基因工程复习提纲1

基因工程作业复习提纲

一、名词解释

基因工程：基因克隆、显性质粒、质粒DNA、染色体DNA、Southern 印迹、Western印迹、PCR技术、限制性内切酶、相容性末端、部分酶切、标记基因、T克隆、表达载体、基因组文库、基因克隆、目的基因、RT-PCR、受体细胞、感受态细胞、外植体、基因工程药物、核酸疫苗、转基因动物、基因治疗、表达系统、包涵体蛋白、星活性、基因工程、结构基因、cDNA文库、启动子、酶单位、定量PCR、电穿孔转化法、基因枪法。

基因工程：（gene engineering）在体外将目的基因片段插入载体上，构建重组DNA（基因的新组合),并将其导入到原先没有这类分子的受体细胞内，而能持续稳定的增殖和表达的过程。基因工程的核心内容是基因克隆和基因表达。

基因克隆:（gene cloning）采用重组DNA技术，将不同来源的DNA 分子在体外进行特异切割，重新连接，组装成一个新的杂合DNA分子。在此基础上，这个杂合分子能够在一定的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代分子，此过程称为基因克隆。

显性质粒：对宿主细胞产生新的遗传表型的质粒，即表达型质粒。

质粒DNA：细菌或细胞染色体以外的，能自主复制的，与细菌或细胞共生的小型共价闭合双链环状DNA，对细菌的某些代谢活动和抗药性的表型有一定的作用。

染色体DNA：是生物体内主要的遗传物质，在细胞核或核区的染色体中，是有脱氧核苷酸组成的双链结构。

Southern印迹：(Southern blotting)通过Southern印迹转移将琼脂糖凝胶上的DNA分子转移到硝酸纤维滤膜上，然后进行DNA分子杂交，在滤膜上找到与核酸探针有同原序列的DNA分子。这种方法称为。Western印迹：（Western blotting）将蛋白质从电泳凝胶中转移到

硝酸纤维素滤膜上，然后同放射性同位素125I标记的特定蛋白质抗体进行反应。

PCR技术：（polymerase chain reaction）是通过模拟体内DNA复制的方式，重复变性、退火、延伸过程，在体外选择性的将DNA某个特殊区域扩增出来的技术。又称为基因的体外扩增。

限制性内切酶：(restriction enzyme)是能够识别双链DNA分子中的特异序列，并能切割双链DNA的一类内切酶。主要存在于原核细菌中，帮助限制外源DNA和保护自身DNA。

相容性末端：由同尾酶即不同的限制酶切割产生的末端是相同的，且是对称的，这样的相同的黏性突出末端称为相容性末端。

部分酶切：是指控制反应条件，使得酶在DNA序列上的识别位点只有部分得到切割，它的理论依据是酶切反应速度不均衡。

标记基因：（marker gene）是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用，它是对目的基因进行标记的工具。

T克隆：将普通的克隆载体切成线状，并使之在3‘末端含有一个凸出碱基T的载体

表达载体：（expression vector）是指具有宿主细胞基因表达所需的调控序列，能使克隆的基因在宿主细胞内转录和翻译的载体。

基因组文库：（genomic DNA library）某种生物的基因组的全部遗传信息通过克隆载体贮存在一个受体菌中的群体之中，这个群体即为该生物的基因组文库。

目的基因：与优良性状相关的基因，即用于克隆的基因。

RT-PCR：属于定量PCR的一种，以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。

受体细胞：指能够接受外源DNA并使其稳定维持的细胞，也只具有应用价值和理论研究的细胞。

感受态细胞：（competent cell）处于能够吸收外源DNA状态的细胞。

外植体：（explant）指用于离体培养中的活的植物组织、器官等材料。基因工程药物：就是指利用基因工程技术生产的药物。

核酸疫苗：（nucleic acid vaccine）又称基因疫苗或DNA疫苗，是利用基因重组技术将编码抗原的基因装入载体，然后直接导入动物体内，通过机体细胞的转录系统合成蛋白，产生的蛋白作为抗原诱导免疫系统产生免疫应答，即通过细胞和体液免疫反应产生抗体，从而达到预防和治疗疾病的目的。

转基因动物：利用DNA重组技术将外源基因导入动物基因组中使其表达，相应的动物称为转基因动物。

基因治疗：（gene therapy）是将目的基因放进特定载体中导入靶细胞或组织，通过替换或者补偿引起疾病的基因，或者关闭或抑制异常表达的基因来克服疾病的治疗方法。

表达系统：泛指目的基因与表达载体重组后，导入合适的受体细胞，并能在其中有效表达目的基因产物。

包涵体蛋白：在一定条件下，外源基因的表达产物在大肠杆菌中积累并致密的聚集在一起形成无膜的裸露结构。

星活性：（star activity）限制酶在非标准反应条件下，能切割一些与之特异型识别顺序类似的序列，降低酶切的特异性，这种现象称为星号活性。

结构基因：（structure gene）是一类负责编码蛋白质或RNA的基因。cDNA文库：（cDNA library）其来自于某一物种某种组织的mRNA，所以cDNA文库既有种属特异性，也有组织特异性。

启动子：是一段提供RNA聚合酶识别和结合的DNA序列，其位于编码基因上游。具有序列特异性、方向性、位置特异性和种属特异性。

酶单位：使1μg某种DNA在最适反应条件下和1小时内完全酶切所需的限制酶量。

定量PCR：（Polymerase Chain Reaction）广义概念的定量PCR技术是

指以外参或内参为标准，通过对PCR 终产物的分析或PCR 过程的监测，进行PCR 起始模板量的定量。狭义概念的定量PCR 技术是指用外标法（荧光杂交探针保证特异性）通过监测PCR 过程达到精确定量起始模板数的目的，同时以内对照有效排除假阴性结果(扩增效率为零)。

电穿孔转化法：是一种将极性分子穿过细胞膜导入细胞的一种物理方法，在这个过程中一个较大的电脉冲短暂破坏细胞膜的脂质双分子层从而允许DNA 等分子进入细胞。

基因枪法：（particle gun ）又称微弹轰击法，它是利用高速运行的金属微粒轰击细胞时能进入细胞内的现象，将包裹在金属微粒表面的外源DNA 分子带入细胞的基因转化方法。

二、简答及问答题

1、基因工程研究的技术路线是什么？

答：基因工程研究的技术路线如下图所示：