临床免疫学PPT-免疫诊断技术
合集下载
临床免疫学PL医学PPT课件
• 2.黄凤琼、汤国宁、张大勇、郭莉、吴逊、许志萍，人类免疫缺陷 病毒感染患者的脑电图表现（J），中国现代神经疾病杂志，20052，5卷1期：55-56.
• 3.盛 磊、常生军、程 江，CCR5 基因多态性的研究进展[期刊论文] ，实用医技杂志 ，2007 年 2 月第 l4 卷第 4 期（旬刊）：429-430.
问题一
患者从发病起至检查并未接受抗病毒 治疗，出院4周后 HIV病毒载量为 2.6×105拷贝／ml，半年后复查病毒 载量为降至2.8×103拷贝／ml，这是 为什么？
• 患者未进行抗病毒治疗
• HIV病毒主要攻击人体的辅助T淋巴细胞系统
• 在潜伏感染阶段，HIV不会被免疫系统所识别
• 艾滋病毒感染时，不仅CD4细胞被破坏殆尽， 而且新制造出的免疫细胞会被艾滋病毒感染, 所以说CD4细胞是HIV的制造工厂。
请阐述该比值倒置的免疫学机制
总结
半年后患者的HIV病毒载量大幅下降机理是什么？ HIV侵犯神经系统的免疫机制是什么呢？ 巨噬细胞在抗HIV过程中起的作用及机制是什么？ 抗HIV特异性体液免疫作用是有限的，为什么？ CD4/CD8比值倒置的免疫学机制是什么？
引用文献列表
• 1.中华医学会感染病学分会艾滋病学组，艾滋病诊疗指南（J），中 华传染病杂志，2006-4，第24卷第2期：133-144.
问题一
患者从发病起至检查并未接受抗病毒 治疗，出院4周后 HIV病毒载量为 2.6×105拷贝／ml，半年后复查病毒 载量为降至2.8×103拷贝／ml，这是 为什么？
问题二
问题三 HIV侵犯神经系统的免疫机
制是什么呢？
脑电图：是通过电极记录 下来的脑细胞群的自发性、 节律性电活动。脑电图说 明脑功能的一种状态。
• 3.盛 磊、常生军、程 江，CCR5 基因多态性的研究进展[期刊论文] ，实用医技杂志 ，2007 年 2 月第 l4 卷第 4 期（旬刊）：429-430.
问题一
患者从发病起至检查并未接受抗病毒 治疗，出院4周后 HIV病毒载量为 2.6×105拷贝／ml，半年后复查病毒 载量为降至2.8×103拷贝／ml，这是 为什么？
• 患者未进行抗病毒治疗
• HIV病毒主要攻击人体的辅助T淋巴细胞系统
• 在潜伏感染阶段，HIV不会被免疫系统所识别
• 艾滋病毒感染时，不仅CD4细胞被破坏殆尽， 而且新制造出的免疫细胞会被艾滋病毒感染, 所以说CD4细胞是HIV的制造工厂。
请阐述该比值倒置的免疫学机制
总结
半年后患者的HIV病毒载量大幅下降机理是什么？ HIV侵犯神经系统的免疫机制是什么呢？ 巨噬细胞在抗HIV过程中起的作用及机制是什么？ 抗HIV特异性体液免疫作用是有限的，为什么？ CD4/CD8比值倒置的免疫学机制是什么？
引用文献列表
• 1.中华医学会感染病学分会艾滋病学组，艾滋病诊疗指南（J），中 华传染病杂志，2006-4，第24卷第2期：133-144.
问题一
患者从发病起至检查并未接受抗病毒 治疗，出院4周后 HIV病毒载量为 2.6×105拷贝／ml，半年后复查病毒 载量为降至2.8×103拷贝／ml，这是 为什么？
问题二
问题三 HIV侵犯神经系统的免疫机
制是什么呢？
脑电图：是通过电极记录 下来的脑细胞群的自发性、 节律性电活动。脑电图说 明脑功能的一种状态。
临床免疫学检验技术PPT(共64页)
临床免疫学检验技术
• 江西省胸科医院：熊国亮
一、概述
• 免疫学检验是研究免疫学技术及其在医学 检验领域应用的一门学科。免疫检验技术 则重点阐述各类免疫学技术的基本原理、 方法类型和临床应用。19世纪末相继建立 了凝集试验、沉淀试验和补体结合试验等 三大经典血清学试验，用于检测病原微生 物的抗原或抗体对传染病的诊断起到重要 作用。
三、酶联免疫吸附试验（enzy发展，放射 免疫技术、荧光免疫技术、酶免疫技术、 化学发光免疫技术、流式细胞免疫分析技 术等免疫标记技术应用于临床免疫学检验， 加快了免疫学检验的自动化、标准化进程， 极大地提高了免疫学检验的灵敏度，拓展 了免疫学检测范围，从检测免疫相关物质 （抗原、抗体、补体、免疫活性细胞和细 胞因子等）到检测体液中的微量物质（激 素、酶、血浆微量蛋白、血药浓度、微量 元素等）。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
• 此法常用多孔聚苯乙烯反应板作为固相载 体，读取结果需用酶标仪。标记抗原或抗 体所用的酶常选择辣根过氧化物酶（HRP）、 碱性磷酸酶（AP）等，HRP常用的底物有 邻苯二胺（OPD）或四甲基联苯胺 （TMB），碱性磷酸酶一般采用对硝基苯 磷酸酯（P-NPP）作为底物，产物为黄色的 对硝基酚，在405nm波长处有最高吸收峰。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 3.免疫球蛋白、循环免疫复合物和补体的测 定 包括测定五类免疫球蛋白的含量、血清 总补体活性及补体成分的含量和在多种疾 病时血清中升高的循环免疫复合物。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 4. 细胞免疫相关指标测定 检测淋巴细胞亚 群和淋巴细胞的功能以及白细胞介素—2等 多种细胞因子，用于判断机体细胞免疫功 能状况。
• 江西省胸科医院：熊国亮
一、概述
• 免疫学检验是研究免疫学技术及其在医学 检验领域应用的一门学科。免疫检验技术 则重点阐述各类免疫学技术的基本原理、 方法类型和临床应用。19世纪末相继建立 了凝集试验、沉淀试验和补体结合试验等 三大经典血清学试验，用于检测病原微生 物的抗原或抗体对传染病的诊断起到重要 作用。
三、酶联免疫吸附试验（enzy发展，放射 免疫技术、荧光免疫技术、酶免疫技术、 化学发光免疫技术、流式细胞免疫分析技 术等免疫标记技术应用于临床免疫学检验， 加快了免疫学检验的自动化、标准化进程， 极大地提高了免疫学检验的灵敏度，拓展 了免疫学检测范围，从检测免疫相关物质 （抗原、抗体、补体、免疫活性细胞和细 胞因子等）到检测体液中的微量物质（激 素、酶、血浆微量蛋白、血药浓度、微量 元素等）。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
• 此法常用多孔聚苯乙烯反应板作为固相载 体，读取结果需用酶标仪。标记抗原或抗 体所用的酶常选择辣根过氧化物酶（HRP）、 碱性磷酸酶（AP）等，HRP常用的底物有 邻苯二胺（OPD）或四甲基联苯胺 （TMB），碱性磷酸酶一般采用对硝基苯 磷酸酯（P-NPP）作为底物，产物为黄色的 对硝基酚，在405nm波长处有最高吸收峰。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 3.免疫球蛋白、循环免疫复合物和补体的测 定 包括测定五类免疫球蛋白的含量、血清 总补体活性及补体成分的含量和在多种疾 病时血清中升高的循环免疫复合物。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 4. 细胞免疫相关指标测定 检测淋巴细胞亚 群和淋巴细胞的功能以及白细胞介素—2等 多种细胞因子，用于判断机体细胞免疫功 能状况。
免疫检测法PPT课件
质。
缺点
01
02
03
04
交叉反应
有时会出现交叉反应，导致假 阳性结果。
抗体依赖
免疫检测法依赖于抗体的质量 和特异性，因此抗体制备的难
度和成本较高。
样品处理要求高
对于某些生物样品，需要进行 复杂的预处理才能进行检测。
检测时间较长
相对于一些快速检测方法，免 疫检测法可能需要更长时间才
能获得结果。
改进方向
分类
根据检测原理和应用领域，免疫 检测法可分为酶联免疫吸附试验 、放射免疫分析、荧光免疫分析 、化学发光免疫分析等。
免疫检测法的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测人体内的肿瘤标 志物、激素、病毒抗原、 药物残留等，辅助医生进 行疾病诊断和病情监测。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留、毒素等有 害物质，保障食品安全。
情监测。
激素水平检测
性激素检测
通过检测性激素水平，有助于评估男性和女性的生殖健康状况，如 睾酮、雌二醇、孕酮等激素的检测。
甲状腺激素检测
甲状腺激素对人体的新陈代谢和生长发育具有重要作用，通过检测 甲状腺激素水平，有助于甲状腺功能亢进和减退的诊断和治疗。
肾上腺激素检测
肾上腺激素与人体应激反应、免疫功能等方面密切相关，通过检测肾 上腺激素水平，有助于相关疾病的诊断和治疗。Fra bibliotek传染病检测
结核病检测
性病检测
通过检测结核病抗体，有助于早期发 现和诊断结核病，为预防和治疗提供 依据。
免疫检测法在性病检测中发挥着重要 作用，如梅毒、淋病、尖锐湿疣等， 通过检测相关抗体和抗原，及时发现 和治疗性病。
肝炎检测
缺点
01
02
03
04
交叉反应
有时会出现交叉反应，导致假 阳性结果。
抗体依赖
免疫检测法依赖于抗体的质量 和特异性，因此抗体制备的难
度和成本较高。
样品处理要求高
对于某些生物样品，需要进行 复杂的预处理才能进行检测。
检测时间较长
相对于一些快速检测方法，免 疫检测法可能需要更长时间才
能获得结果。
改进方向
分类
根据检测原理和应用领域，免疫 检测法可分为酶联免疫吸附试验 、放射免疫分析、荧光免疫分析 、化学发光免疫分析等。
免疫检测法的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测人体内的肿瘤标 志物、激素、病毒抗原、 药物残留等，辅助医生进 行疾病诊断和病情监测。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留、毒素等有 害物质，保障食品安全。
情监测。
激素水平检测
性激素检测
通过检测性激素水平，有助于评估男性和女性的生殖健康状况，如 睾酮、雌二醇、孕酮等激素的检测。
甲状腺激素检测
甲状腺激素对人体的新陈代谢和生长发育具有重要作用，通过检测 甲状腺激素水平，有助于甲状腺功能亢进和减退的诊断和治疗。
肾上腺激素检测
肾上腺激素与人体应激反应、免疫功能等方面密切相关，通过检测肾 上腺激素水平，有助于相关疾病的诊断和治疗。Fra bibliotek传染病检测
结核病检测
性病检测
通过检测结核病抗体，有助于早期发 现和诊断结核病，为预防和治疗提供 依据。
免疫检测法在性病检测中发挥着重要 作用，如梅毒、淋病、尖锐湿疣等， 通过检测相关抗体和抗原，及时发现 和治疗性病。
肝炎检测
实验诊断学--临床常用免疫学检查 ppt课件
ppt课件
16
IgM 约占血清总Ig的 5%~10%
分子量最大（900000），由五个IgM 单体连接而成，故又称巨球蛋白。
脾脏是它的主要合成部位，IgM主要分 布于血液中，防止发生菌血症方面起重 要作用，半衰期5天左右。
天然同族凝集素抗 A抗B、冷凝集素及 伤寒沙门菌的抗体
均属此类。
ppt课件
17
百分比
参考值
正常人群各年龄 段个体中血清 IgG、IgA、IgM 的含量有很大差
异
70%-80% 7.0-16.6g/L
10%-15% 0.7-3. 5g/L
5%-10% 0.5-2.6g/L
0.02%-1% 0.6-2.0mg/L
0.002% 0.1-0.9mg/L
ppt课件
13
测定方法
❖ 血清中含量较高的 IgG、IgA、IgM多 采用单向免疫扩散法、火箭免疫电泳法和免 疫比浊法，而标本中含量极微的IgD和IgE则 采用敏感度较高的放射免疫法和酶免疫法等 进行定量测定。
ppt课件
14
IgG 占总Ig的70%~80%
是血清中的主要抗体，主要由脾脏和 淋巴结合成，在机体的免疫防御中起重要作 用，抗细菌、病毒和寄生虫等，还具抗毒素 作用，为不完全抗体，分子量小 （150000），唯一能自由地通过胎盘。
半衰期约为23天， 故临床上使用丙球 作治疗时以2～3周
注射一次
ppt课件
ppt课件
22
高Ig血症
❖ 慢性细菌感染:肺结核,麻风,慢性支气管炎, 感染早期IgM显著升高，以后IgG升高，IgA 也可升高。
15
IgA 约占血清总Ig 10%~15%
分为血清型与分泌型两种，具有抗细 菌、抗病毒、抗毒素作用，其中的分泌 型（SIgA）在局部与抗呼吸道、消化道 和泌尿生殖道感染、炎症或肿瘤等病变 密切相关,是抗过敏的重要免疫屏障。
《诊断学》第二版PPT第二十四章 临床常用免疫学检测
检测：感染性疾病、免疫增值性疾病和免疫缺 陷性疾病的诊断、鉴别诊断、疾病进展和预后。
血清免疫球蛋白分类
根据重链稳定区的分子 结构和抗原特异性的不 同，分为五类：IgG、 IgA、IgM、IgD、IgE
血清免疫球蛋白分类
检测方法
酶联免疫法（ELISA) 放射免疫（RIA) 荧光标记免疫(IFA) 化学发光法（CLIA) 免疫透射比浊、免疫散射比浊
减低：免疫复合物性疾病（如肾小球肾炎）、 自身免疫性疾病活动期、感染性心内膜炎、病 毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重症营养不良 和遗传性补体成分缺乏症等
二、补体C3检测
是一种由肝脏合成的β2-球蛋白。C3在补体系 统各成分中含量最多，是经典途径和旁路途径 的关键物质。它也是一种急性时相反应蛋白。
参考值
参考值 0.5 ～2.6 g/L
临床意义
IgM增高 见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类 风湿关节炎、SLE等，原发性巨球蛋白血症时， IgM呈单克隆性明显增高
IgM降低 见于IgG型重链病， IgA型MM，先 天性免疫缺陷病，使用免疫抑制剂，淋巴系统 肿瘤和肾病综合症。
四、免疫球蛋白E的检测
– 半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆 Ig片段。
– 恶性淋巴瘤：血液中可出现M蛋白。 – 良性M蛋白血症：
第二节 血清补体检测
补体是一组具有酶源活性的糖蛋白，由传统途 径的九种成分C1(C1q/C1r/C1s）-C9，旁路途 径的三种成分及其衍生物B/D/P/H/I等因子组 成
参与机体的抗感染和免疫调节,介导病理反应
识别阶段
细胞膜
C3转化酶的形成
活 化 阶 段
C4b2b 为C3转化酶
C4b
C5转化酶的形成
血清免疫球蛋白分类
根据重链稳定区的分子 结构和抗原特异性的不 同，分为五类：IgG、 IgA、IgM、IgD、IgE
血清免疫球蛋白分类
检测方法
酶联免疫法（ELISA) 放射免疫（RIA) 荧光标记免疫(IFA) 化学发光法（CLIA) 免疫透射比浊、免疫散射比浊
减低：免疫复合物性疾病（如肾小球肾炎）、 自身免疫性疾病活动期、感染性心内膜炎、病 毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重症营养不良 和遗传性补体成分缺乏症等
二、补体C3检测
是一种由肝脏合成的β2-球蛋白。C3在补体系 统各成分中含量最多，是经典途径和旁路途径 的关键物质。它也是一种急性时相反应蛋白。
参考值
参考值 0.5 ～2.6 g/L
临床意义
IgM增高 见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类 风湿关节炎、SLE等，原发性巨球蛋白血症时， IgM呈单克隆性明显增高
IgM降低 见于IgG型重链病， IgA型MM，先 天性免疫缺陷病，使用免疫抑制剂，淋巴系统 肿瘤和肾病综合症。
四、免疫球蛋白E的检测
– 半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆 Ig片段。
– 恶性淋巴瘤：血液中可出现M蛋白。 – 良性M蛋白血症：
第二节 血清补体检测
补体是一组具有酶源活性的糖蛋白，由传统途 径的九种成分C1(C1q/C1r/C1s）-C9，旁路途 径的三种成分及其衍生物B/D/P/H/I等因子组 成
参与机体的抗感染和免疫调节,介导病理反应
识别阶段
细胞膜
C3转化酶的形成
活 化 阶 段
C4b2b 为C3转化酶
C4b
C5转化酶的形成
临床免疫学检验课件第11章固相膜免疫分析技术ppt
收峰波长增长， A680/A519比值增大。 肉眼观察胶体金颜色或测定其吸收峰波长的变化粗
略预估胶体金直径大小
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
不同直径金颗粒的呈色性和光吸收性
胶体金颗粒 （nm）
?斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold
filtration assay, DIGFA) ?斑点金免疫层析试验（dot immunogold
胶体金免 疫技术
chromatography assay, DICA)
?斑点酶免疫吸附试验(dot enzyme linked immunospot assay
（2）保存 ： ? 洁净的玻璃容器；室温避光无灰尘环境中保 存3个月，4℃保存半年 ? 避免冻存：导致胶体金聚集。 ? 20天内标记：胶体金的不稳定性
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
（三）免疫金的制备(P53)
,Dot-ELISA)
?免疫印迹法(immunoblotting test, IBT)
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
第一节 胶体金免疫技术
colloidal gold immunoassay 1.原理：
胶体金特性 ? 胶体特性 ? 呈色性和光吸收性 ? 稳定性 ? 聚沉现象
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
略预估胶体金直径大小
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
不同直径金颗粒的呈色性和光吸收性
胶体金颗粒 （nm）
?斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold
filtration assay, DIGFA) ?斑点金免疫层析试验（dot immunogold
胶体金免 疫技术
chromatography assay, DICA)
?斑点酶免疫吸附试验(dot enzyme linked immunospot assay
（2）保存 ： ? 洁净的玻璃容器；室温避光无灰尘环境中保 存3个月，4℃保存半年 ? 避免冻存：导致胶体金聚集。 ? 20天内标记：胶体金的不稳定性
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
（三）免疫金的制备(P53)
,Dot-ELISA)
?免疫印迹法(immunoblotting test, IBT)
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
第一节 胶体金免疫技术
colloidal gold immunoassay 1.原理：
胶体金特性 ? 胶体特性 ? 呈色性和光吸收性 ? 稳定性 ? 聚沉现象
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
临床免疫学技术培训PPT免疫检测与诊断方法
利用免疫学原理和技术，对疾病进行早期、快速、准确的诊断。
通过调节或增强机体的免疫功能，达到治疗疾病的目的。
03
02
01
以凝集试验、沉淀试验等为基础，操作简便但灵敏度较低。
早期免疫检测
利用酶标记抗体或抗原，提高检测灵敏度和特异性。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
通过荧光标记抗体，实现对病原体的快速、直观检测。
肿瘤免疫治疗概述
简要介绍肿瘤免疫治疗的概念、原理及主要策略，如免疫检查点抑制剂、过继性细胞免疫治疗等。
肿瘤免疫治疗药物及临床试验进展
列举目前处于临床试验阶段的肿瘤免疫治疗药物，并介绍其研究进展和最新成果。
肿瘤免疫治疗的效果评估
探讨如何评估肿瘤免疫治疗的效果，包括生存率、生活质量、无进展生存期等指标的改善情况，以及生物标志物的变化等。
01
简要介绍肿瘤标志物的概念、分类及其在肿瘤诊断、治疗和预后评估中的意义。
常见肿瘤标志物及其检测方法
02
列举常见的肿瘤标志物，如CEA、AFP、CA19-9等，并介绍其相应的检测方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光法等。
肿瘤标志物检测的临床应用
03
探讨肿瘤标志物检测在肿瘤早期筛查、诊断、治疗监测和预后评估中的应用价值。
临床免疫学技术培训PPT免疫检测与诊断方法
：
2023-12-30
免疫检测与诊断方法概述抗原抗体反应及检测技术免疫细胞功能检测技术自身免疫性疾病相关检测技术免疫学技术在感染性疾病中应用肿瘤免疫学相关检测技术
免疫检测与诊断方法概述
01
通过免疫学技术制备疫苗，预防传染病的发生。
预防接种
免疫诊断
免疫治疗
肿瘤免疫学相关检测技术
临床免疫检验的质量保证PPT医学课件
Pm=
Pm<5%为失控。此时，阴性标本可以发出报告，所有阳 性标本在查清原因后重做。
根据二项式分布的概率计算
如果一个实验室检测HBsAg，平常病人结果的阳性率为 10%，即p=0.1, 在某一次检测19个样本出现5个阳性结果， 14个阴性结果，则检测过程中是否存在污染的可能性可通 过下述方法计算。即计算在19个样本中出现至少5个阳性结 果的概率，此时的概率为1-（获得0个或1个或2个或3个或4 个阳性结果的概率）即：
本章小结
分析前质量保证包括检验项目的申请、患者的准 备、标本的采集、运送、接收和保存等。
分析中的质量保证包括实验室环境条件、仪器设 备维护校准、试剂方法的性能验证、标准操作程序的 建立、人员培训、标本前处理、室内质量控制、室间 质量评价和实验室间比对等，其中室内质量控制和室 间质量评价是质量保证的重要方面。
本章小结
临床上绝大部分开展的免疫学检验，都是仅能作为 筛查试验或诊断试验，阳性结果仅代表在检测中发生了 抗原抗体的阳性反应，但阳性反应可能是真阳性，也可 能是假阳性，也就是说存在一定比例的假阳性可能。由 于免疫检验方法学的这一局限性，在免疫检验的分析前 、分析中和分析后质量保证中，都涉及到与其他检验项 目不同的特点，突出表现在检验项目的申请（分析前） 和结果的报告与解释（分析后）两个方面。
是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用 来决定实时的测定结果的可接受性。
通过参与EQA，实验室可对自己的实验操作进行纠正， 从而起到自我教育的作用。
第五节 分析后的质量保证
重点提示
结果的报告与解释 检验后标本的保存与处理 咨询服务
结果的报告
基本信息 ①患者的姓名、性别、年龄； ②送检科室或单位名称； ③标本采集时间和实验室接收标本时间；④标本的编号或 条码；⑤检测项目；⑥标本类型；⑦检测方法和主要设备 等。
Pm<5%为失控。此时，阴性标本可以发出报告，所有阳 性标本在查清原因后重做。
根据二项式分布的概率计算
如果一个实验室检测HBsAg，平常病人结果的阳性率为 10%，即p=0.1, 在某一次检测19个样本出现5个阳性结果， 14个阴性结果，则检测过程中是否存在污染的可能性可通 过下述方法计算。即计算在19个样本中出现至少5个阳性结 果的概率，此时的概率为1-（获得0个或1个或2个或3个或4 个阳性结果的概率）即：
本章小结
分析前质量保证包括检验项目的申请、患者的准 备、标本的采集、运送、接收和保存等。
分析中的质量保证包括实验室环境条件、仪器设 备维护校准、试剂方法的性能验证、标准操作程序的 建立、人员培训、标本前处理、室内质量控制、室间 质量评价和实验室间比对等，其中室内质量控制和室 间质量评价是质量保证的重要方面。
本章小结
临床上绝大部分开展的免疫学检验，都是仅能作为 筛查试验或诊断试验，阳性结果仅代表在检测中发生了 抗原抗体的阳性反应，但阳性反应可能是真阳性，也可 能是假阳性，也就是说存在一定比例的假阳性可能。由 于免疫检验方法学的这一局限性，在免疫检验的分析前 、分析中和分析后质量保证中，都涉及到与其他检验项 目不同的特点，突出表现在检验项目的申请（分析前） 和结果的报告与解释（分析后）两个方面。
是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用 来决定实时的测定结果的可接受性。
通过参与EQA，实验室可对自己的实验操作进行纠正， 从而起到自我教育的作用。
第五节 分析后的质量保证
重点提示
结果的报告与解释 检验后标本的保存与处理 咨询服务
结果的报告
基本信息 ①患者的姓名、性别、年龄； ②送检科室或单位名称； ③标本采集时间和实验室接收标本时间；④标本的编号或 条码；⑤检测项目；⑥标本类型；⑦检测方法和主要设备 等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
荧光染料的种类及荧光光谱
FITC（异硫氰酸荧光素）：绿色，530nm PE（藻红蛋白）：橙黄色，575nm PerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白）：深红色，675nm PI(碘化丙啶）：橙红色，620nm APC(别藻兰蛋白）：红色，660nm
荧光染色对照的设置
CK抗体包被的反应板 加入酶标的CK抗体
加入底物
检测抗原特异性B细胞
二、免疫荧光显微技术 (Immunofluorescence Technique)
是用荧光素（常用的有异硫氰酸荧光素，FITC) 与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗原反应， 置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发 出荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。
流式细胞仪
BD-Calibur
BD FACSVantage
EPICS XL-ADC
CYTOMICS FC500
EPICS ALTRA
如何让流式细胞仪认识目标细胞？
细 胞
抗体
荧光 MARKER特异性结合物
MARKER
细 胞
细 胞
对细胞进行定量的MARKER可以在细胞的任何部位
细胞膜 细胞器 细胞浆 细胞核 代谢
一、酶免疫测定技术
(Enzyme Immunoassay, EIA)
是用酶（常用的有辣根过氧化物酶-HRP和碱性磷酸 酶-AP) 标记的抗体进行的抗原抗体反应。EIA将抗原 抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通 过酶作用于底物后显色来判定结果。
常用的方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法，前 者测定可溶性抗原或抗体，后者测定组织中或细胞表 面的抗原。
数据的获取
结果的分析
操作流程图
EDTA抗凝血 100μl
加入荧光标记 的抗体各10μl
溶解红细胞、 洗涤、固定
15 min避光
FCM分析
样本制备非常重要
单细胞悬液 大多数仪器是在50-300 µm大小的孔径中,将细胞悬液
注射进入鞘液中 这一过程,成为流体动力学聚焦
1）常见临床检测标本的准备
血液或骨髓、培养细胞样品 体液和各种灌洗液 各种组织
血液或骨髓：EDTA-K2（1.5～2 mg/ml ）抗凝
培养细胞样品：
胰蛋白酶消化 PBS吹打悬浮 低速离心5min PBS洗涤2次 PBS悬浮沉淀细胞
体液和各种灌洗液：包括脱落细胞、胸腹水细胞、 尿液、内镜刷检细胞等
离心取沉淀细胞 PBS悬浮
1、酶联免疫吸附试验
(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA)
是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙 烯微量反应板）表面，使抗原抗体反应在固相表 面进行。用洗涤法将液相中游离成分洗除。 主要有双抗体夹心法、间接法BAS-ELISA等。
ELISA检测抗体
包括直接荧光法、间接荧光法和补体法。
1、直接荧光法：
将荧光素直接标记抗体作标本染色。该法的优点 是特异性强，但其缺点是每检测一种抗原必须制 备相应的荧光抗体。
2、间接荧光法：
用一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标记的 二抗染色。该法的优点是敏感性比直接法高，制 备一种荧光素标记的二抗可用于多种抗原的检测， 但非特异性荧光亦会增加。
间接免疫荧光染色
未标记的第一抗体 灵敏度高 操作复杂 背景染色增加
ber of cells
100
101
102
103
104 100
101
102
103
104 100
101
102
103
104
CD3
CD4
CD8
双色免疫荧光染色
染色方法
第一，表面染色 第二，胞内染色 第三，胞内和表面标记同时检测
免 疫 印 迹 法 示 意 图
四、流式细胞技术
（Flow Cytometry, FCM)
FCM是将免疫荧光技术应用于流式细胞仪，对 单个细胞的表面标志（抗原或受体）进行快速、 精确的分析和自动检测，并将不同类型的细胞分 选收集。
FCM还可对同一细胞的多种参数（如DNA、 RNA、蛋白质和细胞体积等）进行多信息分析， 为当代生命科学研究领域中广泛使用的一项新技 术。
直接标记 直接 打孔 打孔或直接 ANYWAY
流式细胞仪对目标细胞的识别需要借助对MARKER进行
标记的荧光素
用荧光标记抗体
抗体特异性地结合细 胞上对应的抗原
表达该抗原的细胞被 标记上荧光； 抗原表达多的细胞荧 光强度强
阳性细胞百分 比或浓度
靶蛋白浓度
1、流式细胞仪工作原理
标本的准备
2、操作流程 免疫荧光染色
临床免疫技术
摘要
利用免疫学原理建立的免疫学检测技术应用于：
多种免疫性疾病（感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反应、 自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反应和肿瘤等）的 诊断、疗效评估、发病机制探讨、以及对抗原性物质或 免疫细胞的定性、定量，对细胞因子、粘附分子及细胞 受体的检测等。
常用免疫学检测技术：
酶免疫技术 免疫荧光显微技术 免疫印迹技术 流式细胞技术
PBS洗涤2次 尼龙网过滤
各种组织：包括新鲜实体组织样本、组织活检或 内镜取材标本
酶消化法 机械法 化学处理法
尼龙网过滤
PBS洗涤2次
2）免疫荧光染色
免疫荧光染色的类型（直接、间接） 荧光染色的方法（单色、双色、多色） 荧光染料的种类 荧光染色对照的设置
直接免疫荧光染色
荧光素标记的单抗直接染色 操作简便 背景染色低
ELISA（双抗体夹心法）检测抗原
2、酶联免疫斑点法
（Enzyme-Linked Immunospot assay, ELISAPOT)
是在ELISA的基础上建立的检测抗体生成 细胞及细胞因子产生细胞的方法。
加入淋巴细胞
抗原包被的反应板 加入酶标记二抗
加入底物
T细胞产生CK的检测
加入淋巴细胞
CK
间 接 免 疫 荧 光 法 示 意 图
3、补体结合免疫荧光法：
此法是在间接法的第一步抗原—抗 体反应时加入补体，使之与抗原— 抗体复合物结合；再用荧光素标记 的抗C3抗体进行示踪。
三、免疫印迹技术 (Immunoblotting)
是将凝胶电泳与固相免疫测定结合，先把电泳 分区的蛋白质转移到固相载体，再用酶免疫、 放射免疫等技术测定。该法能分离分子大小不 同的蛋白质并确定其分子量。 常用于检测多种病毒如HIV的抗体或抗原。