如何使用莱克多巴胺快速检测试剂盒

莱克多巴胺快速检测试剂盒说明书

【原理】

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测猪尿和猪肝等样本中的莱克多巴胺，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的莱克多巴胺和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的莱克多巴胺含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出莱克多巴胺含量。

【试剂盒组份】

1、酶标板：8孔/条，12条/板

2、莱克多巴胺标准溶液(1ml/瓶)：0ppb、0.1ppb、0.3ppb、

0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb

3、酶标记物…………………………………12ml

4、抗体工作液………………………………7ml

5、显色剂A …………………………………7 ml

6、显色剂B …………………………………7 ml

7、终止液…………………………………7 ml

8、20倍浓缩洗液……………………………50ml

9、使用说明书………………………………1 份

10、封板膜：…………………………………1张

11、封口袋：……………………………………1 个

【试剂盒技术指标】

试剂盒灵敏度：0.1ppb

样本检测下限：

尿样、血清……………………………………0.1ppb

组织……………………………………0.1ppb

饲料……………………………………10ppb

交叉反应率：

化合物名称%交叉反应性

莱克多巴胺 (100)

沙丁胺醇……………………………………<0.01

克伦特罗……………………………………<0.01

卡布特罗……………………………………<0.01

回收率：

尿样、血清……………………………95%±15%

组织………………………………95%±15%

饲料………………………………95%±15%

批间、批内变异系数：CV≤10%

【所需仪器和试剂】

所需仪器：微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器、振荡器、离心机、恒温箱、天平（感量0.01g）、

刻度移液管、微量移液器(单道20µl-200µl、

100µl-1000µl、多道250µl)

所需试剂：氢氧化钠、乙酸乙酯、浓HCl、磷酸二氢钾、乙腈、

【样本前处理】

样本处理前须知：

（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

（2）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

尿样、血清样品的处理

清亮尿样或血清直接测定，如尿样或血清浑浊须过滤或离心10min（15℃，4000r/min）直至清亮，暂不使用样本应冷冻保存，但避免反复冻融。

组织样品（包括肌肉、肝脏和肾脏）前处理（稀释倍数1）1、称2±0.05g组织，加入6ml乙腈-0.1MHCl水溶液(体

积比84:16)。

2、振荡10min,室温4000r/min以上离心10min。

3、取上清3ml，加入2ml 0.1M NaOH，加入6ml乙酸乙酯，

振荡10min，室温4000r/min 以上离心10min。取全部

上清于50℃氮气或空气吹干。

4、加入1ml三蒸水复溶，取50µl进行分析。

饲料样品的处理（稀释倍数11）

1、称2 克饲料样品，加入2mL 1M盐酸。

2、加入18mL 双蒸去离子水，混匀，涡旋3分钟。在摇

床震动15分钟。

3、在2000rpm下离心20分钟。

4、取出上清液加入1mL 1M 氢氧化钠，用盐酸调整pH值

至7-9 之间。

5、在2000rpm下离心20分钟，取上清液50µl进行检测。【检测程序】

1、复温：使用前将试剂盒置于室温（20-25℃）平衡30min

以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数

量的酶标板微孔条插入框架中，将不用的微孔条放入自

封袋，保存于2-8℃,不要冷冻；

2、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和

标准品均需做2孔平行；

3、反应：往酶标板微孔中加入标准溶液或试样液50µl/孔，

然后加入莱克多巴胺抗体工作液50µl/孔，用盖板膜封

板，37℃反应40min。

4、洗板：倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，

去除孔中液体。加入250µl/孔稀释后洗液（将20×浓

缩洗液用蒸馏水稀释,稀释比例：1:19），轻拍，15s后

倒出孔中液体，如此重复操作共洗板5次，最后用吸水纸拍干。

5、酶标记物：加入酶标记物100µl/孔，用盖板膜封板，37℃

反应20min。取出酶标板，如前述洗板5次；

6、显色：每孔加入A、B显色剂各50µl，轻轻振荡混匀，

37℃避光显色10min；

7、测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标

仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），测

定每孔吸光度值（OD值）。

【结果判定】

1、定性判定：

用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出样本所含莱克多巴胺浓度范围（ng/ml）。假设样品1的吸光度值为0.313，样品2的吸光度值为1.032，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.892；0.1ppb为1.501；0.3ppb为1.175；0.9ppb为0.751；2.7ppb为0.421；8.1ppb为0.198。则样品1的浓度范围是1.35ppb-4.05ppb；样品2的浓度范围是

0.15ppb-0.45ppb。（再乘以相应的稀释倍数）

2、定量判定：

所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。

百分吸光度值（%）＝B

×100% B0

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值

以标准品百分吸光率为纵坐标，以莱克多巴胺标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中莱克多巴胺实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。

【注意事项】

1、用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。

2、用之后立即将所有试剂放回2-8℃冰箱。

3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一

致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是ELISA测定程序

中的要点。

4、所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微

孔板。

5、室温低于20℃或试剂及标本没有回到室温（20-25℃）

会导致所有标准的OD值偏低。

6、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出

现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍

干后应立即进行下一步操作。7、混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。

8、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

9、不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引

起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。

10、不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的

发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。11、显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸

光度值小于0.5时，表示试剂可能变质。

12、【规格】96T

13、【贮藏】2～8℃，避光保存

本说明书从广州瑞森生物摘录整理。