黄连中小檗碱的研究(仪器分析)
川黄连中小檗碱的提取及纯化工艺的研究_林叶新
黄连为毛莨科植物黄连 Coptis chinensis Franch 的干燥根 茎［1］。 小 檗 碱 为 黄 连 中 含 有 量 最 高 的 原 小檗碱型生物碱，也是最重要的活性成分之一，具 有抗炎、抗菌、抗癌，治疗糖尿病和心血管疾病， 及抑制脂肪分化等多方面药理作用［2-6］。
传统用于提取黄连小檗碱的方法有稀硫酸法、 乙醇浸提法、水提法等［7-9］，这些方法有一定的局 限性，如消耗溶剂量大、耗时长、提取率低等。因 此，为提高黄连小檗碱的提取率，一些现代化方 法，如有超声波提取法、超微振动法、亚临界水提 取法、加速 溶 剂 萃 取 法、 微 波-索 氏 工 艺 联 合 提 取 法等［10-13］也 被 采 用 于 黄 连 小 檗 碱 的 提 取 中。 尤 其 是微波辅助提取，因微波具有能促进植物细胞破 裂，提高有效成分从物料内部向提取溶剂界面的扩
2013 年 6 月 第 35 卷 第 6 期
中成药 Chinese Traditional Patent Medicine
June 2013 Vol． 35 No． 6
川黄连中小檗碱的提取及纯化工艺的研究
林叶新1 ， 夏之宁1，2* ， 陈 华2 ， 杨丰庆2 （ 1． 重庆大学生物工程学院，重庆 400030； 2． 重庆大学化学化工学院，重庆 400030）
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2013 年 6 月 第 35 卷 第itional Patent Medicine
June 2013 Vol． 35 No． 6
沸现象，并降低了高温破坏目标产物的可能性。通 过与传统提取工艺的对比，发现此方法提取时间 短，提取率高，优于其他提取方式。此外，本研究 还采用了 AB-8 大孔吸附树脂对黄连生物碱进行分 离纯化。通过比较小檗碱的提取率和纯化后的纯 度，得到一种快速简单有效地提取及纯化川黄连中 小檗碱的方法。 1 材料与方法 1. 1 材料 川黄连购买于重庆康济跃洪药业有限 公司。将黄连粉碎，过 50 目筛。盐酸小檗碱标准 品 （ 纯度≥ 98% ，上海源叶生物科技有限公司） 、 乙腈 （ 分析纯，上海陆都试剂化工厂） 、冰醋酸 （ 分析 纯，重 庆 川 东 化 工 有 限 公 司） 、无 水 乙 醇 （ 分析纯，重庆川东化工有限公司） 、AB-8 大孔树 脂 （ 天津市光复精细化工研究所） 。 1. 2 仪器 TCMC—204 型温控式微波化学反应器 （ 南京陵江科技开发有限责任公司） 、LC—900B 高 效液相色谱仪 （ 配 LB 900 型紫外检测器，重庆川 仪九厂） 、HW—2000 色谱工作站 （ 南京千谱软件 有限公司） 、SHZ-D （ Ⅲ） 循环水式真空泵 （ 巩义 市予华仪器有限责任公司） 、UV—2450 紫外分光 光度计 （ 日本岛津公司） 、AY120 电子天平 （ 日本 岛津公司） 1. 3 方法 1. 3. 1 色谱条件 Kromasil C18 色 谱 柱 （ 250 mm × 4. 6 mm，5 μm） 色谱柱，柱温 25 ℃ ； 流动相 为乙腈-水 （ 30 ∶ 70） 含 0. 6% 冰醋酸，体积流量 1. 0 mL / min； 检测波长 342 nm。 1. 3. 2 对照品工作曲线的测定 准确称取 2. 5 mg 盐酸小 檗 碱 标 准 品，用 色 谱 流 动 相 溶 解 成 0. 025 mg / mL 的盐酸小檗碱母液，备用。使用时，用色 谱流 动 相 逐 级 稀 释 至 所 需 的 质 量 浓 度。 用 RPHPLC 测定盐酸小檗碱的量，每个样品测定 3 次。 以盐酸小檗碱峰面积对质量浓度拟合工作曲线。 1. 3. 3 微波辅助回流法提取 准确称取川黄连药 粉 （ 3. 0 g） ，在设定条件下，采用 TCMC—204 型 温控式微波化学反应器，对黄连小檗碱进行提取。 提取工艺优化时，先通过单因素试验 （ 考察乙醇 浓度、微波回流时间、提取温度、料液比、提取次 数等因素） 选取影响黄连小檗碱提取率的因素和 水平，再进行正交试验，确定最佳提取工艺。提取 率计算公式为 （ 提取所得小檗碱的质量 /生药质 量） × 100% 。单因素初始条件为乙醇 40% ，微 波时间 10 min，温度为 70 ℃ ，料液比为 1 ∶ 20，提
薄层色谱—荧光分光光度法测定黄连中小檗碱的含量
薄层色谱—荧光分光光度法测定黄连中小檗碱的含量摘要成立了薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连中小檗碱的含量。
以1%盐酸甲醇为溶剂超声提取，用苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨(6∶3∶∶∶展开，甲醇洗脱，调剂pH值为12，在Ex＝365nm，Em＝409nm的条件下测定其荧光强度，线性范围为～ml，r＝，平均回收率为%。
关键词：薄层色谱-荧光分光光度法；黄连；小檗碱黄连为毛莨科植物黄连(Coptis chinensis Franch)、三角叶黄连(Coptis deltoides et Hsiao)或云连(Coptis teeta Wall)的干燥根茎。
其要紧生物活性成份为小檗碱。
本文采纳薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连药材中小檗碱的含量。
1 仪器与试药仪器RF-540型荧光分光光度仪，CS-930双波长薄层扫描仪(日本岛津)。
试药盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所)；黄连药材(市售)。
2 方式与结果对照品溶液的制备周密称取盐酸小檗碱对照品适量，加入甲醇制成1mg/ml贮备液。
用前取贮备液适量用甲醇稀释成20μg/ml的对照品溶液。
薄层色谱条件〔1，2〕以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨(6∶3∶∶∶为展开剂，展开前用氨水饱和15min，展距为13cm，晾干后置紫外灯(365nm)下检视，小檗碱呈现黄绿色荧光斑点(Rf＝。
荧光测定条件的选择pH条件的选择取对照品溶液，加入不同体积的1mol/L氢氧化钠溶液，在Ex＝365nm，Em＝409nm处测定盐酸小檗碱的荧光强度。
结果显示20mmol/L氢氧化钠溶液荧光强度最大(见表1)。
表1 氢氧化钠浓度对小檗碱荧光强度的阻碍氢氧化钠(mmol/L)202550小檗碱荧光强度荧光光谱的绘制取对照品溶液用甲醇稀释成约100ng/ml(碱液浓度为20mmol/L)，进行荧光强度扫描测定，从扫描图谱取得小檗碱最大激发波长365nm，最大发射波长为409nm(见图1)。
实验三 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定
实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定小檗碱又称黄连素，是在高等植物中分布比较广泛的、有明显生理活性的化学成分。
主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。
小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐（即盐酸黄连素）治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。
黄连为毛茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch。
），三角叶黄连（C。
deltoidea C。
Y。
Cheng et Hsiao）或云连（C。
teetoides C。
Y。
Cheng）的根茎，含有小檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。
目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。
三颗针来源于小檗科小檗属（Berberis）多种植物，其根皮含生物碱约2%，主要含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。
R1 R2 R3 R4 R51R1OR2OR5£-OR3OR4+3 CH3 HCH2CH3 CH3 CH3 CH3 HCH2CH2CH2CH23H CH3 CH3 CH3 H2345小檗碱 (Berberine)属异喹啉类生物碱，自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100℃干燥时即失去结晶水，转为棕黄色，加热至110℃时，其颜色加深变暗色。
Mp.145℃至160℃即分解。
OCH3H3NHOCH3OH小檗胺H3COHCH3游离小檗碱能缓缓溶于水，在热水及热乙醇中易溶，而在冷乙醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。
醇式和醛式小檗碱则具有一般生物碱的通性，难溶于水，易溶于有机溶剂。
小檗碱的盐类除中性硫酸盐、磷酸盐外，一般在水中的溶解度均较小。
小檗碱及其盐类在水、乙醇中的溶解度如下表：小檗碱还能与苯、氯仿、丙酮等溶剂结合成分子缩合物，有完好的结晶状态，可作为小檗碱的识别之用。
黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定.
实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。
3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
CHOOCH333季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）OCH3N+OCH33小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。
黄连中小檗碱的研究(仪器分析)
实验步骤:
分别取上述药材、水提取物、醇提物及化学对照品盐酸 小檗碱粉末少量，与KBr混合，研磨均匀后压片，放入光 谱仪中测定。
数据处理:
图1为黄连药材及其水提取物、80 ％乙醇提取物和主要成分盐酸小檗 碱的红外光谱图 表1为cm盐1 酸小聚碱的红外谱峰归属 情况。
cm 1
比较图1各谱图的吸收峰可知,
盐酸小檗碱1505
芳环骨架振
动峰在整体谱图中表现的峰越强,
峰形越细长, 则该混合物中的盐酸
小檗碱的含量越高。除此之外, 各
原理: 乙腈-0.1%磷酸为流动相进行分离以高效液相 色谱仪进行检测，利用峰高进行定量分析。
阴性试验:
制备盐酸小檗碱阴性试液，依所给色谱条件 操作，得色谱图，与对照品、供试品色谱 图比较，结果见图2。表明在、盐酸小檗碱 峰处无干扰。
IR和HPLC 的 比较
IR定性分析 能够简单快速 地提供黄连中 主要化学成分 的定性与半定 量信息。
HPLC定量分析 简单可行, 重 复性好, 可作 为检测盐酸小 檗碱含量的质 量控制。
檗碱的含量最高。小檗碱为一种异喹啉生 物碱, 又称黄连素, 熔点145℃。小檗碱对溶 血性链球菌、金黄色葡萄球菌、淋球菌和 弗氏、志贺氏痢疾杆菌均有抗菌作用, 并有 增强白血球吞噬作用。因此, 快速准确地测 定黄连中小檗碱含量, 对于中草药有效成分 的分析研究有着重要意义。
黄连中小檗碱的检测
红外光谱研究 高效液相色谱研究 两种分析方法的比较
黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定.
实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。
3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
CHOOCH333季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）OCH3N+OCH33小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。
黄连中小檗碱的提取和鉴定(设计性实验)
实验二黄连中小檗碱的提取和鉴定（设计性实验）一、前言黄连为毛茛科黄根茎含多种生物碱, 主要是小檗碱, 又称黄连素约为５%～８%, 其次为黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱（巴马亭）、药根碱、非洲防己碱．尚含黄柏酮、黄柏内酯、木兰花碱、阿魏酸等．叶含小檗碱１.４%～２.８%．此外, 黄连中还含有多种微量元素．从三角叶黄连中分离鉴定了黄连碱、小檗碱、掌叶防己碱和药根碱．连属植物黄连、三角叶黄连或云连的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连中有效成分是生物碱，其中小檗碱含量最高。
小檗碱对溶血性链球菌，金黄色葡萄球菌，淋球菌和弗氏、志贺氏痢疾杆菌等均有抗菌作用，并有增强白血球吞噬作用，对结核杆菌、鼠疫菌也有不同程度的抑制作用，对大鼠的阿米巴菌也有抑制效用。
小檗碱在动物身上有抗箭毒作用，并具有末梢性的降压及解热作用。
小檗碱的盐酸盐（俗称盐酸黄连素已广泛用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等，对肺结核、猩红热、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定疗效。
中医常用黄连、黄柏、三颗针及十大功劳等作清热解毒药物，其中主要有效成分即小檗碱。
二、目的要求1.通过对黄连中小檗碱的提取，掌握天然产物的提取技术。
2.通过对小檗碱的鉴定，掌握一般生物碱的鉴别方法。
3.通过查阅资料并结合所学知识，初步了解并完成实验方案的设计。
三、实验原理黄连主含小檗碱，含量为5.20%-7.69%，还含黄连碱，甲基黄连碱、掌叶防己碱等，由于它们有相似结构，常统称为黄连生物碱。
小檗碱异名为黄连素，在水或稀乙醇中结晶所得小檗碱为黄色针状结晶。
游离小檗碱微溶于冷水，易溶于热水，几乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。
小檗碱和大分子有机酸生成的盐在水中的溶解度都很小。
小檗碱有季铵式、醛式、醇式，3种能互变的结构式，以季铵式最稳定。
小檗碱的盐都是季铵盐，于硫酸小檗碱的水溶液中加入计算量的氢氧化钡，生成棕红色强碱性游离小檗碱，易溶于水，难溶于乙醚，称为季铵式小檗碱。
实验二 从黄连中提取小檗碱-Rep.20141029
实验二从黄连中提取小檗碱一、实验原理：黄连为我国名产药材之一，抗菌力很强，对急性结膜炎、口疮、急性细菌性痢疾、急性肠胃炎等均有很好的疗效。
黄连中有多种生物碱，除以小檗碱（黄连素）为主要有效成分外，尚含有黄连碱、甲基黄连碱、棕榈碱和非洲防己碱等。
随野生和栽培产地的不同，黄连中的小檗碱含量约4%~10%。
含小檗碱的植物很多，如黄柏、伏牛花、南天竹等，但以黄连和黄柏的含量最高。
小檗碱是黄色针状体，微溶于水和乙醇，易溶于热水和热乙醇中，几乎不溶于乙醚。
小檗碱存在3种互变异构体，其结构如下：自然界以季胺碱的形式存在。
小檗碱的酸式盐、硫酸盐、硝酸盐均难溶于冷水，易溶于热水，其各种盐的纯化都比较容易。
二、主要仪器与试剂1、仪器：旋转蒸发仪，250ml圆底烧瓶，回流冷凝管，水浴锅，布式漏斗，抽滤瓶。
2、试剂：黄连，1%乙酸，浓盐酸，丙酮。
三、操作步骤1、提取。
称取10g中药黄连，切碎、磨烂，放入250ml圆底烧瓶，加入100ml 95%乙醇，装上回流冷凝管，热水浴加热回流40 min，静置浸泡，过滤或抽滤，滤渣重复上述操作处理两次，合并3次的滤液。
2、浓缩。
上述滤液在水循环真空泵减压下蒸馏出乙醇和水，回收，直到呈棕红色糖浆状为止。
3、产生结晶。
再加入1% 乙酸（约20~30ml），加热溶解，抽滤以除去不溶物，然后于溶液中滴加浓盐酸至溶液浑浊为止（约需10ml），冰浴冷却即有黄色针状体的小檗碱盐酸盐析出（晶体不好可用水重结晶一次），抽滤。
结晶用水洗涤两次，再用丙酮洗涤一次，加速干燥，烘干后称重。
4、测定熔点。
熔点文献值为200℃左右。
思考题：1.黄连用95%乙醇在热水浴中加热回流浸泡后，应如何进行抽滤（趁热抽滤、冷却后抽滤、或是冷热抽滤都可以）？为什么？2. 在小檗碱的整个提取过程中，影响产品得率的因素有哪些？。
黄连提取工艺的研究
黄连提取工艺的研究李明玥【摘要】采用硅胶G薄层色谱法对黄连进行鉴定,证明黄连的提取物中主要成分为小檗碱.运用正交试验设计法筛选出黄连中小檗碱提取的最佳条件,采用高效液相色谱法,以提取液中的小檗碱的含量为指标优选出黄连中小檗碱的提取工艺.本实验表明,回流提取或连续回流提取,水(用黄连粗粉,回流2次,每次1.5小时,加水量为12倍)和乙醇(体积农度分别为50％、60％、70％)提取黄连中小菜碱的效果基本相同.因此,用水代替乙醇作溶剂,既可保证提取的质量,又能降低成本.本研究结果为黄连中小檗碱的工业化生产提供了理论参考.【期刊名称】《黑龙江医药》【年(卷),期】2012(025)004【总页数】3页(P557-559)【关键词】黄连;小檗碱;提取工艺【作者】李明玥【作者单位】哈药集团生物工程有限公司【正文语种】中文【中图分类】R284.2小檗碱(berberine BR)是黄连的主要有效成分，为季铵碱。
其抗菌能力很强，对急性结膜炎、口疮、急性细菌性痢疾、急性肠胃炎等均有很好的疗效，主要用于肠道感染、细菌性痢疾等，黄连中小檗碱的含量高达3.6%以上［1］。
1.1 材料1.1.1 药品与试剂药品:黄连(购于黑龙江省药材批发公司);盐酸小檗碱标准品(购于南京省生物技术中心)。
试剂:硅胶G(分析纯);乙酸乙酯(分析纯);甲醇(分析纯);冰醋酸(分析纯);95%乙醇;乙腈(液相色谱纯);磷酸氢二钾(分析纯);盐酸(分析纯);甲醇(色谱纯);1.1.2 仪器设备薄层用玻璃板;展开缸;毛细管;回流提取装置;离心机;玻璃器皿(烧杯，试管，三角瓶等);粉碎机;研钵;高效液相色谱仪(柱 Waters C18，4.6×150mm，5m;SPD －10AVP紫外检测器;色谱柱;泵;柱温箱);电热恒温水浴锅;万分之一电子天平。
1.2 方法1.2.1 黄连中小檗碱的提取方法研究根据有关资料［2］设计正交试验筛选出小檗碱的最佳水回流提取工艺并与用不同浓度的乙醇回流提取的结果相比较。
黄莲鉴定实验报告
黄莲鉴定实验报告篇一：实验黄连中小檗碱的提取、精制和鉴定实验四黄连中小檗碱的提取、精制和鉴定一、概述黄连系毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eranch.）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床。
主要化学成分的结构及理化性质：小檗碱为黄色针状结晶，mp为154℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
NHCHOOCH333OCH3季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OCH3OCH3小檗碱（黄连素）二、实验部分（一）实验目的1、掌握小檗碱的结构特点和理化性质，以及一般的提取精制方法。
2、掌握旋转蒸发仪的使用。
3、熟悉盐酸小檗碱的色谱鉴定和定性鉴定方法。
（二）实验原理1、提取原理：小檗碱为异喹啉类小檗碱，结构中的氮原子以季铵盐形式存在，显一定程度的亲水性，因此游离小檗碱能溶与水(1:20)及乙醇(1:100)，热水或热乙醇中易溶，不溶于乙醚、氯仿、苯等有机溶剂。
盐酸小檗碱在沸水中溶解，在冷水中析出。
2、分离原理：小檗碱与酸所成的盐在水中的溶解度不尽相同，如硫酸小檗碱为(1:30)，酸性硫酸小檗碱为(1:100)，枸橼酸小檗碱为(1:125)，而盐酸小檗碱为(1:500)。
本实验就是据游离小檗碱在水和乙醇中的溶解度较大，而其盐酸盐难溶于水的性质进行提取和精制的。
黄连素片中小檗碱的测定(氧化还原滴定法)
黄连素片中小檗碱的测定吕培银（四川农业大学理学院，四川雅安625000）摘要：本实验用间接碘量法滴定K2Cr2O7测定黄连素片中盐酸小檗碱的含量。
本实验的实验目的是学习和掌握黄连素片中盐酸小檗碱的测定的原理和方法、返滴定法、重铬酸钾法、碘量法。
关键词：黄连素；小檗碱；重铬酸钾法；碘量法Determination of the alkali in the jaundice filmLv Peiyin(Sichuan Agricultural University School of Science, Sichuan Ya'an 625000) Abstract: The content of chlorpyrifos hydrochloric acid in the flaxin slice was measured in this experiment by indirect iodine content titration K2Cr2O7. The purpose of this experiment is to learn and master the principle and method of the determination of the small hydrochloric acid in the jaundice, the method of retintolation, the potassium heavy chromium and the iodine measurement method.Keywords: jaundice; chlorpyrifos; potassium rechromic; iodine method1 前言黄连为毛茛科黄连属植物黄连(coptis chinensisEraneh)三角叶黄连(coptis deltoidca C.Ychenget Hsiao)或云连(coptiteetoldesC.Y .cheng)的干燥根。
黄连中小檗碱的提取
黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连 （coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng） 的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。 黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱 （berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。其 中小檗碱含量最高，可达 10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。小檗碱有 很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小 檗碱相似。 一、目的要求 1、掌握从黄连中提取小檗碱的原理和方法；小檗碱精制的方法。 2、学习渗漉法提取方法。 3、熟悉小檗碱的化学性质和鉴定方法。 二、实验原理 小檗碱为黄色针状结晶，mp 为 145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1:20） 及乙醇中（1:100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等 有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。盐酸盐为 l:500，枸橼酸盐 1:125，酸性硫酸盐 1:100，硫酸盐 l:30，但在热水中都比较容易溶解。
掌叶防己碱
本实验是利用小檗碱属于季铵碱，其游离型在水中的溶解度最大。而它们的 盐类以含氧酸盐在水中溶解度较大，不含氧酸盐难溶于水，其盐酸盐在水中溶解 度则更小。利用此性质结合盐析法，可从黄连中提取小檗碱，再利用两种生物碱 极性不同，采用柱色谱分离。 三、仪器与试剂
1、试剂：黄连粗粉 50g，0.2%-0.5%硫酸溶液，乙酸乙酯溶液，甲醇溶液，10%NaOH 溶液，丙酮溶液，氨水，饱和石灰水，氯化钠。
（3）取自制精制盐酸小檗碱少许，加水 1ml 待溶解后，加浓硝酸 1-2 滴，即 产生绿色硝酸小檗碱沉淀。
分析化学--黄连素片中盐酸小檗碱的测定
2019/11/13
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二、实验目的
• 学习和掌握黄连素片中盐酸小檗碱的测定 的原理和方法
• 学习和掌握返滴定法 • 学习和掌握重铬酸钾法 • 学习和掌握碘量法
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返滴定法
当试液中待测物质与滴定剂反应很慢，或者用滴定剂 直接滴定固体试样，反应不能立即完成，故不能用 直接滴定法进行滴定。此时可先准确地加入过量标 准溶液，待反应之后，在用另一种标准溶液滴定剩 余的标准溶液。
I
3
络离子；
2.避免光照；
3.控制溶液的酸度。
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21
参考文献
［1］四川大学化工学院、浙江大学化学系.分析化学实验 北京：高等教育出版社 ，2010 ［2］武汉大学.分析化学.5版 北京：高等教育出版社2008 ［3］傅强主编.药物分析实验方法学.人民卫生出版
社,2008.7.
滴定必须在中性或酸锌溶液中进行。因为 I 2 在碱性
溶液中会发生歧化反应。
2.防止 I 2 的挥发和空气中的氧气氧化。
加用入碘过瓶量，K不I的要可剧以烈使摇动I 2，形以成减I3少络的I 2离子挥，发I且，滴定被时空使气
氧化的反应，随光照及酸度增高而加快。因此，在反
应时，应置于暗处，滴定前调好酸度，洗出I 2 后，应
定至溶液呈亮绿色为终点。
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14
C20H18ClNO4 %
2(6 CK2Cr2O7
V C K2Cr2O7
Na 2 S 2O3
m 1000
VNa2S2O3
) M K2Cr2O7
100 %
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【免费下载】黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定
实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。
3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
O ONHCHOOOOCH3OCH3季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OO33小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
N+H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。
黄莲鉴定实验报告
黄莲鉴定实验报告篇一：实验黄连中小檗碱的提取、精制和鉴定实验四黄连中小檗碱的提取、精制和鉴定一、概述黄连系毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eranch.）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床。
主要化学成分的结构及理化性质：小檗碱为黄色针状结晶，mp为154℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
NHCHOOCH333OCH3季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OCH3OCH3小檗碱（黄连素）二、实验部分（一）实验目的1、掌握小檗碱的结构特点和理化性质，以及一般的提取精制方法。
2、掌握旋转蒸发仪的使用。
3、熟悉盐酸小檗碱的色谱鉴定和定性鉴定方法。
（二）实验原理1、提取原理：小檗碱为异喹啉类小檗碱，结构中的氮原子以季铵盐形式存在，显一定程度的亲水性，因此游离小檗碱能溶与水(1:20)及乙醇(1:100)，热水或热乙醇中易溶，不溶于乙醚、氯仿、苯等有机溶剂。
盐酸小檗碱在沸水中溶解，在冷水中析出。
2、分离原理：小檗碱与酸所成的盐在水中的溶解度不尽相同，如硫酸小檗碱为(1:30)，酸性硫酸小檗碱为(1:100)，枸橼酸小檗碱为(1:125)，而盐酸小檗碱为(1:500)。
本实验就是据游离小檗碱在水和乙醇中的溶解度较大，而其盐酸盐难溶于水的性质进行提取和精制的。
黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定.
实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。
3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
CHOOCH333季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）OCH3N+OCH33小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。
【免费下载】实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定
【免费下载】实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定小檗碱又称黄连素，是在高等植物中分布比较广泛的、有明显生理活性的化学成分。
主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。
小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐（即盐酸黄连素）治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。
黄连为毛茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch 。
），三角叶黄连（C 。
deltoidea C 。
Y 。
Cheng et Hsiao ）或云连（C 。
teetoides C 。
Y 。
Cheng ）的根茎，含有小檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。
目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。
三颗针来源于小檗科小檗属（Berberis ）多种植物，其根皮含生物碱约2%，主要含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。
N +OH ￡-R 1OOR 4OR 3R 2O R 5R 1 R 2 R 3 R 4 R 5 CH 3 CH 3 H CH 3 CH 3 CH 3 CH 3 H H CH 3 H CH 3 CH 3 CH 3 H CH 212345CH 2CH 2CH 2CH 2小檗碱(Berberine)属异喹啉类生物碱，自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100℃干燥时即失去结晶水，转为棕黄色，加热至110℃时，其颜色加深变暗色。
Mp.145℃至160℃即分解。
N H H 3N O CH 3O CH 3O O H O N H H 3CO C H 3D?éT°·游离小檗碱能缓缓溶于水，在热水及热乙醇中易溶，而在冷乙醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。
醇式和醛式小檗碱则具有一般生物碱的通性，难溶于水，易溶于有机溶剂。
黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定.
实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。
3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
CHOOCH333季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）OCH3N+OCH33小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。
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样品处理：
• 黄连药材经粉碎后过40目筛，分别称取适量黄连药材粉
末两份，各置于250 mI圆底烧瓶中，分别加入8倍量去离子
水或80％乙醇水溶液浸润30min，之后加热回流提取2次，每 次l h，趁热过滤，将滤液浓缩后真空干燥，得到黄连的水提 物与醇提物。
实验步骤： 分别取上述药材、水提取物、醇提物及化学对照品盐酸 小檗碱粉末少量，与KBr混合，研磨均匀后压片，放入光 谱仪中测定。 数据处理：
图1为黄连药材及其水提取物、80％乙醇提取物和主要成分盐酸小檗碱的红外光谱图 表1为盐酸小聚碱的红外谱峰归属情况。
比较图 1 各谱图的吸收峰可知，盐酸小檗碱 1505 cm1 芳环骨架振动峰在整体谱图中表现的 峰越强，峰形越细长，则该混合物中的盐酸小檗 碱的含量越高。除此之外，各谱图中 1365 ， l277 ， 1 l229，l036 cm 的存在也可以帮助判断小檗碱 在混合物中含量的高低；另外，通过判断谱峰之 间的比例也能帮助辨别盐酸小檗碱在混和物中的 比例。
阴性试验： 制备盐酸小檗碱阴性试液，依所给色谱条件 操作，得色谱图，与对照品、供试品色谱 图比较，结果见图2。表明在、盐酸小檗碱 峰处无干扰。
IR和HPLC 的 比较
IR定性分析 能够简单快速 地提供黄连中 主要化学成分 的定性与半定 量信息。
HPLC定量分析 简单可行，重 复性好，可作 为检测盐酸小 檗碱含量的质 量控制。
黄连中小檗碱的研究
黄连，中药材具有清热燥湿，泻火解毒 的功效，可用于湿热内蕴所致黄疸，呕吐， 泻痢，温病高热，目赤，牙痛，心烦不寐， 心火亢盛，心悸不宁，消渴；外治湿疮， 湿疹，耳道流脓，疮疡。姜黄连清胃，止 呕，于寒热互结，湿热中阻，痞满呕吐时 施用；
黄连的有效成分主要为生物碱，其中小 檗碱的含量最高。小檗碱为一种异喹啉生 物碱，又称黄连素，熔点145℃。小檗碱对 溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、淋球菌 和弗氏、志贺氏痢疾杆菌均有抗菌作用， 并有增强白血球吞噬作用。因此，快速准 确地测定黄连中小檗碱含量，对于中草药 有效成分的分析研究有着重要意义。
黄连中小檗碱的检测
红外光谱研究
高效液相色谱研究
两种分析方法的比较
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原理：黄连所含化学成分不同，其红外光谱的特征 吸收峰的位置、峰形、峰强也就不同。
实验仪器 样品处理
A B 红外光谱研究 （定性）
C 实验步骤
D 数据处理
实验仪器： 采用Spectrum Gx型的傅里叶变换的红外分析光谱，检测器 为DTGS的检测扫描器，红外光谱范围为4000—400 cm1
标准曲线： 精密称取盐酸小檗碱对照品12.30mg，置50ml量瓶中， 加入甲醇，超声15min溶解，并稀释至刻度。对照品贮备 液设进样量为1、2、3、5、7、10μl,依次注入色谱仪，测 定峰面积，以盐酸小檗碱对照品含量（X）为横坐标，以 峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线。进行线性回归， 得回归方程。盐酸小檗碱回归方程及线性系数见图1.盐酸 小檗碱含量在0.246~2.460μg范围内与峰面积积分值呈良 好的线性关系。
原理：乙腈-0.1%磷酸为流动相进行分离以高效液相 色谱仪进行检测，利用峰高进行定量分析。•
A B C 供试品制备 D 数据处理 高效液相色谱 （定量）
实验仪器 色谱条件
实验仪器： Agilent1200高效液相色150mm×4.60mm,5μm） 流动相为乙腈-0.1%磷酸（25∶75） 流速为1ml· min 1 检测波长为340nm 柱温为25℃ 进样量10μl 每1000ml0.1%的磷酸溶液加入50μl的三乙胺（扫尾 剂）进行洗脱
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供试品的制备：
酸性水溶剂煎煮法提取黄连中的盐酸小檗碱，再利用 热蒸馏水溶解，抽滤，重结晶，最后用无水乙醇溶解，抽 滤，重结晶，的盐酸小檗碱精制品。取精制样品适量，研 细，精密称取6.3mg，置容量瓶中，精密加入甲醇50ml， 密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，过滤，再称定 重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，即得。