现代仪器分析实验报告.

实验一双波长分光光度法测定混合样品溶液中

苯甲酸钠的含量

一、目的

1．熟悉双波长分光光度法测定二元混合物中待测组分含量的原理和方法。

2．掌握选择测定波长（λ1）和参比波长（λ2）的方法。

二、原理

混合样品溶液由苯酚和苯甲酸钠组成，在0.04mol/LHCl溶液中测得其吸收光谱，苯甲酸钠的吸收峰在229nm处，苯酚的吸收峰在210nm处。若测定苯甲酸钠，从光谱上可知干扰组分（苯酚）在229和251nm处的吸光度相等，则ΔA＝KC苯甲酸钠

ΔA仅与苯甲酸钠浓度成正比，而与苯酚浓度无关，从而测得苯甲酸钠的浓度。

三、仪器与试剂紫外分光光度计苯酚苯甲酸钠蒸馏水盐酸

四、操作步骤及主要结果

1．样品的制备

（1）标准储备液的配制精密称取苯甲酸钠0.1013g和苯酚0.1115g，分别用蒸馏水溶解，定量转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为200μg/ml的储备液，置于冰箱中保存。

（2）标准溶液的配制分别吸取标准苯酚储备液5.00ml和标准苯甲酸钠储备液5.00ml至100ml容量瓶中，用0.04mol/LHCl溶液稀释至刻度，摇匀，即得浓度为10μg/ml的标准溶液。

2．样品的测定（1）波长组合的选择于可见－紫外分光光度计上分别测定苯酚和苯甲酸钠标准溶液的吸收光谱（检测波长200~320nm），确定双波长法测定苯甲酸钠含量时的参比波长（λs=257.5nm）和测定波长（λm=231.2nm）。（2）苯甲酸钠工作曲线的绘制配制不同浓度的l苯甲酸钠/0.04MHCl 溶液。以0.04mol/L HCl溶液为参比溶液，测定系列浓度的苯甲酸钠/0.04M HCl溶液在λm和λs处的吸光度差值（见表1），计算其回归方程Y=0.0652X+0.0311(R2=0.999)。（3）测定以0.04mol/L HCl溶液为参比溶液，测定混和溶液的吸光度值( n=3 )，根据回归方程计算混和溶液中苯甲酸钠的含量（X，RSD%）。见表2

表1双波长法测定不同浓度下苯甲酸钠标准溶液的吸光度

标准溶液浓度（ug/ml）231.2nm 吸光度257.5nm吸光度吸光度差值

2 0.16

3 0.012 0.151

4 0.324 0.021 0.303

6 0.455 0.034 0.421

8 0.605 0.046 0.559

10 0.735 0.054 0.681

12 0.871 0.062 0.809

表2混合溶液不同波

长下的吸光度

测量次数231.2nm 吸光度257.5nm吸光度吸光度差值

1 0.61

2 0.110 0.502

2 0.614 0.11

3 0.501

3 0.613 , 0.112 0.501

平均值0.612 0.112 0.500 RSD均小于0.1%将Y=0.500代入回归方程Y=0.0652X+0.0311得X=7.2，则样品浓度为：7.2936ug/ml则其含量为：7.3*100/1000=0.73mg

五讨论：本试验采用双波长法测定苯酚和苯甲酸钠的混合液中苯甲酸钠的含量，关键是两个波长的选择，同时应使两波长下苯甲酸钠的吸光度值足够大，以减小测量误差。

六.思考题：选择等吸收波长的原则是什么？

①干扰组分b在这两个波长（即参比波长和测定波长）应具有相同的吸光度，即A2b- A1b=0 。

②待测组分在这两个波长处的吸光度差值应足够大。

实验二导数光谱法测定混合样品溶液中苯酚的含量

一、目的

1．学习导数吸收光谱的绘制。

2．利用导数光谱法直接测定二元混合物中组分的含量。

二仪器与试剂紫外分光光度计苯酚苯甲酸钠蒸馏水盐酸

三、操作步骤及主要结果

1．样品的制备

（1）标准储备液的配制精密称取苯甲酸钠0.1013g和苯酚0.1115g，分别用蒸馏水溶解，定量转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为200μg/ml的储备液，置于冰箱中保存。

（2）标准溶液的配制分别吸取标准苯酚储备液5.00ml和标准苯甲酸钠储备液5.00ml至100ml容量瓶中，用0.04mol/LHCl溶液稀释至刻度，摇匀，即得浓度为10μg/ml的标准溶液。

测定波长的选择：分别测定苯甲酸钠和苯酚的一阶导数吸收光谱，选择苯甲酸钠一阶导数等于0、而苯酚的一阶导数偏离零点较大的波长处，作为苯酚的测定波长269nm；

苯酚二阶导数工作曲线绘制配制浓度为2、4、6、8、10、12 μg/ml苯酚/0.04MHCl溶液。以0.04mol/L HCl溶液为参比溶液，测定系列浓度的苯酚/0.04M HCl溶液二阶导数光谱，读取测定波长处不同浓度苯酚溶液的二阶导数值，计算其回归方程。Y=5014.2*X+0.021866(R2=0.999)

混合样品二阶导数吸收光谱的测定（n=3）平均值为：0.0015代入上述公式中得：样品中苯酚的浓度为7.55*0.11156/0.1=8.4ug/ml

样品中苯酚的含量为8.4*100/1000=0.84mg

五讨论：本试验采用双波长法测定苯酚和苯甲酸钠的混合液中苯酚的含量，关键是两个波长的选择，同时应使两波长下苯甲酸钠的导数光谱值为0，而苯酚的导数光谱值最大，故选用269nm下的二阶导数光谱以减小测量误差。

六.思考题：导数光谱进行测定的特点是什么？

导数光谱法是将吸光度信号转化为对波长的导数信号的方法。导数光谱是解决干扰物质与被测物光谱重叠，消除胶体等散射影响和背景吸收，提高光谱分辨率的一种数据处理技术。

导数光谱的特点：

①峰形特点

②特征性增加：吸收峰数为：导数阶数+1，即n+1

③可消除干扰：高一阶的导数，可消除低一阶的干扰

④分辨率提高：随导数阶数的增加，峰形越来越尖锐，峰变窄，因而导数光谱法分辨率高。

⑤选择性及灵敏度提高

实验三高效液相色谱法定量分析（外标法）

一、目的

掌握HPLC仪的操作方法；

掌握HPLC外标定量分析的原理和方法。

二、提要