细菌代谢产物的检测及鉴定
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应用：D群链球菌（+） 其它链球菌（-）
甲基红试验
原理： 葡萄糖 细菌 丙酮酸
混合酸（pH )
甲基红试剂
醇酮醛（pH ) 红色反应（+）
橘黄色（-）
培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。
应用：大肠埃希菌（+）
产气肠杆菌（-） 肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼 酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，而肠 杆菌属则为阴性。
结果：
两支培养基均无变化为产碱型； 两支培养基均产酸为发酵型； 若不加石蜡的培养基产酸为氧化型。
应用：肠杆菌科细菌（发酵型）
非发酵菌（产碱型/氧化型） 葡萄球菌（发酵型） 微球菌（氧化型）
β-半乳糖苷酶试验
原理：有的细菌可产生β-半乳糖苷酶，能 分解邻-硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG)，而 生成黄色的邻-硝基酚，在很低浓度下也 可检出。
结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般 在20～30min内显色。
应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试 验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。 本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速 鉴定。
七叶苷水解试验
原理：
七叶苷 细菌 七叶素 枸橼酸铁黑色化合物
培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。
结果：培养基变为黑色为阳性，不变 色者为阴性。
无色
红色
应用：肠杆菌科中变形杆菌属的鉴定。
苯丙氨酸脱氨酶试验
• 原理
苯丙氨酸
苯丙酮酸
10%氯化铁 绿色化合物
• 应用：肠杆菌科的鉴定
变形杆菌属、摩根菌属、普罗威
登斯菌属（+）
氨基酸脱羧酶试验
原理：氨基酸 特异性脱羧酶 胺＋CO2
指示剂变色
应用：肠杆菌科细菌的鉴定。如肺炎克雷 伯菌赖氨酸为阳性，鸟氨酸为阴性。
碳水化合物代谢试验
糖（醇、苷）类发酵试验
• 原理
由于细菌含有发酵不同糖类的酶， 故分解糖的能力不同，终末产物亦 不一致。
• 应用 鉴定细菌最主要的试验，特别对肠 杆菌科细菌的鉴定尤为重要 。
氧化一发酵试验(O／F试验)
• 原理 氧化型：仅在有氧环境中分解葡萄糖 发酵型：在有氧或无氧环境中都能分解 葡萄糖 产碱型：在有氧或无氧环境中都不能 分解葡萄糖
V-P试验
原理：
葡萄糖 细菌 丙酮酸
OH- 二乙酰
O
乙酰甲基甲醇 胍基 红色化合物（+）
培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基
结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色
出现且于35 ℃ 4h后仍如故者即为阴性。
应用：常与甲基红试验一起使用，因为前者阳
性的细菌，后者通常为阴性。 产气肠杆菌（+） 大肠埃希菌（-）
明胶液化试验
原理：明胶 明胶酶
氨基酸
失去凝固力
应用：肠杆菌科细菌的鉴定。如沙雷菌、 普通变形杆菌、阴沟肠杆菌等。
碳源利用试验
枸橼酸盐利用试验
• 原理
枸橼酸盐
碳酸盐+氨（pH )
溴麝香草酚蓝
绿色 深蓝色
• 应用：肠杆菌科细菌的鉴定
埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌
属（-）
呼吸酶类试验
细胞色素氧化酶试验
蛋白质和氨基酸代谢试验
吲哚试验
• 原理 色氨酸
对二甲基氨基苯甲醛
吲哚
玫瑰吲哚
（红色）
• 应用
肠道杆菌的鉴定。
大肠埃希菌（+）
沙门菌属（-）
硫化氢试验
• 原理 含硫氨基酸 细菌 硫化氢
醋酸铅/硫酸亚铁
硫化铅/硫化亚铁 （黑色）
• 应用 肠杆菌科菌属间的鉴定。
尿素（脲）酶试验
原理：
细菌
尿素 氨
• 原理
游离 协同因子 凝血酶 纤原
金葡 血浆凝固酶
结合（凝聚因子）
纤维蛋白
• 应用：致病性葡萄球菌的鉴定
胆汁溶菌试验
• 原理 胆盐、去氧胆酸钠和牛黄胆酸钠能选择 性的溶解肺炎链球菌。
• 应用 肺炎链球菌（+） 甲型链球菌（- ）
CAMP试验
B 族 链 球 菌
细菌的分类及鉴定
同济医院检验科
细菌的生物化学试验
原理：由于细菌各自的酶系统不同，新陈代谢的产 物也有所不同，而这些产物又各具有不同的生物化 学特性。为此，可利用生物化学的方法来鉴别细菌
的类别，这种试验称为细菌的生化反应试验
常用检查方法
• 碳水化合物代谢试验 • 氨基酸和蛋白质代谢试验
• 碳源利用试验 • 呼吸酶类试验 • 抑菌试验
• 原理 盐酸二甲基对苯二铵 细菌 醌类化合物
Cyt氧化酶 （深紫色） • 应用
奈瑟菌属、假单胞菌属（+） 肠杆菌科（-）
过氧化氢酶（触酶）试验
• 原理
某些细菌分泌过氧化氢酶，使过氧化氢 生成水和初生态氧，继而形成氧分子出 现气泡。
• 应用 金黄色葡萄球菌、奈瑟菌属（+） 链球菌属（-）
ห้องสมุดไป่ตู้
（血浆）凝固酶试验
甲基红试验
原理： 葡萄糖 细菌 丙酮酸
混合酸（pH )
甲基红试剂
醇酮醛（pH ) 红色反应（+）
橘黄色（-）
培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。
应用：大肠埃希菌（+）
产气肠杆菌（-） 肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼 酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，而肠 杆菌属则为阴性。
结果：
两支培养基均无变化为产碱型； 两支培养基均产酸为发酵型； 若不加石蜡的培养基产酸为氧化型。
应用：肠杆菌科细菌（发酵型）
非发酵菌（产碱型/氧化型） 葡萄球菌（发酵型） 微球菌（氧化型）
β-半乳糖苷酶试验
原理：有的细菌可产生β-半乳糖苷酶，能 分解邻-硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG)，而 生成黄色的邻-硝基酚，在很低浓度下也 可检出。
结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般 在20～30min内显色。
应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试 验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。 本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速 鉴定。
七叶苷水解试验
原理：
七叶苷 细菌 七叶素 枸橼酸铁黑色化合物
培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。
结果：培养基变为黑色为阳性，不变 色者为阴性。
无色
红色
应用：肠杆菌科中变形杆菌属的鉴定。
苯丙氨酸脱氨酶试验
• 原理
苯丙氨酸
苯丙酮酸
10%氯化铁 绿色化合物
• 应用：肠杆菌科的鉴定
变形杆菌属、摩根菌属、普罗威
登斯菌属（+）
氨基酸脱羧酶试验
原理：氨基酸 特异性脱羧酶 胺＋CO2
指示剂变色
应用：肠杆菌科细菌的鉴定。如肺炎克雷 伯菌赖氨酸为阳性，鸟氨酸为阴性。
碳水化合物代谢试验
糖（醇、苷）类发酵试验
• 原理
由于细菌含有发酵不同糖类的酶， 故分解糖的能力不同，终末产物亦 不一致。
• 应用 鉴定细菌最主要的试验，特别对肠 杆菌科细菌的鉴定尤为重要 。
氧化一发酵试验(O／F试验)
• 原理 氧化型：仅在有氧环境中分解葡萄糖 发酵型：在有氧或无氧环境中都能分解 葡萄糖 产碱型：在有氧或无氧环境中都不能 分解葡萄糖
V-P试验
原理：
葡萄糖 细菌 丙酮酸
OH- 二乙酰
O
乙酰甲基甲醇 胍基 红色化合物（+）
培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基
结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色
出现且于35 ℃ 4h后仍如故者即为阴性。
应用：常与甲基红试验一起使用，因为前者阳
性的细菌，后者通常为阴性。 产气肠杆菌（+） 大肠埃希菌（-）
明胶液化试验
原理：明胶 明胶酶
氨基酸
失去凝固力
应用：肠杆菌科细菌的鉴定。如沙雷菌、 普通变形杆菌、阴沟肠杆菌等。
碳源利用试验
枸橼酸盐利用试验
• 原理
枸橼酸盐
碳酸盐+氨（pH )
溴麝香草酚蓝
绿色 深蓝色
• 应用：肠杆菌科细菌的鉴定
埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌
属（-）
呼吸酶类试验
细胞色素氧化酶试验
蛋白质和氨基酸代谢试验
吲哚试验
• 原理 色氨酸
对二甲基氨基苯甲醛
吲哚
玫瑰吲哚
（红色）
• 应用
肠道杆菌的鉴定。
大肠埃希菌（+）
沙门菌属（-）
硫化氢试验
• 原理 含硫氨基酸 细菌 硫化氢
醋酸铅/硫酸亚铁
硫化铅/硫化亚铁 （黑色）
• 应用 肠杆菌科菌属间的鉴定。
尿素（脲）酶试验
原理：
细菌
尿素 氨
• 原理
游离 协同因子 凝血酶 纤原
金葡 血浆凝固酶
结合（凝聚因子）
纤维蛋白
• 应用：致病性葡萄球菌的鉴定
胆汁溶菌试验
• 原理 胆盐、去氧胆酸钠和牛黄胆酸钠能选择 性的溶解肺炎链球菌。
• 应用 肺炎链球菌（+） 甲型链球菌（- ）
CAMP试验
B 族 链 球 菌
细菌的分类及鉴定
同济医院检验科
细菌的生物化学试验
原理：由于细菌各自的酶系统不同，新陈代谢的产 物也有所不同，而这些产物又各具有不同的生物化 学特性。为此，可利用生物化学的方法来鉴别细菌
的类别，这种试验称为细菌的生化反应试验
常用检查方法
• 碳水化合物代谢试验 • 氨基酸和蛋白质代谢试验
• 碳源利用试验 • 呼吸酶类试验 • 抑菌试验
• 原理 盐酸二甲基对苯二铵 细菌 醌类化合物
Cyt氧化酶 （深紫色） • 应用
奈瑟菌属、假单胞菌属（+） 肠杆菌科（-）
过氧化氢酶（触酶）试验
• 原理
某些细菌分泌过氧化氢酶，使过氧化氢 生成水和初生态氧，继而形成氧分子出 现气泡。
• 应用 金黄色葡萄球菌、奈瑟菌属（+） 链球菌属（-）
ห้องสมุดไป่ตู้
（血浆）凝固酶试验