淋巴细胞亚群检测的临床应用-山西省人民医院

临 床
应 用
免疫缺陷病
原发性免疫缺陷病：患者血液淋巴细胞免疫表型可出现多种异常。如
严重联合免疫缺陷病（SCID）时，T淋巴细胞缺乏；X连锁无丙种球蛋
白血症，B淋巴细胞数量缺乏或减少。
HIV感染和AIDS：CD4+T淋巴细胞是HIV感染的主要细胞。 CD4+T淋巴
细胞计数用于评价HIV感染后免疫系统受损的程度。
流式细胞术的应用使得过去应用E-玫瑰花结试验或EAC-花环
试验检测T或B淋巴细胞成为历史
应用抗CD（cluster of differentiation,CD)单抗将免疫细胞区分
得更细、更科学、更能描述免疫细胞的机能状态
由于流式细胞仪将静态的、显微镜下肉眼观察改为动态的、
计算机信号处理，因此，在流式细胞仪上 T细胞亚群统计方 式已从传统的荧光显微镜下计数 200 个细胞成为几秒钟内计 数上万个，因此，结果更真实、更具有统计意义。
机械性防御机制：皮肤、粘膜（口腔、呼吸道、消化道、泌尿）； 体液免疫机制：补体系统；急性相蛋白（CRP等）；吞噬细胞（单核-巨噬细胞、
粒细胞）；NK（肿瘤、病毒感染细胞、异源）；ADCC。感染早期数分或96h内执行防卫。
2、适应性免疫应答：识别特异的病原体，特异性应答
T及B淋巴细胞，感染后4-5天对识别的病原体进行杀伤清除，发生在固有 性免疫应答之后。 B淋巴细胞针对细胞外的细菌病原体，引发吞噬作用，介导体液免疫 T淋巴细胞抵抗细胞内复制的病原体（病毒、结核菌），介导细胞免疫
CD4+T细胞：下降
CD8+T细胞：HIV感染早期增高，发展为AIDS时下降 NK细胞：降低，特别是疾病晚期
SARS


淋巴细胞数量减低，部分患者表现出与AIDS和部分晚 期肿瘤患者相似的免疫功能状态。
研究发现： SARS患者淋巴细胞及其各亚群均受到破坏，以T细胞 受损为主，而且CD4细胞比CD8细胞受损更为严重。 治疗后病情好转或治愈后，T淋巴细胞数量可逐渐恢 复正常。
牛皮癣
牛皮癣患者血液中T淋巴细胞各亚群的数量常无明显的
差别
但患者皮肤病变的部位浸润淋巴细胞却以辅助/诱导性
T细胞（TH）占优势
案 例
分
析
1、邢某，男，左上肺癌

2010年1月15日入院检测： CD3 CD4 CD8 B 51% 20% 26% 12%
NK 21%
2、结合血常规结果，同时关注百分比和绝对数 3、当CD4+/CD8+比例倒置时，一定要确认是CD4+细胞绝对数降低， 还是CD8+细胞绝对数增加所致，两种情况的临床意义不同 4、（CD3+%）+（CD19+%）+（CD16/56+%）=100%±5%，如相差过于 悬殊，临床具有一定提示意义。研究表明感染和血液肿瘤最易出 现等式严重偏离
6.1 CD4+T细胞又分为Th1和Th2,Th1主要介导细胞免疫和炎症反应，涉及抗病毒、抗胞内寄生菌 和移植物排斥；Th2主要参于B细胞增殖、抗体产生和超敏反应性疾病。同时两者互为抑制，它们 在免疫调节中互相拮抗，起着十分微妙的作用 6.2己有研究表明确实存在CD4+杀伤T细胞，因而不能说CD4+T细胞一定发挥上调作用
CD4+：Th1:CD4+IFNr+ Th2:CD4+IL+ Th0:CD4+IFNr+IL+ CD8+：Tc1:CD8+IFNr+ Tc2:CD8+IL4+ Tc0:CD4+IFNr+IL4+
调节性T细胞（regulatory T,Treg):淋巴细胞亚群中的新成员。
2010年3月22日出院检测： CD3 CD4 CD8 55% 27% 24%
B 11%
NK 18%
1、邢某，男，左上肺癌

2010年1月15日入院检测： CD3 CD4 CD8 B 51% 20% 26% 12%
NK 21%
2010年3月22日出院检测： CD3 CD4 CD8 55% 27% 24%
2010年8月25日入院检测： CD3 CD4 CD8 B 17% 6% 9% 79% 2010年9月21日治疗后检测： CD3 CD4 CD8 B 53% 17% 34% 36% 2010年10月25日治疗后监测： CD3 CD4 CD8 B 80% 14% 60% 13%
NK 4%




NK 9%
解读原则：
5、NK细胞：
天然免疫系统的一个重要组成部分，约占外周血单核细胞的15-30%，可通过非 MHC性限制性途径识别并在多数情况下杀伤被病毒感染细胞。 HIV感染时，与CD4+T细胞计数相关 NK细胞的抗肿瘤免疫比T细胞的抗肿瘤免疫更重要 不明原因流产患者：NK细胞数量与早孕组相比明显减少
6、避免将细胞表面标志和功能间的联系绝对化，原因：
T细胞与B细胞系统的特性(共性：产生记忆细胞）
T细胞系统（cell
-来源于胸腺 -巨噬细胞处理后的抗原识别 -分两大类：细胞毒性T细胞（cytotoxic T cells,CTL)和调节T细胞（regulatory T cells,T reg),Treg=辅助性T细胞Th + 抑制 性T细胞Ts -Th:识别特异性抗原,正反馈免疫调节；
SLE患者活动期和非活动期的淋巴细胞亚群结果有显著差异 强直性脊柱炎和类风湿性关节炎患者活动期和非活动期的淋巴细
胞亚群结果无显著差异
造血干细胞移植后重建

干细胞移植后免疫系统将重建，但是极为 缓慢。
NK细胞首先开始升高，随后T、B淋巴细胞开始
恢复。
CD4+比CD8+重建更晚。
倒置CD4+/CD8+两年才能逆转。
流式细胞术 = 细胞荧光化学技术+单克隆抗体技术+激光技术+流体力学+光
电测量技术+计算机技术
测量速度快：最快可在1秒种内检测上万个细胞 可进行多参数测量：可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测
量 具有明显的统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况 高分辨率(CV<2%)、高灵敏度(荧光检测灵敏度≤100MESF，前向角散射光检 测灵敏度(0.2∼0.5um) 既是细胞分析技术，又是精确的分选技术，分选纯度可达99%以上
T淋巴细胞又分为 T helper/T inducer（CD3+CD4+）， (ThCD29+ /Ti CD45RA+) 、 T suppressor/ T cytotoxic（CD3+CD8+） (TsCD28-/Tc CD28+)
如何解读“淋巴细胞亚群”报告
解读原则：
1、综合判断， CD4+%、CD8+%、CD4+/CD8+：初步评估机体免疫状态，快速便利
CD4/CD8明显减少
肿瘤终末期CD4/CD8比值，可预测患者存活期
病毒性感染的重要标志
1、艾滋病：免疫功能普遍低下是艾滋病患者最明显的特征。 CD4+细胞显著低于正常对照组，而CD8+细胞正常， CD4+/CD8+比值下降。 2、慢性乙肝患者：CD3、CD4、CD8均下降，CD4/CD8正常， 表明患者T细胞辅助性、杀伤性功能下降，引起病毒清除困难， 导致慢性迁延性肝损伤； 3、慢活肝、肝硬化患者：CD3、CD4下降，CD8增高， CD4/CD8下降，患者免疫自稳功能下降，从而引起自身免疫损 伤，肝细胞持续性、大量损伤； 4、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、流行性出血热、 麻疹急性期、水痘、猩红热和一些上呼吸道感染患者均可表现 CD4下降、CD8升高能及CD4/CD8比值下降。
-发挥抗独特型抗体的免疫调节
-防御细胞外病原体(细菌)，以抗体介导，促使 巨噬细胞和补体系统活化，ADCC -Th2(IL-4,IL-5)
-T细胞活化先天性免疫系统的防御机制，如
巨噬细胞 -Th1(Байду номын сангаасFN-α)
何时检测“淋巴细胞亚群”？
•评价免疫功能（血常规、Ig、补体、淋巴细胞亚群）
术前； 新生儿筛查（原发性免疫缺陷病）； 体检
Surface immunoglobulin (sIg) for B-cells
流式细胞仪检测原理
Surface immunoglobulin (sIg) for B-cells
流式细胞术的特点
流式细胞术：利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参
数、快速的定量分析及分选的技术
•诊断免疫相关疾病（如HIV初筛有反应时） •免疫治疗疗效观察 •出现免疫功能低下症状时检测
1、经常感到疲劳； 2、经常感冒； 3、伤口容易感染； 5、易受到传染病的侵袭； 8、爱做梦（恶梦）
4、肠胃功能下降；自身保护能力差； 6、精神萎靡； 7、易昏睡
9、身心憔悴
Sheep erythrocyte rosetter ( E-rosettes) for T-cells
自身免疫疾病
活动期SLE患者外周血CD16＋CD56＋细胞百分率明显降低 SLE、强直性脊柱炎和类风湿性关节炎患者外周血CD4＋细胞百分
率显著降低，CD8+细胞百分率显著升高，CD4＋/CD8比值降低或倒 置。治疗后患者CD4＋细胞明显增加，CD8+细胞显著降低，CD4＋ /CD8+比值显著升高。
器官移植后免疫监测
排斥反应和免疫抑制剂治疗监测。
CD4/CD8低于0.2,则停止使用免疫抑制剂；
若CD4/CD8过高，则提示容易发生排斥反应
实体肿瘤疗效观察
恶性肿瘤治疗前CD3+细胞数量、CD4+/CD8+细胞比
值降低，化疗或放疗有效时则可逐渐恢复或达到 正常水平。
癌转移时，CD3、CD4明显减少，CD8明显增多，


NK 10%
淋巴细胞亚群的新指标
需要进一步细分的淋巴细胞亚群
T helper/T inducer（CD3+CD4+）， (ThCD29+ /Ti CD45RA+)
T suppressor/ T cytotoxic（CD3+CD8+） (TsCD28-/Tc CD28+)
根据T淋巴细胞分泌细胞因子的不同还可将 CD4+、CD8+分为：
淋巴细胞亚群流式术的基本内容
荧光染料标记的单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，结合多色荧光
分析，即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来，进而得到各亚群的
相对比例。
淋巴细胞为CD45阳性，颗粒度较低的一群细胞
淋巴细胞主要分为T淋巴细胞（CD3+）、B淋巴细胞（CD19+）和 NK细
胞（CD16+56+）

免疫系统：由免疫器官、免疫细胞及免疫分子组成，遍布全身、相互制约的 网络
免疫相关疾病：
应答过高:变态反应(过敏性疾病,四型) 不平衡: 应答不足:感染、肿瘤、放射病、血液病、免疫缺损症 自身组织应答：自身免疫疾病（SLE、类风湿性关节炎）
免疫应答类型：二种 1、固有性免疫应答：识别多种病原体的共有成分（多糖），非特异性应答。
淋巴细胞亚群检测的临床应用
检验科 梁红萍
2012-5
主要内容
为何要检测“淋巴细胞亚群”？ 何时检测？
如何解读？
如何应用？（肿瘤、自身免疫、感染、儿科） 案例分析 标本要求
为何要检测“淋巴细胞亚群”？
关键词：免疫
免疫基本功能:
（拉丁文，免…)
识别自己与非己---》动态平衡
mediated mmunity,CMI)
B细胞系统(humoral immunity)
-介导体液免疫，经Ab执行免疫功能
-来源于骨髓 -识别天然蛋白质抗原 -增殖时需要T辅助细胞Th的刺激 -分化成浆细胞 -合成抗原特异性抗体
-介导细胞免疫，自身分化效应细胞
Th=Th1+Th2+Th0
-Ts:负反馈免疫调节； -CTL：杀伤表达特异抗原的靶细胞，如病毒 、结核菌等感染的靶细胞或肿瘤细胞
B 11%
NK 18%
2、曹某，男，胃癌
2010年3月24日入院检测： CD3 CD4 CD8 43% 30% 15%
B 4%
NK 29%


2010年4月23日治疗后检测： CD3 CD4 CD8 B 53% 35% 21% 4%
NK 31%
3、唐某，男，慢淋
解读原则：
7、 随着现代免疫学的发展，对T细胞表面标志及其生物学作用
的分子机制有了更深入的认识。鉴于T细胞功能亚群的传统分类
已不能反映真实情况，有必要淡化所谓辅助性T细胞/抑制性T细 胞等的概念。 实际上，无论是CD4+T细胞或CD8+T细胞，均包括可发挥正、 负调节（即辅助或抑制）作用的功能亚群。 8、与时俱进