基酸，并且得到了它们的定量数据。
通过比对标准氨基酸的色谱图谱，我们
成功地鉴定出了样品中的各种氨基酸成分。
实验结论：
通过本次实验，我们掌握了氨基酸的分离技术和鉴定方法，提高了实验操作能
力和数据分析能力。
同时，我们对氨基酸的结构和性质有了更深入的了解，为
今后的科研工作打下了坚实的基础。
总结：氨基酸的分离鉴定实验是一项重要的生物化学实验，通过本次实验，我
们不仅掌握了氨基酸的分离技术和鉴定方法，还提高了实验操作能力和数据分
析能力，为今后的科研工作提供了有力支持。
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实验七氨基酸的分离鉴
定
标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]
实验七氨基酸的分离鉴定——纸层析法一、目的
通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，它是利用不同的氨基酸在展层溶剂中的分配系数不同而得以分离的一种方法。
惰性支持物是新华一号滤纸，其上含有很多的羟基，与水有较强的亲和力因此把它看成是含有静止水相的惰性支持物。
水相因此称为静止相（固定相），有机溶剂称为流动相。
展层溶剂由两个互不相溶的有机溶剂和水组成，它们互相混合时便分成两相：一相是以水饱和了的有机相，另一相是以有机溶剂饱和了的水相。
分配系数(α)＝溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
当用滤纸进行分配层析时，流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使氨基酸在两相之间不断分配而得以分离。
不同的氨基酸在一定的条件下，有其一定的Rf值，故可根据Rf值定性鉴定氨基酸，但通常用已知的标准氨基酸层析作对照，本实验就是如此。
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
层析溶剂由有机溶剂和水组成
物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移
值）来表示的：
Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、材料与方法
（1）、材料：层析缸；毛细管；喷雾器；培养皿；层析滤纸；正丁醇；冰醋酸；分液漏斗；烧杯；培养皿；赖氨酸；脯氨酸；氨酸；苯丙氨酸；亮氨酸；茚三酮
（2）操作步骤
1.配置层析液置于密闭的层析缸中。
2．准备滤纸：取层析滤纸一张。
在纸的一端距边缘2cm处用铅笔划一直线，在直线上每间隔2cm做一记号，标出5个原点。
3．点样：用毛细管将各氨基酸样品点在5个原点上，用量10～20μl，每点在纸上扩散的直径，最大不超过3mm，边点样边用电吹风吹干，越小越好。
干后再点一次。
4．扩展?用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。
将盛有约20mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中(点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1cm)。
待溶剂上升15―20cm时即取出滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。
5．显色?用喷雾器均匀喷上0。
1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
6．计算各种氨基酸的Rf值。
四、结果与分析
在显色反应中，脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质，其余皆为紫色，因为脯氨酸为亚氨基酸，与茚三酮反应并不释放氨气，而直接产生黄色物质。
混合氨基酸一定有赖氨酸和脯氨酸，可能有缬氨酸和苯丙氨酸，因为脯氨酸与茚三酮反应生成黄色物质，赖氨酸、亮氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸与茚三酮反应生成紫色物质。
五、讨论与结论
本实验的关键是层析液的制备，点样点要小。
由于层析时间较短，混合氨基酸没有完全分开，所以本次实验失败。
六、思考题
1.何为纸层析法答：纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
2.何谓Rf值影响Rf的主要因素是什么答：（1）氨基酸被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的：Rf=原点到层析中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。
（2）在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
3.怎样制备扩展剂答：扩展剂800-1000mL是4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物。
将20mL正丁醇和5mL冰醋酸放人分液漏斗中，与15mL水混合，充分振荡，静置后分层放出下层水层。
取漏斗内的扩展剂约5mL置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的倒人培养皿中备用。
4.层析缸中平衡溶剂的作用是什么答：（1）防止或减少边缘效应的出现.所谓边缘效应,是指并列点样的同一物质经薄层展开后薄板边缘处的比移值比中间的要大的现象。
（2）平衡剂起到使纸层析上吸附的溶剂达到饱和。
是物质在展开剂和纸层析上吸附的溶剂中溶解度不同而进行分离。
七、参考文献
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