土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(公开课)
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《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》课件
5
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里 样品中微生物的数量。
缺点
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
6
2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培 养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖 而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。
A.①②③⑥ C.②③④⑥
B.③④⑤⑥ D.①③④⑥
10
㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数 目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基 中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样 的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。
原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或 者是混入了其他的含氮物质)
11
方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液 的体积(ml)，M代表稀释倍数。
7
注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三 个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出 菌落平均数。
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里 样品中微生物的数量。
缺点
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
6
2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培 养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖 而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。
A.①②③⑥ C.②③④⑥
B.③④⑤⑥ D.①③④⑥
10
㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数 目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基 中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样 的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。
原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或 者是混入了其他的含氮物质)
11
方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液 的体积(ml)，M代表稀释倍数。
7
注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三 个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出 菌落平均数。
课件2：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
4．当培养基的某种营养成分为特定化学成分时， 也具有分离效果。例如，石油是惟一碳源时，可以 抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石 油的微生物生存，达到分离出能消除石油污染的微 生物的目的。 5．改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生 物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得 到耐高温的微生物。
专题2 微生物的培养与应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌
的分离与计数
基础梳理
一、研究思路 1．自然界中目的菌株的筛选 (1)依据：根据它对__生__存__环__境___的要求，到相应的环境 中去寻找。 (2)实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚 合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中分离到的。
3．重复组的结果是否一致如果学生选取的是同一种 土样，统计的结果应该__接__近_。
四、操作提示 1．无菌操作 (1)取土样的用具在使用前都需要_灭__菌__。 (2)应在火焰旁称取土壤，并在火焰附近将土样倒入烧 瓶中，塞好棉塞。 (3)在__稀__释___土壤溶液的过程中，每一步都要在__火__焰_ 旁操作。
2.本实验使用的 平板 和试管比较多，为了避 免混淆，最好在使用前就标记好。
3．规划时间 对于耗时较长的生物实验，要事先规划时间，以便提 高工作效率，在操作时更加有条不紊。
五、课题延伸 细菌合成的_脲__酶__将尿素分解成氨，使培养基的碱 性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红 指示剂培养细菌，若指示剂变_红__，可确定该种细 菌能够分解尿素。
例2 某同学在稀释倍数为106的培养基上测得
平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样
品中菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为
0.1 mL)( )
A．2.34×108
[人教版]《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学课件1
![[人教版]《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学课件1](https://img.taocdn.com/s3/m/0a89e354680203d8cf2f244e.png)
［名师课堂教学］［人教版］《土壤 中分解 尿素的 细菌的 分离与 计数》 教学课 件1（完 整版PP T)
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二、实验设计、操作提示
1、实验流程：
土壤取样→梯度稀释 制备培养基
→接种→培养→观察计数
2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板， 统计的菌落数分别为21、212和256，该同学以 这三个平板菌落数的平均值163作为统计结果。 这两你位认同为学哪的位实同验学需的操要结作改果过进更程吗接中？近可如真能果实出需值现要？了，你错如认误何为 改进？
（二）统计菌落数目
1、稀释涂布平板法计数： 用例样、品某中同的学菌在落稀数释，倍代数表为活10菌6的数培。养基上测得
图中还应增设一组_空__白__对__照___组。
人 ［教 名版 师《课土堂壤教中学分］解［尿人素教的版细］《菌土的壤分 中离分与解计 尿数素的》细PP菌T课的件分1 离与 计数》 教学课 件1（完 整版PP T)
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平板中平均菌落数 涂布的体积
×稀释倍数
2、显微镜直接计数： 借助于细菌计数板（或血细胞计数板）
（不能区分死菌和活菌）
［名师课堂教学］［人教版］《土壤 中分解 尿素的 细菌的 分离与 计数》 教学课 件1（完 整版PP T)
（三）设置对照、设置重复
课本P23“实验分析”：
在做本课题的实验可时通，过A空同白学对从照对应（1对0未6倍接稀种释 的培养基中筛选出大约的1培50养个基菌进落行。培但养是，）其来它说同明学
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二、实验设计、操作提示
1、实验流程：
土壤取样→梯度稀释 制备培养基
→接种→培养→观察计数
2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板， 统计的菌落数分别为21、212和256，该同学以 这三个平板菌落数的平均值163作为统计结果。 这两你位认同为学哪的位实同验学需的操要结作改果过进更程吗接中？近可如真能果实出需值现要？了，你错如认误何为 改进？
（二）统计菌落数目
1、稀释涂布平板法计数： 用例样、品某中同的学菌在落稀数释，倍代数表为活10菌6的数培。养基上测得
图中还应增设一组_空__白__对__照___组。
人 ［教 名版 师《课土堂壤教中学分］解［尿人素教的版细］《菌土的壤分 中离分与解计 尿数素的》细PP菌T课的件分1 离与 计数》 教学课 件1（完 整版PP T)
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平板中平均菌落数 涂布的体积
×稀释倍数
2、显微镜直接计数： 借助于细菌计数板（或血细胞计数板）
（不能区分死菌和活菌）
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（三）设置对照、设置重复
课本P23“实验分析”：
在做本课题的实验可时通，过A空同白学对从照对应（1对0未6倍接稀种释 的培养基中筛选出大约的1培50养个基菌进落行。培但养是，）其来它说同明学
《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》课件
(六).观察并记录结果
(七).计数
◆在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养 时间不足而导致遗漏菌落的数目。 ◆如果在某一稀释度下得到了2个或2个以上菌落数目 在30—300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够 进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌 落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。
注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30—— 300的平板上进行计数 ②为了增强实验的说服力和准确性可将同一稀释 度涂布于三个或三个以上的平皿中，培养后计算 出菌落平均数 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低
2.显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里 样品中微生物的数量。
缺点
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 eg：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验
时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约 150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出 大约50个菌落。分析其原因
(三)样品的稀释
◆应在酒精灯火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤样品的过程中，每一步都要在火焰旁进行
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？ 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素 分离不同的微生物采用的稀释度相同吗？ 的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中： ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 好氧及兼性厌氧细菌数约为 2185 万，放线菌数 原因：不同微生物在土壤中含量不同 约为477万，霉菌数约为23.1万。 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于 结论： 为获得不同类型的微生物，就需要按不 计数的平板 同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地 提供选择培养的条件。
课题土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件
〔1〕土样不同 〔2〕培育基被杂菌污染 〔3〕混入了其他的含氮物质
如何确定缘由究竟是什么？
二.实验的详细操作
㈠土壤取样
从肥沃、潮湿的土壤中取样。先铲去表层土3cm左
右，再取样，将样品装入事先预备好的信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在运用前
灭菌
都要 。
㈡制备培育基 制以备尿素为独一氮源 的选择培育基。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落 数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，
M代表稀释倍数。
本卷须知 ①为了保证结果准确，普通选择菌落数在30—3的00平板
上进展计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三 个以上的培育皿中，经涂布培育，计算出菌落平均数。
①从物理性质看此培育基属于哪类？ 固体培育基
㈡统计菌落数目：
1、显微镜直接计数：
利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中 微生物的数量。
缺陷：
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需求相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以察看。
2.间接计数法〔活菌计数法〕 ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培育基上 所构成的一个菌落是由一个单细胞繁衍而成的，即一 个菌落代表原先的一个单细胞。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分别与计数
一、课题背景
1、尿素的利用：
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接 被之农 后作 才物 干吸被氨收植。物土利壤 用中 。的细菌将尿素分解成
2、细菌利用尿素的缘由：
脲酶
土3、壤反中响的式细：菌分解尿参素与是酚由红于指它示们剂能？合成 。
如何确定缘由究竟是什么？
二.实验的详细操作
㈠土壤取样
从肥沃、潮湿的土壤中取样。先铲去表层土3cm左
右，再取样，将样品装入事先预备好的信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在运用前
灭菌
都要 。
㈡制备培育基 制以备尿素为独一氮源 的选择培育基。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落 数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，
M代表稀释倍数。
本卷须知 ①为了保证结果准确，普通选择菌落数在30—3的00平板
上进展计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三 个以上的培育皿中，经涂布培育，计算出菌落平均数。
①从物理性质看此培育基属于哪类？ 固体培育基
㈡统计菌落数目：
1、显微镜直接计数：
利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中 微生物的数量。
缺陷：
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需求相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以察看。
2.间接计数法〔活菌计数法〕 ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培育基上 所构成的一个菌落是由一个单细胞繁衍而成的，即一 个菌落代表原先的一个单细胞。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分别与计数
一、课题背景
1、尿素的利用：
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接 被之农 后作 才物 干吸被氨收植。物土利壤 用中 。的细菌将尿素分解成
2、细菌利用尿素的缘由：
脲酶
土3、壤反中响的式细：菌分解尿参素与是酚由红于指它示们剂能？合成 。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数公开课
专题2 :微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的
分离与计数
本文档后面有精心整理的常用PPT编辑图标，以提高工作效率
课题背景 1、尿素的利用
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。 土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。
2、细菌能利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是 必不可少的。
（三）设置对照
主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响， 提高实验结果的可信度。
①判断培养基中是否有杂菌污染： 将未接种的培养基同时进行培养。
②判断选择培养基是否具有筛选作用：
完全培养基（营养成分齐全）接种后培养观察菌落数目。
㈠.筛选菌株 1、实例： PCR技术
DNA多聚酶链式反应是一种在 体外将少量DNA大量复制(PCR) 的技术，此项技术要求使用耐高 温（930C）的DNA聚合酶。
原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有 Taq细菌被筛选出来。
启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的 环境中去寻找。
⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质) 假设一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则 证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。
假设二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白 对照，以证明培养基是否受到污染。
进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。
㈣.取样涂布
◆实验时要对培养皿作 好标记。注明培养基类 型、培养时间、稀释度、 培养物等。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的
分离与计数
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课题背景 1、尿素的利用
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。 土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。
2、细菌能利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是 必不可少的。
（三）设置对照
主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响， 提高实验结果的可信度。
①判断培养基中是否有杂菌污染： 将未接种的培养基同时进行培养。
②判断选择培养基是否具有筛选作用：
完全培养基（营养成分齐全）接种后培养观察菌落数目。
㈠.筛选菌株 1、实例： PCR技术
DNA多聚酶链式反应是一种在 体外将少量DNA大量复制(PCR) 的技术，此项技术要求使用耐高 温（930C）的DNA聚合酶。
原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有 Taq细菌被筛选出来。
启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的 环境中去寻找。
⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质) 假设一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则 证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。
假设二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白 对照，以证明培养基是否受到污染。
进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。
㈣.取样涂布
◆实验时要对培养皿作 好标记。注明培养基类 型、培养时间、稀释度、 培养物等。
土壤中分解尿素的细菌分离和计数ppt课件
A 土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B 先铲去表层土3-8cm左右，再取样 C 取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D 应在火焰旁称取土壤
2、下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离”实验步骤排列
正确的是 ①土壤取样
C
②称取10g土壤加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中
③吸取0.1ml进行平板涂布
④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107 稀释度
不正确的是（D）
A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨，高温、高压灭菌后道平板 B 取104、105、106 倍土壤稀释液和无菌水各0.1ml涂布不同平板 C 将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24h-48h D 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数。
15
利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中， 从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别 得到以下两种统计结果。
稀释倍数： 测细菌数： 一般用104、105、106稀释液
测放线菌： 一般用103、104、105稀释液 测真菌数： 一般用102、103、104稀释液
思考：为什么分离不同的微生物要用不同的稀释度？
土壤中各类微生物的数量不同
如果是第一次做这个实验，稀释倍数的范围
可以放宽103-107.
20
1 、关于土壤取样的叙述，错误的是（ C ）
是
。
(3)示意图A和B中,
表示的是用稀释涂布平
板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部
分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现:振
荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因
是：振荡培养能提高培养液中
的含量，同时可
2、下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离”实验步骤排列
正确的是 ①土壤取样
C
②称取10g土壤加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中
③吸取0.1ml进行平板涂布
④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107 稀释度
不正确的是（D）
A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨，高温、高压灭菌后道平板 B 取104、105、106 倍土壤稀释液和无菌水各0.1ml涂布不同平板 C 将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24h-48h D 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数。
15
利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中， 从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别 得到以下两种统计结果。
稀释倍数： 测细菌数： 一般用104、105、106稀释液
测放线菌： 一般用103、104、105稀释液 测真菌数： 一般用102、103、104稀释液
思考：为什么分离不同的微生物要用不同的稀释度？
土壤中各类微生物的数量不同
如果是第一次做这个实验，稀释倍数的范围
可以放宽103-107.
20
1 、关于土壤取样的叙述，错误的是（ C ）
是
。
(3)示意图A和B中,
表示的是用稀释涂布平
板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部
分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现:振
荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因
是：振荡培养能提高培养液中
的含量，同时可
2.2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数(公开课课件)
3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的
信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使
用前都要灭菌。
㈡.制备培养基：
制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
（三）.微生物的培养与观察
（ 四）细菌的计数 ◆实验时要对培养皿作好标记。注明培 养基类型、培养时间、稀释度、培养物 等。
思考： 要验证以尿素为唯一氮源的培养基 对土壤中的细菌确实具有选择作用，你 该如何设计实验。
举一反三 （1）将土壤中的固氮菌分离出来 （2）将土壤中自养微生物分离出来 （3）筛选出抗青霉素的微生物 （4）筛选出耐高浓度食盐的微生物
……
例：两位同学用稀释涂布平板法测定同 一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计 的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板 ，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这 三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问 题，错在哪？
甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平 均值.
某同学在稀释倍数为106的培养基中测得 平板上菌落数的平均值为234，那么每 克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀 释液的体积为0.1mL) ( )
B
A．2.34×108 C．234
B．2.34×109 D．23.4
3.下列说法不正确的是（ B ） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚 合酶。 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、 M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值。 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因 素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大， 种类最多。
信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使
用前都要灭菌。
㈡.制备培养基：
制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
（三）.微生物的培养与观察
（ 四）细菌的计数 ◆实验时要对培养皿作好标记。注明培 养基类型、培养时间、稀释度、培养物 等。
思考： 要验证以尿素为唯一氮源的培养基 对土壤中的细菌确实具有选择作用，你 该如何设计实验。
举一反三 （1）将土壤中的固氮菌分离出来 （2）将土壤中自养微生物分离出来 （3）筛选出抗青霉素的微生物 （4）筛选出耐高浓度食盐的微生物
……
例：两位同学用稀释涂布平板法测定同 一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计 的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板 ，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这 三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问 题，错在哪？
甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平 均值.
某同学在稀释倍数为106的培养基中测得 平板上菌落数的平均值为234，那么每 克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀 释液的体积为0.1mL) ( )
B
A．2.34×108 C．234
B．2.34×109 D．23.4
3.下列说法不正确的是（ B ） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚 合酶。 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、 M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值。 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因 素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大， 种类最多。
课题土壤中分解尿素的细菌的分离与计数公开课一等奖课件省赛课获奖课件
能分解尿素的细菌的鉴定
鉴定的原理： 细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基的pH升高。
鉴定办法： 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红批示剂，运用
此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化。
知识统计3
分解尿素的 细菌鉴定：
鉴定的原理：
细菌合成的脲酶将尿素分解成 氨，会使培养基的pH升高。
鉴定方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中
恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的核 心。为了确保成果精确，普通将几个稀释度
知统计2
测定微生物数量 的常用方法：
活菌计数法（接种办法稀释 涂（布统平计板菌法落数），30-300）
显微镜直接计数法
（三） 设 置 对 照
1、对照实验是指除了 被测试 的条件外， 其它条件都 相似 的实验。满足该条件 的称为 对照组，未满足该条件的称为 实验 组。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
提示：研究思路
（一） 筛 选 菌 株 原理
人为提供有助于目的菌株的条件（涉及 营养、温度、pH等），同时克制或制止其它 微生物生长。
在微生物学中，将允许特定种类的微生物 生长，同时克制或制止其它种类微生物生长 的培养基，称做选择培养基。
知识统计1
筛选菌株 的原理：
2.实验目的（略）
3.材料用品（略）
4.操作环节 （1）土壤取样 （2）样品稀释涂布 （3）微生物的培养与观察 （4）细菌的计数
二、成果分析与评价
1.培养物中与否有杂菌污染以及选择培养基与 否筛选出菌落
对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长， 阐明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落 数目明显不不大于选择培养基的数目，阐明选择培 养基已筛选出某些菌落。
阅读教材23～25页“实验设计”和“操作提示” 等两个内容，请根据教材提供的三个资料、样品的 稀释和稀释液的取样培养流程示意图及“操作提示” 的有关问题，自行设计一种《土壤中分解尿素的细 菌的分离与计数》这样的一种实验。
鉴定的原理： 细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基的pH升高。
鉴定办法： 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红批示剂，运用
此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化。
知识统计3
分解尿素的 细菌鉴定：
鉴定的原理：
细菌合成的脲酶将尿素分解成 氨，会使培养基的pH升高。
鉴定方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中
恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的核 心。为了确保成果精确，普通将几个稀释度
知统计2
测定微生物数量 的常用方法：
活菌计数法（接种办法稀释 涂（布统平计板菌法落数），30-300）
显微镜直接计数法
（三） 设 置 对 照
1、对照实验是指除了 被测试 的条件外， 其它条件都 相似 的实验。满足该条件 的称为 对照组，未满足该条件的称为 实验 组。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
提示：研究思路
（一） 筛 选 菌 株 原理
人为提供有助于目的菌株的条件（涉及 营养、温度、pH等），同时克制或制止其它 微生物生长。
在微生物学中，将允许特定种类的微生物 生长，同时克制或制止其它种类微生物生长 的培养基，称做选择培养基。
知识统计1
筛选菌株 的原理：
2.实验目的（略）
3.材料用品（略）
4.操作环节 （1）土壤取样 （2）样品稀释涂布 （3）微生物的培养与观察 （4）细菌的计数
二、成果分析与评价
1.培养物中与否有杂菌污染以及选择培养基与 否筛选出菌落
对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长， 阐明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落 数目明显不不大于选择培养基的数目，阐明选择培 养基已筛选出某些菌落。
阅读教材23～25页“实验设计”和“操作提示” 等两个内容，请根据教材提供的三个资料、样品的 稀释和稀释液的取样培养流程示意图及“操作提示” 的有关问题，自行设计一种《土壤中分解尿素的细 菌的分离与计数》这样的一种实验。
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◆如果得到了至少2个菌落数目在30——300的平板，则说明稀释 操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个 重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。
㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不 足而导致遗漏菌落的数目。
微生物的培养与观察
菌落的形状、大小、 隆起程度和颜色
[一]无菌操作
三、
1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。
2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥 形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记
注明培养基种类、培养日期、平板培养样品
脲酶
五.课外延伸
2.测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过 滤器过滤后，将滤膜放到 伊红-美蓝 培养基上培养，大肠杆 菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。
本课题知识小结:
⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质) 假设一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时， 如何 A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落， 验证? 但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析 其原因。 ⑴土样不同
专题2 :微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数
课题背景
1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。 土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌能利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
+ H2O CO(NH2)2
脲酶
2NH3 + CO2
培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶 的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮 源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿 素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而 受到抑制，所以用此培养基就能够选择 出分解尿素的微生物。
允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生 物生长的培养基，叫做选择培养基
5、怎样证明此培养基具有选择性呢？
原因： 土壤中各类微生物的数量（单位：株 /kg ）是不同
的。例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌 数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。 结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度 进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。
㈣.取样涂布
◆实验时要对培养皿作 好标记。注明培养基类 型、培养时间、稀释度、 培养物等。
的稀释度等。 [三]规划时间
四、课题成果与评价
培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是 否筛选出菌落
对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培 养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于 选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。
五.课外延伸
1.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚 红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升 高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解 尿素。
3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： KH2PO4 NaH2PO4 MgSO4`7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 固体培养基 1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
①从物理性质看此培养基属于哪类？
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
碳源：葡萄糖 氮源：尿素
4、培养基选择分解尿素的微生物的原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、 pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、 生理、生长条件等； 方法： ⑴抑制大多数微生物的生长 ⑵促进目的菌株的生长 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等 方法对它进行纯化培养分离。
说明设置重复组的重要性。在设计实验时，一定要涂布至少3
个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结
果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味 着操作有误，需要重新实验。
注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平 板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以 上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所
形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个 菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代 表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。
3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭 状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
研究思路
㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
㈠.筛选菌株
1、实例： PCR技术
培养基类型
是否 接种
目的
结果
以尿素为 实验组 唯一氮源 的培养基
牛肉膏 蛋白胨 培养基
是
分离 尿素 细菌
判断该 培养基 有无选 择性
只生长尿 素细菌
对照组
是
生长多种 微生物
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数： 利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定 容积里样品中微生物的数量。
缺点：
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
（三）
样品的稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板
问题：为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土 壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用 的稀释范围相同吗？
②判断选择培养基是否具有筛选作用：
完全培养基（营养成分齐全）接种后培养观察菌落数目。
[一]土壤取样 “微生物的天然培养基” 数量最大、种类最多
大约70%—90%是细菌
从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去表层土3 cm 左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。
DNA多聚酶链式反应是一种在 体外将少量DNA大量复制(PCR) 的技术，此项技术要求使用耐高 温（930C）的DNA聚合酶。 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有 Taq细菌被筛选出来。
启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的 环境中去寻找。
2、实验室中微生物的筛选原理：
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则 证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。
假设二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白 对照，以证明培养基是否受到污染。 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是 必不可少的。
（三）设置对照
主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响， 提高实验结果的可信度。 ①判断培养基中是否有杂菌污染： 将未接种的培养基同时进行培养。
[二]制备培养基
由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较 为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。 可准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。每个稀释度下需要3 个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。 将稀释相同倍数的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落 数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可 以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。