实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁的条件

实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁的条件
、实验目的
1、掌握分光光度计的原理、构造和使用方法。

2、学习分光光度计分析中如何确定最佳实验条件。

、实验原理
在可见光区分光光度法测量中，通常是将被测物质与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。

显色反应的程度受显色剂用量、显色时间，显色液酸度等条件的影响，通过实验，确定合适的显色条件。

三、仪器及试剂
分光光度计；1cm 吸收池；10mL移液管；25mL 容量瓶,100ml 容量瓶
1．铁标准溶液
100μg·mL -1（即0.01 mg·mL-1）铁标准溶液：准确称取0.3511g（NH 4）2 Fe（SO4）2·6H 2O 于烧杯中，用2 mol ·L-l盐酸15 mL 溶解，移入500 mL 容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。

用前，准确稀释10 倍成为含铁10 ug·mL -1标准溶液。

2. 1g.L -1邻二氮菲：1.0 g 邻二氮菲于小烧杯中，加入5-10ml 95%乙醇溶液溶解，再用水稀释到1000 mL 。

3. 10％盐酸羟胺水溶液：10％水溶液（现用现配，避光保存）
4. 醋酸钠溶液1mol/L
5. 0.8 mol/L 氢氧化钠溶液
四、实验步骤
1、吸收曲线的制作和测量波长的选择
用移液管吸取0.0ml、2.0mL 10 ug ·mL -1标准溶液，分别注入二个25 mL 容量瓶中，加入1.0mL10% 的盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min ；再加2 mL 邻二氮菲溶液，2.5mL 醋酸钠溶液溶液，用水稀释至刻度，摇匀。

放置5min 后，用1cm 比色皿，以试剂空白为参比，在440~560nm 之间，每隔10nm 测一次吸光度，其中在500-520 nm 之间，每隔5nm 测一次吸光度。

然后以波长为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。

2、显色剂用量影响
在7 只25mL容量瓶中，各加2.0 mL 10 ug·mL -1铁标准溶液和1.0 mL 盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min。

分别加入0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0 、4.0ml 1g.L-1邻二氮菲溶液，再各加2.5mL 1mol/L 醋酸钠缓冲溶液，以水稀释至刻度，摇匀。

放置5min 后，以水为参比，在510 nm 测量各溶液的吸光度。

其中，加2.0 mL 1g.L-1邻二氮菲溶液的显色溶液不要倒掉，用于时间影响的测定。

3、显示时间的影响
取上述1 中加2.0 mL 1g.L -1邻二氮菲溶液的容量瓶，在显色时间为10min 、20min 、30min 、
40min 、50min 、60min 分别测定吸光度值。

4、溶液酸度的影响
在7 只25mL容量瓶中，各加入2.0 mL 10 ug ·mL -1铁标准溶液和1.0 mL 盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min ，再各分2.0ml 邻二氮菲溶液，摇匀。

然后，分别用移液管准确吸取加人0.8 mol· L-1 氢氧化钠溶液0.0 、0.5 、1.0，2.0 ，3.0，4.0 、5.0ml 于容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，放置10min 。

用精密pH试纸测定上述溶液pH值，同时在分光光度计上，波长为510 nm，以水为参比测定各溶液的吸光度。

五、数据记录
1. 最大吸收波长的确定
2、显色剂用量的影响
3、显色时间的影响
4
六、结果讨论与思考
1. 分别以波长、显色剂体积、显色时间、溶液pH 为横坐标、相应的吸光度为纵坐标，绘制曲线，确定最大吸收波长、合适的显色剂用量、显色时间、溶液pH 是多少？2．分光测定中比色皿盛放溶液的体积为多少，用手拿比色皿时应注意什么？
实验二邻二氮菲分光光度法测定微量铁的浓度
一、实验目的
1．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的方法2．了解分光光度计的构造、性能及使用方法
二、实验原理
邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的较好试剂，在pH=2～9 的条件下，二价铁离子与试剂生成极稳定的橙红色配合物。

配合物的lgK稳＝21.3，摩
尔吸光系数510 ＝11000 L m·ol-1·cm-1。

在显色前，用盐酸羟胺把三价铁离子还原为二价铁离子。

4Fe3+＋2NH2OH→4Fe2+＋N2O ＋4H＋＋H2O
测定时，控制溶液pH＝5 较为适宜，酸度高时，反应进行较慢，酸度太低，则二价铁离子水解，影响显色。

用邻二氮菲测定时，有很多元素干扰测定，须预先进行掩蔽或分离，如钴、镍、铜、铅与试剂形成有色配合物；钨、铂、镉、汞与试剂生成沉淀，还有些金属离子如锡、铅、铋则在邻二氮菲铁配合物形成的pH 范围内发生水解；因此当这些离子共存时，应注意消除它们的干扰作用。

三、仪器与试剂
l mol L·-1醋酸钠、10%盐酸羟胺、0.1%邻二氮菲溶液、10 μg·mL-1铁标准溶液、分光光度计等。

四、实验步骤
1、标准曲线的绘制取25 mL 容量瓶6 个，分别准确吸取的10μ gm·L-l 铁标准溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0和5.0 mL于各容量瓶中，各加10％盐酸羟胺溶l mL ，摇匀，2 min后再各加醋酸钠溶液2.5 mL和0.1％邻二氮菲溶液2 mL，以水稀释至刻度，摇匀。

10min 以后，在分光光度计上用l cm 比色皿，在最大吸收波长510 nm 处以试剂空白为参比测定各溶液的吸光度。

记录实验数据。

（2）吸取未知液5 mL，按上述与标准曲线相同条件和步骤测定其吸光度。

做3 个平行，记录实验数据。

五、数据记录与处理
1．以铁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，用EXCEL 绘制标准曲线、线性方程、相关系数。

2．计算未知液3 份平行样的铁浓度和平均浓度（g·L-1）。

六、思考
1. 在实验中盐酸羟胺和邻二氮菲的作用分别是什么？
2、实验中试剂空白的作用是什么？
3、简述可见光分光光度计的操作步骤。

实验三土壤中水溶性盐的提取及原子吸收光谱法测定土壤中水溶性镁
一、实验目的
1. 了解土壤中水溶性盐的提取方法
2. 了解和掌握原子吸收光谱法的原理、结构及操作方法。

二、实验原理
含金属离子的试液被雾化后并进入乙炔—空气火焰时，金属离子被原子化，产生基态原子蒸气。

该蒸气能吸收相应金属元素空心阴极灯发射出来的共振发射线的辐射能，其吸收情况服从比尔定律。

样品测得的吸光度，根据标准溶液计算的标准曲线计算相应的浓度。

一、仪器与试剂
原子吸收光谱仪AA-7000 、10ug/mL镁标液、SrCl2溶液、去离子水
二、实验步骤
1、土壤水溶性盐的提取
称取20.0g过1mm筛的土壤，加去离子水100ml，在振荡机上振荡3分钟，或用手摇荡3min，然后过滤。

2、镁标准溶液的配置
分别取0、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0ml 的镁标液于6 个25ml 容量瓶中，
加1ml SrCl2 溶液，用去离子水定容至刻度，摇匀待测。

3、样品溶液的配置
分别取滤液0.5ml 于3个容量瓶中，加1ml SrCl2溶液，用去离子水定容至刻度，摇匀待测。

三、原子光谱仪测定
AA-7000 测定步骤见附件。

四、结果计算
1、标准溶液与吸光度
根据测定结果计算标准曲线和相关系数。

2、根据测定结果计算土壤提取液中镁的平均浓度、土壤中水溶性镁的百分含量。

六、思考题
1、简述原子吸收光谱仪的构成与工作原理。

2、如果测水溶性钙，能不能用镁元素的空心阴极灯作光源？
附:
SHIMADZU AA-7000 原子吸收操作步骤
（一）火焰连续法
一、开机顺序：
①打开电脑；② 打开AA-7000 主机电源；③ 启动WizAArd软件，选择“操
作”，点击“测量”；④ 在ID 栏输入“Admin”，登陆系统；⑤ 弹出“向导选择”
对话框，点击“取消” ，进入下一步。

二、仪器初始化在“仪器”下拉式菜单中，点击“连接” ，仪器进入初始化状态。

弹出“气体调节”页面时，根据提示，打开通风设备，乙炔钢瓶主阀（逆时针旋转1 圈为宜）和空压机开关。

（乙炔气体分压要求为0.08-0.10 MPa ，空气压力要求为0.35 MPa ）检测完成后，点击“确定” 。

弹出“火焰分析日常监测项目” 页面时，请对每个项目一一进行检查并勾选，点击“确定”。

等待漏气检测结束，若不存在漏气现象，点击“确定” ，完成初始化。

三、设置参数
在“参数”下拉式菜单中，选择“元素选择向导” ，进行元素选择。

①选择“火焰连续法”、“普通灯”，单击“下一步”；输入元素灯位；点击“谱线搜素”；谱线搜素完成后，点击“关闭” 。

②校准曲线设置：输入“浓度单位”，编辑“校准曲线测量次序” 。

③样品组设置：输入“浓度单位” 、“样品数量”，点击“更新”；在样品ID 栏输入样品名称或编号，点击“下一步” 。

④点击“连接/ 发送参数”，完成参数设置。

四、点火同时按下PURGE 和IGNITE 两键，直至火焰点燃，松开。

五、测量步骤
①校零：把进样吸管放入去离子水中，雾化1min，点击页面底部的Auto Zero 。

②测量标准样品：吸入溶液，待信号稳定后，按页面底部的START ，读数完毕，START键变回绿色，换溶液，重复以上操作。

③测量空白溶液：方法同②。

④测量未知溶液：方法同②。

测量过程中，每测完一种未知样品，应吸入去离子水雾化30s。

每测5-6 个样品，应校零一次。

⑤所有样品测量完毕，吸入去离子水雾化2min ，取出进样吸管，按EXTINGUISH 键熄灭火焰，并关闭乙炔钢瓶主阀和空压机开关
六、关机顺序
① 在“仪器”下拉式菜单中，点击“连接” ，切断主机与电脑的通讯；
②保存或打印数据，退出WizAArd 程序；
③关闭AA-7000 主机电源；
④关闭计算机，
⑤关闭抽风设备。

实验四电位滴定法测定醋酸的含量和解离常数、实验目的
1、熟悉电位滴定的基本原理和操作技术；
2、学习电位滴定曲线确定滴定终点。

二、实验原理
醋酸为有机酸 （ K a 1.8 10 5
），与 NaOH 的反应为： HAc NaOH NaAc
用与已知浓度的 NaOH 滴定未知浓度的 HAc 溶液在终点时产生 pH （或 mV ）值的突跃， 据滴定过程中 pH （或 mV ）值的变化情况来确定滴定的终点，进而求得各组份的含量。

滴定终点可由电位滴定曲线 （指示电极电位或该原电池的电动势对滴定剂体积作图） 确定，也可以用二次微商曲线法求得。

确定滴定体积以后，从 pH ～ V 曲线上查出 HAc 被中和一半时（ 1/2Ve ）的 pH 值。

此 时， pH=pKa, 从而计算出 Ka 。

醋酸在水溶液中电离如下：
其离解常数为 Ka
[H ][ Ac ]
[HAc]
当醋酸被中和了一半时， 溶液中： [Ac -
]=[HAc] ，根据以上平衡式， 此时 Ka=[H +
]，即 pKa=pH 。

1 因此， pH ～V 图中 2
Ve 所处的 pH 值即为 pKa ，从而可求出醋酸的酸常数
三、仪器和试剂
1、仪器 pHS-3C 型酸度计（含复合电极）
电磁搅拌器（含搅拌子）
2、试剂 NaOH 溶液 0.1mol/L ：称取 馏
水，完全溶解后，定容至 待测定的醋酸溶液
四、实验步骤
1． 打开酸度计电源开关，预热 30min 。

接好复合玻璃电极。

2． 用 pH=6.86（25℃）和 pH=4.00（25 ℃） 的缓冲溶液将 pHs-3C 型酸度计 pH 计的标定。

（1）按
“ pH/MV ”按钮，仪器进入 PH 测量状态。

按“温度”按钮，调节↑或↓ 使温度显示为溶液的温度值，然后按“确定”键。

（2 ）把用蒸馏水清洗电极，插入 pH6.86 的标准缓冲溶液中，读数稳定后按“定 位”键，此时 pH 指示灯闪烁，调节↑或↓使 pH 读数为该溶液当时温度下的 pH 值，然后按“确认”键，仪器进入 pH 测量状态， PH 指示灯停止闪烁。

（ 3）把用蒸馏水清洗过电极插入 pH4.00（或 pH9.18）的标准缓冲溶液中，待读 数稳定后接“斜率”键（此时 pH 指示灯闪烁），调节↑或↓使 pH 使读数为该溶 液当时温度下的 pH 值，然后按“确认”键，仪器进入 pH 测量状态， pH 指示灯 停止闪烁，标定完成。

（ 4 ）用蒸馏水清洗电极后可对被测溶液进行测量。

3． 粗测： 准确吸取醋酸试液 10.00mL 于 100mL 小烧杯中， 再加水约 20mL 。

放入搅拌磁子， 浸入 pH 复
合电极。

开启电磁搅拌器 （注意磁子不能碰到电极） ，用 0.1000mol/LNaOH 标准溶 液进行滴定， 1mL 读数一次，待到超过化学计量点，初步确定滴定终点。

4. 细测：同上，准确吸取醋酸试液 10.00mL 于 100mL 小烧杯中，再加水 20.00mL 。

放入搅 拌磁子，浸入 pH
复合电极。

开启电磁搅拌器， 用 NaOH 标准溶液进行滴定，滴定开始时每点 隔 1mL 读数一次，在 Vep 处和化学计量点附近时间隔 0.10mL 读数一次，记录每个点对应 的 体积和 pH 值，过了滴定终点每滴 1mL 读一次 pH 值，直至滴定至 pH12左右。

5. 滴定结束后的电极、 烧杯和搅拌子都要清洗干净。

实验完毕后整理好仪器、器皿， 原处。

五、数据记录与处理
1、画表格记录滴定体积和对应的 pH 。

2、根据滴定数据作 pH ～ V 滴定曲线，
3、根据滴定终点求出试样溶液中醋酸的浓度（以
g/L 表示）。

1
H 2O 。

因此根 HAc H Ac
Ka 。

滴定管 铁架台（含滴定管夹） 100ml 玻璃烧杯 4g 固体
NaOH ，加入新鲜的或煮沸的除去二氧化碳的蒸 1L ，充分摇
匀标定。

放回
4、pH～V 图中2Ve 所处的pH 值即为pKa，从而可求出醋酸的离解常数Ka。

5、与Ka（理论）进行比较，计算相对误差。

六、问题讨论
1、电位滴定的原理和依据是什么？
2、电位法滴定测定与用酚酞为指示剂的滴定中有什么区别？
3、pH计使用中应注意什么问题？
pH计使用中注意事项：
1 复合电极在使用前浸泡活化24h。

（3M氯化钾溶液中）
2 . 清洗电极后，不要用滤纸擦拭玻璃膜，而应用滤纸吸干，避免损坏玻璃膜。

3 . 严禁在强酸和腐蚀性强碱溶液中使用。

4 . 配制pH 标准溶液使用无CO2，蒸馏水一般保存2-3 个月，如发现浑浊，发霉或沉淀现象时，不能继续使用。

实验五牙膏中游离氟含量的测定
实验目的
1、掌握电位分析法基本原理
2、学习用氟离子选择性电极测定牙膏中微量游离氟的方法。

二、实验原理
采用F-选择电极法可以测定牙膏游离氟的含量。

电极电位与溶液中离子活度的对数值呈线性关系:E=K-0.0592 lga F- 若在标液与样液中加入总离子强度调节缓冲剂TISAB，控制待测溶液的离子强度与酸度恒定，电池的电动势与溶液中的F-的浓度对数值成线性关系，通过测量电动势就能求得溶液中F-的浓度。

三、实验仪器与试剂
仪器：PHS-3C型酸度计，氟离子选择电极，甘汞电极，磁力搅拌器，烧杯，25mL 容量瓶8 个，100mL塑料烧杯
试剂：氟离子标准溶液100μg/mL 柠檬酸盐缓冲液（TISAB）：总离子强度调节缓冲溶液
四、实验内容与步骤
1、含氟牙膏样品的制备（佳洁士防蛀牙膏、黑人牙膏）：称取不同品牌牙膏各50g（精确至0.001g ），分别置于100mL塑料烧杯中，逐渐加入去离子水搅拌使溶解，转移至
250mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀。

2、标准溶液的配置与测定
准确量取0、0.5 、1.0 、1.5 、2.0 、2.5mL氟离子标准溶液，分别移入6个25mL 容量瓶中，各加入5mL TISAB，用去离子水稀释至刻度，摇匀。

然后逐个转入
100mL塑料烧杯中，按由浓度由低到高的顺序，在磁力搅拌器下测量电位值E
（mV），并记录。

3、牙膏中游离氟的测定
准确吸取步骤1中2 种牙膏的上清液5mL，分别置于25mL容量瓶中，各加入5mL TISAB，用去离子水稀释至刻度，摇匀。

转入100mL塑料烧杯中，在磁力搅拌下测量其电位值，
五、数据计算
1、根据标准溶液的浓度和测定的电位值计算E－lg[F] 线性关系方程和R值。

2、根据牙膏上清液中测定的电位值，计算上清液游离氟的浓度和牙膏中游离氟的百分含量。

六、思考题
1、本实验测定的结果是氟离子的活度还是浓度？
2、在实验中为什么要加入TISAB?
实验六高效液相色谱柱性能考察
一. 实验目的
掌握考察色谱柱基本特征的方法
二. 基本原理评价液相色谱柱的性能是否优良，有不同的方法和考察指标。

本实验用理
论塔板数和峰对称性两个方面进行考察。

（1）理论塔板数：色谱柱的分离效率（简称柱效），可定量地用理论塔板数来表示，理论塔板数反映色谱柱本身的特性，可表明柱受填料颗粒度、柱内径、流动相流速和粘度、进
样方式等影响，是一个具有代表性的参数。

2
n = 5.54（t R/ w1/2）
= 16（t R/ w）2
H = L /n
n理论塔板数，t R组分保留时间，W1/2半高峰宽，W峰宽，L色谱柱长，H理论塔板高度。

（2）峰对称性：若色谱填充不均匀或柱子经长期使用及保存不当，都会引起色谱峰的不对称。

峰不对称性用峰不对称因子（Peak Asymmtrey Factor ）表示。

其计算方法见图1，由峰顶向基线作垂线，并在峰高10%处作基线平行线，得A ，C，B 三交点，则峰不对称因子可由下式计算求得：
PAF = CB/AC 一根良好的色谱柱，峰不对称因子应在
0.8---1.2 范围内。

图1 峰不对称因子计算示意图
三. 仪器和试剂
1．HP 1100高效液相色谱仪（配DAD 检测器，检测波长254 nm），超声波清洗机（流动相脱气用），50 μL平头微量注射器，不锈钢色谱柱2．流动相为甲醇：水= 85：15（体积比），实验混合物为萘—联苯（1：1）四．实验步骤1．HP1100使用步骤（1）开泵, 检测器, 柱温箱，电源
（2）开电脑，当Bootp sever 打出七行字后，打开HPLC Chematation on line （在线工作站）
（3）设置流动相的比例（二元泵），流速1.00---5.00 ml/min, 打开purge 阀，赶走气泡，打开柱温箱，打开DAD 检测器。

等赶尽气泡后关闭purge 阀，流动相通过柱子。

（4）设置并保存方法，设置样品信息，文件保存路径。

（5）等基线平稳后，按Balance按钮，平衡后等Ready 出现可进样。

在下一针前先按Balance平衡同上，等Ready出现后，再进样。

（6）实验完毕用水（有盐时）或甲醇分别冲洗柱子约半小时，此时柱温箱和检测器可关闭。

用水或甲醇冲洗进样器，扳动进样器几次，冲洗干净，关闭泵。

（7）关闭chemstation online 后，再关闭泵，检测器，柱温箱，电源。

（8）打开chemstation offline 工作站进行数据分析，作标准曲线。

测量浓度。

2．色谱柱性能检查
（1）将填好的色谱柱接入色谱系统
（2）启动仪器，待基线平稳后进样
（3）进样完毕后，出现完整的色谱图，保存记录数据五数据处理根据柱长（cm），组分保留时间tR（min），组分的半高峰宽W 1/2（min），计算每米的理论塔板数、理论塔板高度和组分的不对称因子。

六问题讨论
1．根据数据处理的结果，评价所填充的色谱柱的性能
2．简述评价液相色谱柱的方法和指标。

实验七气相色谱仪的使用及色谱柱的性能评价
、目的要求
通过本实验掌握气相色谱仪的使用方法和柱性能评价指标的计算。

二、基本原理毛细管固定相有大的相比和比渗透性以及高的柱效，因此，常用于复杂物质的分析。

由于毛细管柱的性能会因涂渍方式、膜的厚度、膜的均匀性、柱子安装技术等因素而变化，因此，必须对毛细管柱的性能进行评价。

柱评价通常选用k' ≥3 的组分测定其保留时间与半宽度，计算它的理论塔板数；同时选用难分离的一对物质测定其分离能力，通过观察峰的拖尾程度以评价柱壁的惰性度。

看教材P190-192 学习气相色谱仪的主要构成部分和作用。

看教材P208-210 了解毛细管柱气相色谱法的特点和毛细管色谱仪的结构。

三、仪器与试剂
1. 仪器毛细管气相色谱仪，FID；色谱柱：Rtx-5 柱，30 m×?0.3mm，膜厚：0.25 m
2. 试剂环己烷（bp：沸点80.74 ℃）正戊烷（bp：36℃）
3. 色谱条件：Injection temperature（ Ti）＝200o C Injection mode（进样方式）：split ，分流比：100：1；Flow control:linear velosty; 分流比50:1 ；载气（N2，99.995 ％）；线速：40cm/s；Tc＝80o C；T D＝140o C；H2：30 mL/min；尾吹气（N2）40 mL/min；空气：300 ml/min; 进样量0.2 l （液）；H2 0.4MPa；空气0.5MPa
四、实验步骤
1. 毛细管色谱仪的使用：熟悉气相色谱仪的各部分、了解GCsolution 参数设置
2. 进样练习：吸取正戊烷和环己烷上方气体0.2 L，进样练习。

3. 色谱柱性能评价：分离正戊烷和环己烷
五、数据处理
1. 理论塔板数的测定：正戊烷和环己烷的理论塔板数（theoretical plates），根据柱长计算塔板高度
2. 计算正戊烷和环己烷的分离度（resolution ）
3. 计算正戊烷和环己烷的分离度的拖尾因子（tailing factor）
T（拖尾因子）=W 0.05h/2d1
W0.05h 为5%峰高处的峰宽，d1 为峰顶点至峰前沿之间的距离
T 应该在0.95-1.05之间，低于0.95 为前延峰，高于1.05 为拖尾峰
六、问题讨论
1. 简述毛细管色谱法的优缺点。

2. 毛细管柱分析时为什么要采用分流方式？
3. 气相色谱气化室温度的设定和柱温有何要求？
附:
第一部分气相色谱分析注意事项
、载气钢瓶的使用规程
1 钢瓶必须分类保管，直立固定，远离热源，避免暴晒及强烈震动，氢气室内存放量不得超过二瓶。

2 氧气瓶及专用工具严禁与油类接触。

3 钢瓶上的氧气表要专用，安装时螺扣要上紧。

4 操作时严禁敲打，发现漏气须立即修好。

5 用后气瓶的剩余残压不应少于980 kPa。

6 氢气压力表系反螺纹，安装拆卸时应注意防止损坏螺纹。

二、减压阀的使用及注意事项
1 在气相色谱分析中，钢瓶供气压力在9.8-14.7 MPa 。

2 减压阀与钢瓶配套使用，不同气体钢瓶所用的减压阀是不同的。

氢气减压阀接头为反向螺纹，安装时需小心。

使用时需缓慢调节手轮，使用完后必须旋松调节手轮和关闭钢瓶阀门。

三、热导池检测器的使用及注意事项
1 开启热导电源前，必须先通载气，实验结束时，把桥电流调到最小值，再关闭热导电源，最后关闭载气。

2 稳压阀，针形阀的调节须缓慢进行。

稳压阀不工作时，必须放松调节手柄。

针形阀不工作时，应将阀门处于“开”的状态。

3 各室升温要缓慢，防止超温（现在的气相色谱仪一般采用程序自动控制升温）。

4 更换汽化室密封垫片时，应将热导电源关闭。

若流量计浮子突然下落到底，也应首先关闭该电源。

5 桥电流不得超过允许值。

四、氢火焰检测器的使用及注意事项
1 通氢气后，待管道中残余气体排出后，应及时点火，并保证火焰是点着的。

2 使用FID 时，离子室外罩须罩住，以保证良好的屏蔽和防止空气侵入。

如果离子室积水，可将端盖取下，待离子室温度较高时再盖上。

工作状态下，取下检测器罩盖，不能触及极化极，以防触电。

3 离子室温度应大于100 ℃，待层析室温度稳定后，再点火，否则离子室易积水，影响电极绝缘而使基线不
稳。

五微量注射器的使用及注意事项
1 微量注射器是易碎器械，而且常用的一般是容积为1μ l 的注射器，使用时应多加小心，
不用时要洗净放入盒内，不要随便玩弄，来回空抽，否则会严重磨损，损坏气密性，降低准确度。

2 微量注射器在使用前后都须用丙酮或丁酮等溶剂清洗，而且不同种类试剂要有不同的微量注射器分开取样，切不可混合使用，否则会导致试剂被污染，最后检测结果不准确。

3 对10 μl -100 μl 的注射器，如遇针尖堵塞，宜用直径为0.1 mm 的细钢丝耐心穿通（工具箱
中备有）,不能用火烧的方法。

4 硅橡胶垫在长时间进样后，容易老化漏气，因此需及时更换。

5 用微量注射器取液体试样，应先用少量试样洗涤多次，再慢慢抽入试样，并稍多于需要量。

如内有气泡则将针头朝上，使气泡上升至完全排出，再将过量的试样排出，用；滤纸吸去针尖外所沾试样。

注意切勿使针头内的试样流失。

6 取好样后应立即进样，进样时，注射器应与进样口垂直，针尖刺穿硅橡胶垫圈，插到底后迅速注入试样，完成后立即拔出注射器，同时迅速按下色谱数据工作站的数据采集开关，整个动作应进行得稳当，连贯，迅速。

针尖在进样器中的位置，插入速度，停留时间和拔出速度等都会影响进样的重复性。

手不要直接接触注射器的针头和有样品部位、不要有气泡（吸样时要慢、快速排出再慢吸，
反复几次， 10ul 注射器 金属针头部分体积 0.6ul ，有气泡也比较难看到，多吸 1-2ul 把注射 器针尖朝上气泡上走到顶部再推动针杆排除气泡， （指 10ul 注射器，带芯子注射器凭感觉） 进样速度要快，每次进样保持相同速度，针尖到汽化室中部开始注射样品。

7 必须在本次实验完全结束才能进样继续进行下一个实验。

第二部分 岛津气相色谱 GC-2010操作说明
、准备工作 （请参阅相关文献和《分析化学手册》第
5 卷） 一）、待测样品准备： 热稳定气体试样或易汽化液体试样（难汽化或热不稳定物质不适于
气相色谱法） ；标样，用于样品中各组分的定性与定量。

二）、色谱条件确立： 色谱柱及柱温；进样方式及温度；载气类型及流速；检测器及温度
等。

三）、定量方法选择： m i ＝ f i ×A i （h i ） f i —校正因子， A i —峰面积， h i —峰高
1. 归一化法 ，要求样品中 所有物质都能从色谱柱流出并被检测器检出 。

优点： a 、不必知道准确进样量。

b 、仪器操作条件变动影响不大。

c 、当 f 值相近或 相同时，可
不必求出 f 值，因此特别适合同系物、同分异构体等的分析，此时式 （1） 可简化为式 （2）。

2. 外标法 （标准曲线法） ，配制一系列不同浓度的标样进行色谱分析，
作出峰面积对浓 度的工作曲线； 在严格相同的色谱条件下 ，对未知样进行色谱分析，根据峰面积和 工作曲线求出被
测组分的含量． 3. 内标法 ，将一种与样品互溶但不起反应的纯物质加入到待测样品中作内标进行色谱 定量。

此时：
wi % ms fi Ai 100%
m 样品 f s A S
该法具有归一化法的优点，但 必须事先测得相对校正因子 ，且要求内标物与样品各 组分很好分离。

二、上机操作
（一）、确保气源处于工作压力范围内： 载气 0.5~0.9 MPa ；使用 FID 检测器时打开空气压缩 机和氢气发生
器电源。

（二）、打开 GC-2010 和工作站电源。

（三）、点击工作站桌面 <GC Real Time Analysis> →<OK> ，长声蜂鸣表示联机成功。

（四）、打开原有方法文件或重新设定新的参数，包括色谱柱、进样口、柱温、检测器等。

（五）、点击<Download Parameters> → <System On> ，待检测器达到设定温度后， Flame <On> （FID
检测器，点火之前检查空气和氢气是否已达到需要压力） 或Current <On>（TCD 检测器）。

（六）、系统稳定（ Ready ）且基线平稳后，点击 <Single Run> → <Sample Login> ，编辑样品 信息， 点
击 <Start> →进样→按 GC 上 [Start] 键，进行色谱分析及数据获取。

七）、点击 <GC Post Run Analysis> 进行数据处理。

八）、分析结束后，点击 <System Off> ，待检测器、进样口、柱箱温度均 降至至少 80℃以
下 时，方可关闭工作站、 GC 电源和载气气源。

、注意事项
一）、实验前做好所有准备工作，开机前先开气源。

二）、保证氢气发生器液面高度在 1.2~1.8 刻度之间，最好处于中间刻度。

三）、使用 TCD 检测器时注意载气类型的选择和相应最高电流的限制。

四）、新的或放置一段时间的色谱柱需在高于最高检测温度 30℃左右老化几小时使基线平
稳，老化时最好不接检测器。

色谱柱实际使用温度不得超过其温度上限。

W%
f i A i f 1A 1 f 2 A 2 100%(1) W%
A i A 1 A 2 ....................... A n 100%(2)。