微生物量磷 100809.

土壤微生物磷的测定

一、仪器设备

分光光度计，聚乙烯提取瓶（200ml），容量瓶（25ml），烧杯（25ml），广口瓶（100ml），其他设备参见微生物量碳。

二、试剂配制

去乙醇氯仿：参见微生物量碳。

碳酸氢钠溶液[c（NaHCO3）=0.5mol L-1，pH8.5]：42.0g分析纯碳酸氢钠溶于800ml去离子水，用1mol L-1NaOH溶液缓慢调节pH至8.5，再用去离子水定容至1L。注意该溶液放置时期过长时，溶液的pH值升高，需要经常调节酸度。

硫酸溶液[c（H2SO4）=2.5mol L-1]：70.0ml分析纯浓硫酸（H2SO4，ρ=1.89g ml-1），用去离子水稀释定容至500ml。

钼酸铵溶液[ρ（(NH4)4Mo7O24⋅4H2O）＝4g100ml-1]：20.0g分析纯钼酸铵溶于去离子水，定容至500ml。

抗坏血酸溶液[c（C6H8O6）=0.1mol L-1]：1.32g抗坏血酸溶于75ml去离子水。抗坏血酸溶液极易被氧化，应在使用时当天配制。但如果向75ml此溶液中加入25mg乙烯二胺四烷基醋酸二钠和0.5ml蚁酸，可短期保存。

酒石酸锑钾溶液[ρ（C4H4KO7Sb⋅½H2O）=1mg Sb ml-1]：0.2743g分析纯酒石酸锑钾溶于去离子水，定容至100ml。

混合显色液：取上述硫酸溶液125ml与37.5ml钼酸铵溶液混合，再加入75ml抗坏血酸溶液和12.5ml酒石酸锑钾溶液，混匀。此溶液保存时间不宜超过24h。

磷酸二氢钾标准溶液[ρ（KH2PO4）=4µg P ml-1]：0.1757g分析纯磷酸二氢钾（称量前105℃烘2～3h），溶于少量去离子水，再加入1-2ml浓硫酸，用去离子水定容至1L，即得40µg P ml-1磷酸二氢钾贮存液，置4℃下保存。取50ml贮存液用去离子水稀释定容至500ml，即得4µg P ml-1磷酸二氢钾标准溶液，此溶液不宜久存。

磷酸二氢钾溶液[ρ（KH2PO4）=250µg P ml-1]：1.0984g分析纯磷酸二氢钾（称量前105℃烘2～3h），溶于去离子水并定容至1L。

三、操作方法

（1）熏蒸

称取经前处理相当于4.0g烘干基的新鲜土样3份，置于25ml烧杯中。用无乙醇氯仿熏蒸24h，除去土样中残留的氯仿，详细操作步骤参见实验六十四。另称取等量的土样3份，置于另一干燥器中但不熏蒸，作为对照土样。

（2）浸提

将熏蒸与不熏蒸土样无损地转移到200ml聚乙烯提取瓶中，加入80ml0.5mol L-1NaHCO3溶液（土水比为1:20，w:v），振荡30min（300r min-1），用双层慢速定量滤纸过滤100ml广口瓶中，若滤液

浑浊，必须重新过滤。另称取经前处理相当于4.0g烘干基的土样3份于200ml聚乙烯提取瓶中，加入0.4ml250µg P ml-1KH2PO4溶液（相当于25µg P g-1土），再加入80ml0.5mol L-1NaHCO3溶液，同上进行提取。用于测定外加正磷酸盐态无机磷的回收率（R Pi），以校正土壤对熏蒸处理所释放出来的微生物生物量磷的吸附和固定，每种土壤测定一次回收率（R Pi）即可。提取液应立即测定或在–18℃下保存。

（3）测定

取适量的提取液（1.5～5ml）于25ml容量瓶中，加入适量的1mol L-1HCl溶液进行中和，HCl 溶液的加入量通常为提取液体积的1/2，放置4h并间隙摇动以排除溶液中的CO2。补充去离子水至约20ml，加入4ml混合显色液，再用去离子水定容，完全显色后，882nm下比色。

工作曲线：分别取0、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0ml4µg P ml-1磷酸二氢钾标准溶液于25ml容量瓶中，加入与样液等体积的0.5mol L-1NaHCO3溶液，同上进行中和、显色和比色测定，即得0、0.04、0.08、0.16、0.24、0.32µg P ml-1系列标准磷工作曲线。

（4）计算

土壤微生物生物量磷：B P=E Pi/（k P∙R Pi）

式中：E Pi为熏蒸与不熏蒸土样的差值，R Pi=[（外加KH2PO4溶液土的测定值–未熏蒸土样的测定值）/25]×100%，即校正系数；k P为转换系数，取值0.4（Brookes等，1982）。