逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响

逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响
张
虹
季有波
1
（长春医学高等专科学校，吉林长春130031）
〔关键词〕逍遥散；乳腺癌；细胞周期〔中图分类号〕R737.9
〔文献标识码〕A
〔文章编号〕1005-9202（2012）24-5611-02；doi ：10.3969/j.issn.1005-
9202.2012.24.1381
吉林大学第二医院
通讯作者：季有波（1976-），男，主治医师，讲师，主要从事慢性疼痛性疾
病研究。

第一作者：张
虹（1977-），女，讲师，硕士，主要从事方剂学研究。

中医认为乳腺癌或癌前病变属于“乳岩”、“乳癖”范畴，乃由情志不畅、肝郁气滞、血瘀、脾气消沮等所致。

而逍遥散行气疏肝，调畅神志，具有抗焦虑、抗抑郁作用，从而影响癌症的发生发展
〔1〕。

本课题组在前期研究中证实了逍遥散提取液对乳
腺癌细胞MCF-7有显著的生长抑制作用〔2〕。

本实验进一步探
讨逍遥散提取液对细胞周期的影响，为古方新用及乳腺癌的防
治进一步提供实验依据。

1材料与试剂1.1试剂DMEM 培养基（Invitrogen ）、RNase 、PI 购自Sigma 公司；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所。

1.2
药物
逍遥散的药物组成及用量为：柴胡、当归、白术、茯
苓、
芍药各30g ，炙甘草15g ，煨姜、薄荷各1g ，购自市售药店，并经过严格鉴定。

按上述组方和单品药当归取生药，加蒸馏水回流提取3次，
每次分别为60、30、30min ，浓缩药液，再加入DMEM 培养液稀释，配成浓度为1g /ml 药液，过滤除菌，4ħ保存备用。

1.3
细胞培养
人乳腺癌细胞系（MCF-7）购自吉林省肿瘤研究所，置于含10%胎牛血清的DMEM 培养基中，在37ħ、5%CO 2空气及饱和湿度条件下培养。

以每5ˑ104
细胞/瓶接种，24h 换液1次并加入相应浓度的逍遥散提取液。

1.4
FCM 检测细胞检测细胞周期
取对数生长期细胞用于
实验，随机分5组：对照组、逍遥散提取液低剂量组（2mg /ml ）、中剂量组（5mg /ml ）、高剂量组（10mg /ml ）、当归组（5mg /ml ）。

按照常规方法用PI 染色，流式细胞仪检测细胞周期
〔3〕。

经低、中、高剂量的逍遥散提取液和当归分别作用48h ，收集MCF-7细胞，用PBS 冲洗两次，
70%冷乙醇固定过夜。

PBS 冲洗2次，加RNase ，37ħ水浴30min 降解RNA ；再用PBS 洗2次后，加PI 染液，4ħ避光反应30min ，经PBS 洗涤后上机检测。

用FACScan 流式细胞仪Cellfit 软件收取细胞测定DNA 含量的
变化，每个样品收集细胞数为1ˑ104
个。

1.5统计学分析所有数据均采用SAS 统计软件进行检测，
数据用x ʃs 表示，两组间比较采用t 检验。

2
结
果
经流式细胞仪检测，不同剂量的逍遥散提取液和当归提取液对乳腺癌细胞MCF-7作用48h 后，各周期细胞比例见表1。

表1
逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响（x ʃs ，
%）组别G 0/G 1
S
G 2/M
逍遥散低剂量组
63.813ʃ0.78335.828ʃ0.9551）0.480ʃ0.1231）中剂量组55.615ʃ1.4532）28.258ʃ3.7201）0.207ʃ0.1001）高剂量组54.463ʃ2.6962）
25.430ʃ4.2461）0.190ʃ0.1471）对照组64.763ʃ2.20236.238ʃ1.1100.597ʃ0.076当归组
68.250ʃ3.990
31.500ʃ4.210
0.250ʃ0.250
与对照组比较：1）P ＜0.05，
2）P ＜0.013讨论
细胞周期是指细胞从第一次分裂结束产生新细胞到第二次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期（M 期）两个阶段。

分裂间期是物质准备和积累阶段，分裂期则是细胞增殖的实施过程。

间期又分为休眠期（G 0期）、
DNA 合成前期（G 1期）、DNA 合成期（S 期）与DNA 合成后期（G 2期），在此期间主要完成染色质中的DNA 复制和相关蛋白质的合成。

M 期为细胞分裂期，
在此期间进行细胞物质的平均分配，一个细胞经过分裂形成两个新的细胞。

在细胞周期中，S 期是细胞增殖的关键，其最主要的特征是
DNA 的合成，DNA 分子的复制就是在这个时期进行的。

通常只要DNA 的合成一开始，细胞增殖活动就会进行下去，直到分裂成两个子细胞。

因此通过某种因素进行干扰、破坏或抑制DNA 合成，就可以抑制癌细胞增殖，从而达到治疗癌症的目的。

例如，放射线能破坏癌细胞DNA 的结构与合成，治疗某些肿瘤
〔4〕
；药物秋水仙碱等则可阻止纺锤体的形成，从而抑制癌细
胞的分裂〔5〕。

因为单味当归可能有促进妇女乳腺癌细胞增生的作用〔6〕
，
因此本实验采用当归提取液组作对照。

本实验观察结果表明，逍遥散提取液3个不同浓度组对乳腺癌细胞MCF-7作用48h 后，S 期细胞比例降低，且随着药物浓度的增加，细胞比例降低更明显。

提示逍遥散提取液可通过阻断乳腺癌细胞MCF-7DNA 合成的方式，抑制乳腺癌细胞体外增殖；而单味当归亦无促进DNA 合成作用。

4
参考文献
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虹，付士波，等.逍遥散对乳腺癌细胞抑制作用实验研
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戴
军.人参当归可能诱发乳腺癌专业人士建议妇女慎用
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2004；20（4）：1.〔2012-04-05收稿2012-06-25修回〕
（编辑曲莉)
自拟逍遥汤加减联合FOLFOX 方案治疗老年晚期原发性肝癌19例
袁华墅
肖晓洪
童
玲
黄
海
（泰和县人民医院肿瘤科，江西
泰和343700）
〔关键词〕原发性肝癌；中药；化学治疗；奥沙利铂；氟尿嘧啶〔中图分类号〕R735
〔文献标识码〕A
〔文章编号〕1005-9202（2012）24-5612-02；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.24.139
第一作者：袁华墅（1972-），男，主治医师，主要从事肿瘤学研究。

原发性肝癌预后极差，发病与死亡比例为1：0.98。

由于肝癌发病隐匿，
进展快，老年患者发现时多已达中晚期，失去手术机会；其他局部治疗如射频消融、无水酒精注射、经导管肝动脉化疗栓塞（TACE ）等虽对控制局部病情较好，但因适应证少而临床应用受限。

全身治疗如化疗、中医中药治疗目前在临床探索中。

本文拟分析自拟逍遥汤加减联合FOLFOX 方案治疗老年晚期原发性肝癌患者的效果。

1资料与方法1.1
临床资料
2006年1月至2009年1月我科住院的老年
晚期原发性肝癌患者38例。

符合以下条件之一：手术后复发转移；无手术、介入治疗；介入治疗失败；不愿接受介入治疗。

其中男32例，女6例；年龄60 85〔平均（65ʃ3.8）〕岁；肝功能Child-pugh A 级36例，B 级2例，分为自拟逍遥汤加减联合FOLFOX 方案组（治疗组）和单纯行FOLFOX 方案治疗组（对照组）各19例。

两组性别、病情、病程、临床分期、肝功能Child-pugh 分级等差异不显著（P ＞0.05）。

1.2
治疗方法
治疗组以自拟逍遥汤为基本方案（柴胡10g 、
郁金10g 、茯苓10g 、当归10g 、白芍15g 、白术10g 、败酱草20g 、鳖甲15g 、半枝莲30g 、白花蛇舌草30g 、黄芪15g 、甘草6g ），随症加减，如眼肤黄疸，小便黄赤，大便干结或溏便不爽加菌陈、栀子、大黄、田基黄等。

从开始入组起服用，每日一剂，化疗初加强和胃止呕处理，化疗间歇期加强健脾益气、护肝养
阴治疗。

采用FOLFOX 方案化疗，即奥沙利铂100mg /m 2
静脉滴注2h 、
第1天，亚叶酸钙300mg /m 2
静脉滴注2h ，第1天，氟尿嘧啶400mg /m 2静脉推注、
之后2400mg /m 2
46h 静脉泵注，每2周重复，4w 为1个周期，治疗至疾病进展或出现不能耐受的毒性，持续至多6个周期。

对照组行单纯FOLFOX 方案化疗。

化疗每周期前常规作三大常规、
肝肾功能、血甲胎蛋白（AFP ）定量、心电图，两疗程评价疗效，随访2年，如果有乙型肝炎病毒复制标志，可使用抗乙型肝炎病毒药。

患者疾病进展后都给予最佳支持治疗。

1.3
客观疗效评价
按照RECIST1.0版标准评价，分为完全
缓解（CR ）、
部分缓解（PR ）、稳定（SD ）、进展（PD ），以CR +PR 计算有效率（RR ），以CR +PR +SD 计算疾病控制率（DCR ）。

生活质量评定，依据KPS 评分，治疗前计分增加≥10分为改善，降低≥10分为下降，变化＜10分为稳定。

以血AFP 定量、胸部X 线片、腹部增强CT 评价疗效，统计总生存时间（OS ）、肿瘤进展时间（TTP ）、
生活质量（QOL ）及毒性反应。

毒性反应按照美国NCICTC 标准评价，分为0 4级。

1.4
统计学分析
采用SPSS13.0软件进行统计学分析，计数
资料组间比较采用χ2
检验。

2结
果
2.1
两组近期疗效比较
治疗组疾病控制率（78.9%，
CR 2例，
PR 7例，SD 6例，PD 4例）明显高于对照组（47.4%，PR 4例，SD 5例，PD 11例）（P ＜0.01）。

2.2
两组生活质量比较
治疗组改善率63.2%、稳定率
·2165·中国老年学杂志2012年12月第32卷。