实验四 细胞色素氧化酶的组织定位

实验四植物体内细胞色素氧化酶的组织定位
一、实验目的
掌握植物体内细胞色素氧化酶的组织定位的原理与技术
二、实验原理
以α-萘酚为底物催化的反应产物与对氨基二甲基苯胺的重氮基结合，在细胞色素氧化酶存在的条件下产生偶联偶氮反应，生成蓝色靛酚产物吲哚酚蓝。

三、实验材料、试剂与仪器
1、实验材料：施肥的白菜和未施肥的小白菜根系。

2、实验试剂：
(1)1% α-萘酚溶液：称取1g α-蔡酚溶于100ml蒸馏水中，加热煮沸，然后逐滴加入25%KOH，直至蔡酚完全溶解为止，过滤后保存于冷暗处。

(2)1%对氨基二甲基苯胺溶液：称取1g对氨基二甲基苯胺盐酸，放入100ml 蒸馏水中加热煮沸，然后保存在冰箱中，但只能保存一星期。

(3)0.1mol/L磷酸缓冲液，pH5.8。

3、实验仪器：刀片、镊子、托盘等。

四、实验步骤
1. 取小白菜根系，蒸馏水冲洗干净后，用刀片将根系分开，一份作为实验组，一分作为空白对照。

2. 将切开的根材料放入pH5.8的磷酸缓冲液内，在室温下（约25℃）放置10分钟，然后将材料移入含有1% α－萘酚和1%对氨基二甲基苯胺的等量混合液中，约30分钟后，取出后，用蒸馏水反复冲洗后，将染色的材料放在有蒸馏水托盘中，观察染色结果。

五、实验结果
图1 施肥的小白菜根系细胞色素氧化酶的组织染色图
注：上为对照组，下为实验组。

六、实验讨论
由实验结果可以看出，小白菜根系染色后变蓝，且对照组与实验组均被染色。

其原因可能是对照组高温处理的时间不够，没能使细胞色素氧化酶完全失活，因此对照也出现染色的情况。

另外，侧根可明显观察到染色变蓝的情况，而在主根观察到染色的结果不明显，可能的原因是染色时间短，染液没能完全进入根内部，因此观察到主根染色较浅，不明显。