酪氨酸酶活性抑制实验方法
酪氨酸酶活性的抑制研究及皮肤美白化妆品的研制
酪氨酸酶活性的抑制研究及皮肤美白化妆品的研制
王白强;曾晓军
【期刊名称】《福建轻纺》
【年(卷),期】2002(000)007
【摘要】研究探讨了皮肤黑色素的成因和皮肤美白机理。
通过测定常用的6种生物美白剂对酪氨酸酶活性的抑制率，初步建立美白剂效果的评价体系，实验还表明自制中草药萃取物美白效果明显，抑制率可达95％。
同时，开发了3种美白、祛斑、防晒等功能的化妆品，市场潜力很大。
【总页数】6页(P1-6)
【作者】王白强;曾晓军
【作者单位】福建省轻工业研究所，福建福州 350005;福州抗生素集团有限公司中心化验室，福建福州 350002
【正文语种】中文
【中图分类】TQ685.5
【相关文献】
1.酪氨酸酶活性抑制实验及其在祛斑美白化妆品功效评价中的应用 [J], 杜孝元;刘玮;史飞;张萍
2.皮肤化学美白剂抑制酪氨酸酶活性的研究 [J], 刘宇红;董银卯;李才广
3.十味归白散对酪氨酸酶活性及诱导豚鼠皮肤色素沉着的抑制作用 [J], 谢凡; 姚佳晨; 陈丽文; 李文艳
4.响应面法优化新疆阿魏中阿魏酸的提取工艺及其抑制酪氨酸酶活性研究 [J], 阿
迪拉·吐尔逊塔依;田永芝;何诗冰;努尔亚·艾尼外尔;范琳惠;约日耶提·萨力;塔吉古丽·阿不里克木
5.Box-Behnken优化微波萃取桂花果皮多酚提取工艺及体外抑制酪氨酸酶活性研究 [J], 杨丹;梁正杰;徐广;张万超;黄红燕;梁正杰
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油溶性美白剂对酪氨酸酶抑制性能的测试方法
油溶性美白剂对酪氨酸酶抑制性能的测试方法
周忠;王建国;周蕾;王建新
【期刊名称】《日用化学工业》
【年(卷),期】2003(033)005
【摘要】化学分析方法测定油溶性美白剂对酪氨酸酶活性的抑制率可在有机溶剂-水体系中进行.通过测定若干单一有机溶剂和复配有机溶剂对酪氨酸酶活性的抑制率及相关的溶解参数,发现复配有机溶剂V(丙二醇):V(乙酸乙酯)为9:1的用量为0.5 mL时,对酪氨酸酶活性的抑制率为29.4%.该复配有机溶剂与水构成的测试体系可用于油溶性美白剂,如异甘草素和甘草素对酪氨酸酶活性的抑制率的测定.
【总页数】3页(P326-328)
【作者】周忠;王建国;周蕾;王建新
【作者单位】江南大学,化学与材料工程学院,江苏,无锡,214036;江南大学,化学与材料工程学院,江苏,无锡,214036;江南大学,化学与材料工程学院,江苏,无锡,214036;江南大学,化学与材料工程学院,江苏,无锡,214036
【正文语种】中文
【中图分类】TQ658.5
【相关文献】
1.4种美白剂对B-16细胞内酪氨酸酶活性抑制的研究 [J], 李玲;宋伟民;周华
2.马铃薯酪氨酸酶体外筛选美白剂测定体系的建立 [J], 徐鹏;付绍平;王伟;赵长新;章克昌
3.皮肤化学美白剂抑制酪氨酸酶活性的研究 [J], 刘宇红;董银卯;李才广
4.几种美白剂抑制酪氨酸酶活性的研究 [J], 刘琦;刘洋;吴金昊;陶丽莉;王楠;赵华
5.三种美白剂对酪氨酸酶活性的抑制 [J], 陆晔;周名权;翁康生;刘国星
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酪氨酸酶活性的抑制研究及皮肤美白化妆品的研制
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作 者简介 ： 自强 （ ９ ５一） 男 ， 建惠 安人 ， 王 １６ ， 福 工程 师 ， 长期 从事 香料 、 香精 、 化妆 品 的研制工 作 。
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摘 要 ：研 究探 讨 了皮 肤 黑 色素 的 成 因 和 皮 肤 美 白机 理 。 通 过 测 定 常 用 的 ６种 生 物 美 白剂 对 酪 氨 酸 酶 活 性 的抑 制 率 ，初 步 建 立 美 白剂 效 果 的评 价 体 系 ， 实验 还 表 明 自制 中草 药 萃 取 物 美 白 效 果 明 显 ，抑 制 率 可 达 ９ ％ 。 同时 ， 开 发 了 ３种 美 白、 祛 斑 、 防 晒 等 功 能 的 化 妆 品 ， 市场 潜 力 ５
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此 ，近 些 年 皮 肤 美 白类 化 妆 品 市 场 的 开 发 日趋 重 视 ，无 论 是 日常 家 庭 用 还 是 专 业 美 容 店 用 ，美
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皮 肤 黑 色 素 细 胞 组 织 将 黑 色 素 转 移 到 表 皮 基 底 层 细 胞 中 ，随 着 细 胞 的 新 陈 代 谢 而 被 带 到 角
种中药抑制酪氨酸酶活性的实验研究
6种中药抑制酪氨酸酶活性的实验研究摘要! 目的! 研究&种中药对酪氨酸酶活性的抑制作用1 方法! 分别用50%乙醇水溶液回流提取中药白芷、白附子、当归、云苓、白蒺藜、银杏叶- 然后浓缩提取液至膏状1用水将$ #45膏状稀释为$45 6 47 - 测定各自对酪氨酸酶活性的抑制率1结果! &种中药白芷3 白附子3 当归3 云苓、白蒺藜、银杏叶都对酪氨酸酶活性的抑制率分别为35%、55%、60%、22%、55%、40%。
结论：白附子对酪氨酸酶活性抑制作用最强关键词! 黄褐斑；中药；祛斑；美白；酪氨酸酶据统计- 约有,70%的被调查者认为美容的最大障碍之一是面部雀斑、黄褐斑、老年斑的形成，它们属于常见色素沉着的皮肤病，影响容貌，给患者造成严重的心理压力，有报道美白祛斑类化妆品的市场份额始终处于增长趋势。
1994年日本的美白类化妆品销售额约为1980年的二十倍。
中国与日本属同一肤色人种- 巨大的市场潜力不容忽视1近年来- 对从传统药物和天然资源中寻找新药物- 已越来越受到许多发达国家和发展中国家的医药科研工作者的重视，我国是中药的发源地- 中药3 天然药物资源丰富- 而且几千年的临床实践-给开发和利用祛斑的天然植物提供宽广的空间1 本文在研究黄褐斑的形成机理和中药治疗黄褐斑的基础上，对6种常用中药进行了抑制酪氨酸酶活性的试验- 发现白附子、白蒺藜的提取液有较强的抑制酪氨酸酶活性的作用。
黄褐斑形成的机理及病因由于黄褐斑患者皮损部位黑色素细胞活性增强- 黑素和黑素小体均增加- 进而表现出色斑- 影响美容病理状态下- 真皮内巨噬细胞可吞噬滴落入真皮的黑色素体- 或沉着于真皮上层- 或在细胞内降解- 一部分经淋巴转移< / = 1色素的产生与排泄失去平衡- 并过剩地聚集在表皮细胞内的部分- 就形成色素沉着< & = 1黑色素的排泄有两条途径! 一是从肾内排泄- 另一是经皮肤排出- 即黑色素被转移到角质蛋白中- 随表皮生长移行到角质层，最后随角质层周期换新而脱落，病的原因有以下几个方面：1.1妊娠或口服避孕药由于妊娠或口服避孕药导致激素的改变! 血中雌激素" 孕激素或促黑色素细胞激素# $%&6水平增高使黑色素细胞活性增加1.2某些疾病某些慢性疾病! 特别是女性生殖器疾病和月经失调" 痛经"附件炎" 不孕症等以及肝脏病" 慢性酒精中毒" 甲状腺疾病" 结核" 内脏肿瘤患者中也常发生本病! 可能与卵巢" 垂体" 甲状腺等内分泌有关(有研究表明! 妇女中黄褐斑患者的甲状腺疾病患病率比正常人高! 故认为黄褐斑不是单一疾病! 可能是自身免疫病的一部分.1.3 遗传因素不同的资料表明有30%-70%的患者有家族史! 且男性的比例比女性高。
柯里拉京对B16细胞增殖及酪氨酸酶活性的抑制作用
柯里拉京对B16细胞增殖及酪氨酸酶活性的抑制作用黄海潮;郑公铭;王如意;张显策;李忠军;刘纲勇;傅中【摘要】采用体外培养B16细胞,在柯里拉京作用不同时间后,用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测柯里拉京对B16细胞生长的影响;用多巴氧化法检测柯里拉京对B16细胞中酪氨酸酶活性的抑制作用;用形态学和Hoechst33258染色法观察柯里拉京对B16细胞生长形态的影响.结果表明,柯里拉京对B16细胞增殖的抑制作用明显,其作用12,24和48 h的IC50分别是35.63,25.78和20.94 mg/L;对作用于B16细胞中酪氨酸酶12,24和48 h时的IC50分别是16.38,14.00和13.85 mg/L;形态学观察表明,当p(柯里拉京)＞16 mg/L作用24h时,B16细胞损伤明显;Hoechst33258染色显示,当ρ(柯里拉京)≤16 mg/L作用24h时,B16细胞呈现凋亡形态.【期刊名称】《日用化学工业》【年(卷),期】2016(046)001【总页数】4页(P44-47)【关键词】化妆品添加剂;柯里拉京;B16细胞;酪氨酸酶【作者】黄海潮;郑公铭;王如意;张显策;李忠军;刘纲勇;傅中【作者单位】广东食品药品职业学院,广东广州 510520;广东食品药品职业学院,广东广州 510520;广东食品药品职业学院,广东广州 510520;广东食品药品职业学院,广东广州 510520;广东食品药品职业学院,广东广州 510520;广东食品药品职业学院,广东广州 510520;广东食品药品职业学院,广东广州 510520【正文语种】中文【中图分类】TQ658现在越来越多的人注重外表，因此化妆品拥有众多的消费者，其中美白化妆品较受青睐。
由于绝大部分天然中草药毒副作用小，使消费者易于接受，中草药的美白作用及其应用成为研究热点，相关文献报道众多，且市场上宣称添加某种或几种中草药提取物的美白化妆品也林林总总。
酪氨酸酶抑制率测定方法
1. 4念珠藻甲醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制1. 4. 1念珠藻甲醇提取物对酪氨酸酶活力的影响提取物对酪氨酸酶的抑制参照Masuda和Kubo的方法[ 6, 7] , 并略作修改。
待测样品用DMSO 进行浓度梯度稀释, 浓度分别为1、05、025、0125 mg / mL; 换算成反应体系中的终浓度分别为333、1665、8325、4 3 g /mL。
反应在96孔细胞板上进行, 每组8孔, 分别是: A. 不含样品, 但含酪氨酸酶的阴性对照, 3孔重复; B. 不含样品及酪氨酸酶的空白对照, 1孔; C. 包含样品及酪氨酸酶, 3孔重复,D. 含样品但不含酪氨酸酶的空白对照, 1 孔。
A 孔中加入190 L pH 68、0 1 mo l/L 磷酸缓冲液,10 L 1380 U /mL酪氨酸酶; B 孔中加入200 L 相同的磷酸缓冲液; C 孔中加入180 L磷酸缓冲液,10 L 1380 U /mL酪氨酸酶, 10 L样品; D 孔中加入190 L磷酸缓冲液, 10 L样品。
然后将细胞板在30条件下放置5 m in, 再在每孔中加入100 L2 5 mmo l/L L-酪氨酸( 见表1 )。
在30反应10m in后, 立即置于Tecan Sunrise 酶标仪中测量在475 nm下的吸光值。
提取物对酪氨酸酶活性的抑制按公式计算:抑制率=( A - B ) - ( C- D)*100%A – B参照文献方法〔3〕在数支干燥的试管中各加入1.oml0.03%左旋多巴溶液，再加上维生素E一日环糊精溶液，(加入量按表所列体积) 最后的磷酸钠缓冲液加至5.Oml，25℃恒温10 min后，加入0.4ml酶提取液，立即计时并迅速置于恒温槽内，待反应1min，用BaCRmanDV一70型分光原度计在475nm处测定吸收度，以缓冲液为参比，然后根据多巴色素的消光系数“=3700求出Vi，把无维生素E一日环糊精溶液存在时速度定为100%，求出不同浓度维生素E一日环糊精存在时酶的相对活性以及对酶的抑制率抑制率二V。
酪氨酸抑制性测定实验方案
熟地黄提取液对酪氨酸酶的抑制作用研究一、仪器和药品：仪器：分光光度计、微量移液器（1ml）、电子天平、容量瓶（10ml、50ml、250ml）、回流装置一套、沸石、抽滤装置、旋转蒸发仪、水浴恒温箱、烧杯和量筒若干。
药品：熟地黄粉末（约50g）、体积分数50%的乙醇（200ml）、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、L-酪氨酸、酪氨酸酶、去离子水若干。
二、实验方案：A、熟地黄有效成分的提取：1、干燥熟地黄粉末10.0 g + 体积分数50%的乙醇100mL，室温浸泡24 h。
2、烧瓶+沸石+上述浸泡液，回流提取3 h，冷却后抽滤取滤液。
残渣再次加50%乙醇100mL 回流提取3 h，冷却抽滤取滤液，合并两次滤液。
（回流温度约80℃。
）3、将滤液置于旋转蒸发仪上60-65℃浓缩回收溶剂，得膏状提取物。
4、称取适量膏状提取物+去离子水配置成1 mg/mL 溶液备用。
B、磷酸缓冲溶液（PBS）的配制：1、称取磷酸氢二钠13.3984 g，加去离子水溶解，转移至250mL 容量瓶中定容得a液；另称取磷酸二氢钠6.9011 g，加去离子水溶解，转移至250mL容量瓶中定容得b液。
2、分别移取a、b两溶液各50mL至250mL容量瓶中，加去离子水定容，即得pH=6.8的磷酸缓冲溶液。
C、L-酪氨酸溶液和酪氨酸酶溶液的配制：1、称取L-酪氨酸25.6 g，用PBS缓冲液定容于50mL容量瓶中，即得L-酪氨酸溶液。
2、称取酪氨酸酶0.3502 g，用PBS缓冲液定容于10mL容量瓶中，即得酪氨酸酶溶液。
（冰水浴中操作、保存。
）D、酪氨酸酶活力的测定：（分光光度法测A475）用微量移液器分别按表一剂量准确移取a、b、c、d四组样液，置于37℃水浴中恒温10 min后，各加入0.40mL酪氨酸酶溶液，混匀，37℃温育反应10 min，迅速移入比色皿中，测得在475nm处的吸光度A a、A b、A c、A d ，然后按下面的公式计算熟地提取液对酪氨酸酶的抑制率：抑制率=[1-（A d-A c）/（A b-A a）]×100%其中：a：既无底物也无提取物的待测液；b：有底物但无提取物的待测液；c：无底物但有提取物的待测液；d：既有底物也有提取物的待测液。
酪氨酸酶活性抑制实验及其在祛斑美白化妆品功效评价中的应用_杜孝元
Ｔｙｒｏ ｓｉｎ ａ ｓｅ ｉｎ ｈ ｉｂ ｉｔｉｏ ｎ ｔｅ ｓｔ ａ ｎ ｄ ｉｔｓ ａ ｐ ｐ ｌｉｃ ａ ｔｉｏ ｎ ｉｎ ｅ ｆｆｉｃ ａ ｃ ｙ ｅ ｖａ ｌｕ ａ ｔｉｏ ｎ ｏ ｆ ｗｈ ｉｔｅ ｎ ｉｎ ｇ ｃ ｏ ｓｍ ｅ ｔｉｃ ｓ
ＤＵ Ｘｉａｏ － ｙｕ ａｎ ， ＬＩＵ Ｗｅｉ， Ｓ ＨＩ Ｆｅｉ， ＺＨＡＮＧ Ｐｉｎ ｇ （Ｄｅｐ ａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇ ｙ， Ｔｈｅ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓ ｐ ｉｔａｌ ｏｆ Ａｉｒ Ｆｏｒｃｅ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００３６， Ｃｈｉｎａ）
７４２
中国美容医学 ２００５ 年 １２ 月第 １４ 卷第 ６ 期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｄｅｃ．２００５．Ｖｏｌ．１４．Ｎｏ．６
表 ３ 已知活性物成分的样品检测结果
活性物成分
浓度（ ％）
合成熊果苷（ ＡＲＢＵＴＩＮ）
３．０
天然熊果苷
２．０
曲酸双棕榈酸脂（ ＫＡＤ－Ｄ１５）
内（ 或接近）。
１．４ 功效评价表示方法
２．１．３ 曲酸标准对照：选用曲酸作为标准品对照，将浓度由
１．４．１ 抑制率计算方法：样品对酪氨酸酶活性的抑制强度以 ２０ｇ／Ｌ 倍量稀释至 １．２５ｇ／Ｌ，结果见表 ２。
抑制率表示。参照李莉［３］介绍的较简便方法，以阳性对照结果
结果显示量效关系呈负相关，ｒ＝－０．９７－０．９９，接近高度相关。
１ 材料和方法 １．１ 材料：酪氨酸酶（ Ｓｉｇｍａ 公司生产，货号 ９００２－１０－２）；Ｌ
多巴（ Ｓｉｇｍａ 公司生产，货号 ５９－９２－７）；曲酸（ Ｓｉｇｍａ 公司生 产，货号 ５０１－３０－４）；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠（ 北京化工厂 生产，ＡＲ）。试验样品是由广州丹芭碧化妆品有限公司研究 和发展实验室提供，部分样品是市售的各种牌号的祛斑类产 品。恒温仪（ 美国 Ｆｉｓｈｅｒ 公司生产，型号 Ｂａｔｈ１３５）；紫外分光 光度计（ 日本岛律，ＵＶ－２２０１，上海第三分析仪器厂，型号 ７５２）；离心机（ 上海安亭科学仪器厂生产，ＬＸＪ－ＩＩＢ）。 １．２ 检测方法 １．２．１ 样品处理：取定量（ Ｗ）样品溶于定量（ Ｖ）去离子水 或三蒸水中（ 酪氨酸酶是铜蛋白，溶液中不应含有铜离子）， 经搅拌、混匀、沉淀等处理后吸取澄清部分待检。水剂和水溶 性凝胶剂可直接溶解；乳化剂要在溶解前先鉴别乳状液相 型，如为 Ｗ／Ｏ 型，则采取转型稀释法使成为 Ｏ／Ｗ 型。 １．２．２ 实验操作：在玻璃试管中进行生化反应，各管加入所 需缓冲液（ ｐＨ６．８，０．０５ｍｏｌ／Ｌ，ＰＢ）、样品液、曲酸溶液和酶 溶液。于 ３０℃水浴中反应 １０ｍｉｎ，依次加入多巴溶液，再于 ３０℃水浴中反应 １０ｍｉｎ，测 ４７５ｎｍ ＯＤ 值。实验体系设计见 表 １。
桑白皮提取物对酪氨酸酶活性抑制作用研究
桑白皮提取物对酪氨酸酶活性抑制作用研究刘兆明;李超;王萌;张方可;孙珊珊;张春燕;王慧云【摘要】目的以左旋多巴为底物考察桑白皮乙醇提取液对马铃薯酪氨酸酶的抑制作用.方法采用不同极性溶剂对桑白皮有效成分进行提取,比较各种提取液对马铃薯酷氨酸酶的抑制效果;将提取液稀释后考察提取液浓度与抑制作用间的关系,并计算半数抑制浓度IC50值;采用高效液色谱法分析提取液的主要成分,并对具有不同保留时间成分的抑制活性进行考察.结果甲醇和乙醇两种溶剂提取液的抑制效果最好;桑白皮提取物的抑制作用与其浓度呈现良好相关性,IC50为0.6225 mg/ml;高效液相色谱实验中抑制活性较强成分保留时间主要集中在10～15 min.结论本研究对从桑白皮中分离纯化一些具有潜在实际应用价值的酪氨酸酶抑制成分提供了有用的参考.【期刊名称】《济宁医学院学报》【年(卷),期】2017(040)004【总页数】4页(P264-267)【关键词】桑白皮;酪氨酸酶;分光光度法;抑制作用;高效液相色谱【作者】刘兆明;李超;王萌;张方可;孙珊珊;张春燕;王慧云【作者单位】济宁医学院药学院,日照 276826;济宁医学院药学院,日照 276826;济宁医学院药学院,日照 276826;济宁医学院药学院,日照 276826;济宁医学院药学院,日照 276826;济宁医学院药学院,日照 276826;济宁医学院药学院,日照 276826【正文语种】中文【中图分类】R965.1酪氨酸酶是一种含铜的多酚氧化酶，广泛存在于人体及动植物、微生物[1]，作为人体黑色素合成的关键代谢酶，与人的皮肤衰老、色素沉着性疾病的发生发展有着密切联系；此外，该酶也影响昆虫伤口愈合以及蔬菜水果的褐变[2]。
天然来源酪氨酸酶抑制剂具有安全、毒副作用低、来源广泛、效果独特等优点。
从天然产物中寻找酪氨酸酶抑制成分已成为该领域当前的研究热点[3-5]。
桑科植物桑白皮作为一种中医临床常用中药，主要用于治疗伏火郁肺，症见咳嗽痰多，色黄黏稠，咯吐不爽等。
白鲜皮抑制酪氨酸酶作用研究及其美白面膜制备
第 49 卷第 12 期2021 年 6 月广州化工Guangzhou Chemical Industry Vol. 49 No. 12Jun. 2021白鲜皮抑制酪氨酸酶作用研究及其美白面膜制备**基金项目：2019年大学生创新创业项目(201910162047)。
第一作者：杨宇(1999-),女，本科学生，制药专业。
通讯作者：陈晓霞(1980-),女，博士，副教授，主要从事药物分析工作。
杨 宇，宋孟霜，陈 婕，王姝萱，刘 畅，李欣然，陈晓霞(辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600)摘 要：采用紫外-可见分光光度法对不同浓度白鲜皮水提物及醇提物抑制酪氨酸酶活性进行研究，结果显示白鲜皮醇提物与水提物相比，具有更强的抑制酪氨酸酶活性的作用，且存在剂量依赖性。
当含生药浓度达到16mg/mL 时，其抑制率可到到 76%o 以白鲜皮醇提物为主要美白成分，制备了外观显透明色，呈弱酸性，清凉无刺激感，粘稠度适中，易于贴敷的美白面膜, 期望进行更进一步的开发，实现规模化生产。
关键词：白鲜皮；酪氨酸酶；抑制；美白面膜中图分类号：TQ685. 2文献标志码：B 文章编号：1001-9677(2021)012-0088-03Study on Inhibitation of Cortex Dictam on Tyrosinase andWhitening Mask Preparing *YANG Yu , SONG Meng -shuang , CHEN Jie , WANG Shu -xuan , LIU Chang , LI Xin -ran , CHEN Xiao -xia (College of Pharmacy , Liaoning University of Traditional Chinese Medicine , Liaoning Dalian 116600 , China)Abstract : Inhibitation of different concentrations of water extract and alcohol extract from cortex dictam ontyrosinaseactivity was detected with UV-Vis spectrophotometry , results showed that alcohol extract from cortex dictam had stronger inhibitory effect on tyrosinase activity than water extract , and there was a dose-dependent. When the concentration of raw drug reached 16 mg/mL, its inhibition rate can reach 76%. The whitening maskwas prepared with alcohol extract form cortex dictam as the main whitening ingredient. It showed transparent color , weak acid , cool no irritation , moderate viscosity , easy to apply.Key words : cortex dictam ； tyrosinase ； inhibitation ； whitening mask随着人民生活水平的提高，越来越多的女性朋友关注皮肤 保养。
酪氨酸酶活性抑制实验及其在祛斑美白化妆品功效评价中的应用
酪氨酸酶活性抑制实验及其在祛斑美白化妆品功效评价中的应用杜孝元;刘玮;史飞;张萍【期刊名称】《中国美容医学》【年(卷),期】2005(14)6【摘要】目的:建立评价祛斑美白化妆品功效的体外实验方法.方法:根据酪氨酸酶催化底物发生反应的原理,研究建立和优化了一种酪氨酸酶活性抑制实验系统,并采用不同浓度的曲酸溶液作为标准对照.结果:应用本方法进行测试,分别得出3.0%的熊果苷、4.0%的曲酸双棕榈酸脂、0.5%的氢醌对酪氨酸酶活性的抑制率分别为58.21%、92.92%、126.01%.对未知成分的数种化妆品样品也进行了同样测试,抑制率在3.1 5%～47.69%.结论:本研究为祛斑美白化妆品的功效评价提供了一种体外实验方法.【总页数】3页(P740-742)【作者】杜孝元;刘玮;史飞;张萍【作者单位】解放军空军总医院皮肤科,北京市,100036;解放军空军总医院皮肤科,北京市,100036;解放军空军总医院皮肤科,北京市,100036;解放军空军总医院皮肤科,北京市,100036【正文语种】中文【中图分类】R977.3【相关文献】1.外感受抑制实验在紧张型头痛中枢调控机制研究中的应用 [J], 梁瑞华;张素平2.口服神经氨酸酶抑制剂奥司他韦在人实验性流行性感冒中的应用随机对照预防试验和治疗试验 [J], Frederick G. Hayden, MD;John J. Treanor MD ;R. Scott Fritz, PhD3.应用酶催化动力学——吸光光度法评价美白化妆品功效实验中几个问题的解决方法 [J], 杜孝元;赵广;蔡瑞康;刘玮4.甲醛挥发抑制剂在解剖实验教学中的应用 [J], 郭连军;田秀兰5.性视频刺激加5型磷酸二酯酶抑制剂激发阴茎勃起实验在勃起功能障碍诊治中的应用 [J], 朱选文;郭君平;张峰彬;钟达川;方家杰;李方印因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
白附子酪氨酸酶活性抑制成分的提取与分离_穆燕
所述方法处理粗提液并测量其对酪氨酸酶活性的抑
制率。
1.2.3 有机溶剂萃取分离白附子超声辅助提取物 按1.2.2.2所述方法采用超声辅助提取白附子有效成 分，将粗提液于50℃减压浓缩去除乙醇得到的白附子 膏状提取物用蒸馏水混悬至密度为1.1~1.2g/cm3，依 次用等体积的乙醚、正丁醇反复萃取4次。将获得的 萃取液减压浓缩除去溶剂，分别记为乙醚相、正丁醇 相、水相。各组分配制成10mg/mL粗分离液，测定其对 酪氨酸酶活性的抑制率。 1.2.4 硅胶柱层析分离 用氯仿浸泡硅胶24h后湿 法装柱。将正丁醇相萃取物与硅胶以1∶10的比例拌 样后上样。用氯仿/甲醇（V/V）混合溶剂线性梯度洗 脱（氯仿∶甲醇，100∶0→50∶50），按柱体积收集流出组 分。室温下用硅胶G薄层板以氯仿-甲醇溶液作展开 剂、碘蒸气为显色剂对流出组分进行薄层层析 （TLC）示踪，根据TLC检测结果对分离部位进行合并， 得到9个组分（A-I），将各组分去除有机溶剂后测定 其对酪氨酸酶活性的抑制率。
组分溶液，然后在1、2号试管加入0.5mL酪氨酸酶溶
液（溶于pH6.8磷酸盐缓冲溶液），用pH6.8磷酸盐缓冲溶液将三Leabharlann 试管内的溶液体积补至3mL，体系中酶的
终浓度为173U/mL。将1、2、3号试管于30℃孵育30min
后在475nm处测其吸光值，记为A1、A2、A3。按式（1）计 算白附子分离组分对酪氨酸酶活性的抑制率：
Compounds extracted with 20% ethanol aqueous solvent presented the best inhibition ability on tyrosinase
with tyrosinase inhibitory rate of 96.35%. Additionally，more effective compounds were extracted by ultrasound-
抑制黑色素形成检测平台-抑制酪氨酸酶tyrosinase活性
抑制黑色素形成檢測平台-活性2抑制酪氨酸酶(tyrosinase)BLK:空白組; KJ:麴酸; 其他為測試樣品代號抗皺活性檢測平台技術-抑制基質金屬蛋白酶活性膠原蛋白(collagens)是皮膚真皮層細胞外基質主要的成份，而基質金屬蛋白酶(MMPs)是一組降解細胞外基質的主要酶(包括MMP-1、MMP-2 及MMP-9)。
隨著年齡的增加，真皮層細胞外基質的基質金屬蛋白酶活性也隨著增加，因而導致真皮層的超微結構逐漸喪失其完整性，破壞了真皮層的彈力架構，結果使真皮變薄，皮膚彈性逐漸消失，皮膚鬆弛，因而出現皺紋的老化現象。
因此，適度的抑制MMPs的功能，可以達到抗皺延緩老化的效果。
抑制基質金屬蛋白酶活性試驗結果實例Marker:分子量標準品S: MMP-2和-9標準品M+:培養基添加TNF-αM:培養基其它為不同的受測樣品●當條帶的亮度愈小，MMP的活性愈低。
這表示受測樣品有抑制MMP酵素活性的效果，具有減少皮膚皺紋的潛力。
提升皮膚彈性篩選平台技術-快速篩選增加皮膚彈性化妝品原料技術皺紋產生的主要原因是皮膚內部的纖維斷裂或鬆弛，主導真皮彈力的彈力線狀纖維 (Elastin) 就是其中之一。
隨著年齡的增長，彈力分解酵素(Elastase) (會分解彈力線狀纖維)的數量和活性大大增加，導致過多彈力線狀纖維被分解而大為減低肌膚彈性，產生皺紋。
因此抑制彈力分解酵素的活性可以減少皺紋產生。
試驗方法是以經過BODIPY FL dye修飾的Elastin為受質，當與 Elastase反應後，受質斷裂同時釋放出特殊波長之螢光斷裂碎片，最後再由微量盤螢光光譜儀偵測釋放出螢光強度變化，當Elastase的活性被抑制時，螢光則會變弱。
提升皮膚彈性—Positive control (PC)：0.04 mM (N-Methoxysuccinyl -Ala-Ala-Pro-Val-chloromethyl ketone)。
酶活性抑制实验报告
实验名称：酶活性抑制实验实验目的：通过本实验，探究不同抑制剂对酶活性的影响，并分析其作用机制。
实验原理：酶活性受多种因素的影响，其中抑制剂是一种能够降低酶活性的物质。
根据抑制剂与酶的结合方式，可分为不可逆抑制和可逆抑制。
不可逆抑制剂与酶形成共价键，使酶失活；可逆抑制剂与酶形成非共价键，可逆地降低酶活性。
实验材料：1. 酶制剂（如过氧化氢酶、淀粉酶等）2. 底物（如H2O2、淀粉等）3. 抑制剂（如碘化物、氟化物等）4. pH缓冲液5. 温度控制装置6. 光度计7. 移液器8. 试管实验方法：1. 酶活性测定：取一定量的酶制剂，加入底物，在特定条件下（如pH、温度）反应，通过测定反应产物或底物的浓度变化来计算酶活性。
2. 抑制剂对酶活性的影响：向酶反应体系中加入不同浓度的抑制剂，重复上述步骤，观察抑制剂对酶活性的影响。
3. 抑制剂作用机制分析：通过比较不可逆抑制剂和可逆抑制剂对酶活性的影响，分析抑制剂的作用机制。
实验步骤：1. 酶活性测定：- 取一定量的酶制剂，加入底物，在特定条件下反应。
- 使用光度计测定反应体系中产物或底物的浓度变化。
- 计算酶活性。
2. 抑制剂对酶活性的影响：- 向酶反应体系中加入不同浓度的抑制剂。
- 重复上述步骤，观察抑制剂对酶活性的影响。
- 记录不同抑制剂浓度下的酶活性变化。
3. 抑制剂作用机制分析：- 比较不可逆抑制剂和可逆抑制剂对酶活性的影响。
- 分析抑制剂的作用机制。
实验结果：1. 酶活性测定：在特定条件下，酶活性与底物浓度呈正比关系。
2. 抑制剂对酶活性的影响：加入抑制剂后，酶活性降低。
不可逆抑制剂对酶活性的影响较大，而可逆抑制剂对酶活性的影响较小。
3. 抑制剂作用机制分析：不可逆抑制剂与酶形成共价键，使酶失活；可逆抑制剂与酶形成非共价键，可逆地降低酶活性。
实验结论：1. 抑制剂可以降低酶活性。
2. 不可逆抑制剂和可逆抑制剂对酶活性的影响不同。
3. 抑制剂的作用机制与其与酶的结合方式有关。
4味中药对酪氨酸酶抑制作用的探讨
·中药房之窗·14味中药对酪氨酸酶抑制作用的探讨闫军1,李昌生1,陈声利1,张君仁2,赵天恩3(1.济南市皮肤病防治院,济南市250001;2.山东大学药学院,济南市250012;3.山东省皮肤病性病研究所,济南市250022)中图分类号R28;R96文献标识码A文章编号1001-0408(2003)07-0442-02摘要目的:研究14味中药对酪氨酸酶的抑制作用。
方法:用50%乙醇提取中药有效成分,利用紫外分光光度法测定酶促反应的速度,以衡量其对酪氨酸酶的抑制作用。
结果:测得14条酶促反应时间曲线。
结论:13味中药对酪氨酸酶活性呈较好的抑制作用(P<0.01),除芦荟以外,其余中药不影响酶促反应的平衡。
桃仁、僵蚕、芦荟抑制作用最好。
关键词中药;酪氨酸酶;紫外分光光度法;抑制Stud y on the Inhibitin g Effects of14Kinds of Chinese Materia Medica on T y rosinaseYAN J un,L I Chan g shen g,CHEN Shen g li(J inan Cit y Hos p ital for Skin Diseases Prevention,J inan250001) ZHAN G J unren(School of Pharmac y,Shandon g U niversit y,J inan250012)ZHAO Tianen(Shandon g Provincial Instit ute of Dermatolo gy and Venereolo gy,J inan250022)ABSTRACT OBJ EC T IV E:To inversti g ate t he inhibitor y effect s of14kinds of t raditional Chinese medicines on t y rosinase activit y1M E THODS:The effective com p onent s of t raditional Chinese medicines were ext racted b y50%et hanol1The s p eed of enz y mic catal y sis of t y rosinase was determined b y ult raviolet s p ect ro p hotomet r y to evaluate t he inhibitor y effect s of ext ract s of t raditional Chinese medicines1R ESUL TS:14reactive time curves of enz y mic catal y sis of t y rosinase were obtained1CONCL U S-ION:13kinds of t raditional Chinese medicines in vit ro showed a better inhibitive effect on t y rosinase activit y(P<0101), wit hout influence on t he e q uilibrium of enz y mic catal y sis exce p t Aloe barbadensis Miller1Prunus p ersica Bat sch,Bomb y x mori Linnaeus and Aloe barbadensis Miller showed t he best inhibitor y effect on t y rosinase activit y1KEY WO RDS t raditional Chinese medicines;t y rosinase;ult raviolet s p ect ro p hotomet r y;inhibition中药治疗色素障碍性皮肤病取得了良好的疗效,且人们积累了大量宝贵经验。
壬二酸衍生物抑制酪氨酸酶活性实验研究
壬二酸衍生物抑制酪氨酸酶活性实验研究
壬二酸衍生物抑制酪氨酸酶活性实验研究
马秋华;汪峰;周春英
【期刊名称】《中国麻风皮肤病杂志》
【年(卷),期】2011(027)003
【摘要】@@ 壬二酸衍生物(K-ADG)与壬二酸相比,易溶于水,使用量少,有效浓度低,美白作用更强.目前市场上销售的许多美白、祛斑产品都是以抑制酪氨酸酶达到美白作用,1故对酪氨酸酶抑制作用的强弱是评价增白化妆品的主要指标.2近年来,有文献报道了多种对酪氨酸酶活性有抑制作用的化学物质的研究结果.3-7 该实验比较几种不同浓度的壬二酸衍生物对酪氨酸酶活性的抑制率.
【总页数】2页(215-216)
【关键词】
【作者】马秋华;汪峰;周春英
【作者单位】山东省青岛市海滋医疗集团皮肤科,青岛,266033;山东省青岛市海滋医疗集团皮肤科,青岛,266033;山东省青岛市海滋医疗集团皮肤科,青岛,266033
【正文语种】中文
【中图分类】
【相关文献】
1.壬二酸衍生物抑制酪氨酸酶活性实验 [C], 周春英; 马秋华; 张玉
2.芳酰胺类衍生物的合成及蛋白酪氨酸磷酸酶1B和含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2抑制活性研究 [J], 王文龙; 骆欢; 高雅; 高立信; 盛丽; 周宇波; 李佳; 李静雅; 冯柏年。
酪氨酸酶活性抑制实验方法
酪氨酸酶活性抑制实验方法一、试剂：酪氨酸酶、酪氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、阳性对照（熊果苷粉末）、样品、去离子水二、试剂配制：1、磷酸盐缓冲溶液（PH=6.8）：先分别配制0.2M的磷酸二氢钠和0.2M的磷酸氢二钠。
0.2M磷酸二氢钠：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 去离子水；0.2M磷酸氢二钠：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 去离子水；取51ML磷酸二氢钠+49ML磷酸氢二钠即得0.2M、PH=6.8的磷酸缓冲液。
2、L-酪氨酸溶液：称取L-酪氨酸25.6 g，用磷酸缓冲液定容于50mL容量瓶中，即得L-酪氨酸溶液。
3、酪氨酸酶溶液：将马铃薯洗净，于4℃预冷4h左右。
去皮，切成约1.0 cm3丁状，于-20℃冷冻过夜。
称重，按1：1（W:V ）的比例加入4℃预冷的磷酸钠缓冲液，用组织捣碎机制成匀浆，3层纱布过滤，滤液于4000 r/min离心10min，上清液即为所得的酪氨酸酶粗酶液，4℃保存，2h内用完。
4、受试液的配制：将原先所配5mg/ml的溶液用甲醇稀释到1mg/ml.。
5、阳性对照：取熊果苷粉末0.01g，溶于10ml的甲醇溶液，即得1mg/ml的对照品溶液。
三、实验方法：依下表所示向试管中依次加入磷酸盐缓冲溶液、样品溶液、酪氨酸溶液，于35℃水浴10分钟。
然后加入酪氨酸酶液，混匀，再在35 ℃下孵育30min，迅速转移至比色皿中，在475nm处测定吸光值。
受试组用空白对照组1调零，阴性对照组用空白对照组2调零，阳性对照组用空白对照组3调零。
受试组吸光值为A1，阴性对照组吸光值为A2，阳性对照组吸光值为A3。
抑制率=1－[（A1－A2）/(A3－A2)]×100%=（A3－A1）/(A3－A2)×100% 注：受试液组共四种样品。
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酪氨酸酶活性抑制实验方法
一、试剂：酪氨酸酶、酪氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、阳性对照（熊果苷粉末）、样品、去离子水
二、试剂配制：
1、磷酸盐缓冲溶液（PH=6.8）：先分别配制0.2M的磷酸二氢钠和0.2M的磷酸氢二钠。
0.2M磷酸二氢钠：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 去离子水；
0.2M磷酸氢二钠：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 去离子水；
取51ML磷酸二氢钠+49ML磷酸氢二钠即得0.2M、PH=6.8的磷酸缓冲液。
2、L-酪氨酸溶液：称取L-酪氨酸25.6 g，用磷酸缓冲液定容于50mL容量瓶
中，即得L-酪氨酸溶液。
3、酪氨酸酶溶液：将马铃薯洗净，于4℃预冷4h左右。
去皮，切成约1.0 cm3丁状，于-20℃冷冻过夜。
称重，按1：1（W:V ）的比例加入4℃预冷的磷酸钠缓冲液，用组织捣碎机制成匀浆，3层纱布过滤，滤液于4000 r/min离心10min，上清液即为所得的酪氨酸酶粗酶液，4℃保存，2h内用完。
4、受试液的配制：将原先所配5mg/ml的溶液用甲醇稀释到1mg/ml.。
5、阳性对照：取熊果苷粉末0.01g，溶于10ml的甲醇溶液，即得1mg/ml的
对照品溶液。
三、实验方法：
依下表所示向试管中依次加入磷酸盐缓冲溶液、样品溶液、酪氨酸溶液，于35℃水浴10分钟。
然后加入酪氨酸酶液，混匀，再在35 ℃下孵育30min，迅速转移至比色皿中，在475nm处测定吸光值。
受试组用空白对照组1调零，阴性对照组用空白对照组2调零，阳性对照组用空白对照组3调零。
受试组吸光值为A1，阴性对照组吸光值为A2，阳性对照组吸光值为A3。
抑制率=1－[（A1－A2）/(A3－A2)]×100%=（A3－A1）/(A3－A2)×100% 注：受试液组共四种样品。