蟾蜍坐骨神经干电生理实验

实验报告

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同组学生姓名：指导老师：

摘要目的以蟾蜍坐骨神经干标本为材料，测定蟾蜍坐骨神经干复合动作电位，探讨蟾蜍坐骨神经干的特性、双相动作电位形成机制及神经损伤、药物对神经兴奋传导的影响。方法应用微机生物信号采集处理系统及电生理实验方法，记录不同处理情况下的动作电位情况结果中枢引导时，在刺激电压1.0V，波宽0.1ms的方波刺激下，第一、二对引导电极引导出的动作电位之间，正相与负相振幅大小均有显著性差异（P<0.05），正相与负相时程长度之间均有显著性差异（P<0.05）；末梢引导时，在刺激电压1.0V，波宽0.1ms的方波刺激下，第一对引导电极引导出的动作电位的正相振幅与负相振幅大小间有显著性差异（P<0.05），正相时程与负相时程长度间有显著性差异（P<0.05）；末梢引导时，用刺激电压 1.0V，波宽0.1ms的方波刺激，当引导电极距离为10/20/30mm时，动作电位的正相振幅与负相振幅大小间均有显著性差异（P<0.05）；引导电极距离10mm时动作电位的正相振幅/负相振幅与引导电极距离20mm时相比均有显著性差异（P<0.05）；引导电极距离10mm时动作电位的正相振幅与引导电极距离30mm时相比有显著性差异（P<0.05）。夹伤神经后，测定得的末梢单相动作电位振幅与时程相较双相动作电位均有显著性差异。经3mol KCl处理2分钟后，正相动作电位振幅与处理前均无显著性差异（P>0.05），负相动作电位振幅及正相时程与处理前均有显著性差异（P<0.05）。经4%procaine处理5分钟后，正相动作电位振幅与处理前均无显著性差异（P>0.05），负相动作电位振幅及正相时程与处理前均有显著性差异（P<0.05）。结论蟾蜍坐骨神经具有双向传导动作电位的能力。当引导电极间距小于动作电位时程时，正相波与负相波叠加形成双相动作电位。在一定程度内，动作电位振幅与刺激强度呈正相关。

1.材料和方法

1.1实验动物蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad）

1.2 药品任氏液3mol/L KCL 2%普鲁卡因

1.3 仪器RM6240B/C生物信号采集处理系统神经肌肉标本盒（成都仪器厂）

1.4 制备蟾蜍坐骨神经干将蟾蜍毁脑毁脊髓去上肢和内脏，下肢剥皮浸于任氏液中。将下肢背面向上置于蛙板上，剪去骶骨；将腹面向上，用玻璃分针分离脊柱两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，在近中枢端剪断神经，将神经干穿过骶部剪孔移向背侧。使标本俯卧并用大头针固定，用玻璃分针循股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经大腿部分至腘窝，将腓浅神经、胫神经分离，剪除腓肠肌。提起结扎线头，用剪刀循坐骨神经走向剪除附着肌肉至跟腱，剪断跟腱和神经。用镊子剥离附着在神经干上的组织。

1.5 仪器连接和参数引导电极接1、2通道，刺激器输出接刺激电极。仪器参数：1、2通道时间常数0.02s，滤波频率1KHz，灵敏度5Mv，采样频率40KHz，扫描速度0.5ms/div。单刺激模式，电压1.0V，波宽0.1ms，延迟1ms，同步触发

1.6 记录动作电位将神经干标本置于标本盒电极上，使电极与神经接触良好。在施加相应

处理后，记录动作电位值。

2. 观察项目

2.1 测定中枢引导的双相动作电位神经干末梢端置于刺激电极处，用刺激电压1.0V，波宽0.1ms的方波刺激神经干，测定第一、二对引导电极引导的双相动作电位正相波和负相波的振幅与时程

2.2 测定末梢引导的双相动作电位及兴奋传导速度神经干中枢端置于刺激电极处，用刺激电压1.0V，波宽0.1ms的方波刺激神经干，测定第一对引导电极引导的双相动作电位正相波和负相波的振幅与时程。分别测量两个动作电位起始点间的时间差和标本盒中两对引导电极之间的距离，计算动作电位传导速度。

2.3 引导电极间距与动作电位振幅、时程的关系神经干中枢端置于刺激电极处，用刺激电压1.0V，波宽0.1ms的方波刺激神经干。调节第一对引导电极之间的距离为10/20/30mm，测定相应的MAP正相振幅与时程。

2.4 测定单相动作电位用镊子在第一对引导电极的贴近后电极处夹伤神经，用刺激电压

1.2V，波宽0.1ms的方波刺激神经干，测定末梢MAP振幅和时程。

2.5 观察刺激强度与动作电位振幅的关系调节波宽为0.1ms，刺激电压从0.1V起，按照步长0.05V增加至振幅至最大值，记录对应情况

2.6 测定KCL与普鲁卡因处理前后的MAP振幅情况另取一条神经干，处置如前。在第一对引导电极处以浸有3mol/L KCL的滤纸处理神经干，在第二对引导电极处以浸有2%普鲁卡因的滤纸处理神经干，记录处理后5分钟后的动作电位振幅和时程。

3.结果

3.1 中枢引导时，在刺激电压1.0V，波宽0.1ms的方波刺激下，第一对引导电极正相的振幅和时程分别与负相的振幅和时程大小有显著性差异（P<0.05），第二对引导电极正相的振幅和时程分别与负相的振幅和时程大小有显著性差异（P<0.05）。第一、二对引导电极引导出的动作电位之间，正相与负相振幅大小均有显著性差异（P<0.05），正相与负相时程长度之间均有显著性差异（P<0.05）。见表1

表1：蟾蜍坐骨神经干中枢引导的复合动作电位

组

A1chp(mv)A1chn( mV)D1chp(ms )D1chn(ms )A2chp(mv)A2chn( mV)D2chp(ms)D2chn(ms )别

1 4.18 0.928 1.33 1.81 0.684 0.476 1.18 1.43

2 4.51 3.51 1.22 1.98 3.65 1.65 1.78 2.04

3 5.39 3.47 0.95 1.9 3.21 1.65 1.57 2.33

4 2.43 1.79 0.89 1.72 1.148 0.684 1.3

5 1.7

5 5.4

6 2.8 0.68 1.51 4.32 0.769 1.44 1.76

6 2.3 1.649 0.93 2.12 1.209 0.904 1.29 1.69

7 4.52 2.52 0.8 2.07 3.11 1.11 1.23 2.34

8 4.15 3.27 1.05 2.75 3.09 1.869 1.65 2.55

9 4.87 3.31 0.81 2.51 4.23 0.867 1.57 2.22 ⎺x

±

4.2±1.14 2.58±0.93 0.96±0.21 2.04±0.39 2.74±1.38 1.11±0.5 1.45±0.2 2.01±0.38 s

3.2末梢引导时，用刺激电压1.0V，波宽0.1ms的方波刺激，当引导电极距离为10/20/30mm 时，动作电位的正相振幅和时程分别与负相振幅和时程大小均有显著性差异（P<0.05）；引导电极距离10mm时动作电位的正相振幅/负相振幅与引导电极距离20mm时相比均有显著