肿瘤细胞体外培养的重要性

肿瘤对化疗和放疗抗性的一种机制是由 于P53突变或P53的缺失，人类癌50 % P53 突变
Non small cell lung
60 %
Colon
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50 %
Breast
40 %
Head and neck
60 %
Ovarian
60 %
②制备单克隆抗体，主要是靶向表皮生长因子 EGF受体EGFR和HER-2。80年代研究人员发现，
一、肿瘤细胞体外培养的重要性
恶性肿瘤细胞培养建立细胞系，包括癌细胞 系和转化细胞系。转化细胞系可以是恶性转 化细胞和一般转化细胞两种。
恶性转化细胞系和癌细胞系一样具有永久性 生长能力和恶性表型，对此二种来源的细胞 系鉴定也是相似的，为研究恶性肿瘤提供了 有用模型。而一般转化细胞系只具有无限生 长能力，不具有恶性细胞的表型，此种细胞 系可相似于正常细胞的模型而被应用。
常应用体外肿瘤细胞培养，模拟体内环境或确定 单因素多因素研究肿瘤细胞发生发展结局。观察
抗癌药物对细胞周期作用点的影响也常应用肿瘤
细胞体外培养。若能确定肿瘤细胞各周期时间， 选择各期针对性药物进行治疗，则可以提高疗效。
放线菌素D作用于G1期抑制DNA聚合酶合成， 作用于S后期与G2期抑制rRNA并影响cAMP 水平。放线菌素D不影响非分裂期细胞，因 而放线菌素D是一种细胞周期特异性药物。
癌细胞的迅速增殖扩散受机体内环境中多种因
素的影响如各种生长因子、抑素、激素、多胺、 基因调节包括细胞周期基因和癌基因、cAMP 和cGMP浓度（前者对细胞增殖负调节，而后 者为相反）。
正常细胞周期的G1期有一个特殊的调节点—R点， 在生长条件不适宜情况下，细胞不能通过调节点而 不增殖，细胞通过G1期进入M期前受一种不稳定蛋 白质调节通过R点启动DNA的合成，例如抑癌基因 P53最重要的生物学功能就是通过调控细胞周期监测 点来维持基因组的稳定性，当细胞DNA受损时，P53 诱导细胞周期终止或凋亡，而P53突变或缺失使P53 功能失活则导致基因组紊乱，产生细胞转化。
数十年来医生们除用手术外只能用放疗 和化学疗法来治疗癌症，这些疗法毫无 分别地同时杀死健康细胞和癌细胞，直 到人类基因组图谱的解密，我们才迎来 了适用少数病人的靶向性治疗新时代， 医生们首先分析病人肿瘤中的DNA（基 因），再开出靶向性复合药物的药方， 专门攻击肿瘤细胞发生缺陷的基因，达 到治疗癌症的目的。
在人类的脑部、肺部和胰腺等部位的肿瘤中 EGFR的含量极高，Artrazeneca公司的研究人员 于1998年率先提出通过开发阻断EGFR的药物，
可以抑制肿瘤的生长，这种全新的疗法就是现在
的靶向性疗法，它没有毒副作用，不会杀死正常
细胞，按照这种思路，基因技术公司开发出一种 治疗晚期乳腺癌的药物Herceptin，并于1998年 获准上市。Herceptin是一种单克隆抗体药物，靶 向HER-2，这种药物能使只有5个月寿命的晚期 乳腺癌病人继续生存。为什么Herceptin成功获准，
由于临床试验中没有同时对所有乳腺癌患者进行 试验，而是选择了其中的一小部分（大约占25℅） 的那些HER-2含量异常高的晚期乳腺癌患者。
③不增殖细胞，这类细胞由R点走向分化细胞， 并执行专门功能的细胞（称终末细胞）如神经 细胞、哺乳动物成熟的红细胞、皮肤上皮的角 质细胞、多性核粒细胞。
肿瘤和正常的组织同样在体内也具有三 种不同的细胞群：
①增殖细胞群（A）：是肿瘤中处于增殖周期的细 胞，与肿瘤生长直接有关，亦是化学疗法最易攻击 的部分。
阿糖胞嘧啶，选择性地抑制核苷二磷酸还原 酶，阻断核苷酸变为脱氧核苷酸，从而抑制 DNA合成，是DAN合成抑制剂，属于S期特 异性药物。
秋水仙素能与微管蛋白强烈结合，引起 微管解体，纺锤体破坏，结果染色体的 移动被阻断，细胞分裂停留在中期，它 是属于M期的特异性药物。
通过体外细胞培养观察抗癌药物对细胞 周期作用点将常用的抗癌药物的细胞周 期分类。
癌细胞来源于体内正常上皮细胞。癌细胞在 体内或体外一样具有无控制生长和分化不全
的特点，因此比正常细胞容易培养建细胞系。 如20世纪50年代，国外建立了宫颈癌的Hela 细胞系。
癌细胞的增殖是按指数方式生长的，自一个癌 细胞增殖到能触及的程度要经过30代（109， 1cm3, 1g）。这样1cm3大小的肿块再经过10 代（ 1012 ，10 cm3，1Kg）。这样的大小和
②暂不增殖细胞群（B），它是延长了G1细 胞或G0细胞，目前不参加细胞周期，与肿瘤 的扩大暂时无关，由于它保留着增殖的能力， 在一定条件下成为肿瘤复发根源。
③不再增殖群（C），它不再参与细胞周期， 而日趋衰老，死亡，对肿瘤增长无意义。肿 瘤的增长情况取决于3种细胞群的比例，肿瘤 增殖率（growth factor GF）可由下列关系来 决定：GF=A／A+B+C。A群细胞越多， B、 C群细胞越少，肿瘤恶性程度越高。
体内细胞处于不同状态，大概分成三种命运: ① 中 骨继不髓续同干增时细殖期胞细（，胞胃S 、肠，G上不2皮断、M中离）的开完基G成1底期细细通胞胞过分等细裂，胞，周如期
②不增殖细胞，这类细胞在分裂完成后，暂处 于 分G裂1期期，，如正肝常细情胞况，下只不有合受成损DN或A切，除不时进肝入细细胞胞 再分裂增殖。哺乳动物的初级卵细胞也属于此 类。
当前较有前景的靶向治疗
①现在发展的基因工程腺病毒（ONYX015）因删除了E1B 55KD蛋白而可以选 择性的溶解P53突变或缺失的肿瘤细胞， 此类肿瘤细胞占50℅，也就是腺病毒 ONYX-015可达到50℅的靶向治疗药物的 效果，目前已在头颈部肿瘤中进行Ⅱ期 临床试验。
当前较有前景的靶向治疗
重量时足以致病人于死亡。经治疗后如细胞数 从1012减少至1010，重约10g时可称显效或部 分缓解；若肿瘤细胞数减少到108或106，重约 100mg至10mg时，可认为临床治愈或完全缓
解，但仍有可能复发。要根治肿瘤细胞，必须
彻底消灭所有癌细胞。外科手术切除大量肿瘤 细胞，但转移癌细胞仍有复发的危险。