胶体金检测技术
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待检尿样检测区出现红色条带为阴性 待检尿样检测区不出现红色条带为阳性
阳性结果 样品中可能含有等于或高于3ng/ml的盐酸克伦特罗。
培训资料
四、ß-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍
以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例
一．适用范围： 主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊 尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要 5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当 尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测 卡才能检测到。
免疫胶体金快速检测技术
农业部饲料质量监督检验测试中心（西安）
培训资料
主要内容
一、免疫胶体金技术的发展历史 二、胶体金检测卡的基本原理及构造 三、免疫胶体金层析法检测原理及应用 四、ß-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍 五、常见问题分析与注意事项 六、免疫胶体金技术的发展的方向
培训资料
一、免疫胶体金技术的发展史
培训资料
经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似 样品，必须进行确证后，才能准确判断，不能提前作结论。
因此，对于出现阳性结果的样品，应按官方抽样程序分瓶 封装Байду номын сангаас品，并于0 ~-4℃保存，尽快送到我中心进行确证检测。
培训资料
五、常见问题及注意事项
1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温 2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用
规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于 猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml。
培训资料
-------结果判定依据
阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说 明检测卡有效。
如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带， 出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。
试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动， 无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性， 从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。 因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。
3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹 尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如
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二、 胶体金的概念、原理及结构
1.胶体金概念及来源： 胶体金又称金溶胶，是由金 盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液。
2.胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围 在外的离子层构成，离子层为氯金酸负离子（AuCl2-)， 外层为H+，分散在溶液中。呈球形(小颗粒)或椭圆形 (大颗粒)。
培训资料
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二 、包装 每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡 ，滴管1个、干燥剂1片。
三、现场筛查步骤
1．在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡 和待检样本溶液恢复至室温。
2．从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地 使用。
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3．将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂 直滴加3滴（约80ul）于加样孔中，加样后开始计时。
放在冰箱中要防止温度过低，检测卡受潮，一般风泠冰箱 最好，温度控制在8℃左右较为理想。避免在炎热高湿的环境 中保存。 10.阳性疑似样品应在0 ～-4℃冷冻保存 冷藏和常温条件下， 尿中的瘦肉精在尿酸和酶的作用下易发生降解，含量会大幅下 降，表出现最为突出的是盐酸克伦特罗和莱克多巴胺，因此需 确证的尿样必须冷冻保存。 11.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照 自来水、 蒸馏水或去离子水离子浓度较低，会影响抗原和抗体的反应， 不能作为阴性对照。
果风吹太阳晒，NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位 置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电 风扇、空调的风直吹。
培训资料
4.尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面 这主要是人手掌的 汗液中有钾、钠离子存在，影响NC膜上泳动时的毛细管作用。 5.尿样滴管不可混用，以免交叉污染 每一类检测卡的抗体 都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相似的样品组 成会产生干扰。 6.加样量为70-80μl左右（垂直加三滴）
图1 金颗粒示意图
在溶液中金颗粒呈 圆形,表面带有负电 荷,由于静电的排斥 力,使其在水中保稳 定状态，形成稳定 的胶体状态。
培训资料 3. 胶体金试纸条的构造
样品垫
胶体金垫 控制线（C线） 吸水滤纸
层析方向
PVC底板
测试线 （T线）NC膜（硝酸纤维素膜）
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4.免疫层析法检测原理（双抗体夹心)
培训资料
4.1978年Geoghegan等应用免疫金技术检测B淋巴 细胞表面抗原。 5.1981年Danscher建立了银显影液增强光镜下金颗 粒的免疫金银染色方法
（Immunogold-silver staining,IGSS）。 6.1986年Fritz（美，生物）等人在IGSS法基础上成 功地进行了彩色IGSS的染色法,使得检测结果更加鲜 艳夺目—这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！
4.1（以HCG检测为例）
培训资料
4.2 免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）
（以吗啡检测为例）
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4.3 免疫层析法检测的原理（应用proteinA金标）
（以HIV检测为例）
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克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析 法的应用
采用竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶 颗粒，标记为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦 特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑 制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克伦特罗－BSA 偶联物（与盐酸克伦特罗的化学结构相似）的结合，使检测线不 显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性。
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4．结果应在5~10分钟读取，其他时间判读无效，根据示意 图判定结果。
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A、阴性（-）：C、T线均出现。表示样品中不含有克伦 特罗或其深度低于检测限。
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B、阳性（+）：检测T线不出现，则表示样品中克伦特罗浓 度高于检测限。
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C、无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已 失效，重新使用新卡。
如果加样量太大或太小，将会影响实验结果。如样品非常 粘稠，有可能导致样品爬不上去，此时可适当多滴1~2滴。 7.以T线的条带为观测点,C线为质量控质线
由于动物个体的差异使尿样样本中的成分组成不同，检测 时，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要条带出现，就 可判定为阴性结果。
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8. 如果尿样出现沉淀或浑浊物，请离心后或静置后再检测； 9.试纸条应常温保存，防止温度过高或过低
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六、发展方向(Developing)
1.标记技术的探索 顺磁粒子标记、量子点标记
免疫反应信号转化为电子信号模式
培训资料
2.生物传感器
谢谢！
1.1939年（英，植物）Kausche和Ruska把烟草叶病毒吸 附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状 颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。 2.1971年（美，微生物）Faulk和Taylor首先将兔抗沙门菌 抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。 3.1974年（奥）Romano等将胶体金标记在马抗人IgG上， 实现了间接免疫金染色法。同年Bauer等报道将胶体金标记 在凝集素上的应用。
阳性结果 样品中可能含有等于或高于3ng/ml的盐酸克伦特罗。
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四、ß-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍
以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例
一．适用范围： 主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊 尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要 5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当 尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测 卡才能检测到。
免疫胶体金快速检测技术
农业部饲料质量监督检验测试中心（西安）
培训资料
主要内容
一、免疫胶体金技术的发展历史 二、胶体金检测卡的基本原理及构造 三、免疫胶体金层析法检测原理及应用 四、ß-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍 五、常见问题分析与注意事项 六、免疫胶体金技术的发展的方向
培训资料
一、免疫胶体金技术的发展史
培训资料
经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似 样品，必须进行确证后，才能准确判断，不能提前作结论。
因此，对于出现阳性结果的样品，应按官方抽样程序分瓶 封装Байду номын сангаас品，并于0 ~-4℃保存，尽快送到我中心进行确证检测。
培训资料
五、常见问题及注意事项
1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温 2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用
规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于 猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml。
培训资料
-------结果判定依据
阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说 明检测卡有效。
如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带， 出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。
试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动， 无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性， 从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。 因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。
3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹 尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如
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二、 胶体金的概念、原理及结构
1.胶体金概念及来源： 胶体金又称金溶胶，是由金 盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液。
2.胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围 在外的离子层构成，离子层为氯金酸负离子（AuCl2-)， 外层为H+，分散在溶液中。呈球形(小颗粒)或椭圆形 (大颗粒)。
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培训资料
二 、包装 每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡 ，滴管1个、干燥剂1片。
三、现场筛查步骤
1．在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡 和待检样本溶液恢复至室温。
2．从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地 使用。
培训资料
3．将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂 直滴加3滴（约80ul）于加样孔中，加样后开始计时。
放在冰箱中要防止温度过低，检测卡受潮，一般风泠冰箱 最好，温度控制在8℃左右较为理想。避免在炎热高湿的环境 中保存。 10.阳性疑似样品应在0 ～-4℃冷冻保存 冷藏和常温条件下， 尿中的瘦肉精在尿酸和酶的作用下易发生降解，含量会大幅下 降，表出现最为突出的是盐酸克伦特罗和莱克多巴胺，因此需 确证的尿样必须冷冻保存。 11.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照 自来水、 蒸馏水或去离子水离子浓度较低，会影响抗原和抗体的反应， 不能作为阴性对照。
果风吹太阳晒，NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位 置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电 风扇、空调的风直吹。
培训资料
4.尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面 这主要是人手掌的 汗液中有钾、钠离子存在，影响NC膜上泳动时的毛细管作用。 5.尿样滴管不可混用，以免交叉污染 每一类检测卡的抗体 都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相似的样品组 成会产生干扰。 6.加样量为70-80μl左右（垂直加三滴）
图1 金颗粒示意图
在溶液中金颗粒呈 圆形,表面带有负电 荷,由于静电的排斥 力,使其在水中保稳 定状态，形成稳定 的胶体状态。
培训资料 3. 胶体金试纸条的构造
样品垫
胶体金垫 控制线（C线） 吸水滤纸
层析方向
PVC底板
测试线 （T线）NC膜（硝酸纤维素膜）
培训资料
4.免疫层析法检测原理（双抗体夹心)
培训资料
4.1978年Geoghegan等应用免疫金技术检测B淋巴 细胞表面抗原。 5.1981年Danscher建立了银显影液增强光镜下金颗 粒的免疫金银染色方法
（Immunogold-silver staining,IGSS）。 6.1986年Fritz（美，生物）等人在IGSS法基础上成 功地进行了彩色IGSS的染色法,使得检测结果更加鲜 艳夺目—这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！
4.1（以HCG检测为例）
培训资料
4.2 免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）
（以吗啡检测为例）
培训资料
4.3 免疫层析法检测的原理（应用proteinA金标）
（以HIV检测为例）
培训资料
克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析 法的应用
采用竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶 颗粒，标记为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦 特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑 制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克伦特罗－BSA 偶联物（与盐酸克伦特罗的化学结构相似）的结合，使检测线不 显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性。
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4．结果应在5~10分钟读取，其他时间判读无效，根据示意 图判定结果。
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A、阴性（-）：C、T线均出现。表示样品中不含有克伦 特罗或其深度低于检测限。
培训资料
B、阳性（+）：检测T线不出现，则表示样品中克伦特罗浓 度高于检测限。
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C、无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已 失效，重新使用新卡。
如果加样量太大或太小，将会影响实验结果。如样品非常 粘稠，有可能导致样品爬不上去，此时可适当多滴1~2滴。 7.以T线的条带为观测点,C线为质量控质线
由于动物个体的差异使尿样样本中的成分组成不同，检测 时，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要条带出现，就 可判定为阴性结果。
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8. 如果尿样出现沉淀或浑浊物，请离心后或静置后再检测； 9.试纸条应常温保存，防止温度过高或过低
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六、发展方向(Developing)
1.标记技术的探索 顺磁粒子标记、量子点标记
免疫反应信号转化为电子信号模式
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2.生物传感器
谢谢！
1.1939年（英，植物）Kausche和Ruska把烟草叶病毒吸 附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状 颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。 2.1971年（美，微生物）Faulk和Taylor首先将兔抗沙门菌 抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。 3.1974年（奥）Romano等将胶体金标记在马抗人IgG上， 实现了间接免疫金染色法。同年Bauer等报道将胶体金标记 在凝集素上的应用。