如何使用莱克多巴胺快速检测试剂盒
莱克多巴胺(血清)
莱克多巴胺（瘦肉精）快速检测卡——胶体金法(血清)一、简介“瘦肉精”快速检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理，样本中的“瘦肉精”在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜（NC膜）检测线上“瘦肉精”-蛋白偶联物的结合。
如果样本“瘦肉精”含量≥3ppb/ml，检测线不显颜色，结果为阳性。
反之，检测线显红色，结果为阴性。
本产品是检测莱克多巴胺（瘦肉精）的快速筛选试剂，整个检测过程只需5-10分钟，适用于尿液样品的检测。
二、试剂组成1、莱克多巴胺免疫胶体金快速检测卡（50份/盒）；2、一次性塑料吸管（1个/袋）；3、干燥剂（1片/袋）；4、使用说明书（1张/盒）。
三、标本收集用干燥、洁净的离心管或适当容器采集血清。
如果不立即检测，可将血清冷冻保存；血清在2-8℃冷藏可保存24小时，要注意避免腐败造成失效或污染。
如果血清出现沉淀或浑浊物，请离心后再检测。
四、操作步骤1、在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待检样本溶液恢复至室温。
2、撕开装有莱克多巴胺检测卡的包装袋，小心取出检测卡，水平放置于实验台上。
3、用塑料吸管吸2-3滴血清样本加入样本孔中。
4、5-8分钟内观察结果，10分钟后结果无效。
五、结果判定1、阳性结果：出现一条红色质控线（C）。
2、阴性结果：出现质控线（C）和反应线（T）两条红线。
3、无效结果：无红线出现，表明检测结果无效，需重新实验。
六、注意事项1、检测卡在保质期内一次性使用。
4℃冰箱中保存的检测卡检测前应平衡至室温后再开袋使用，否则会影响检测结果。
2、谨防检测卡受潮，铝箔包装袋受损或检测卡受潮后。
检测卡不能使用。
3、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面，检测时避免阳光直射。
4、塑料吸管不可混用，以免交叉污染；5、出现阳性结果，应用本卡复查并作阳性对照实验，必要时送实验室进一步定量。
6、铝箔包装袋中的小包是干燥剂，不可误服。
7、自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。
莱克多巴胺检测方法
莱克多巴胺检测方法1．分析目标化合物莱克多巴胺2、仪器设备高效液相色谱-质谱仪（LC-MS）。
3、试剂除下列试剂外，使用附录2所列试剂。
莱克多巴胺：含莱克多巴胺99％以上，熔点为163.9℃～164.6℃。
4．试验溶液的制备1）肌肉、肝脏、肾脏和其它可食用部分肌肉：尽可能除去脂肪层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。
肝脏、肾脏和其它可食用部分：搅碎混合均匀后，称取其5.00g。
加入20mL乙酸乙酯和1mL4mol／L碳酸钾溶液，均质后，以每分钟3000转离心分离10分钟，收集乙酸乙酯层。
离心管内残留物中加入20mL乙酸乙酯，振荡5分钟后，按上述同样条件离心分离，合并所得的乙酸乙酯层，40℃以下浓缩，除去乙酸乙酯。
残留物中加入30mL乙腈溶解，移入分液漏斗中。
加入30mL乙腈饱和正己烷，振荡，弃去正己烷层，重复操作2次。
乙腈层在40℃以下浓缩，除去乙腈。
残留物中加入1.0mL 甲醇溶解，此为试验溶液。
2）脂肪尽可能除去肌肉层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。
加入30mL乙腈和30mL乙腈饱和正己烷，均质后，以每分钟3000转离心分离10分钟，乙腈层移入分液漏斗中。
离心管内的正己烷层和残留物中加入30mL乙腈，振荡5分钟，按上述同样条件离心分离。
合并所得的乙腈层于前面的分液漏斗中，加入30mL 乙腈饱和正己烷。
激烈振荡5分钟后，静置，收集乙腈层， 40℃以下浓缩，除去乙腈。
残留物中加入1.0mL甲醇溶解，此为试验溶液。
5．标准曲线的制作将盐酸莱克多巴胺标准品配制成0.025～0.5mg（以莱克多巴胺计）/L的甲醇溶液数点，分别注入GC-MS中，用峰高法或面积法绘制成标准曲线。
6．定量试验注入试验溶液于GC-MS中，根据5的标准曲线求出莱克多巴胺的含量。
7．测定条件LC-MS柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径2～5μm），内径2.0～6.0mm、100～250 mm的不锈钢管。
柱温：40℃。
流动相：乙腈：0.05%三氟乙酸（1：4）混合溶液。
上海快灵生物莱克多巴胺酶联免疫试剂盒
快灵生物莱克多巴胺酶联免疫试剂盒
产品编号：KL-SE-S081
产品名称：莱克多巴胺(瘦肉精)酶联免疫试剂盒
产品规格： 96孔
产品概要：
莱克多巴胺(瘦肉精)属β-受体激动剂类药物。
它可以加快畜禽生长速度，降低酮体脂肪含量，提高瘦肉率，且价格低廉，因此其非法应用者不断增多。
国家卫生部、农业部、药品监督管理局发出的公告明确禁止莱克多巴胺在食用动物中使用。
莱克多巴胺(瘦肉精)试剂盒采用直接竞争酶联免疫法，可对尿液、饲料、肉类组织中的莱克多巴胺进行快速定量检测。
检测原理：
莱克多巴胺(瘦肉精)酶联免疫试剂盒采用直接竞争一步法,莱克多巴胺(瘦肉精)蛋白偶联物和标准品或样品中的莱克多胺竞争性地与莱克多巴胺抗体结合；洗涤后加入底物液显色，结合的酶将无色的显色剂转化为蓝色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；在450nm波长进行检测，样品中的莱克多巴胺(瘦肉精)浓度与吸收光强度成反比。
适用范围：可定性、定量检测动物组织(含水产）、饲料、尿液等样本中莱克多巴胺(瘦肉精)的残留量。
特异性：
莱克多巴胺…………100% 克伦特罗…………<0.1%
沙丁胺醇............<0.1% 盐酸多巴胺 (1)
灵敏度：莱克多巴胺(瘦肉精)酶联免疫试剂盒检测灵敏度为0.1ng/ml
检测下限：尿样检测下限为0.1ng/ml；饲料检测下限为1ng/ml；肉类组织检测下限为0.1ng/ml
精密度：用莱克多巴胺(瘦肉精)酶联免疫试剂盒说明书提供的组织样本提取方法回收率为85±15%；板内变异系数小于6%，板间变异系数小于10%。
农产品快速检测技术W1201-1 速测卡法检测莱克多巴胺的原理及速测卡使用方法介绍-微设计
教学目标
了解胶体金法检测莱克多巴胺的原理；
掌握胶体金速测卡检测莱克多巴胺试剂盒的使用方法。
教学内容
知识点
技能点
1.胶体金速测卡的基本构造；
2.胶体金法检测莱克多巴胺的原理；
3.胶体金速测卡测定莱克多巴胺的方法；
4.使用胶体金速测卡的注意事项。
1.胶体金速测卡测定莱克多巴胺的操作步骤
设计思路
教学步骤
呈现形式与素材
《农产品/食品快速检测技术》课程-微设计
微课编号
W1201
微课名称
速测卡法检测莱克多巴胺的原理及速测卡使用方法介绍
所属模块
残留物的快速检测
子模块
兴奋剂类药物残留的快速检测
关键词
速测卡；莱克多巴胺；原理；方法
是否通用
√通用农产品食品
是否重点建设
√是否
微课类型
讲授型
微课形式
PPT动画式
教学设计模式
直观演示法时长(min)源自1.通过图片形式展示莱克多巴胺快速检测试剂盒；
图片
1
2.通过动画讲授胶体金速测卡的基本构造。（知识点1）
动画
1
3.通过动画讲授胶体金法检测莱克多巴胺的原理。（知识点2）
动画
2
4.通过视频讲授莱克多巴胺速测卡试剂盒的组成；
视频
0.5
5.通过系列图片展示讲授胶体金速测卡测定莱克多巴胺的方法（知识点3）（技能点1），并对实验结果进行观察。
图片、ppt
2
6.讲解莱克多巴胺速测卡使用过程中的注意事项。（知识点4）
ppt
1.5
小计
食品冷链品控专业《33. 瘦肉精(莱克多巴胺)试纸卡使用说明书》
瘦肉精〔莱克多巴胺〕试纸卡使用说明书
1 适用范围：本产品适用于猪的肌肉组织中莱克多巴胺的快速筛查。
对猪的肝脏、肺脏、肾脏组织，以及尿液中莱克多巴胺的快速筛查具有一定的参考价值。
2 检测原理：莱克多巴胺快速检测卡是基于竞争法胶体金免疫层析技术，将检测液参加速测卡上的样品孔，检测液中的莱克多巴胺与试纸卡上的抗体结合形成复合物，假设浓度低于灵敏度值，逐渐凝集成一条可见的T线；假设浓度高于灵敏度值，那么不会再形成可见T线而形成可见的C线。
3 灵敏度：5L盐酸克伦特罗、群勃龙醋酸酯、氯霉素类、大环内酯类、氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类和四环素类等药物，结果均呈阴性。
使用本品检测1μg/mL沙丁胺醇，结果显示均呈阴性。
7 包装：试纸卡、离心管和3mL吸管各5个。
15mL离心管1个〔清洗后可反复使用〕。
8 保存和稳定性：4~30℃阴凉枯燥处保存，不可冷冻，防止阳光直晒，生产日期起18个月内有效。
莱克多巴胺Rac定量检测试剂盒ELISA
莱克多巴胺（Rac）定量检测试剂盒（ELISA）利用说明书一、概要β兴奋剂是一种人和兽医作为医治哮喘的药物。
在家畜中超剂量利用能够脂肪组织转化为肌肉组织，由于能够显著改善脂肪率和生产效率，β兴奋剂往往被滥用于畜牧养殖生产中。
已经有克伦特罗或其他β兴奋剂中毒的病例报导，近来又有一些非法利用莱克多巴胺（Rac）来替代克伦特罗作为饲料添加，并存在滥用现象。
通常情形下，HPLC或GC-MS是克伦特罗残留检测的确证方式，可是其前处置步骤繁琐、费用昂贵。
酶联免疫快速检测试剂盒具有本钱低廉、操作简便、一次处置样本量大等优势，已成为常规的初步筛查方式。
本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品，与仪器分析技术相较具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点，能最大限度地减少操作误差和工作强度。
二、用途定量检测动物尿液中莱克多巴胺（Rac）的残留。
三、检测原理本试剂盒采纳竞争酶联免疫实验。
检测的基础是抗原抗体反映，微孔板预包被羊抗鼠IgG 捕捉抗体，加入鼠抗莱克多巴胺抗体后，会与捕捉抗体连接。
通过孵育及洗板后，加入标准品、样品及莱克多巴胺酶标记物（Rac-HRP），游离的莱克多巴胺（Rac）与莱克多巴胺酶标记物（Rac-HRP）竞争莱克多巴胺抗体结合位点。
通过孵育及洗板后，加入底物并孵育。
结合的酶连接物将底物转化为蓝色的产物。
加入反映终止液后使颜色由蓝转变成黄色。
在450 nm 处测量，吸光度值与样品中的莱克多巴胺浓度成反比，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数即可得出样品中莱克多巴胺的含量。
四、检测限检测限：ml（）五、特异性交叉物交叉率（%）Dobutamine……………………………………Ritodrine………………………………………Ractopamine …………………………Ractopamine Gluc B (384)(1S,3S) –Ractopamine…………………………(1R,3S)-Ractopamine……………………………Isoxsuprine………………………………………Salmeterol…………………………………………Fenoterol…………………………………………Clenbuterol……………………………………<Salbutamol………………………………………<六、试剂盒组成每一个盒中的试剂足够进行 96 个实验（包括标准测定），试剂盒中的组份如下：一、96孔酶标板1块（12孔×8条）：预包被羊抗鼠IgG二、标准液×6瓶（1ml/瓶）：0ng/mL、mL、mL、mL、mL、mL3、酶连接物（6mL）：辣根过氧化物酶标记的莱克多巴胺工作液4、莱克多巴胺抗体（6mL）：鼠抗莱克多巴胺单克隆抗体工作液五、底物液A（6mL）：过氧化脲6、底物液B（6mL）：四甲基联苯胺（TMB）7、终止液（6mL）：2N H2SO48、浓缩洗涤液（25×）（25mL）：含Tween-20的磷酸盐缓冲液（PBST）9、其他：封板膜3张，自封袋1个，说明书1份七、样本处置处置任何样本，必需利用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要改换吸头。
试剂盒的使用流程是什么
试剂盒的使用流程是什么概述试剂盒是实验室常用的一种化学试剂包装形式，通常由不同试剂及配套消耗品组成，用于实验室分析、检测和研究等工作。
本文将介绍试剂盒的使用流程，帮助读者更好地了解试剂盒的使用方法和注意事项。
使用流程使用试剂盒时，一般需要按照以下流程进行操作：1.准备工作在操作前，确保实验室工作区域整洁清洁，准备好所需的仪器设备和试剂盒。
2.试剂盒的打开将试剂盒放置在平整的工作台上，先检查外包装是否完好，并根据试剂盒上的说明将其打开。
3.试剂的取用打开试剂盒后，注意阅读试剂盒内的说明书。
根据实验需求，用量器具取出所需试剂，将其放置在专用试管、培养皿或其他实验容器中。
注意避免将试剂污染或误操作。
4.试剂储存使用完毕后，将试剂盒内未使用完的试剂进行储存。
按照试剂的性质和实验室的规定，将试剂储存在相应的存储条件下，如冷藏、避光等。
5.试剂盒的清洗使用完毕后，将试剂盒和使用过的器具进行清洗和消毒。
按实验室的规定，选择合适的清洗剂和方法进行清洗，确保试剂盒的日常维护和卫生。
注意事项在使用试剂盒时，需要注意以下事项：•仔细阅读说明书：在操作前，仔细阅读试剂盒内的说明书，了解试剂的性质、使用方法和注意事项。
•遵循实验室规定：按照实验室的安全操作规程进行实验，遵守试剂的使用和处理规定，确保实验安全。
•避免交叉污染：在取用试剂的过程中，注意避免交叉污染。
使用干净的工具和容器，避免不同试剂之间的混合污染。
•适当的储存条件：根据试剂的性质，选择适当的储存条件。
某些试剂需要在低温、干燥或避光的条件下储存，以保持其稳定性和有效性。
•合理利用试剂：在使用试剂时，注意节约使用，避免浪费。
遵循实验设计的要求，合理使用试剂，减少资源的浪费。
结论试剂盒是实验室工作中常用的化学试剂包装形式，正确的使用流程可以帮助实验人员安全、高效地进行实验工作。
通过对试剂盒的准备、打开、试剂取用、储存和清洗等步骤的介绍，以及注意事项的提醒，读者可以更好地了解和掌握试剂盒的使用方法和注意事项，从而提高实验的成功率和工作效率。
如何正确使用新冠病快速检测试剂盒新冠病快速检测试剂盒的正确操作方法及常见问题
如何正确使用新冠病快速检测试剂盒新冠病快速检测试剂盒的正确操作方法及常见问题新冠病快速检测试剂盒是一种常用于新冠病毒检测的工具，它能够快速检测出样本中是否存在新冠病毒的抗原。
正确使用新冠病快速检测试剂盒不仅可以提高检测的准确性，还能够避免误操作导致的不准确结果。
本文将介绍新冠病快速检测试剂盒的正确操作方法，并解答常见问题，帮助读者正确使用这一工具。
一、新冠病快速检测试剂盒的正确操作方法新冠病快速检测试剂盒的正确操作方法可以总结为以下几个步骤：1.准备工作在进行新冠病快速检测之前，首先需要准备好所需的器材和试剂。
常见的器材包括试纸、吸管、标本采集棒等，试剂一般由生产商提供。
同时，需要确保操作环境的清洁和无菌，以避免污染样本和试剂。
2.标本采集新冠病快速检测试剂盒一般用于鼻拭子和咽拭子样本的检测。
在采集样本之前，应先向患者说明采样的具体过程和注意事项。
鼻拭子应通过鼻腔进行采集，咽拭子则需要从咽喉后方进行采集。
采集时，要确保采样器完全接触到样本，并且避免有空气进入。
3.试纸处理将采集到的样本与试剂充分混合后，滴在试纸的相应位置。
通常情况下，试纸有两个孔，一个用于样本滴加，另一个用于观察结果。
注意滴加的量应符合试纸使用说明中的要求。
滴加后，放置试纸在水平面上，避免移动或者挤压，以免干扰试剂在试纸上的反应。
4.观察结果按照使用说明中规定的时间观察试纸上的结果。
结果一般通过试纸上的反应线显示，通常有两条线，一条用作验证线，一条用作检测线。
阴性结果通常以出现一条验证线和一条检测线为主，阳性结果则会出现两条线。
根据试纸上线的数量和颜色的深浅来判断测试结果的强度。
二、新冠病快速检测试剂盒的常见问题解答1.为什么在使用新冠病快速检测试剂盒时需要遵循严格的操作步骤？严格遵循操作步骤可以确保样本和试剂的准确混合以及反应的正确进行。
如果操作不正确，可能会导致试剂的污染或者试纸上的结果不准确。
2.新冠病快速检测试剂盒的准确性如何？新冠病快速检测试剂盒在准确性方面有一定的局限性，其结果仅供参考。
农产品快速检测技术W1201-5 速测卡法检测莱克多巴胺的原理及速测卡使用方法介绍-微测试
《农产品/食品快速检测技术》课程-微测试一、单选题1、速测卡法检测莱克多巴胺残留时，加样时应采用（）滴加。
A．移液管B．微量移液器C．试剂盒中的滴管D．以上均可参考答案：C难度：低2、对于莱克多巴胺胶体金检测卡，各组分的排列顺序正确的是（）。
A．胶金垫、样品垫、NC膜、吸水滤纸B．胶金垫、样品垫、吸水滤纸、NC膜C．样品垫、胶金垫、NC膜、吸水滤纸D．吸水滤纸、样品垫、胶金垫、NC膜参考答案：C难度：中3、对于莱克多巴胺胶体金检测卡，以下说法错误的是（）。
A．NC膜即硝酸纤维素膜B．硝酸纤维素膜固定抗体C．控制区固定二抗D．胶金垫上结合胶体金标记单抗参考答案：B难度：高二、多选题1、莱克多巴胺的胶体金检测卡主要是由以下（）部分组成。
A、胶体金垫；B、样品垫；C、吸水滤纸；D、硝酸纤维素膜。
参考答案：A；B；C；D难度：中三、判断题1、速测卡法检测莱克多巴胺残留时，组织样品中油脂含量高低对检测结果无影响。
参考答案：F难度：低2、样液滴加到样品垫的加样孔中后，应马上观察显色窗读取实验结果，防止结果不准。
参考答案：F难度：中四、填空1、若样品中无莱克多巴胺残留，或莱克多巴胺含量低于检测限，则在样品区滴加样品后，T区，C区。
参考答案：显红色；显红色难度：中2、若样品中莱克多巴胺残留高于检测限，则在样品区滴加样品后，T区，C区。
参考答案：不显色，显红色难度：中五、简答题1、请简述速测卡法检测莱克多巴胺的原理。
参考答案：检测卡含有被事先固定于硝酸纤维素膜测试区（T）的抗原和控制区（C）的二抗以及固定于金标垫上的金标抗体。
样品经简单前处理，取样品滴入检测卡的样品孔中，若样品为阴性，在T区出现一条紫红条带；若样品为阳性，则T区不会出现紫红色条带。
无论样品中有无莱克多巴胺存在，C区都会出现一条紫红色条带。
难度：中。
莱克多巴胺(Ractopamine)ELISA 检测试剂盒说明书
地址：北京市海淀区西北旺镇东北旺南路1号院东南1号房 电话：+86-10-82771310 82773503 82771993 827729271莱克多巴胺(Ractopamine)ELISA 检测试剂盒说明书本试剂盒可以在尿样、血清、饲料、组织等生物样品中酶免定性、定量检测莱克多巴胺的残留量。
提供的材料与试剂1、可拆96孔酶标板×1块 （包被有偶联抗原）2、标准液×6瓶：（1.5ml/瓶）0ppb ，0.3ppb ，0.9ppb ，2.7ppb ，8.1ppb ，24.3ppb3、高浓度标准品：（1.5ml/瓶） 100ppb4、抗体工作液 10ml ………………………绿色帽5、酶标二抗 7ml ………………………透明帽6、底物液 A 液 7ml ………………………白色帽7、底物液 B 液 7ml ……………………… 红色帽8、终 止 液 7ml ………………………黄色帽9、20×浓缩洗涤液 40ml ………………………透明帽 10、20×浓缩提取液 50ml ………………………蓝色帽一、概述莱克多巴胺（Ractopamine ）是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物，属β-兴奋剂，是一种营养重分配剂，可加快畜禽生长速度，降低酮体脂肪含量，提高瘦肉率。
欧盟已禁止将β-兴奋剂作为家禽的生长促进剂，我国在《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中也有明文规定，但由于莱克多巴胺属于非处方药，且价格远低于克仑特罗，因此非法使用者有不断增多的趋势。
本试剂盒是应用ELISA 技术研发的新一代药物残留检测产品，操作时间仅需1.5小时，能最大限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA ，在酶标板微孔条上预包被上偶联抗原，样本中残留的莱克多巴胺和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标二抗后，用TMB 底物显色，样本吸光度值与其所含莱克多巴胺含量成负相关，通过标准曲线换算出相应的值，再乘以样品稀释倍数，即可得出样品中莱克多巴胺的残留量。
硼砂速测盒使用说明
莱克多巴胺快速检测卡【适用范围】用于检测畜禽是否喂养莱克多巴胺。
【检测原理】莱克多巴胺((Ractopamine，简写Rac)在牲畜中超剂量使用可以脂肪组织转化为肌肉组织，近来使用莱克多巴胺来替代克伦特罗作为饲料添加。
人食用含有莱克多巴胺残留的产品后常引起心悸、肌肉震颤、呕心呕吐、发热寒战等症状，特别对心脏病、糖尿病、高血压等病人危害更大。
而本试纸卡用于莱克多巴胺残留的快速筛选检测。
本试纸卡采用竞争抑制免疫层析技术的原理来测定动物尿液、饲料和肉等组织中的莱克多巴胺。
试剂含有被预先固定于膜上检测带(T)的莱克多巴胺偶联物和被胶体金标记的抗莱克多巴胺单克隆抗体。
本产品的检测莱克多巴胺浓度3ng/g(3ppb)及以上为阳性。
【规格】 10片/盒。
【贮藏】常温，避光。
【包装】检测卡10片【生产日期】见封口【有效期】 12个月。
【使用方法】1、样品制备尿样：样本必须用洁净、干燥不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器收集。
可直接检测，如有浑浊请先离心取上清。
若不能及时检测送检，尿样样本在2-8℃冷藏可以保存48小时。
长期保存需冷冻于-20℃，忌反复冻融。
肉样：1、装入大约4克碎的猪肉样本(肉泥)于离心管中，盖紧管盖，在80℃左右的水浴锅中水浴10 分钟；吸取煮出的溶液到1.5ml的离心管中。
如有明显黄色浑浊请离心，用上清液作为待测样品溶液。
饲料：1、取1g样品粉末于离心管中，加入5ml水，混匀，置于超声波水浴中超声30min(每10min取出混匀1次)，超声提取后冷却至室温，于3000rpm离心5min，取上清液进行测试。
2、操作步骤（1）从检测卡袋中取出所需的检测卡，放置室温，在检测卡上做好样品编号标记。
（2）从原包装中取出试剂，打开后平放在桌面上，请在1小时内尽快使用。
（3）吸取待检样品溶液，缓慢滴加100μl(约4滴)于加样孔中，加样后开始计时。
（4）在10分钟内读取结果，超过10分钟的结果判读无效。
3、结果判定:A、阴性B、阳性C、无效A：阴性：位置C显示出红色条带，位置T同时出现红色条带时，判为阴性。
畜产品中莱克多巴胺残留的快速检测
由表 2 可以看出，在空白组织中添加莱克多巴 胺标准液，浓度为 1.0ng/mL 的样品平均回收率为 85.3%（CV=3.21%）；浓度为 2.0ng/mL 的样品平均回 收率为 83.7%（CV=1.89%）。 4 结论与讨论
在“放心肉”不令人放心的今天，“绿色食品”、 “安全猪肉”的呼声高涨，对肉品安全要求越来越严
表 2 试样的加标回收率及变异系数
内瘦肉精的检测。本实验准确性高、重复性强、检测 时间快速，检测费用也相对低廉，具有极好的应用推 广价值。运用竞争酶标检测“瘦肉精”具备以下优点： （1）该检测方法检测范围广，不仅能检测猪肉猪尿中 的莱克多巴胺，而且能够有效检测牛羊肉和牛羊尿 中的莱克多巴胺。（2）实验特异性强，实验结果较为 准确；（3）高度灵敏，对尿液中莱克多巴胺的检测下 限为 100ng/kg；（4）实验重复性强，对尿样做重复试 验，定量分析结果误差在 100ng/kg 的为 87%，误差在 200 ng/kg 的为 12%，误差在 300ng/kg 的为 1%；（5） 实验平行性高，在检测过程中，对标准液和样品做两 个平行试验，其相对误差小于 5%。酶标法也有缺点， 如出现非特异性反应，即酶促反应的有色产物会快 速放大，实验中只要沾少许酶分子就会产生明显的 非特异反应。因此，一般将酶标检测做筛选法而不做 仲裁法。
形成抗体 / 抗原或抗体 / 酶标抗原复合物。洗涤酶标 板除去游离的酶标抗原，加入酶基质（底物），温育， 结合到酶联板上的酶标记物将无色发色剂转化为蓝
万方数据
畜牧兽医科技信息
2010 年第 5 期 31
试验研究
８。口［｜
＼ １０口。
６。０。
图 1 莱克多巴胺浓度--百分吸光度标准曲线图
色产物。加终止液后，颜色由蓝色转变为黄色。在单 释莱克多巴胺抗体浓缩液和莱克多巴胺酶标记物浓
莱克多巴胺
莱克多巴胺（Ractopamine，RAC）ELISA检测试剂盒说明书产品编号：3K30200-001.【概述】莱克多巴胺(Ractopamine，RAC) 属β- 兴奋剂类药物。
它可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被作为养殖促进剂使用。
其残留经食物链进入人体可导致头痛、头晕、胸闷、心悸、四肢麻木等中毒症状，对消费者的健康构成极大危害。
国家卫生部、农业部、药品监督管理局发出的公告明确禁止莱克多巴胺在食用动物中使用。
莱克多巴胺酶联免疫试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点，适用于现场大批量样品检测。
2.【试验原理】采用直接竞争法，样品中的莱克多巴胺与酶标板上固定的抗原竞争酶标记的抗体，通过酶催化显色剂显色，根据显色的深浅来判断样品中的含量。
样本吸光值与其含有的莱克多巴胺呈负相关。
3.【适用范围】可定性、定量检测尿样中的莱克多巴胺。
4. 【试剂盒组份】4.1 标准品×6 瓶* 1ml/ 瓶4.2 莱克多巴胺酶标板：1块（8孔*12条）4.3 莱克多巴胺抗体工作液：1瓶(6ml)4.4 酶结合物工作液：1瓶（6ml）4.5 浓缩样品稀释液：1瓶（10×, 30ml）4.6 浓缩洗涤液：1瓶(20×,40ml)4.7 浓缩肉样提取液：1瓶(50×,12ml)4.8 底物液A 液1瓶：7ml4.9 底物液B 液1瓶：7ml4.10 终止液1瓶:7ml4.11 说明书1 份4.12 质控报告1 份4.13 盖板膜1 张4.14 自封袋1 个★注：标准品浓度为0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。
5.【使用单位需自备的设备及试剂】5.1 仪器设备：5.1.1 微孔板酶标仪450nm/630nm5.1.2 均质器5.1.3 振荡器5.1.4 旋涡混合器5.1.5 离心机5.1.6 氮吹仪5.1.7 微量移液器5.1.8 计时器5.2 试剂：5.2.1针对组织样品一的样品乙腈、乙酸乙酯、正己烷（或正庚烷）5.2.2 针对于饲料样品1M NaOH溶液:称取4gNaOH加去离子水溶解并定容至100ml。
肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定—酶联免疫快速测定法
2 酶联免疫法检测瘦肉精 2.2操作 2.2.1 国标-酶联免疫法（ELISA) )实验方法与步骤
(1)主要试剂： 高氯酸、异丙醇+乙酸乙酯(40+60)、克伦特罗酶联免疫试剂盒等
(2)主要仪器:匀浆器、离心机微量移液器：单道20ul、50ul、100ul和多道50ul- 250ul 可调、 酶标仪（配备450nm滤光片）
2.2操作 2.2.2 克伦特罗快速检测卡检测步骤
（1）取5 g匀浆去脂肪肉样（或肉泥）于50 mL离心管中，盖紧管盖。 （2）将装有样品的离心管放入沸水中加热10 min，用微量移液器或滴管取出管中 液体移至干净离心管中，冷却至室温（注意：样品温度应控制在20±5℃）。 （3）取出检测卡，开封后平放于桌面，使用本产品附带滴管，吸取离心管中的上 清液加3-4滴于样品孔中。 （4）加样后3-5min，观察显色区，判断结果，其他时间判断无效。
2 酶联免疫法检测瘦肉精
2.2.1酶联免疫法（ELISA) )实验方法与步骤
(3)测定 ① 提取肌肉、肝脏及肾脏试样 ② 准备竞争酶标记物、克伦特罗抗体、包被有抗抗体的微孔板条试样；
准备试样：提取物取20ul进行分析。高残留的试样用蒸馏水进一步稀释。
测定：详细过程参考实训指导书或国标GB-T5009.192-2003。
酶联免疫法测定激素（盐酸克伦 特罗、莱克多巴胺）-初筛Fra bibliotek目录页
检测依据 酶联免疫法检测瘦肉精
1 检测依据
检测标准： GB-T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的
测定第三法酶联免疫法（ELISA筛选法）
2 酶联免疫法检测瘦肉精
2.1酶联免疫法（ELISA)原理
基于抗原抗体反应进行竞争性抑制测定。微孔板包被有针对克仑特罗IgG的包被抗体。 克伦特罗抗体被加入，经过孵育及洗涤步骤后，加入竞争性酶标记物、标准或试样溶液。 克仑特罗与竞争性标记物竞争克仑特罗抗体，没有与抗体连接的克伦特罗标记酶在洗涤步 骤中被除去。将底物（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中孵育，结合的 标记酶将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝转变为黄色。在 450nm处测量吸光度值，吸光度比值与克伦特罗浓度的自然对数成反比。
莱克多巴胺的检测方法及注意事项
莱克多巴胺的检测方法及注意事项时冉冉;姜波;王涛【期刊名称】《中国畜牧兽医文摘》【年(卷),期】2013(000)004【总页数】2页(P36-36,56)【作者】时冉冉;姜波;王涛【作者单位】山东省济南市畜产品质量安全监测中心山东济南 250000;山东省济南市畜产品质量安全监测中心山东济南 250000;山东省济南市动物卫生监督所，山东济南 250002【正文语种】中文莱克多巴胺属于β-兴奋剂，可行使营养重新分配，是一类结构和功能类似于肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物，它可以加快畜禽生长速度，降低胴体脂肪含量，提高瘦肉率。
在欧盟β-兴奋剂已被禁止用于家禽的生长促进剂，我国在《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中也有明文规定，但由于莱克多巴胺属于非处方药，且价格远低于克伦特罗，因此，其非法应用者不断增多。
酶联免疫吸附法是目前β-兴奋剂类最佳的检测方法。
ELISA检测方法有双抗体夹心法测抗原、间接法测抗体、竞争法测抗体等。
利用竞争酶联免疫吸附法检测瘦肉精，具有速度快，灵敏度高的特点，是保证肉品卫生安全的较好监控方法，对以后瘦肉精检测工作的发展具有指导作用。
1 试验原理其原理是利用多克隆抗体既能与莱克多巴胺结合，也能与包被抗原结合。
这些包被抗原被固定在酶标板孔壁上，当样品中含有莱克多巴胺时，它与包被抗原竞争结合抗体中有限量的结合位点。
由于每一个孔中抗体的结合位点数相同，当样品中莱克多巴胺浓度低时，就有更多抗体的位点与包被抗原结合，更多的抗体被固定在酶标板壁上，就会与更多的酶标二抗结合，所以结果就呈现深蓝色。
相反，样品的莱克多巴胺浓度高，结果就呈现浅蓝色。
加入终止液后，蓝色相应变成黄色，然后用酶标仪进行测定。
这种方法可定性、定量检测尿液、饲料、组织样本中莱克多巴胺的残留量。
2 实验材料与方法2.1 试剂和材料莱克多巴胺-酶联免疫试剂盒，去离子水，猪肉样本。
2.2 仪器酶标仪、天平、均质器、氮气吹干装置、离心机、振荡器、微量移液器等。
莱克多巴胺免疫胶体金快速检测试剂板 使用说明书
莱克多巴胺免疫胶体金快速检测试剂板使用说明书【产品简介】本产品用于快速检测猪肉中莱克多巴胺残留，灵敏度为5μg/kg（ppb），整个检测过程只需要15～25分钟，适用于各类企业及检测机构。
【产品组成】莱克多巴胺免疫胶体金快速检测试剂板（50份/盒）RAC专用PBST（1瓶/盒）说明书（1份/盒）【配套器具】滴管（50支/盒）5mL刻度冷冻管（50个/盒）1.5mL离心管（50个/盒）【样品处理】猪肉样品应当避光冷藏保存。
1称取4g左右剪碎的猪肉样本装于5mL刻度冷冻管中，盖紧管盖，于90℃以上水浴锅中水浴10分钟；2冷却至常温后，取4滴煮出的溶液（尽量吸取肉汁中上清）于1.5ml离心管中，再加入4滴RAC专用PBST，充分混合，待检。
【使用步骤】测试前先完整阅读使用说明书，并将试剂板和待检样本溶液恢复至常温（20~30℃）。
♦从包装袋中取出试剂板后请尽快使用；♦用滴管吸取待检样品溶液，于加样孔中滴加4滴（约100μL），加样后开始计时；♦结果应在3~5分钟读取，其他时间判读无效；♦读取结果时，试剂板水平置于观察者正面，如上图右侧所示。
【结果判断】阴性（－）：T线（检测线，靠近加样孔一端）显色，表明样品中莱克多巴胺浓度低于5ng/mL，或不含莱克多巴胺。
阳性（＋）：T线无显色，则表明样品中莱克多巴胺浓度高于5ng/mL。
无效：未出现C线（对照线），可能是操作不当或试剂条已失效。
应再次阅读说明书，并用新的试剂板重新测试。
【注意事项】♦请勿触摸试剂板中央的白色膜面；♦请勿使用过期的试剂板；♦切勿重复使用配备的滴管，以免交叉污染；♦切勿食用配备的试剂；♦若需直接检测标准品，请用本公司提供的PBST缓冲液进行配制。
【特异性】本产品与链霉素、四环素、氯霉素、磺胺类等药物无交叉反应。
【精密度】同时用本产品和莱克多巴胺ELISA检测试剂盒对260份样品包括140份阴性样本和120份阳性样本进行检测，结果表明本产品与莱克多巴胺ELISA检测试剂盒的结果符合率为93.6％。
莱克多巴胺检测卡说明书(完整版)
莱克多巴胺（ractopamine）金标快速检测卡——（胶体金法）使用说明书【产品名称】通用名称：莱克多巴胺金标快速检测卡（胶体金法）英文名称：ractopamine汉语拼音：LaiKe DuoBaAn JinBiao KuaiSu JianCeKa【摘要】本速测卡专门用于检测动物尿样中的莱克多巴胺的快速筛查，整个检测过程只需要3-5分钟，不需要任何仪器设备，最低检测限为5ng/ml。
【检测原理】莱克多巴胺（ractopamine）是一种肾上腺受体激动剂，可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。
人食用了饲喂莱克多巴胺的禽畜产品后，残留的莱克多巴胺可对消费者的健康构成极大危害。
因此，中国政府禁止在饲料中使用莱克多巴胺来增加动物的瘦肉率。
莱克多巴胺快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测尿液中的莱克多巴胺。
根据检测卡样品测试线(T)和对照线(C)的有无来判定样品中的莱克多巴胺含量。
具有简单快速，无需特殊的仪器设备等特点，既可以在实验室进行，也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。
由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。
结果准确，饲料样品灵敏度为10ppb，组织、肉样、肝脏样品灵敏度为5ppb，准确率大于95%。
【试剂盒组成】1.莱克多巴胺快速检测卡50头份2.说明书1份3.PE手套5只【标本收集】尿样标本必须收集在洁净、干燥、不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器内。
若不能及时送检，尿样标本在2-8℃冷藏可保存24小时。
长期保存需冷冻-20℃，忌反复冻融。
【操作步骤】1、测试前必须将未开封的检测卡和待测样本进行室温平衡。
2、从铝箔袋中取出检测卡（在一小时内使用）。
3、将检测卡平放，用塑料吸管垂直滴加2-3滴无气泡样本液（约60 µL--80µL）于加样孔，开始计时。
【判定结果】检测结果应在5分钟时读取，半小时后结果判读无效；阳性：在观察孔内，若对照线显色，但检测线不显色，说明样品中莱克多巴胺的含量高于5ppb。
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莱克多巴胺快速检测试剂盒说明书
【原理】
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测猪尿和猪肝等样本中的莱克多巴胺，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的莱克多巴胺和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的莱克多巴胺含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出莱克多巴胺含量。
【试剂盒组份】
1、酶标板：8孔/条，12条/板
2、莱克多巴胺标准溶液(1ml/瓶)：0ppb、0.1ppb、0.3ppb、
0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
3、酶标记物…………………………………12ml
4、抗体工作液………………………………7ml
5、显色剂A …………………………………7 ml
6、显色剂B …………………………………7 ml
7、终止液…………………………………7 ml
8、20倍浓缩洗液……………………………50ml
9、使用说明书………………………………1 份
10、封板膜：…………………………………1张
11、封口袋：……………………………………1 个
【试剂盒技术指标】
试剂盒灵敏度：0.1ppb
样本检测下限：
尿样、血清……………………………………0.1ppb
组织……………………………………0.1ppb
饲料……………………………………10ppb
交叉反应率：
化合物名称%交叉反应性
莱克多巴胺 (100)
沙丁胺醇……………………………………<0.01
克伦特罗……………………………………<0.01
卡布特罗……………………………………<0.01
回收率：
尿样、血清……………………………95%±15%
组织………………………………95%±15%
饲料………………………………95%±15%
批间、批内变异系数：CV≤10%
【所需仪器和试剂】
所需仪器：微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器、振荡器、离心机、恒温箱、天平（感量0.01g）、
刻度移液管、微量移液器(单道20µl-200µl、
100µl-1000µl、多道250µl)
所需试剂：氢氧化钠、乙酸乙酯、浓HCl、磷酸二氢钾、乙腈、
【样本前处理】
样本处理前须知：
（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（2）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。
尿样、血清样品的处理
清亮尿样或血清直接测定，如尿样或血清浑浊须过滤或离心10min（15℃，4000r/min）直至清亮，暂不使用样本应冷冻保存，但避免反复冻融。
组织样品（包括肌肉、肝脏和肾脏）前处理（稀释倍数1）1、称2±0.05g组织，加入6ml乙腈-0.1MHCl水溶液(体
积比84:16)。
2、振荡10min,室温4000r/min以上离心10min。
3、取上清3ml，加入2ml 0.1M NaOH，加入6ml乙酸乙酯，
振荡10min，室温4000r/min 以上离心10min。
取全部
上清于50℃氮气或空气吹干。
4、加入1ml三蒸水复溶，取50µl进行分析。
饲料样品的处理（稀释倍数11）
1、称2 克饲料样品，加入2mL 1M盐酸。
2、加入18mL 双蒸去离子水，混匀，涡旋3分钟。
在摇
床震动15分钟。
3、在2000rpm下离心20分钟。
4、取出上清液加入1mL 1M 氢氧化钠，用盐酸调整pH值
至7-9 之间。
5、在2000rpm下离心20分钟，取上清液50µl进行检测。
【检测程序】
1、复温：使用前将试剂盒置于室温（20-25℃）平衡30min
以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
取出需要数
量的酶标板微孔条插入框架中，将不用的微孔条放入自
封袋，保存于2-8℃,不要冷冻；
2、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和
标准品均需做2孔平行；
3、反应：往酶标板微孔中加入标准溶液或试样液50µl/孔，
然后加入莱克多巴胺抗体工作液50µl/孔，用盖板膜封
板，37℃反应40min。
4、洗板：倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，
去除孔中液体。
加入250µl/孔稀释后洗液（将20×浓
缩洗液用蒸馏水稀释,稀释比例：1:19），轻拍，15s后
倒出孔中液体，如此重复操作共洗板5次，最后用吸水纸拍干。
5、酶标记物：加入酶标记物100µl/孔，用盖板膜封板，37℃
反应20min。
取出酶标板，如前述洗板5次；
6、显色：每孔加入A、B显色剂各50µl，轻轻振荡混匀，
37℃避光显色10min；
7、测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标
仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），测
定每孔吸光度值（OD值）。
【结果判定】
1、定性判定：
用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出样本所含莱克多巴胺浓度范围（ng/ml）。
假设样品1的吸光度值为0.313，样品2的吸光度值为1.032，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.892；0.1ppb为1.501；0.3ppb为1.175；0.9ppb为0.751；2.7ppb为0.421；8.1ppb为0.198。
则样品1的浓度范围是1.35ppb-4.05ppb；样品2的浓度范围是
0.15ppb-0.45ppb。
（再乘以相应的稀释倍数）
2、定量判定：
所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
百分吸光度值（%）＝B
×100% B0
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值
以标准品百分吸光率为纵坐标，以莱克多巴胺标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。
将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中莱克多巴胺实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。
【注意事项】
1、用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。
2、用之后立即将所有试剂放回2-8℃冰箱。
3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一
致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是ELISA测定程序
中的要点。
4、所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微
孔板。
5、室温低于20℃或试剂及标本没有回到室温（20-25℃）
会导致所有标准的OD值偏低。
6、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出
现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。
所以洗板拍
干后应立即进行下一步操作。
7、混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
8、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
9、不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引
起灵敏度、OD值的变化。
不要交换使用不同批号的盒中试剂。
10、不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的
发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
11、显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。
0标准的吸
光度值小于0.5时，表示试剂可能变质。
12、【规格】96T
13、【贮藏】2～8℃，避光保存
本说明书从广州瑞森生物摘录整理。