免疫学技术及其应用

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酶联免疫斑点试验(enzyme—linked immunospot assay，ELISPOT)
• 用已知细胞因子的抗体包被固相载体，加入待检 效应细胞，温育一定时间后洗去细胞，如待检效 应细胞产生相应细胞因子，则与已包被的抗体结 合，再加入酶标记抗该细胞因子抗体，加底物显 色。 • 一般选择硝酸纤维素膜(NC)或聚偏二氟乙烯(PVDF) 膜覆盖微量反应板作为固相，在分泌相应细胞因 子的细胞所在局部呈现有色斑点，一个斑点表示 一个分泌相应细胞因子的细胞，通过计数可推算 出分泌某种细胞因子细胞的频率。
电镜技术、免疫胶体金技术、生物素-亲和素标记技
术、发光免疫分析技术等。������
免疫学技术及应用
1.你为什么选修免疫学技术？ 2.列出你所了解的某个生命科 学领域，查找其与免疫学的关 系？
免疫学检测技术
课 程 简 介
免疫学是生命医学领域重要的基础学科和前 沿学科，与人类健康与重大疾病防治密切相 关。随着生命科学和生物高技术的发展与交 叉融合，高端仪器设备和技术手段不断应用 于免疫学领域。 阐释免疫学技术理论背景和基本原理的基础 上，以典型实验技术为例，比较详细地介绍 常用的免疫学实验操作流程和方法。使学生 理解实验原理的基础上，结合自身实验条件， 灵活有效的加以选择应用，为科研提供技术 方法的支持。
免疫学相关分子生物学技术
介绍基因克隆和表达技术、 PCR(特别是定量PCR技术）、RNA 干扰、microRNA技术等的原理、 选择策略与依据、关键注意事项 和应用实例。
免疫学相关检wk.baidu.com技术
介绍经典的抗原抗体血清学反应、 流式细胞分析和分选技术、细胞 凋亡和细胞周期检测技术、免疫 组织化学技术、免疫细胞信号转 导研究技术、激光扫描共聚焦显 微镜技术等相关的技术原理以及 在免疫学研究中的应用。
经典的抗原抗体反应������
������ 集反应、沉淀反应、补体结合反应、中和试验等������ 凝
现代免疫学技术������
免疫印迹技术、免疫组化、酶联免疫技术、免疫共沉 淀技术、免疫扩散技术、免疫电泳技术、流式细胞技 术、疫苗的设计(含逆向免疫)和抗体工程等技术 免疫微粒技术、免疫荧光技术、放射免疫技术、免疫
免疫细胞的检测
• 免疫细胞的分离
• 磁珠分离法
• fluorescence-activated cell sorter，FACS
• 免疫细胞功能的测定
• T细胞 • B细胞
T细胞鉴定及功能测定
• • • • • 使用酶、免疫荧光标记单抗进行鉴定 淋巴细胞转化试验 E花环形成试验 混合淋巴细胞培养 CTL介导的细胞毒试验
免疫印迹技术
• 将用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE分 离得到的按分子量大小排列的非标记蛋 白转移到固相载体膜上，再用标记的特 异性的抗血清或单克隆抗体对蛋白质进 行定性及定量分析的技术，其鉴定蛋白 质的敏感性为1—5ng。 • 检测可溶性抗原、细胞成分的鉴定与分 析，检测与自身变性细胞核成分结合的 抗体(抗核抗体)，HIV的明确诊断。
• 细胞增生或增生抑制法 • 细胞病变抑制法 • 趋化作用测定法
• 免疫学检测法 • 分子生物学技术
免疫学相关标记技术
包括荧光、酶、放射、磁珠标记 技术、和发光免疫分析技术原理、 具体方法和应用。

免疫标记技术是用荧光素、放射性同位素、酶、 铁蛋白、胶体金及化学(或生物)发光剂等作为追 踪物，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应 荧光显微镜，射线测量仪，酶标检测仪，电子显 微镜和发光免疫测定仪等精密仪器，对实验结果 直接镜检观察或进行自动化测定
淋巴细胞增殖性疾病
消化系统疾病与免疫
呼吸系统疾病与免疫
心血管疾病与免疫
内分泌系统疾病与免疫
风湿性疾病
神经系统疾病与免疫
眼部疾病与免疫 耳鼻咽喉疾病与免疫 皮肤病与免疫 肾脏疾病与免疫
衰老与免疫 生殖与免疫 肿瘤免疫与免疫防治 移植免疫
中医临床与免疫
麻醉、手术与免疫
临床输血与免疫
口腔疾病与免疫
免疫学技术研究的范畴
Immunofluorescent stain of immunoglobulin G (IgG) showing linear pattern in Goodpasture's syndrome
天疱疮免疫荧光染色
放射免疫测定法
• 用放射性同位素标记抗原或抗体进行 的免疫测定。 • 既有同位素的敏感性又有抗原抗体结 合的特异性，同时具有重复性好、准 确性高、标本用量少等优点。 • 广泛应用于激素、药物等微量物质的 检测。


敏感性、特异性、精确性及应用范围
免疫标记技术 • 免疫酶测定法 • 免疫荧光技术 • 放射免疫测定法 • 免疫胶体金技术
免疫酶测定法
• 是一种用酶标记一抗或二抗检测特异性抗原或 抗体的方法。 • 将抗原—抗体反应的高度特异性与酶对底物的 高效催化作用有效地结合起来，通过酶分解底 物产生有色物质(也可作用于荧光底物，产生 荧光)，肉眼观察颜色深浅或酶标仪测定光密 度值(OD)，以反映抗原或抗体的含量。 • 本法灵敏度高，检测可溶性抗原或抗体、组织 或细胞表面特异性抗原。
免疫胶体金技术
• 氯金酸(HAuCl+)在还原剂作用下，产生分散状态的胶体金颗粒。 碱性条件下，金颗粒表面带负电荷，与蛋白质正电荷基团结合。 • 胶体金可标记白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、激素、脂蛋白、植 物血凝素、卵白素等。大分子以单层形式吸附在金颗粒表面。 • 不同还原剂作用于氯金酸，产生的胶体金粒径大小不相同(5— 50nm)，小粒径的胶体金由于穿透性好，电子密度高，常被用于 免疫电镜技术。这些小粒径的金颗粒，经银显影液处理后，金粒 子还原银离子生成银颗粒而吸附在金颗粒周围呈黑褐色，从而放 大了金颗粒的显色效果，又称免疫金银法。
• 胶体金颜色随颗粒大小而变化，大于20 nm的金颗粒 在光镜下呈现砖红色，可在光镜水平行免疫分析，也 可用银显影剂增强，进一步提高灵敏度。 • 当胶体金的粒径较大、浓度密集时肉眼水平即可观察， 即胶体金斑点渗滤试验和胶体金斑点免疫层析试验。
免疫学相关蛋白质技术
介绍经典的蛋白质电泳、印迹技 术、如 SDS-PAGE双向电泳、 Western印迹和斑点印迹。此外， 酵母双杂交系统、免疫共沉淀技 术、 GST pull-down和最近发展 出的 BIA core技术等。
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B细胞的鉴定及功能测定
• • • •
检测B细胞分化抗原 测定B细胞产生抗体的能力 溶血空斑试验 ELISPOT
免疫分子相关实验技术
介绍抗原（包括抗原肽）、抗体 （单抗、多抗、基因工程抗体）、 补体、细胞因子及其受体、HLA、 TLR 等的背景知识，相关研究技 术的原理和方法。
细胞因子的检测
• 生物活性检测
生命科学+免疫学】
免疫生物学 免疫病理学 分子免疫学 免疫药理学 免疫遗传学 肿瘤免疫学 免疫学检验
临床医学与免疫
感染性疾病与免疫 免疫缺陷性疾病 过敏性疾病 血液系统疾病与免疫
淋巴细胞增殖性疾病
消化系统疾病与免疫
呼吸系统疾病与免疫
临床医学与免疫
感染性疾病与免疫 免疫缺陷性疾病 过敏性疾病 血液系统疾病与免疫
免疫细胞相关实验技术
免疫分子相关实验技术 免疫学相关标记技术
免疫学相关蛋白质技术
免疫学技术研究的范畴
免疫学相关分子生物学技术
免疫学相关检测技术
免疫学实验相关动物模型
免疫细胞相关实验技术
介绍单核巨噬细胞、树突状细胞、 NK细胞、T细胞、B细胞，以及这 些细胞亚群（如pDC、DCreg Th1、Th2、Th17、Treg、B细胞 亚群等）的理论背景，相关实验 技术原理和具体方法。
免疫荧光技术
• 用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性 抗原或抗体的方法。 • 常用的荧光素有异硫氰酸荧光素 (nuorescein isothiocyanate，FITC)、 藻红蛋白(phycoerythrin，PE)等。在激 发光的作用下，可直接发射荧光，前者 发黄绿色荧光，后者发红色荧光。
ELISA
• 双抗体夹心法(sandwich assay)
• 检测血清、脑脊液、胸、腹水等各种液相中 的可溶性抗原
• 间接法
• 测定细胞及组织表面抗原
中国疾病预防控制 2004-07-19,21:06:13 测量波长：450 参考波长： 620 0.080 0.032 0.022 0.019 0.019 0.018 0.018 0.044 0.024 0.019 0.022 0.018 0.019 0.019 0.068 0.032 0.019 0.019 0.023 0.019 0.020 0.092 0.029 0.022 0.014 0.014 0.018 0.019 0.088 0.035 0.025 0.021 0.020 0.019 0.019 0.075 0.027 0.020 0.015 0.019 0.020 0.017 0.059 0.027 0.021 0.018 0.019 0.020 0.020 1.610 0.083 0.042 0.019 0.022 0.023 0.021
常用的抗原抗体反应
• 凝集反应 • 沉淀反应
免疫学实验相关动物模型
介绍自身免疫病动物模型（如自 身免疫性甲状腺炎，系统性红斑 狼疮，自身免疫性脑脊髓炎等）、 感染性疾病动物模型（利什曼原 虫、弓形虫、巨细胞病毒、李斯 特菌等）、肿瘤动物模型、器官 移植动物模型等免疫学研究常用 的动物模型相关原理，应用范围 和制备方法。