高效液相色谱HPLC
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▪ 低压梯度洗脱（常压混合，高压进柱，1个 泵。）
▪ 高压梯度洗脱（高压混合，高压进柱，2个 泵。）
▪安捷伦泵：小视频 ▪色谱学堂：泵
在线脱气机
高效液相色谱仪流动相脱气的目的 1、使色谱泵输液均匀准确，减小脉动。 2、提高保留时间和色谱峰面积的重现性。 3、防止气泡引起尖峰。 4、使基线稳定，提高信噪比。 5、降低溶剂的紫外吸收本底。 6、减少死体积。 7、防止填料氧化。
什么是色谱法
色谱法是一种现代的分离分析方法 1906年正式命名(见诸文献) 20世纪30年代开始广泛研究和应用 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代
色谱法(Chromatography)溯源
100多年前俄国植物学家Tswett(茨维特)分离植物色 素时采用的实验方法
他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直 立玻璃管,再加入石油醚使其自由流下,结果色素中 各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带
色谱法的分类
按固定相的形态分: 平面色谱 o 纸色谱 o 薄层色谱 柱色谱
色谱法的分类示意图
什么是HPLC？
高效液相色谱法 –HPLC(High Performance Liquid Chromatography ) –是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的 高效能分离手段: o High 高 o Performance 性能 o Liquid 液体的 o Performance 色谱
HPLC的组成
由五大部分组成：： 溶剂输送系统（贮液器，高压泵） 进样系统（进样阀等） 分离系统（色谱柱等） 检测系统（检测器等） 记录及数据处理系统
1. 高压输液泵
为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体 的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速 是高效液相色谱的特点之一 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性
视频 ：脱气目的 在线脱气机
2. 进样装置
▪进样视频：安捷伦 ▪进样视频：岛津
3. 分离系统
包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。 色谱柱一般用内部抛光的不锈钢制成。其内径为2 ~ 6mm， 柱长为10 ~50cm，柱形多为直形，内部充满3～10 mm高效微 粒固定相。柱温一般为室温或接近室温
匀浆法填充柱： 将填料制成悬浮液，在高压泵的作用下压入装有洗脱 液的色谱柱。理论塔板数可达8万/米
Tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描述他的 实验方法，即现在的
Chromatography(色谱法)
Tswett（茨维特)的实验
一根长玻璃管填充碳酸钙的颗粒 将碾碎之植物叶片的提取液灌入柱中 随着石油醚提取液向下流过柱子，现出展宽的色带 分离出不同的化合物
Chromato -- 颜色 Graphy -- 图象
高压输液泵： 恒压泵（流量随阻力变化重现性差） 恒流泵（多用）：往复式 注射式
作用：将流动相在高压下连续不断地送入液路系统。 性能：①有足够的压力
②输出流量恒定，可调 ③输出压力平稳 ④泵室体积小 ⑤泵体抗腐蚀、耐酸
▪梯度洗脱装置
作用：将两种或两种以上溶剂按一定程序连续 改变配比，以改变流动相极性、离子强度、 PH值、提高分离效率。
又叫洗脱剂,溶剂
相(Phase):
物理化学术语,特指在某一系统中,具有相同成 分及相同物理、化学性质的均匀物质部分。各相 之间有明显可分的界面
色谱分离原理
色谱法的分类
按流动相的物态分:
气相色谱 (Gas Chromatography, GC) 用气体作为流动相(又叫载气)
液相色谱 (Liquid Chromatography, LC) 用液体作为流动相(又叫洗脱剂)
适用：高沸点、热不稳定有机及生化 试样的高效分离
液相色谱法的分类
按流动相和固定相的相对极性分: 正相色谱(Normal Phase Chromatography) o 固定相的极性大于流动相 反相色谱(Reversed Phase Chromatography) o 固定相的极性小于流动相 有机化合物的极性 分子间作用力(静电引力,偶分子间作用力(静电引力,偶极力,色散 力,氢键力)综合表现的一种表述
2017年样品检测组操作技能培训
（一）高效液相基础知识 高志国
（2017.03.29）
高效液相色谱基础知识
色谱法原理与分类 HPLC的组成 HPLC的应用 HPLC色谱图名词术语 HPLC定量分析原理
色谱法原理及分类
什么是色谱法 色谱法溯源 Tswett（茨维特)的实验 色谱法原理 色谱法的分类
有机化合Leabharlann Baidu极性示例
液相色谱法的分类
按分离过程的机理分:
1 吸附色谱(Absorption Chromatography) 根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离 2 分配色谱(Partition Chromatography) 分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度(分配系数)不同 3 离子交换色谱(Ion Exchange Chromatography) 根据样品组份离子交换亲和力的差异分离,简称离子色谱(IC) 4 体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography) GPC(Gel Permeation Chromatography) • 固定相是疏水性凝胶,流动相是有机溶剂 GFC(Gel Filtration Chromatography) • 固定相是亲水性凝胶,流动相是水溶液
HPLC特点
特点：高压、高效、高速、高灵敏度 1. 高效分离 ： n =105 /米 2. 高速 ：使用高压泵，出峰时间几分钟到几十分钟 3. 高灵敏度 ：检测下限：10-9-10-13g（最小检测量） 4. 自动化程度高：仪器分析、电脑控制、色谱工作站 5. 应用范围广 ：可测有机物75%-80%
色谱法原理
是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解,分配,吸 附等化学作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各 组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相 互分离
两相中有一相是固定的,叫作固定相(Stationary Phase) 有一相是流动的,称为流动相(Mobile Phase),流动相
▪ 高压梯度洗脱（高压混合，高压进柱，2个 泵。）
▪安捷伦泵：小视频 ▪色谱学堂：泵
在线脱气机
高效液相色谱仪流动相脱气的目的 1、使色谱泵输液均匀准确，减小脉动。 2、提高保留时间和色谱峰面积的重现性。 3、防止气泡引起尖峰。 4、使基线稳定，提高信噪比。 5、降低溶剂的紫外吸收本底。 6、减少死体积。 7、防止填料氧化。
什么是色谱法
色谱法是一种现代的分离分析方法 1906年正式命名(见诸文献) 20世纪30年代开始广泛研究和应用 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代
色谱法(Chromatography)溯源
100多年前俄国植物学家Tswett(茨维特)分离植物色 素时采用的实验方法
他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直 立玻璃管,再加入石油醚使其自由流下,结果色素中 各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带
色谱法的分类
按固定相的形态分: 平面色谱 o 纸色谱 o 薄层色谱 柱色谱
色谱法的分类示意图
什么是HPLC？
高效液相色谱法 –HPLC(High Performance Liquid Chromatography ) –是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的 高效能分离手段: o High 高 o Performance 性能 o Liquid 液体的 o Performance 色谱
HPLC的组成
由五大部分组成：： 溶剂输送系统（贮液器，高压泵） 进样系统（进样阀等） 分离系统（色谱柱等） 检测系统（检测器等） 记录及数据处理系统
1. 高压输液泵
为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体 的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速 是高效液相色谱的特点之一 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性
视频 ：脱气目的 在线脱气机
2. 进样装置
▪进样视频：安捷伦 ▪进样视频：岛津
3. 分离系统
包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。 色谱柱一般用内部抛光的不锈钢制成。其内径为2 ~ 6mm， 柱长为10 ~50cm，柱形多为直形，内部充满3～10 mm高效微 粒固定相。柱温一般为室温或接近室温
匀浆法填充柱： 将填料制成悬浮液，在高压泵的作用下压入装有洗脱 液的色谱柱。理论塔板数可达8万/米
Tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描述他的 实验方法，即现在的
Chromatography(色谱法)
Tswett（茨维特)的实验
一根长玻璃管填充碳酸钙的颗粒 将碾碎之植物叶片的提取液灌入柱中 随着石油醚提取液向下流过柱子，现出展宽的色带 分离出不同的化合物
Chromato -- 颜色 Graphy -- 图象
高压输液泵： 恒压泵（流量随阻力变化重现性差） 恒流泵（多用）：往复式 注射式
作用：将流动相在高压下连续不断地送入液路系统。 性能：①有足够的压力
②输出流量恒定，可调 ③输出压力平稳 ④泵室体积小 ⑤泵体抗腐蚀、耐酸
▪梯度洗脱装置
作用：将两种或两种以上溶剂按一定程序连续 改变配比，以改变流动相极性、离子强度、 PH值、提高分离效率。
又叫洗脱剂,溶剂
相(Phase):
物理化学术语,特指在某一系统中,具有相同成 分及相同物理、化学性质的均匀物质部分。各相 之间有明显可分的界面
色谱分离原理
色谱法的分类
按流动相的物态分:
气相色谱 (Gas Chromatography, GC) 用气体作为流动相(又叫载气)
液相色谱 (Liquid Chromatography, LC) 用液体作为流动相(又叫洗脱剂)
适用：高沸点、热不稳定有机及生化 试样的高效分离
液相色谱法的分类
按流动相和固定相的相对极性分: 正相色谱(Normal Phase Chromatography) o 固定相的极性大于流动相 反相色谱(Reversed Phase Chromatography) o 固定相的极性小于流动相 有机化合物的极性 分子间作用力(静电引力,偶分子间作用力(静电引力,偶极力,色散 力,氢键力)综合表现的一种表述
2017年样品检测组操作技能培训
（一）高效液相基础知识 高志国
（2017.03.29）
高效液相色谱基础知识
色谱法原理与分类 HPLC的组成 HPLC的应用 HPLC色谱图名词术语 HPLC定量分析原理
色谱法原理及分类
什么是色谱法 色谱法溯源 Tswett（茨维特)的实验 色谱法原理 色谱法的分类
有机化合Leabharlann Baidu极性示例
液相色谱法的分类
按分离过程的机理分:
1 吸附色谱(Absorption Chromatography) 根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离 2 分配色谱(Partition Chromatography) 分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度(分配系数)不同 3 离子交换色谱(Ion Exchange Chromatography) 根据样品组份离子交换亲和力的差异分离,简称离子色谱(IC) 4 体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography) GPC(Gel Permeation Chromatography) • 固定相是疏水性凝胶,流动相是有机溶剂 GFC(Gel Filtration Chromatography) • 固定相是亲水性凝胶,流动相是水溶液
HPLC特点
特点：高压、高效、高速、高灵敏度 1. 高效分离 ： n =105 /米 2. 高速 ：使用高压泵，出峰时间几分钟到几十分钟 3. 高灵敏度 ：检测下限：10-9-10-13g（最小检测量） 4. 自动化程度高：仪器分析、电脑控制、色谱工作站 5. 应用范围广 ：可测有机物75%-80%
色谱法原理
是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解,分配,吸 附等化学作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各 组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相 互分离
两相中有一相是固定的,叫作固定相(Stationary Phase) 有一相是流动的,称为流动相(Mobile Phase),流动相