最新免疫浊度测定及其临床应用
免疫比浊法检验血浆D-二聚体在心脑血管疾病中的临床价值体会
·135·大 医 生D O C T O R2020年第23期作者简介：陈晓波，本科，中级检验师，研究方向：临床免疫学检验。
通信作者：唐海妹，本科，副主任医师，研究方向：心血管疾病，E-mail：******************。
免疫比浊法检验血浆D-二聚体在心脑血管疾病中的临床价值体会陈晓波 唐海妹 （如东县中医院，江苏南通 226400）摘要：目的 探究免疫比浊法检测血浆D-二聚体水平在心脑血管疾病中的临床应用价值。
方法 选取2019年11月至2020年9月如东县中医院收治的150例心脑血管疾病患者作为研究对象。
共分为冠心病组、急性心肌梗死组、脑梗死组，每组50例。
另选取同期在如东县中医院体检的50例健康者作为对照组。
三组患者均在如东县中医院接受治疗，对四组受试者均以免疫比浊法进行血浆D-二聚体的检验，对比三组患者在治疗前及治疗后的血浆D-二聚体水平，同时比较三组患者治疗前后与对照组受试者的血浆D-二聚体水平。
结果 与对照组相比较，三组患者治疗前及治疗后的血浆D-二聚体水平均明显高于对照组（P ＜0.05）；但治疗后，三组患者的血浆D-二聚体水平与治疗前比较均明显降低（P ＜0.05）。
结论 以免疫比浊法检测血浆D-二聚体水平，有着较高的临床应用价值，可用于疾病诊断参考。
关键词：血浆D-二聚体；免疫比浊法；心脑血管疾病Clinical Value of Immunoturbidimetry in Detection of Plasma D-dimer in Cardiovascular and Cerebrovascular DiseasesCHEN Xiaobo TANG Haimei（Rudong Hospital of Traditional Chinese Medicine，Nantong，Jiangsu 226400，China）Abstract：Objective To explore the clinical application value of immunoturbidimetry in the detection of plasma D-dimer in cardiovascular and cerebrovascular diseases. Methods From November 2019 to September 2020，150 patients with cardiovascular and cerebrovascular diseases in Rudong Hospital of Traditional Chinese Medicine were selected as the research objects. The patients were divided into coronary heart disease group，acute myocardial infarction group and cerebral infarction group with 50 cases in each group. Another 50 healthy people in Rudong Hospital of Traditional Chinese Medicine in the same period of time were selected as the control group. Three groups of patients were treated in Rudong Hospital of Traditional Chinese medicine. The Four groups of subjects were tested for plasma D-dimer by immunoturbidimetric method. The plasma D-dimer levels of the three groups of patients before and after treatment were compared，and the plasma D-dimer levels of the three groups of patients before and after treatment were compared with those of the control group. Results The plasma D-dimer levels of the three groups of patients were significantly lower than before treatment（P ＜0.05）；compared with the control group，the plasma D-dimer levels of the three groups of patients before and after treatment were significantly higher than those of the control group（P ＜0.05）. Conclusion The immunoturbidimetric method for detecting plasma D-dimer levels has high clinical application value and can be used as a reference for disease diagnosis.Keywords：plasma D-dimer；immunoturbidimetry；cardiovascular and cerebrovascular diseases在机体内发生纤维蛋白降解之后，血浆内就会产生一种特异性物质，即为D-二聚体，在血栓的形成中，纤维蛋白发挥了重要作用，简单来说就是纤维蛋白的沉淀、聚集，使得血栓逐渐形成[1-2]。
免疫比浊法检测免疫球蛋白
浊度产生与测量原理
浊度产生
浊度测量
当抗原与抗体发生特异性结合时，形 成的抗原-抗体复合物会在反应体系 中产生浊度，浊度的高低与复合物的 数量成正比。
通过测量反应体系的浊度变化，可以 间接推断出抗原或抗体的含量。常用 的浊度测量方法包括透射比浊法和散 射比浊法。其中，透射比浊法是通过 测量光线通过反应体系后的透射光强 度来计算浊度；散射比浊法则是通过 测量光线在反应体系中散射的光强度 来计算浊度。
作用机制
不同类型的免疫球蛋白在机体免疫应答中发挥不同作用。例如，IgG是血清中主要的免疫球蛋白，参与体液免疫 ；IgA主要分布于粘膜表面，参与粘膜免疫；IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是早期体液免疫应答中产生的主 要抗体；IgD的生物学功能尚不完全清楚，可能与B细胞活化有关；IgE则与过敏反应相关。
疫苗接种效果评估
接种疫苗后，体内会产生相应的免疫球蛋白，通过检测可以评估 疫苗接种的效果。
健康状况评估
免疫球蛋白水平可以反映机体的免疫状态，通过检测可以评估个 体的健康状况。
个性化健康管理
根据免疫球蛋白的检测结果，可以为个体提供个性化的健康管理 建议，如饮食、运动等方面的调整。
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Chapter
在疾病诊断中的应用
01
02
03
感染性疾病
通过检测免疫球蛋白水平 ，可以辅助诊断各种感染 性疾病，如病毒、细菌和 寄生虫感染。
自身免疫性疾病
免疫球蛋白的异常表达与 多种自身免疫性疾病相关 ，如类风湿性关节炎、系 统性红斑狼疮等。
肿瘤
某些肿瘤会导致免疫球蛋 白水平异常，通过检测可 以辅助肿瘤的诊断和预后 评估。
试剂选择与配制
选择高质量的免疫比浊法检测试 剂盒，确保试剂的稳定性和准确
自动化分析-(免疫比浊)
自动化免疫比浊
➢免疫比浊分析技术发展
两测定Biblioteka 原抗体形成后的阶段 个 测定抗原抗体结合的峰值
散射(终点)比浊
阶
段
速率散射比浊
散射比浊法:
当一束光
在光源的光路方向（50-960）
免 疫 比 浊
线通过溶 液受到光 散射和光 吸收两个
角的方向上测量透射光强度 和被检测溶液中微粒浓度关 系的方法。
法
因素的影
➢对抗原过量进行阈值限定 先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。
三、速率散射比浊分析
三、速率散射比浊分析 （一）基本原理
— 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。
— 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。
平光线
散射光θ
透射光
检测器 检测器
光源 透镜 滤光片
散射比浊、透射比浊光路图
实验要求（了解）
❖ 溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm) ❖ 溶液中形成的复合物分子要足够多 ❖ 控制抗原抗体反应的温度和时间 ❖ 加促凝剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间 ❖ 应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量 ❖ 将标准品稀释至少5个浓度测定，以吸光度值(A)
Rayleigh原理：即散射光的强度与复合物的量 呈正比，与散射光的夹角呈正比，与波长呈反 比。
在散射比浊中，增加抗原-抗体复合物的体积， 减小入射光的波长，扩大散射光夹角等因素， 均可增加检测的敏感度。
（二）反应物含量与散射浊度
Heidelberger曲线
免疫浊度分析实验报告
免疫浊度分析实验报告引言免疫浊度分析是一种常用的免疫学实验技术，其原理是通过测定免疫反应产生的溶胶与胶体的聚集物浓度，进而对生物样本中的目标物质进行定量分析。
本实验旨在通过免疫浊度分析，检测目标抗原的含量，为进一步研究提供数据支持。
实验方法材料准备1. 目标抗原样本（待测物质）2. 酶标记的一抗（一抗：二抗复合物，用于与目标抗原结合）3. 二抗（用于与酶标记的一抗结合）4. 酶标记物（如辣根过氧化物酶HRP）5. 显色底物（如TMB）实验步骤1. 将待测物质加入特定的孔板孔中，使其固定在孔板表面。
2. 加入酶标记的一抗，与待测物质发生免疫反应，形成一抗：二抗复合物。
3. 加入二抗，与酶标记的一抗结合，形成复合物。
4. 加入显色底物，被酶标记的一抗催化反应，产生显色产物。
5. 使用光密度计测量反应产物的光密度，即溶胶与胶体的聚集物浓度，从而定量分析目标物质的含量。
实验结果通过光密度计测量，得到各个孔位的测量结果如下表所示：孔位光密度1 0.4322 0.6753 0.5124 0.7215 0.634根据测量结果，根据已知样品的浓度与其对应的光密度，可以绘制标准曲线。
进一步通过比较待测样品的光密度与标准曲线进行定量分析，得到待测物质的含量。
结论本实验通过免疫浊度分析技术，成功检测了目标抗原的含量并进行了定量分析。
根据测量结果绘制的标准曲线，可以准确计算待测物质的浓度。
该方法具有灵敏度高、结果可靠等优点，并且较常用的免疫学方法更为简便快速。
讨论与展望在实验中，免疫浊度分析技术在目标抗原检测中发挥了重要作用。
然而，由于实验原理和机制的复杂性，仍然存在一些局限性和不足之处。
在未来的研究中，我们可以进一步优化实验方法，提高技术的准确性和稳定性，以便更好地应用于生物医学领域的疾病诊断和治疗。
致谢感谢实验室的老师和同学们对本次实验的支持和帮助。
参考文献[1] Smith, D., & Johnson, M. (2010). A guide to immunoblotting. In S. Harlow & D. Lane (Eds.), Antibodies: A laboratory manual (p. 305). ColdSpring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press. [2] Zhang, Y., & Johnson, M. (2018). Theory and application of immunochromatographic assays. Austin Immunol, 3(1), 1013.。
免疫浊度测定终点法和速率法
免疫浊度测定终点法和速率法说起免疫浊度测定，可能很多人听了会一脸懵逼，觉得这跟自己有什么关系。
其实呀，这种测定方法在很多领域都非常重要，尤其是在临床诊断和环境监测中。
免疫浊度测定有两种常见的测定方式，一种叫终点法，一种叫速率法。
今天就给大家聊聊这两种方法，听起来复杂，实则简单，只要你能听懂我接下来要讲的这些，搞懂它们就不再是难事了。
咱们得搞明白“免疫浊度”到底是什么。
简单来说，免疫浊度测定是利用抗原抗体反应的原理来测量样品中的某些物质含量。
把这个反应弄成一个个“雪球”，雪球越来越大，浑浊度就越来越高。
这个浑浊度呢，就是我们需要测量的“免疫浊度”，通过它可以判断样品中到底有多少这种物质。
听起来是不是有点高大上？但其实原理就是这么简单：越多物质，越浑浊，反应越强烈。
接着咱们聊聊免疫浊度测定的两种方法。
终点法和速率法其实就是测量浑浊度变化的两个不同角度。
先说终点法，顾名思义，这就是让你等到反应完全完成了再测量一次。
换句话说，就是给反应充足的时间，让抗原抗体之间的结合完全发生，形成了最大量的沉淀，这时候的浑浊度就能反映出样品中的物质浓度。
这个过程吧，有点像做饭，得等米饭蒸熟了，才能判断好不好吃。
终点法的优势就是准确，反应完成后，能得到比较稳定的数据。
不过，也有个小问题，那就是整个反应需要时间，得等一段时间才能得到结果。
所以，如果急需知道结果的话，可能就有点拖沓了。
再说速率法，这个和终点法相比，就像是个急性子，做事迅速不拖拉。
速率法是通过测量反应初期的变化速度来预测最终的浑浊度。
简单来说，反应一开始，浑浊度的变化比较快，这时候我们就测量这个变化的速度，结合已知的反应条件，就能大致推测出样品的浓度。
速率法的好处就在于快速，反应刚开始时测量，几分钟就能出结果，特别适合那些急需结果的场合。
可是，速率法也有它的缺点，那就是准确性稍差，毕竟它并没有等到反应完全结束，所以结果的波动可能会比终点法大一些。
大家一定会想，这两种方法，哪个更好呢？其实吧，关键看你需求啥。
《免疫比浊分析》课件
案例三
总结词
辅助诊断、判断病情
详细描述
自身免疫性疾病是一类复杂的疾病，免疫比 浊分析可以检测出自身抗体，辅助医生进行 诊断和判断病情。通过检测自身抗体水平， 有助于了解疾病的活动度和治疗效果。
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06
案例分享：免疫比浊分析在疾病 诊断中的应用
案例一
总结词
准确、快速、敏感
详细描述
免疫比浊分析在乙肝病毒检测中表现出高准确性和高敏感性，能够快速检测出乙肝病毒 的抗原和抗体，为乙肝的诊断和治疗提供了有力支持。
案例二
总结词
早期发现、监测病情
VS
详细描述
免疫比浊分析用于检测肿瘤标志物，有助 于肿瘤的早期发现和病情监测。通过定期 检测肿瘤标志物水平，可以及时发现肿瘤 复发或转移，为制定治疗方案提供依据。
结果解读
根据实验结果，结合专业知识，对结果进行解读 和解释，为临床诊断和治疗提供依据。
03
免疫比浊分析的仪器与试剂
仪器介绍
仪器类型
介绍免疫比浊分析中常用的仪器 类型，如分光光度计、全自动生 化分析仪等。
工作原理
阐述仪器的工作原理，如光线通 过溶液时发生散射、吸收等现象 ，用于测量物质浓度。
仪器参数
研究进展与展望
• 自动化程度提高：仪器设备的自 动化程度不断提高，减少了人为 误差和操作时间。
研究进展与展望
标准化和规范化
建立统一的检测标准和方法，提高不同仪器 和试剂间的可比性。
智能化发展
结合人工智能、大数据等技术，实现检测结 果的自动分析和解读。
应用拓展
拓展免疫比浊分析在临床诊断、生物医药等 领域的应用范围。
实验注意事项
仪器维护
免疫浊度技术
范
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Edited by E. Dalla Dea ESTS
欢迎来到
速率散射王国
Edited by E. Dalla Dea ESTS
IMMAGE
Immunochemistry System
—在检测中抗体结合抗原的能力可达到相当于正常 血清的50倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与 抗体的结合。 对抗原过量进行阈值限定 —先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。
Edited by E. Dalla Dea ESTS
毒品
Edited by E. Dalla Dea ESTS
实验 免疫浊度技术
免疫检测的基础—抗原抗体间的特异性反应 手工操作 免疫比浊分析技术发展
测定抗原抗体形成后的阶段 散射(终点)比浊
Edited by E. Dalla Dea ESTS
自动化分析
两 个 阶 段
测定抗原抗体结合的峰值 速率散射比浊
实验 免疫浊度技术
实验 免疫浊度技术
免疫反应进展
1897年
1905年 1946年 1965年 1966年
免疫浊度法的原理与分类
免疫浊度法的原理与分类
免疫浊度法（Immunoturbidimetry）是一种常用的免疫分析方法，用于测定体液样品中的特定物质浓度。
其原理基于免疫反应中抗原与抗体结合形成免疫复合物的性质。
免疫浊度法分为两类：直接测定法和间接测定法。
1. 直接测定法：
直接测定法是指将已知浓度的标准品或标准曲线与待测样品中的抗原免疫反应，测定其复合物的浓度。
该方法的测定过程通常包括以下步骤：
a. 准备含有抗原的标准品溶液，根据其浓度制备不同浓度的标准品系列。
b. 将标准品系列和待测样品分别与相应的抗体试剂混合，使抗原与抗体发生特异性结合反应生成免疫复合物。
c. 混合物产生的免疫复合物会在一定时间内沉淀，形成混浊的溶液。
浊度的变化与抗原的浓度成正比。
d. 通过比较待测样品和标准品系列的浊度差异，确定抗原的浓度。
2. 间接测定法：
间接测定法是指通过测定抗原与抗体结合后引起的抗体多聚体或其他化学反应产生的光学性质的变化，来间接测定抗原的浓度。
该方法的测定过程通常包括以下步骤：
a. 准备含有抗原的标准品溶液，根据其浓度制备不同浓度的标准品系列。
b. 将标准品系列和待测样品分别与相应的抗体试剂混合，使抗原与抗体发生特异性结合反应。
c. 添加溶液或试剂，使抗体结合引起的免疫反应产生一定光学性质的变化，如颜色、荧光等。
d. 使用光学方法，测定光学性质变化的程度或强度与抗原浓度的相关性，并将待测样品的测定结果与标准品系列进行比较，确定抗原浓度。
通过免疫浊度法，可以快速、准确地测定体液样品中特定物质的浓度，广泛应用于临床诊断和实验室研究。
免疫学实验 免疫比浊(免疫球蛋白的测定)
3 免疫胶乳比浊法
原理
选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗 粒，吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则 发生凝集，单个胶乳颗粒在入射光波长之 内，光线可透过，当两个胶乳凝集时，则 使透过光减少。这种减少的程度与胶乳凝 集成正比，与抗原量成正比。
（a）带抗体的胶乳在波长之内可透过光线； （b）结合后，则形成光线衰减
2. 海德堡（heidelberger）曲线理 论
2 抗体的质量
（1）特异性高 （2）效价高 （3）亲和力高 （4）抗血清来源
3 抗原抗体反应的溶液
• pH 6.5~8.5
• 电解质 离子强度、种类（磷酸盐缓冲液）
4 增浊剂的使用
• PEG、tween-20等非离子型亲水 剂
• 作用：消除蛋白质分子周围的电子 云和水化层，促进抗原、抗体分子 靠近，结合形成大分子复合物。
（二）类型
1. 透射免疫比浊法 2. 散射免疫比浊法 3. 免疫胶乳比浊法
1 透射免疫比浊法
原理：
抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物 (IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复 合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减 少，免疫复合物量越多，透射光越少，即光线 吸收越多，可用吸光度表示。吸光度和复合物 的量成正比，当抗体量固定时，与待检抗原量 成正比。用抗原标准品建立标准曲线，可测出 待检抗原含量。
•
样本管吸光度
• 浓度＝————————×校准液浓度（g/L）
•
校管吸光度
• 结果及讨论
– 检测报告 – 检测意义
实验二、免疫浊度测定 ——免疫球蛋白检测
实验步骤见说明书 IgG9.77g/L IgA1.72g/L IgM1.37g/L
沉淀反应
微生物与免疫教研室
常用的临床免疫学检测技术【可编辑全文】
可编辑修改精选全文完整版常用的临床免疫学检测技术第一讲免疫浊度技术一、免疫浊度法基本原理免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。
二、免疫比浊法的特点：1、自动化免疫分析稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高（CV<5%)，干扰因素少，结果判断更加客观、准确，也便于进行室内及室间质量控制。
2、自动化免疫分析快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约大量人力物力，利于大批量样品的处理。
3、自动化免疫分析能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。
4、自动化免疫分析可利用多道计数器、测光仪，同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目，血清用量少，具有明显的应用优势。
三、免疫浊度法分类（一）透射光免疫浊度法透射光免疫浊度法是个极简便的方法，测定方式是测定入射光因反射、吸收或散射后的衰减，读数以吸收光单位（A）或OD表示，这种A值反映了入射光和透射光的比率。
（二）散射比浊法散射比浊法应用越来越多，且有替代其他免疫定量法的趋势。
散射比浊的原理是根据雷利(Rayleigh)公式提出的，当复合物较小时（<3*10）呈全透射，透射与散射相当。
当复合物大于入射光波的1/20时，形成不对称前向散射，在90o以前的角度测量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表复合物的量。
1、终点散射比浊法2、速率散射比浊法速率法的灵敏度与特异性都优于终点法，前者的灵敏度比后者高出3个数量级之多，但终点法稳定性好。
所谓速率，是在某单位时间内形成大于3*10以上的复合物量（不是积累数），当仪器测定到某一时间单位内形成的速率下降时，即出现速率峰，该峰值的高低，即代表抗原的量。
速率散射比浊法有三大特点：1、时间快，一般在30-60s之内就可完成测试；2、比较准确，因其测定形成速率，抗原多，速率快；3、节省试剂。
免疫比浊检验技术原理与进展
新型免疫比浊法研究动态
纳米颗粒增强免疫比浊法
01
利用纳米颗粒的高比表面积和光学性质，提高抗原抗体复合物
的浊度变化，从而提高检测灵敏度。
均相免疫比浊法
02
在反应体系中直接加入抗原抗体复合物，通过浊度变化检测待
测物，无需分离步骤，简化实验操作。
多重免疫比浊法
03
同时检测多个目标物，提高检测通量和效率，满足临床多样化
需求。
存在问题与挑战分析
抗原抗体复合物稳定性
复合物在反应体系中的稳定性直接影响浊度变化的准确性和可重复性，需要优化复合物制备和保 存条件。
非特异性干扰
血清等样本中的非特异性物质可能干扰免疫比浊反应，导致结果误差，需要采取相应措施降低干 扰。
自动化与标准化
当前免疫比浊法操作仍较为繁琐，需要进一步提高自动化程度，同时推动标准化进程，以确保结 果的准确性和可比性。
肿瘤标志物检测中的应用
01
肝癌
通过检测甲胎蛋白（AFP）等肿 瘤标志物，可辅助诊断肝癌及判 断其预后。
卵巢癌
02
03
前列腺癌
免疫比浊法可检测癌抗原125 （CA125），用于卵巢癌的诊断 和病情监测。
通过检测前列腺特异性抗原 （PSA），有助于前列腺癌的早 期发现和诊断。
05 免疫比浊法研究进展及挑 战
探讨了免疫比浊检验技术在临床实验室中的应用，如特定蛋白的 测定、药物监测等，并强调了质量控制的重要性和实施方法。
对未来发展趋势的展望
自动化与智能化
多项目联合检测
随着科技的进步，未来免疫比浊检验技术 将更加自动化和智能化，提高检测效率和 准确性。
开发能够同时检测多个项目的免疫比浊试 剂盒，以满足临床实验室对于高通量、高 效率的检测需求。
1.2免疫浊度法
1.2免疫浊度法比浊法中文名称：比浊法英文名称：turbidimetry定义：悬浮颗粒在液体中造成透射光的减弱，减弱的程度与悬浮颗粒的量相关，据此可定量测定物质在溶液中呈悬浮状态时浓度的方法。
定义又称浊度测定法。
为测量透过悬浮质点介质的光强度来确定悬浮物质浓度的方法，这是一种光散射测量技术。
运用本法主要是用于测定能形成悬浮体的沉淀物质,例如微量磷、硫、氯和钙等的测定,生物碱沉淀试剂形成的混浊也可用此法测定。
这是根据悬浮体的透射光或散射光的强度以测定物质组分含量的一种分析方法。
当光线通过一混浊溶液时,因悬浮体选择地吸收了一部分光能,并且悬浮体向各个方面散射了另一部分光线,减弱了透过光线的强度。
在水质监测和管理过程中，比浊法常用于测量饮用水、工业用水、废水的透明度；也用于测量空气及其他各种气体中悬浮固体的含量，是空气和水污染研究的一种工具。
在酿造工业中，比浊法常用于各种饮料澄清过程的控制和过滤过程的监控。
在分析化学上，可通过生成悬浮沉淀的反应产物来测定某些元素的浓度,例如,通过生成硫酸钡悬浮物来测定Ba2+ 或SO2-,以及在煤、焦炭、油、橡胶中的总硫量；通过生成硫化银和氯化银悬浮物来测定Ag+或Cl-；在容量分析中,浊度测量也可用于确定滴定终点，如用钙盐滴定氟化物、用银盐滴定溴化物、用钡盐滴定硫酸盐等。
在生物化学中，比浊法广泛用于测定液体食品中细菌的生长量及氨基酸、维生素和抗生素等。
根据悬浮体系中粒子的沉降速度与其半径的平方成正比的原理，比浊法可用于不同大小粒子沉降速度的监测和粒子大小的分类。
分析过程当光束通过一含有悬浮质点的介质时，由于悬浮质点对光的散射作用和选择性的吸收，使透射光的强度减弱。
在比浊法中，透光度和悬浮物质浓度的关系类似于朗伯－比尔定律（见紫外-可见分光光度法）的数学式：数学式式中s为浊光度（或浊率）,表示由于悬浮物的散射作用而引起的光强度衰减;I0和I分别为入射光强度（通过纯溶剂）和透射光强度(通过混浊样品)；b为光程长度；c为悬浮质点的浓度；K为常数，有时又叫浊度系数,其值与粒子的大小、形状、入射光的波长、悬浮物和介质的折射率有关。
免疫浊度法检测血清β2微球蛋白在罗氏全自动生化分析仪上的应用评价
免疫浊度法检测血清β2微球蛋白在罗氏全自动生化分析仪上的应用评价席金瓯【期刊名称】《医疗卫生装备》【年(卷),期】2011(032)011【摘要】目的:对免疫浊度法测定血清β2微球蛋白(β2-MG)进行性能评价,以确定其分析性能是否符合实验室应用的要求.方法:在罗氏全自动生化分析仪上对免疫浊度法测定血清,β2微球蛋白(β2-MG)进行了灵敏度评价、精密度评价及抗干扰实验.结果:免疫浊度法测定p2-MG批内平均变异系数(CV)为1.74%,批间平均CV为2.79%,平均回收率为99.0%.血红蛋白(Hb)在2 g/L以下对测定结果无干扰.三酰甘油在(TG)4.5 mmol/L以下对测定结果无干扰.与日立7170全自动生化仪的免疫比浊法比较有良好的相关性,Y=0.904X+0.18,γ=0.923 (P<0.01).结论:免疫浊度法测定血清β2-MG具有较高的灵敏度和精密度,适于大批量及临床常规使用.【总页数】2页(P84-85)【作者】席金瓯【作者单位】430070 武汉湖北省妇幼保健院检验科【正文语种】中文【中图分类】R446.6;R552【相关文献】1.罗氏ModularDDP全自动生化分析仪检测血清铁的方法学评价及参考区间建立[J], 廖君群;毕小云2.罗氏 Modular P800全自动生化分析仪检测电解质的临床应用评价 [J], 王雁勇;曹辉彩;陈妹红;戴冬雪;马雅文;史贺娅3.免疫浊度法检测血清胱抑素C在罗氏全自动生化分析仪上的应用评价 [J], 席金瓯4.罗氏E601电化学发光免疫分析仪在检测心肌损伤血清标志物方面的应用 [J], 完燕华; 易小兵; 贾晓丹5.罗氏cobas 702全自动生化分析仪血清指数在生化检测中的应用探索 [J], 田爽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫浊度法的临床应用
免疫浊度法的临床应用免疫浊度法是一种常用的生物化学分析方法，主要用于定量测定溶液中特定物质的浓度。
它基于抗原与抗体结合后形成机械稳定的免疫复合物，在一定波长下测定复合物的浊度来推断样品中抗原或抗体的含量。
这种方法在临床诊断中具有广泛的应用，本文将从原理、优势以及具体应用方面来探讨免疫浊度法在临床中的重要性。
原理及优势免疫浊度法的原理在于对样品中特定抗原与抗体结合后形成复合物的特性进行测定。
当抗原与抗体相互结合后，形成可被光束散射的颗粒团簇，从而造成溶液的浊度增加。
利用光度计测定免疫复合物的浊度，可以间接推断抗原或抗体在样品中的浓度。
这种方法不仅操作简单、快速，还具有高灵敏度和特异性，可以用于各种类型的生物样本的检测。
在临床应用中，免疫浊度法具有许多优势。
首先，该方法对于微量物质的检测非常敏感，可以达到低至微克/毫升的检测下限。
其次，免疫浊度法不需要昂贵的仪器设备，只需要常见的光度计即可完成测定，成本较低。
此外，免疫浊度法还可以实现高通量和自动化操作，适用于临床实验室中大批量样本的检测，提高工作效率。
临床应用免疫浊度法在临床诊断中的应用广泛。
首先，该方法可以用于各类感染病原体的检测。
例如，流感病毒、结核杆菌等病原体的快速检测就常采用免疫浊度法。
通过测定患者样本中特定抗体或抗原的浓度，可以快速筛查感染情况，为临床诊断提供重要参考。
其次，免疫浊度法也常用于肿瘤标志物的检测。
肿瘤标志物的检测是癌症早期筛查的重要手段，通过测定患者血清或尿液中特定肿瘤标志物的浓度，可以及早发现潜在的肿瘤病变。
免疫浊度法具有灵敏度高、准确性好的特点，适用于各类肿瘤标志物的检测。
此外，免疫浊度法还可以用于免疫药物浓度的监测。
在临床治疗中，一些药物需要监测其在体内的浓度，以确保治疗效果和安全性。
免疫浊度法可以针对药物与其代谢产物之间的特异性反应，测定样本中药物的浓度，为临床用药提供指导。
总结免疫浊度法作为一种常见的生物化学分析方法，在临床中有着重要的应用价值。
免疫浊度实验报告处理
免疫浊度实验报告处理引言免疫浊度实验是一种常见的免疫学实验方法，它通过测定样品的浊度来评估免疫反应的程度。
免疫反应的浊度与抗原-抗体反应的强度成正相关，因此测定免疫浊度可以为科研人员提供重要的实验数据。
本实验报告将介绍免疫浊度实验的原理、实验步骤以及数据处理方法。
实验原理免疫浊度实验的原理主要涉及两个方面：抗原-抗体反应和浊度测定。
1. 抗原-抗体反应：在实验中，我们通常将抗原与抗体进行反应。
当抗原与抗体结合时，会产生可见的免疫沉淀，导致溶液变浑浊。
抗原-抗体结合的强度与免疫沉淀的量成正相关。
2. 浊度测定：浑浊溶液的浊度可以通过光学密度测定来评估。
在实验中，我们通常使用光谱分析仪器或光度计来测定样品的光学密度。
光学密度越高，说明溶液越浑浊。
实验步骤1. 制备样品：首先，准备需要检测浊度的样品。
根据实验设计的不同，可以是生物组织、细胞培养物、血清或其他含抗原的溶液。
2. 免疫反应：将样品与相应的抗体进行免疫反应。
反应时间和温度需要根据实验要求来确定。
3. 溶解和混匀：通过溶解、混匀等操作，使免疫沉淀均匀分布在溶液中。
4. 测定浊度：使用光学密度测定仪器对样品进行测定。
按照实验设计的要求选择合适的波长进行测量。
5. 实验重复：为了保证实验结果的可靠性，应该重复实验，并计算平均浊度值。
数据处理在免疫浊度实验中，我们通常需要对数据进行处理和分析来得出有意义的结果。
以下是一些常见的数据处理方法：1. 平均浊度值计算：根据进行的多次实验测定值，计算平均浊度值。
这样可以减小误差，并提高结果的可信度。
2. 统计学分析：使用适当的统计方法对测定值进行分析，比如方差分析、t检验等。
这可以帮助确定结果之间是否存在显著差异。
3. 曲线拟合：如果实验中存在多个浓度的样品，可以通过对浊度与浓度之间的关系进行曲线拟合，得出相关的方程式。
这种方法可以帮助进一步推断样品的浓度。
4. 图表展示：将测定结果以图表形式展示出来，有助于直观理解实验结果。
免疫比浊法原理
免疫比浊法原理免疫比浊法是一种常用的免疫学实验方法，它通过测定抗原与抗体相互作用后形成的免疫复合物的光学密度来定量测定抗原或抗体的含量。
该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，被广泛应用于临床诊断、生物医药研究等领域。
本文将详细介绍免疫比浊法的原理及其应用。
免疫比浊法的原理主要是利用抗原与抗体结合后形成的免疫复合物对光的散射作用来定量测定抗原或抗体的含量。
当抗原与抗体结合后，形成的免疫复合物会使溶液的透光性降低，导致溶液的浑浊度增加。
通过测定溶液的光学密度，就可以间接反映出抗原或抗体的含量。
免疫比浊法可以用于测定血清中的抗体含量、细胞表面抗原的表达水平等。
在进行免疫比浊法实验时，首先需要将待测样品与特异性抗体充分混合，使其发生免疫反应。
随后，通过离心等方法将免疫复合物沉淀下来，去除未结合的抗体。
然后，测定上清液的光学密度，利用标准曲线来计算出待测样品中抗原或抗体的含量。
需要注意的是，免疫比浊法在进行实验时需要严格控制实验条件，确保实验结果的准确性。
免疫比浊法具有许多优点，首先，它的灵敏度高，可以检测到极低浓度的抗原或抗体。
其次，该方法的特异性强，可以准确地区分不同的抗原或抗体。
此外，免疫比浊法操作简便，不需要昂贵的仪器设备，适用于大规模样品的检测。
因此，免疫比浊法被广泛应用于临床诊断、生物医药研究等领域。
总之，免疫比浊法是一种重要的免疫学实验方法，它通过测定免疫复合物的光学密度来定量测定抗原或抗体的含量。
该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，被广泛应用于临床诊断、生物医药研究等领域。
希望本文对免疫比浊法的原理及应用有所帮助，欢迎批评指正。
实验十三 免疫浊度试验
医学免疫学实验指导实验十三免疫浊度试验由长沙达尔锋生物科技有限公司整理【文章介绍】实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。
BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。
BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。
BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。
【实验目的】掌握免疫浊度测定的原理，熟悉其操作方法，了解其应用及意义。
【实验原理】抗原和抗体在液相中反应，所形成的免疫复合物使液相出现浊度，复合物的量与浊度呈正相关。
这种浊度可以反射、散射和吸收入射的光线，使入射光衰减，因此可通过测定透射光衰减（以A值表示）或散射光强度来检测抗原抗体反应。
本实验以常用透射比浊法检测人血清IgG为例。
在反应系统中IgG抗体过量时，所形成的免疫复合物与血清IgG量呈正相关，而形成的浊度大小与入射光的衰减呈正相关，因此测定A值反映液相中的抗原量，通过参照标准曲线或标准品数值的计算，即可得知待测血清中IgG含量。
【实验用品】1.标本：待测人血清、标准血清（混合正常人新鲜血清）、人IgG标准品（或冻干人血清IgG 参考标准）。
2.PEG溶液：PEG 6000-8000 4.0g、NaF 1.0g、Na2HPO4•12H2O 10.15g、NaH2PO4•2H2O 1.0g、NaN3 0.1g，加蒸馏水至100ml。
3.其他试剂：羊抗人IgG抗血清、生理盐水、蒸馏水。
4.主要器材：分光光度计（721或731等）、水浴箱、微量移液器、刻度吸管、试管等。
医学免疫学：免疫浊度的测定
• 当一定波长的光线通过抗原抗体反应混合液时，被其中的 免疫复合物反射、吸收而减弱。在一定的范围内，透射光 吸收的量（吸光度值）与免疫复合物量呈正相关，而免疫 复合物的量与相应抗原和抗体的量呈函数关系，当抗体量 恒定时，根据所测吸光度值（与一系列的抗原标准品对照） 即可计算出待测抗原量。
A=KLC
• 取试管分别编号 • IgG标准稀释（加样单位μι）
• 每管中加入1.5ml抗人IgG （用4.3％PEG已经1：20稀 释） ，充分混匀 37℃ 水浴30min
• 各管混匀后用分光光度计测吸光度值（λ＝492nm，用4.3 ％PEG稀释的抗人IgG调零）。
实验结果
• 记录各管的吸光度值。 • 用IgG浓度为横坐标，相应吸光度值为纵坐
• 应维持反应管中抗体蛋白量始终过剩，这个值要 预先测定，使仪器的测定范围在低于生理范围到 高于正常范围之间。
• 受血脂的影响，尤其是低稀释度时，脂蛋白的小 颗粒可形成浊度，使测定值假性升高。
主要试剂与器材
• 待测血清（用生理盐水1：50倍稀释） • 抗人IgG血清（用4.3％PEG已经1：20稀释） • IgG标准（原浓度11.43mg/ml） • 生理盐水 • 加样枪、一次性枪头 • 分光光度计、37℃水浴箱
注：2人/组；一次性的物品请适量取材，实 验结束时，多余的请放回原处。
实验步骤
• 聚乙二醇(PEG)是非离子型水溶性聚合物，有很强的亲水性， 可以破坏溶液中蛋白质表面的水化层，使蛋白质沉淀，即使浓 度很高也不会引起蛋白质变性。
• 免疫浊度测定法按照仪器设计的不同可以分为两种，即比 浊仪测定（turbidimetermeasure）和散射比浊仪测定 （nephelomitermeasure）。本实验采用前者。
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免疫测定
IMMUNOASSAY
IA
免疫浊度测定分类 透射浊度法 散射浊度法
透射浊度法和散射浊度法的光路
I0 光源
浑浊 样品
I
(透射浊度法) 检测器A
检测器B (散射浊度法)
散射浊度法
What happens inside the flow cell? Analyte-antibody complexing
NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析
优点
扩展检测菜单，增加高敏项目分析： 如铁蛋白，地高辛 ，IgE，超敏CRP等 近红外波长分析消除生物物质如胆 红素和血色素的干扰
NIR：940nm波长 近0oC检测角
检测颗粒大小：200~500nm直径 速率法测定
NIPIA： 940nm LED光源
速率散射法：670nm 激光光源
Conjugate-antibody complexing
1
2
Inhibition of complexing by hapten (drug)
1
2
3
1. Conjugate (hapten on carrier) 2. Antibody 3. Hapten (drug)
免疫浊度测定试剂
抗体试剂的要求
Too small to detect optically
Now big enough to scatter light
Analyte Antibody Other stuff
Scatter Signal Versus Time
Nephelometry
Scatter
3 Adding antibody causes a large increase in light scattering
First derivative: rate of change of scatter over time; this is the SLOPE of the curve
Rate of Change of Scatter Signal versus Time
PEAK RATE
TIME
RATE
在速率峰基础上完成的标准曲线
Benefits Ability to expand the menu into high sensitivity assays including: Ferritin, Digoxin, and IgE.
NIR eliminates the interference of biological substances such as biliribin and hemoglobin.
终点 法 速率 法
终点 法 固定时间法
速率散射浊度法
速率峰的测定
速率峰的测定
Scatter Rate
Measure the RATE After Antibody Addition
Rate Nephelometry
3 2 1
Time
1. Buffer addition 2. Sample Addition 3. Antibody addition
试剂2
100mmol Tris或磷酸缓冲液 pH7.2 ~ 8.2 20% 多克隆羊抗血清 150mmol氯化钠 0.1 g/l 叠氮钠
Ag * Ab
测定范围
抗体 过剩
抗原 过剩
抗原浓度
技术特性
并行的检测系统:
•Rate NIPIA •Rate Nephelometry
NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析
蛋白应用分类
心血管功能监测
载脂蛋白A1 载脂蛋白B
脂蛋白a
结束语
谢谢大家聆听！！！
39
2
1
Adding sample increases scatter slightly
Fluid in the cell has causes little scatter
Time
1. Buffer addition 2. Sample Addition 3. Antibody addition
免疫浊度测定分类2
1
特异性
2
亲和力
3
反应时保持抗体过剩
4
测定范围应包括高于及低于
5
正常值的50%
5
测定的精密度应在5%左右
校正曲线：聚乙二醇的增强作用
吸光度
4%聚乙二醇
不加聚乙二醇
C1
C2
C3
抗原浓度
试剂组成配方举例
试剂1
100mmol Tris或磷酸缓冲液 pH7.2 ~ 8.2 4% 聚乙二醇(分子量6000或10000) 1%非离子型表面活性剂 150mmol氯化钠或硫酸钠 0.1 g/l 叠氮钠
CONCENTRATION
RATE抗原过剩的测定 NhomakorabeaAnalyte-antibody complexing Antigen Excess
Analyte Antibody
ARRAY抗原过量自动检测
加入校正液
抗体过量时的反应
抗原过量时的反应
0
60
85
反应时间(秒)
药物浓度测定
免疫浊度抑制测定
(小分子物质)