39. 保护氨基酸检验指导书
氨基酸车间化验作业指导书
1.目的为规范化验室操作工日常操作，安全生产，杜绝污染环境，保证正常生产，特制订本规范化操作规程。
2.适用范围氨基酸车间化验室3.职责3.1氨基酸车间体系员负责《化验室作业指导书》的编制及监督实施；3.2化验室工段长负责协助车间对《化验室作业指导书》的修订，负责规程的具体实施情况监督；3.3化验室主操作保证本班组操作工按照操作规程操作；3.4化验室操作工负责执行操作规程的内容。
4设备规程4.1岗位设备明细4.2.1 PH计操作及注意事项4.2.1.1开机：电源线适配器连接DC插孔上，接通电源，端按电源开关，电源接通后进行标定。
4.2.1.2校正：仪器在连续使用时，每天要校正三次。
如果显示屏上显示“ｍｖ”，按“模式”键PH测量状态。
将用蒸馏水清洗过的电极浸入PH=7.00的缓冲液中，按“校正”键开始校正， PH计在校正时自动判断终点，此时显示屏会显示相应校正结果。
用蒸馏水清洗电极，用干净纱布或水吸干，再插入PH=9.21±0.02（或PH=4.01）的标准缓冲液中，按“校正”键，当到达终点时，显示屏上会显示相应的电极斜率和电极性能状态图标，按“读数”键保存校正结果，并退回到正常的测量状态。
仪器完成校正。
4.2.1.3测量：经过标定后的仪器可进行测量。
用蒸馏水清洗电极，用干净纱布或纸吸干，插入要测试样中，按“读数”开始测量，当到达结果时，显示屏显示结果以及电极性能状态图标，记录结果，按“读数”退回测量状态。
用蒸馏水清洗电极，用干净纱布或纸吸干，将保持湿帽套上。
4.2.1.4注意事项：A.在使用电极前应检查保湿帽中是否有少量参比缓冲液。
B.新电极在使用前须经过标准缓冲液校正方可使用。
C.仪器输入端必须保持清洁。
D.校正时检查使用的标准缓冲液与显示器上显示的标准缓冲液组是否一致。
E.此仪器能自动识别标准缓冲液，若测量偏差较大则显示出错，应重新更换标准缓冲液。
F.校正过程中，若校正出错（屏幕显示Eｒｒ2），按“校正”键重新进行校正，但若按读数则终止这次校正并返回测量状态并且这次校正的任何结果都不被保存。
39. 保护氨基酸检验指导书
保护氨基酸检验指导书发放号：编写: 审核:批准:1. 检验流程1.1 成品置于待测区1.2 检验员取样1.3 成品检测(外观、纯度、质谱、旋光、熔点、澄清度等)1.4 备注：A. 产品粉碎并包装置于待测区后，取样检测出的数据写入检验报告。
B. 研发部提供的生产过程中的图谱 (MS、HPLC) ，可做参考，有权进行复查。
2 检验项目2.1 外观：目测法（须为白色或类白色粉末或结晶性类白色粉末）2.2 光学纯度的测定2.2.1 仪器和试剂液相色谱仪、输液泵、检测器、色谱柱、记录装置、进样阀、微量注射器、超声波发生器、蒸馏水、乙晴、三氟乙酸2.2.2 分析步骤A. 称取一定量的样品溶于10ml容量瓶中，直至完全溶解，然后将其过滤。
B. 用微量注射器吸取一定量试样溶液进入色谱系统，利用梯度洗脱使样品达到分离。
C. 各组分经过紫外检测器，通过色谱工作站记录各组分的紫外吸收、并转换为电信号。
D. 在线色谱工作站记录各组分的各项参数，如保留时间、峰高、峰面积，通过面积归一法计算出各组分的百分含量。
2.2.3 注意事项A. 氨基酸样品分析必须打空白，谱图中不允许出现未积分的小杂峰，若是空白中有的，必须以基线相减的方式处理掉；如果处理不掉，必须进行复测。
B. 基线尽量保持一条直线。
C. 谱图中不允许出现负峰。
2.2.4 要求及规定A. 氨基酸样品分析必须打空白，谱图中不允许出现未积分的小杂峰，若是空白中有的，必须以基线相减的方式处理掉；如果处理不掉，必须进行复测。
B. 基线尽量保持一条直线。
C. 谱图中不允许出现负峰。
D. 尽量安排同一产品的测试使用同一分析条件，这样可加强可比性。
E. 比较数据的重复性时，安排统一产品测试的时间不要间隔很久。
F . 若单项杂质在1%±0.05%，复测确定数据的重复性。
G. 若同一批次产品分包装送样检测，混合样数据应在各分包装测试数据的范围内。
例如：分包装测试的数据分别为：98.5%、98.6%、98.7%，若混合样数据不在98.5%-98.7%范围内，则复测确定数据的重复性。
氨基酸分析仪期间核查作业指导书
1目的及范围在两次检定（校准）间隔内，进行期间核查，验证仪器设备是否保持检定（校准）时状态，确保检测结果的准确性和有效性。
本作业指导书适用于本中心所有的氨基酸分析仪。
2核查内容外观、分离度、检出限、定量定性重复性。
3核查依据3.1 氨基酸分析仪设备使用说明书。
3.2 JJG 1064-2011《氨基酸分析仪检定规程》。
4核查条件4.1环境条件4.1.1安装仪器的房间应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，室内排风良好。
4.1.2仪器应平衡地放在工作台上，便于操作，周围无强烈的机械振动和电磁干扰，仪器接地良好。
4.1.3环境温度10~28℃，8小时内温度波动不超过±3℃，相对湿度低于85%。
4.2 电源要求4.2.1电源电压：220±22V4.2.2电源频率：50±0.5Hz4.3 仪器与试剂4.3.1秒表，分度值小于0.1s ；电子天平，最大称重200g ，最小分度0.1mg ；游标卡尺，最小分度不大于0.02mm4.3.2氨基酸标准溶液；超纯水5核查方法5.1 外观检查5.1.1 仪器表面应无破损、缺陷，各个接口连接紧密，仪器运转平稳、无异常噪声。
各功能按键和开关均能正常操作。
5.1.2 仪器上有商标，名标，型号，制造厂名，出厂编号等相关内容。
5.2 分离度核查5.2.1 按仪器推荐的测量条件设置各项参数，启动仪器稳定后，有进样系统注入氨基酸标准溶液（浓度为5nmol/mL~20nmol/mL ）做色谱分析，由色谱图测量的数据按式（1）计算苏氨酸（Thr ）-丝氨酸（Ser ）、甘氨酸（Gly ）-丙氨酸（Ala ）、亮氨酸（Leu ）-异亮氨酸（Ile ）的分离度h R 。
（1） %10000⨯-=H HH R h式中：0H ——两相邻色谱峰的平均峰高，mm ；H ——两相邻色谱峰交叉点到基线的距离，mm ；5.3 检出限5.3.1 在5.2.1的测量条件下，测量浓度为5nmol/mL 左右的氨基酸标准溶液3次，记录色谱图，有组氨酸（His ）峰高平均值和基线噪声值，按式（2）计算检出限L C 。
WB01氨基酸测定实训指导(精)
实训指导（十六）电位滴定法测定食品中氨基酸总量一、目的与要求学习电位滴定法测定食品中氨基酸总量的基本原理和操作方法。
二、原理利用氨基酸两性电解质作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定，以酸度计控制测定终点。
三、仪器与试剂1．仪器酸度计；磁力搅拌器；10mL微量滴定管。
2．试剂及材料（1）36%甲醛：应不含有聚合物。
（2）0.050mol/L 氢氧化钠标准溶液。
（3）酱油。
四、操作流程样品处理一总算含量滴定|」氨基酸态氮含量滴工空白滴定」I结果分析五、操作要点1．样品处理吸取酱油5.0mL，加水稀释并定容至100mL。
2．样品测定（1）吸取20.0mL试样，置于200mL烧杯中，加60mL蒸馏水，开动磁力搅拌器，待搅拌稳定后把酸度计的复合电极小心放入烧杯的合适位置，用氢氧化钠标准溶液滴定至酸度计指示pH8.2,记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数，按总酸计算公式，可计算总酸含量。
（2）准确加入10.00mL甲醛溶液，混匀，再用氢氧化钠标准滴定溶液继续滴定至pH9.2, 记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数，供计算氨基酸态氮含量用。
（3）同时量取80mL水，先用0.05mol/L氢氧化钠溶液调节至pH为8.2 （记录用去氢氧化钠标准溶液的体积，此为测总酸的试剂空白试验），再加入10.00mL甲醛溶液，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至9.2，第二次所用氢氧化钠标准溶液体积为测定氨基酸态氮的试剂空白对照。
六、结果分析1．数据记录于表16-1。
X =（匕—? ° 义 0.014 X 100—X 20 100式中 X 一样品中氨基酸态氮的含量，g/100mL ；匕——测定样品在加入甲醛后滴定至终点（pH9.2）所消耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL ；匕——空白试验加入甲醛后滴定至终点所消耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL ；c ——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L ；0.014 ——与1.00mL 氢氧化钠标准滴定溶液［c （NaOH ）=1.000mol/L ］相当的氮的质量，g ；按式（16-1）计算每百毫升样品中氨基酸态氮含量，结果保留两位有效数字。
boc保护氨基实验步骤
boc保护氨基实验步骤英文回答：Step 1: Preparation.Prepare the necessary materials and equipment, including Boc-protected amino acid, coupling reagent, solvent, and a suitable reaction vessel.Ensure that all equipment and glassware are clean and dry to avoid any contamination.中文回答：步骤1，准备。
准备必要的材料和设备，包括Boc保护氨基酸、偶联试剂、溶剂和适合的反应容器。
确保所有设备和玻璃器皿都干净并且干燥，以避免任何污染。
英文回答：Step 2: Deprotection of Boc group.Add the Boc-protected amino acid to the reaction vessel.Add a suitable deprotection reagent, such as trifluoroacetic acid (TFA), to remove the Boc protecting group.Allow the reaction to proceed for a specific period of time, ensuring complete deprotection of the Boc group.中文回答：步骤2，去保护Boc基团。
将Boc保护氨基酸加入反应容器中。
添加适当的去保护试剂，如三氟乙酸（TFA），以去除Boc保护基团。
让反应在特定的时间内进行，确保完全去除Boc基团。
英文回答：Step 3: Purification.After the deprotection reaction, purify the product to remove any impurities.Common purification techniques include column chromatography, recrystallization, or preparative high-performance liquid chromatography (HPLC).Monitor the purity of the product using appropriate analytical techniques, such as thin-layer chromatography (TLC) or HPLC.中文回答：步骤3，纯化。
氨基酸检验
水解法
水解法：以毛发、血粉及废蚕丝等蛋白质为原料， 通过酸、碱或酶水解成多种氨基酸混合物，经分离 纯化获得各种药用氨基酸的方法称为水解法。 目前，用水解法生产的氨基酸有L-胱氨酸、L-精氨 酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、 L-组氨酸、L-脯氨酸 及L-丝氨酸等。 水解法生产氨基酸的主要过程为水解、分离和结晶 精制三个步骤。
发酵法生产的氨基酸品种及工艺 微生物利用碳源、氮源及盐类几乎 可合成所有氨基酸。
目前绝大部分氨基酸皆可通过发酵法生产， 其缺点是产物浓度低，设备投资大，工 艺管理要求严格，生产周期长，成本高。
酶转化法
酶转化法亦称为酶工程技术，实际上是在特
定酶的作用下使某些化合物转化成相应氨基 酸的技术。 酶工程技术工艺简单，产物浓度高，转化 率及生产效率较高，副产物少。 固定化酶或细胞可进行连续操作，节省能 源和劳务，并可长期反复使用。
检测器类型： 流动相：
定氮法
样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨
（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。 经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸 至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算 得样品之氮含量。
4.碘量法或溴量法 示例一：盐酸半胱氨酸水合物的测定 示例一：L-胱氨酸的测定 5.HPLC法 示例一：三氨基酸注射液-341 示例二：六氨基酸注射液400 6.氨基酸自动分析仪
（三）治疗肝病的氨基酸及其衍生物
主要有精氨酸盐酸盐、磷葡氨基酸、谷氨 酸钠、蛋氨酸、瓜氨酸、赖氨酸盐酸盐等； （四）治疗脑及神经系统疾病的氨基酸及其 衍生物 （五）用于肿瘤治疗的氨基酸及其衍生物 （六）其它氨基酸类药物的临床应用
5 氨基酸类药物的生产方法
目前构成天然蛋白质的20种氨基酸的生 产方法有天然蛋白质水解法、发酵法、酶转 化法及化学合成法等四种。 氨基酸及其衍生物类药物已有百种之多， 但主要是以20种氨基酸为原料经酯化、酰化、 取代及成盐等化学方法或酶转化法生产。
氨基酸的检测实验报告
氨基酸的检测实验报告氨基酸检测实验报告一、实验目的：本实验旨在通过定量检测氨基酸的方法，了解氨基酸含量对生物体的影响，掌握氨基酸检测实验的基本原理、操作方法和数据处理。
二、实验原理：氨基酸是生物体中构成蛋白质的基本单元，具有重要的生理功能。
氨基酸的检测方法主要有二级碳酸酐法、二级胺法和氨基酸衍生物法等。
其中，氨基酸衍生物法是目前较常用的方法，通过将氨基酸与重氮芳烃反应生成的氨基酸衍生物，在紫外可见光谱范围内有明显的吸收峰，从而实现氨基酸的定量测定。
三、实验步骤：1. 在试管中加入适量的氨基酸样品，加入碳酸氢钠溶液调节pH值，使其在7-9范围内。
2. 加入硝酸萘溶液，溶解氨基酸样品。
3. 加入亚硝酸钠溶液，生成重氮芳烃。
待反应1-2分钟。
4. 加入硫酸溶液，调节溶液酸碱度。
5. 使用紫外可见分光光度计，选择合适波长，测量反应溶液的吸光度。
6. 建立标准曲线，通过测定不同浓度的氨基酸标准品的吸光度，利用线性回归计算出待测样品的氨基酸浓度。
四、实验结果：1. 测量标准曲线，计算出标准曲线的相关系数R^2。
2. 测量待测样品的吸光度，并利用标准曲线计算出样品中氨基酸的浓度。
五、数据处理与分析：1. 利用标准曲线中的吸光度和已知浓度的氨基酸标准品制作出标准曲线，确定氨基酸浓度和吸光度之间的线性关系。
2. 通过待测样品的吸光度值，利用标准曲线得出样品中氨基酸的浓度。
3. 计算不确定度等数据指标，评估实验结果的可靠性。
六、实验结论：通过标准曲线的测定，我们成功建立了氨基酸的定量检测方法。
通过对待测样品的测定，我们得出其氨基酸的浓度为X，证明样品中含有氨基酸。
七、实验总结：通过本次实验，我们学习了氨基酸检测实验的基本原理和操作方法，掌握了氨基酸的定量测定技术。
同时，我们也了解到氨基酸对生物体的重要性，为后续研究提供了基础。
参考文献：[1] 李教授. 无机及分析化学实验指导. 北京：化学工业出版社，2000.[2] 张博, 杨雪等. 氨基酸及氨基酸衍生物课堂实验研究. 化学实验，2018，40(4):120-123.注：以上内容仅供参考，具体实验报告应结合实际实验结果进行撰写。
氨基酸保护
Carboxylic acid protection - [Bn ester] [Pfp ester] [Me ester] [Allyl ester] [tButyl ester] [PMB ester] [MEM ester]Amine protection (carbamates) - [Fmoc] [Boc] [Cbz] [Troc]Side Chain protections- [Boc]t Bu - (tert-butyl) esterStandard Protection ProcedureTo a solution of the N-protected amino acid, DMAP (0.5 eq), and tBuOH (1.2 eq) in dry DCM at 0° under an inert atmosphere, is added EDCI (1.1. eq) and stirred for 2 h. The mixture is then stirred at room temperature until complete by TLC (usually 14 h) and concentrated in vacuo. The residue is redissolved in ethyl acetate and extracted twice with water, then twice with aqueous saturated sodium bicarbonate. The organic solution is dried (magnesium sulfate) and concentrated in vacuo. The residue is purified by flash chromatography (SiO2) if necessary. RemovalThe compound is dissolved in formic acid and stirred at room temperature until the reaction is complete by TLC (usually 12 hours). The solution is then concentrated and coconcentrated several times with toluene. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesJ. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1996, 985-993.JOC, 1982, 47, 1962-1965.Bn - (benzyl) esterStandard Protection ProcedureThe amino acid is stirred with dry THF andO-benzyl-N,N'-diisopropylisourea (see ref. for synthesis) at room temperature under an inert atmosphere until complete by TLC (usually 2 days). The mixture is cooled to -20 C and filtered. The filtrate is concentrated in vacuo and purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe amino acid derivative is dissolved in 1:1 methanol:t-butanol andPd(OH)2-C is added under a hydrogen atmosphere. The mixtureis allowed to stir until complete by TLC (usually >3 h), then filtered and concentrated. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesMacromolecules, 1978, 534-539.Allyl - (allyl) esterStandard Protection ProcedureThe compound is dissolved in dry DCM and allyl alcohol (1.1 eq) is added. The solution is stirred under an inert atmosphere at 0° and dicyclohexylcarbodiimide (1 eq) is added followed by4-N,N-dimethylaminopyridine (0.05 eq). The reaction is allowed to warm to room temperature and is stirred until complete by TLC (usually 1-2 days). Ethyl acetate is added and the resulting precipitate is removed by filtration. The filtrate is concentrated in vacuo and purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe amino acid and pyrrolidine (1.2 eq) are dissolved in methylene chloride and cooled to -15°. Triphenylphosphine (0.2 eq) andTetrakis(triphenylphosphine)palladium (0) (0.05 eq) are added and stirred under an inert atmosphere for approx. 1 h. Water and acetonitrile are added and the resulting mixture is extracted twice with petroleum ether. The acetonitrile layer is evaporated and purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesTetrahedron, 1996, 52, 12839-12852.PfP - (pentafluorophenyl) esterStandard Protection ProcedureThe acid is dissolved in ethyl acetate and pentafluorophenol (1.2 eq) is added. The solution is cooled to 0° and DCC (1.2 eq) is added. The reaction is allowed to warm to room temperature and stir until complete by TLC (usually overnight, if not complete more DCC may be added). The solution is then filtered through celite, rinsed several times with EtOAc,and concentrated in vacuo. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesJ. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1996, 985-993.Me - (methyl) esterStandard Protection ProcedureThe compound is dissolved in dry MeOH and thionyl chloride (2 eq) is added drop wise at 0° under an inert atmosphere. The result is then refluxed until complete by TLC (usually >4 hours) and concentrated in vacuo. The residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary. RemovalThe ester is dissolved in methanol and 1N NaOH is added (excess). The solution is then heated to reflux and stirred until complete by TLC (usually <1 h). Glacial acetic acid is added until the mixture is neutral and then diluted with chloroform. The organic solution is extracted once with water, once with brine, dried (magnesium sulfate), and concentrated in vacuo. The residue is purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesEur. J. Org. Chem. 1999, 1127-1135.JOC, 1995, 60, 2318-2319.PMB - (para-methoxybenzyl) esterStandard Protection ProcedureThe acid is dissolved in dry DCM and 4-methoxybenzyl alcohol (1.1 eq) is added. The solution is stirred under an inert atmosphere at 0° and dicyclohexylcarbodiimide (1 eq) is added followed by4-N,N-dimethylaminopyridine (0.05 eq). The reaction is allowed to warm to room temperature and is stirred until complete by TLC (usually 1-2 days). Ethyl acetate is added and the resulting precipitate is removed by filtration. The filtrate is concentrated in vacuo and purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe ester is dissolved in phenol and TFA (1-2 eq) is added under an inert atmosphere at 45°. The reaction is stirred until complete by TLC (usually <2 h) and ethyl acetate/water are added. The aqueous layer is extracted2 times with EtOAc and the organic layer is back extracted twice with saturated sodium bicarbonate solution. The combined aqueous layers are acidified to a pH of 1 with 10% HCl, then extracted3 times with EtOAc. The combined organic layers are dried (sodium sulfate) and concentrated in vacuo. The residue is then purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesTetrahedron, 1996, 52, 12839-12852.Tetrahedron Lett. 1990, 31, 6661-6662.MEM - (methoxyethoxymethyl) esterStandard Protection ProcedureTo compound dissolved in a saturated aqueous sodium bicarbonate solution at room temperature, TBAI (1 eq) and methoxyethyloxymethyl chloride (1.2 eq) are added. The reaction is stirred until complete by TLC (usually 16 h) and dichloromethane is added. The organic layer is washed with water, dried (sodium sulfate), and concentrated in vacuo. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary. RemovalThe ester is dissolved in DCM and magnesium bromide etherate (excess) is added at room temperature under an inert atmosphere. The mixture is stirred for 48 h and water is added. The slurry is stirred vigorously for another 2 h and 1N aqueous hydrochloric acid is added until the pH is1-2. The mixture is extracted with ethyl acetate three times and the combined organic layers are dried (sodium sulfate), then concentrated in vacuo. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesJOC, 1994, 59, 2314-2323.Synthesis, 1979, 957-961.Boc - (t Butyloxy) carbamateStandard Protection ProcedureThe amine is dissolved in water and sodium bicarbonate (2 eq) is added with stirring. The resulting solution is cooled to 5° and BOC anhydride (1.5 eq) is added slowly as a solution in para-dioxane (also cooled). The resulting mixture is stirred at 0° for 1 h and allowed to warm to room temperature overnight. Water is then added and the aqueous layer is extracted 2times with EtOAc. The organic layer is back extracted twice with saturated sodium bicarbonate solution. The combined aqueous layers are acidified to a pH of 1 with 10% HCl, then extracted 3 times with EtOAc. The combined organic layers are dried (sodium sulfate) and concentrated in vacuo. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe compound is dissolved in 1:1 trifluoroacetic acid:water and stirred at room temperature until complete by TLC (usually <2 h). The solution is concentrated in vacuo and purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesOrganic Synthesis, 1999, 76, 57-76.Novabiochem Catalog, 2002-2003, pg 2.64-2.65.Fmoc - (9-fluorenylmethyl) carbamateStandard Protection ProcedureThe amine is dissolved in water and sodium bicarbonate (2 eq) is added with stirring. The resulting solution is cooled to 5° and Fmoc-OSu or Fmoc-Cl (1.5 eq) is added slowly as a solution in para-dioxane (also cooled). The resulting mixture is stirred at 0° for 1 h and allowed to warm to room temperature overnight. Water is then added and the aqueous layer is extracted 2 times with EtOAc. The organic layer is back extracted twice with saturated sodium bicarbonate solution. The combined aqueous layers are acidified to a pH of 1 with 10% HCl, then extracted 3 times with EtOAc. The combined organic layers are dried (sodium sulfate) and concentrated in vacuo. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe compound is dissolved in a solution of 20% piperidine in DMF. The mixture is stirred for 30 minutes at room temperature and concentrated in vacuo. The residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesJ. Am. Chem. Soc., 1997, 4, 656-673.Novabiochem Catalog, 2002-2003, pg 2.64-2.65.Alloc - (allyl) carbamateStandard Protection ProcedureThe amine is dissolved in water and sodium carbonate (2.7 eq) is added with stirring. The resulting solution is cooled to 5° and allyl chloroformate (1.5 eq) is added slowly as a solution in para-dioxane (also cooled). The resulting mixture is stirred at 0° for 1 h and allowed to warm to room temperature overnight. Water is then added and the aqueous layer is extracted 2 times with EtOAc. The organic layer is back extracted twice with saturated sodium bicarbonate solution. The combined aqueous layers are acidified to a pH of 1 with 10% HCl, then extracted 3 times with EtOAc. The combined organic layers are dried (sodium sulfate) and concentrated in vacuo. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe amine is dissolved in dry THF and dimethylmalonate (7 eq) followed by tetrakistriphenylphosphine palladium (0.02 eq) are added at room temperature under an inert atmosphere. The reaction is stirred until complete by TLC (usually 24 h) and filtered. The solution is thenchromatography (SiO2) if necessary.ReferencesTetrahedron, 1996, 39, 12839-12852.Tetrahedron Lett. 1986, 23, 2599-2602.Troc - (trichloroethyl) carbamateStandard Protection ProcedureThe amine is dissolved in water and sodium bicarbonate (2 eq) is added with stirring. The resulting solution is cooled to 5° and Troc-OSu or Troc-Cl (1.5 eq) is added slowly as a solution in para-dioxane (also cooled). The resulting mixture is stirred at 0° for 1 hour and allowed to warm to room temperature overnight. Water is then added and the aqueous layer is extracted 2 times with EtOAc. The organic layer is back extracted twice with saturated sodium bicarbonate solution. The combined aqueous layers are acidified to a pH of 3 with 5% HCl, then extracted 3 times with EtOAc. The combined organic layers are dried (sodium sulfate) andchromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe carbamate is dissolved in glacial acetic acid:THF 1:1 and zinc dust (excess) is added. The resulting suspension is stirred at room temperature until complete by TLC (usually <3 h). The mixture is then filtered, concentrated in vacuo and redissolved in chloroform. The solution is washed once with 5% aqueous sodium bicarbonate, dried (sodium sulfate), and concentrated in vacuo. The resulting residue is purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesCan. J. Chem. 1982, 60, 976.Synthesis, 1983, 671.JOC, 1988, 53, 3108.Cbz - (benzylcarboxy) carbamateStandard Protection ProcedureThe amine is dissolved in water and sodium bicarbonate (2 eq) is added with stirring. The resulting solution is cooled to 5° and Cbz-OSu or Cbz-Cl (1.5 eq) is added slowly as a solution in para-dioxane (also cooled). The resulting mixture is stirred at 0° for 1 h and allowed to warm to room temperature overnight. Water is then added and the aqueous layer is extracted 2 times with EtOAc. The organic layer is back extracted twice with saturated sodium bicarbonate solution. The combined aqueous layers are acidified to a pH of 1 with 10% HCl, then extracted 3 times with EtOAc. The combined organic layers are dried (sodium sulfate) and concentrated in vacuo. The resulting residue is purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe amino acid derivative is dissolved in 1:1 methanol:t-butanol andPd(OH)2-C is added under a hydrogen atmosphere. The mixtureis allowed to stir until complete by TLC (usually >3 h) then filtered and concentrated in vacuo. The resulting residue is purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesTetrahedron Lett. 1966, 7, 4765-4768.t Bu - (tert-butyl) etherStandard Protection ProcedureSee: JOC,1975, 6, 675-681 for general procedure.RemovalThe ether is dissolved in 1:1 trifluoroacetic acid:water and stirred at room temperature until the reaction is complete by TLC (usually <2 h). The solution is concentrated and purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesJOC,1975, 6, 675-681Novabiochem Catalog, 2002-2003, pg 2.64-2.65.。
氨基酸测定仪安全操作及保养规程
氨基酸测定仪安全操作及保养规程前言氨基酸测定仪是一种常用的检测仪器，在生物化学、制药等领域被广泛使用。
然而，由于操作不当、检测环境不规范等原因，使用氨基酸测定仪存在一定的安全风险。
为了保障操作人员的安全，提高检测数据的准确性和可靠性，本文将介绍氨基酸测定仪的安全操作规程和保养注意事项。
安全操作规程1. 检查仪器在使用氨基酸测定仪前，必须仔细检查设备是否完好无损。
首先应检查仪器的外观是否损坏，有无裂纹、划痕等瑕疵。
其次应检查仪器的电源线和接线是否牢固，以及是否存在漏电等安全隐患。
最后，还应检查仪器的配件齐全、灵活可动。
2. 加样操作加样是使用氨基酸测定仪时的关键环节，必须注意以下安全事项：•统一标志：操作人员必须使用统一标志的试管或容器进行加样操作，以避免混淆。
•称量瓶：称量瓶一定要密封好，以避免化学品泄漏导致安全事故。
•加样量：加样量必须准确，避免过多或过少，影响测量结果和仪器的正常运行。
3. 试剂操作在使用氨基酸测定仪的过程中，试剂也是一个重要的环节。
操作人员必须严格按照试剂说明书进行操作，遵守以下操作规程：•统一标志：同一种试剂必须使用统一标志的试管或容器进行操作，避免混淆。
•操作台面：使用试剂时应清洁操作台面，避免其它物质的污染。
•标准品：每次操作之前，必须检查标准品的浓度是否符合要求，避免误差发生。
4. 测量数据操作在测量数据时，操作人员也应注意以下细节：•统一标志：每次测量时，必须使用统一标志的试管或容器进行操作，避免混淆。
•按时记录：在测量数据时，必须按时记录数据，避免数据漏报或疏忽造成的影响。
5. 清洗操作氨基酸测定仪需要定时清洗，以保障仪器的正常运转和测量数据的可靠性。
在清洗操作时，操作人员也应注意以下事项：•严格按照清洗操作步骤进行清洗，不得省略、随意改动。
•清洗时间间隔不能过长。
如果长期没有使用，应在重新使用前进行清洗。
保养注意事项氨基酸测定仪的使用寿命和性能，也需要操作人员进行好的保养管理。
氨基酸检测与加标实验方法
氨基酸检测方法及加标回收实验一、试剂：1、6mol/L盐酸溶液：500ml盐酸（浓度≥36%，优级纯）加水稀释至1000ml混匀。
2、ph=2.2柠檬酸钠缓冲液：取19.6g柠檬酸钠加入500ml水溶解，加入16.5ml盐酸，用水稀释至1000ml混匀，用6mol/L盐酸溶液或500g/L氢氧化钠溶液调节PH至2.2。
注：PH=2.2柠檬酸钠缓冲液可以用0.02mol/L盐酸代替。
二、样品处理1、称样：称样前应先测样品中的蛋白质含量，取试样使其蛋白质含量在10mg-20mg。
2、水解：试样中加入6mol/L的盐酸溶液10ml，封口放入恒温干燥箱110℃水解22-24小时后取出放凉。
注:1、一般水解过程需要先抽真空，因为蛋氨酸和半胱氨基酸会被氧化，测出来的值会偏小，其他氨基酸没有明显变化。
2、水解需要22-24小时，花费大量的时间，也可以用微波消解法快速完成：将备好的试样放入微波消解炉中，选择功率为（700-800）W，在150℃条件下，20分钟进行消解后，冷却。
3、烘干：过滤放凉的试样溶液到50ml容量瓶中，用蒸馏水少量多次冲洗水解管，最后定容至刻度，取1ml定容的试样放入干净的水解管中（也可以是其它容器），放入真空干燥箱中60℃真空抽干，加入1ml蒸馏水60℃真空抽干，重复1-2次。
注：抽真空烘干目的是赶酸，这一步可以在氮吹仪上60℃氮吹吹干，重复1-2次，可以节省大量时间。
4、检测：烘干后向试样中加入1-2ml配好的柠檬酸钠或0.02mol/L 的盐酸缓冲液，用注射器经过0.22um过滤头过滤到进样瓶中，上机检测。
三、加标回收实验在测定样品的同时，于同一样品的子样中加入一定量的标准物质进行测定，将其测定结果扣除样品的测定值，以计算回收率。
在这里我以检测小麦粉中各氨基酸的含量为例来说明。
1.计算蛋白质含量，由于在检测氨基酸前测定了小麦粉的蛋白质含量在12-13之间，所以取试样0.15g左右（精确到0.0001g）。
氨基保护实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握氨基保护的原理和方法。
2. 了解不同氨基保护基团的性质和应用。
3. 掌握实验操作技能，提高实验操作的准确性。
二、实验原理氨基保护是指在有机合成中，为了防止氨基与其他官能团发生不必要的反应，而采用特定的保护基团对氨基进行保护。
常见的氨基保护基团有Fmoc、Boc、Tboc等。
这些保护基团与氨基反应生成稳定的氨基保护酯，在后续反应中可以保持氨基的稳定性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 苯胺- Fmoc-Cl- DMF（N,N-二甲基甲酰胺）- DCM（二氯甲烷）- 冰乙酸- 无水硫酸钠- 乙醇- 乙酸乙酯- 碱性氧化铝- 乙醇/水溶液2. 实验仪器：- 烧杯- 分液漏斗- 烧瓶- 蒸发皿- 冷却水浴- 真空泵- 恒温水浴- 红外光谱仪- 核磁共振波谱仪四、实验步骤1. Fmoc保护（1）在烧杯中加入苯胺和Fmoc-Cl，加入适量的DMF溶解。
（2）将混合液置于冷却水浴中，缓慢搅拌。
（3）加入适量的冰乙酸，调节pH值至6.5-7.0。
（4）继续搅拌反应30分钟。
（5）用饱和NaHCO3溶液洗涤反应液，去除未反应的Fmoc-Cl。
（6）用无水硫酸钠干燥反应液。
（7）过滤，收集滤液，用乙醇/水溶液洗涤滤渣。
（8）将滤液蒸发至干燥，得到Fmoc保护的苯胺。
2. Boc保护（1）在烧杯中加入Fmoc保护的苯胺和Boc-Cl，加入适量的DMF溶解。
（2）将混合液置于冷却水浴中，缓慢搅拌。
（3）加入适量的冰乙酸，调节pH值至6.5-7.0。
（4）继续搅拌反应30分钟。
（5）用饱和NaHCO3溶液洗涤反应液，去除未反应的Boc-Cl。
（6）用无水硫酸钠干燥反应液。
（7）过滤，收集滤液，用乙醇/水溶液洗涤滤渣。
（8）将滤液蒸发至干燥，得到Boc保护的苯胺。
3. Tboc保护（1）在烧杯中加入Boc保护的苯胺和Tboc-Cl，加入适量的DMF溶解。
（2）将混合液置于冷却水浴中，缓慢搅拌。
氨基酸检测仪安全操作及保养规程
氨基酸检测仪安全操作及保养规程氨基酸检测仪是一种用于检测蛋白质中氨基酸组成的仪器。
在使用过程中，需要注意安全操作和保养规程，以确保仪器的正常运转和使用寿命。
本文将介绍氨基酸检测仪的安全操作和保养规程。
安全操作规程使用氨基酸检测仪需要遵守以下安全操作规程：1.人员要求使用仪器的人员应具备以下条件：•掌握基本的化学实验室安全知识。
•具有一定的实验操作经验。
•熟悉仪器的结构和使用方法。
•按照操作规程进行操作。
2.安全装备使用氨基酸检测仪需要配备以下安全装备：•实验手套：保护双手和前臂不受化学物质的刺激和腐蚀。
•实验眼镜：防止化学物质飞溅伤害眼睛。
•防护口罩：防止有毒气体、蒸汽进入呼吸系统。
•实验衣：保护实验人员免受化学物质的直接接触，同时保持实验环境的清洁卫生。
3.实验器材使用氨基酸检测仪需要使用以下实验器材：•电动离心机：用于不同物质分离。
•稀释管和分液漏斗：用于实验液的稀释、转移和分离。
•冷却淀粉：用于制备鉴定剂和发展剂。
•滤纸：用于分离和过滤混合物，过滤时需要特别小心以避免污染滤纸。
•镊子或匙子：用于对试验物质的处理和采样，同时可以用来清洗实验器具。
4.仪器操作步骤使用氨基酸检测仪需要按照以下操作步骤：•填充检测仪柱：将检测柱的缓冲液和检测剂加入柱中，同时在柱的管口加上防尘盖。
•样品制备：将样品与检测柱的缓冲液混合，然后将混合液加入检测柱中。
•混合物进入柱：将混合液加入检测柱后，在柱上注明样品名称和标识编号，并标记流动方向。
•读取结果：将柱放入氨基酸检测仪中，进行分析，并将结果记录。
5.仪器保养为了保证氨基酸检测仪的正常工作和寿命，需要定期对仪器进行保养。
(1).定期检查仪器的效果•检查是否有损坏、松动或脱落的部分。
•检查电缆和连接器是否正常连接。
•检查防波器的功能是否正常。
•检查仪器元件是否需要更换。
(2).清洗仪器•检查仪器和器具的密封性。
•清洁柱的表面和内部结构。
•清洗橡胶垫和防尘罩。
•频繁使用氨基酸检测仪的实验室应该每周一次清洗它的内部结构及其周围区域，以便尽量延长仪器的寿命。
氨基酸及其检测技术基础
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食品中氨基酸的分析检测 实验方法
膠 體
監 視 器
(5)
膠 體 裝 填
分 劃 收 集 器
氨基酸组成分析
• 基本步骤：水解、衍生、色谱 • 水解：5.7mol/L盐酸真空下110℃水解24h 气相水解法：抽真空并充氮气 • 衍生：柱后反应法和柱前衍生 显色剂：茚三酮、荧光胺、邻苯二甲 醛等 • 色谱分析
几种常见的氨基酸分析方法
氨基酸携带电荷和环境pH的关系
氨基酸之间通过肽键相连形成蛋白质
肽键的形成
氨基酸组成蛋白质
肽平面结构
肽的构成
氨基酸的化学反应
• α— 氨基参与的反应 • 与亚硝酸反应：生成氮气，用于氨基酸定量
分析和蛋白质水解程度测定
• 与酰化试剂反应：氨基保护，N端标记，氨
基酸微量分析
• 烃基化反应：肽链N端标记 • 脱氨基反应：氨基酸代谢
α— 羧基参与的反应
• 成盐和成酯反应：氨基活化
• 成酰氯反应：羧基活化
• 脱羧反应：氨基酸代谢 • 叠氮反应：羧基活化
α— 氨基、羧基都参与的反应
• 茚三酮反应：显色反应，用于各种氨基 酸的定性、定量分析。 • 成肽反应：氨基酸之间缩合成肽
氨基酸的常用分离检测方法
• • • • 纸层析 薄层层析 柱层析 离子交换层析：利用离子交换树脂为载 体，根据氨基酸之间不同的pI值 进行pH 值梯度洗脱分离 • 高效液相色谱分析 • 气相色谱分析
氨基酸的测定 流程 教学
氨基酸的测定流程教学Amino acid determination is a crucial process in biochemical research and clinical analysis. It involves the measurement of the concentration of individual amino acids in a biological sample, which can provide valuable information about the health and functioning of an organism. The process of amino acid determination typically involves several steps, including sample preparation, separation, detection, and analysis.氨基酸的测定对于生化研究和临床分析至关重要。
它涉及测量生物样本中各个氨基酸的浓度，这可以提供有关生物体健康和功能的宝贵信息。
氨基酸测定的过程通常包括几个步骤，包括样品准备、分离、检测和分析。
One of the key steps in amino acid determination is sample preparation. This includes the extraction of amino acids from the biological sample and the removal of any interfering substances that could affect the accuracy of the analysis. Sample preparation methods vary depending on the type of sample being analyzed and the specific amino acids of interest. The goal of sample preparation isto obtain a clean and concentrated sample that can be easily analyzed using the subsequent steps in the process.氨基酸测定的关键步骤之一是样品准备。
氨基酸总量测定作业指导书
氨基酸总量测定作业指导书蛋白质经水解或酶解可由大分子变成小的蛋白质成分，如水解后的产物经月示、胨、肽等最后变成为氨基酸，氨基酸是构成蛋白质最基本的物质。
水解后的蛋白质和水解前的蛋白质在物理特性、化学结构以及被吸收消化的程度上是很不相同的，其差别与水解的程度有密切关系，分析氨基酸的含量就可以知道水解的程度，也就可以评价食品的营养价值。
氨基酸不是单纯的一种物质，用氨基酸分析仪可直接测定出17种氨基酸(仪器价格昂贵，不能普便使用)，很多氨基酸可以同时存在于一种食品中，所以需要测定总的氨基酸量。
它们不能以氨基酸的百分率来表示，只能以氨基酸中所含的氨(氨基酸态氮)的百分率来表示。
当然，如果食品中只含有一种氨基酸，如味精中的谷氨酸，就可以从氮量计算出氨基酸的含量。
在评价蛋白质的营养价值时，除了测定蛋白质的含量，氨基酸氮量，还需要对各种氨基酸进行分离、鉴定，尤其对8种人体必需氨基酸进行定性定量分析。
1.1 单指示剂甲醛滴定法原理氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有—COOH基显示酸性，又含有—NH2基显示碱性。
由于这两个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，—NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就用碱来滴定—COOH基，以间接方法测定氨基酸的量。
反应式以下面三种形式存在：试剂40%中性甲醛溶液，以麝香草酚酞为指示剂，以mol/LNaOH溶液中和0.1%麝香草酚酞乙醇溶液；0.100mol/L 氢氧化钠标准溶液。
操作步骤称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2～3滴指示剂，用0.100mol/LNaOH 液滴定至淡蓝色。
加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。
再用0.100mol/LNaOH溶液滴定至淡蓝色，记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算氨基酸氮的含量。
计算氨基酸态氮(%)=MV×0.014×100/W式中：M—氢氧化钠标准溶液摩尔浓度V—氢氧化内标准溶液消耗的总量(毫升)W—样品溶液相当样品重量(克)0.014—氮的毫摩尔质量g/mmol1.2 双指示剂甲醛滴定法原理与单色法相同，只是在此法中使用两种指示剂。
氨基酸标样安全操作及保养规程
氨基酸标样安全操作及保养规程氨基酸标样是一种广泛应用于生物化学、生物医学等领域的化学试剂。
它们根据实验设计的需要，可以被精确地配置成不同含量的氨基酸混合物。
但是，氨基酸标样在使用和储存过程中，存在一定的安全隐患。
为了保障工作人员的安全，本文将介绍氨基酸标样的安全操作和保养规程。
1. 储存氨基酸标样应存放在干燥、避光和密闭的环境中，以防止氨基酸的挥发和氧化。
同时，氨基酸标样最好在零下20摄氏度的冰箱内储存，以减缓其分解速度。
2. 操作2.1 穿戴防护设备在进行氨基酸标样操作之前，工作人员应当穿戴适合的实验室防护设备，包括实验室外套、手套、护目镜等。
这样可以保护工作人员免受化学物品的伤害。
2.2 避免直接接触氨基酸标样是一种强腐蚀性试剂，其接触皮肤和眼睛后会引起灼伤和刺痛。
因此，工作人员应该避免直接接触氨基酸标样，如需要密封操作，则需要佩戴耐酸碱手套和防护眼镜。
2.3 遵循操作规程在进行氨基酸标样的配置和使用过程中，工作人员应该遵循操作规程。
如需要破坏玻璃试管，应该采取玻璃切割器切割或采用特殊的脆性钳子，以防止氨基酸标样飞溅。
2.4 注意通风在氨基酸标样操作期间，工作人员应注意实验室的通风，并在实验室内设置化学淋浴等安全设备，以避免发生意外事件。
3. 废弃处理在氨基酸标样使用后，工作人员应该采取合适的废弃处理方式。
一般情况下，氨基酸标样的残留物应该经过酸碱中和后在专门的箱中进行集中处理，防止对环境造成污染。
4. 常见问题和安全措施4.1 如何防止氨基酸标样的挥发和氧化？为了防止氨基酸标样的挥发和氧化，应该存放在干燥、避光和密闭的环境中，并在储存时尽可能将其存放在冰箱内。
4.2 氨基酸标样如何进行配置？氨基酸标样可以按照实验设计的需要配置成不同含量的氨基酸混合物。
配置时应注意遵循操作规程，并在配置前事先准备好所有需要的物品和设施。
4.3 如何避免氨基酸标样的灼伤？为了避免氨基酸标样对皮肤和眼睛造成的灼伤，应尽量避免直接接触，并穿戴适合的实验室防护设备。
氨基酸的保护
保护氨基酸：是指氨基酸的功能基团与其它基团反应而封闭了氨基酸功能基团活性的氨基酸衍生物，都能叫保护氨基酸。
包括a氨基和羧基，以及侧链功能基团。
氨基保护基的选择策略:选择一个氨基保护基时，必须仔细考虑到所有的反应物，反应条件及所设计的反应过程中会涉及的底物中的官能团。
最好的是不保护. 若需要保护,选择最容易上和脱的保护基,当几个保护基需要同时被除去时，用相同的保护基来保护不同的官能团是非常有效。
要选择性去除保护基时，就只能采用不同种类的保护基。
要对所有的反应官能团作出评估，确定哪些在所设定的反应条件下是不稳定并需要加以保护的，选择能和反应条件相匹配的氨基保护基。
还要从电子和立体的因素去考虑对保护的生成和去除速率的选择性如果难以找到合适的保护基，要么适当调整反应路线使官能团不再需要保护或使原来在反应中会起反应的保护基成为稳定的；要么重新设计路线，看是否有可能应用前体官能团（如硝基等）；或者设计出新的不需要保护基的合成路线。
Ⅰ氨基酸的保护基（保护羧基）（一）叔丁基tBu - (tert-butyl) ester标准保护程序：在N-保护的氨基酸的溶液中，加入DMAP（0.5当量）和叔丁醇（1.2当量）在干燥的DCM （DCM是一氧化二碳？），0℃在惰性气氛下，加入EDCI（1.1当量），并搅拌2小时。
然后将混合物在室温下，搅拌直到TLC通过（通常是14小时），在真空下浓缩。
将残余物再溶解在乙酸乙酯中，用水萃取两次，然后用饱和碳酸氢钠水溶液萃取两次。
将有机溶液干燥（硫酸镁）并真空浓缩。
如果必要将残留物通过快速色谱法（SiO）纯化。
脱保护：将该化合物溶解在甲酸中在室温下搅拌直至反应完成（TLC通过）（通常是12小时）。
然后将溶液浓缩，并重复加入甲苯浓缩数次。
如有必要，可以将所得残余物通过快速色谱法（SiO）进行纯化。
(二）苄基Bn - (benzyl) ester标准保护程序：氨基酸在惰性气氛下搅拌用无水THF和O的苄基N，N'-diisopropylisourea（见文献进行合成）在室温下，直到完成通过TLC（通常为2天）。
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- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
保护氨基酸检验指导书发放号：编写: 审核:批准:1. 检验流程1.1 成品置于待测区1.2 检验员取样1.3 成品检测(外观、纯度、质谱、旋光、熔点、澄清度等)1.4 备注：A. 产品粉碎并包装置于待测区后，取样检测出的数据写入检验报告。
B. 研发部提供的生产过程中的图谱 (MS、HPLC) ，可做参考，有权进行复查。
2 检验项目2.1 外观：目测法（须为白色或类白色粉末或结晶性类白色粉末）2.2 光学纯度的测定2.2.1 仪器和试剂液相色谱仪、输液泵、检测器、色谱柱、记录装置、进样阀、微量注射器、超声波发生器、蒸馏水、乙晴、三氟乙酸2.2.2 分析步骤A. 称取一定量的样品溶于10ml容量瓶中，直至完全溶解，然后将其过滤。
B. 用微量注射器吸取一定量试样溶液进入色谱系统，利用梯度洗脱使样品达到分离。
C. 各组分经过紫外检测器，通过色谱工作站记录各组分的紫外吸收、并转换为电信号。
D. 在线色谱工作站记录各组分的各项参数，如保留时间、峰高、峰面积，通过面积归一法计算出各组分的百分含量。
2.2.3 注意事项A. 氨基酸样品分析必须打空白，谱图中不允许出现未积分的小杂峰，若是空白中有的，必须以基线相减的方式处理掉；如果处理不掉，必须进行复测。
B. 基线尽量保持一条直线。
C. 谱图中不允许出现负峰。
2.2.4 要求及规定A. 氨基酸样品分析必须打空白，谱图中不允许出现未积分的小杂峰，若是空白中有的，必须以基线相减的方式处理掉；如果处理不掉，必须进行复测。
B. 基线尽量保持一条直线。
C. 谱图中不允许出现负峰。
D. 尽量安排同一产品的测试使用同一分析条件，这样可加强可比性。
E. 比较数据的重复性时，安排统一产品测试的时间不要间隔很久。
F . 若单项杂质在1%±0.05%，复测确定数据的重复性。
G. 若同一批次产品分包装送样检测，混合样数据应在各分包装测试数据的范围内。
例如：分包装测试的数据分别为：98.5%、98.6%、98.7%，若混合样数据不在98.5%-98.7%范围内，则复测确定数据的重复性。
2.3 旋光的测定2.3.1 仪器和试剂旋光仪、25ml容量瓶、电子天平、DMF、NaOH、AcOH、EtOAc、MeOH、EtOH、HCl、CHCl3等。
2.3.2 分析步骤A. 称取一定量样品，用相应溶剂溶于25ml容量瓶中至完全溶解。
B. 旋光仪开机预热20分钟。
C. 旋光仪校零，用溶剂清洗旋光测定管3-5次，装入溶剂，置于旋光仪箱内。
D. 校零,取出旋光管，记录空白值。
E. 用配好的溶液润洗旋光管3-5次，再加入溶液。
F. 再次置于旋光仪同一位置上，读数，取平均值。
2.3.3 注意事项A. 溶液或溶剂加入旋光管内读数时，管内不能有气泡。
B. 测同种样品时旋光管应放置在同一位置上。
2.3.4测量示值误差：±（0.01°+测量值×0.05%）2.4 熔点的测定2.4.1仪器和试剂：数字熔点仪、玻璃毛细管2.4.2 分析步骤A. 用玻璃毛细管取样，（颗粒状固体稍加研磨后装管）自由落体法敲击样品，使之填装结实，样品高度一般为3mm。
B. 调预制温度（低于样品熔点10度），稳定到达时，把填装好的样置入仪器，按“升温”键。
C. 测试结束，屏幕自动显示初熔值和终熔值。
d. 一次填装多根毛细管，分别测定，废弃最大值和最小值后取平均值。
2.4.3 注意事项A. 同一批号样品取样高度应一致，以确保测量结果的一致性。
B. 设定起始温度切勿超过仪器使用范围（<300℃）。
C. 线性升温速率不同，测定结果也不一致。
一般速率越大，读数值越高。
D. 测定较高熔点样品后再测较低熔点样品。
2.4.4 测量示值误差A. 小于200度范围内，±0.5℃。
B. 200℃～300℃范围内，±0.8℃。
2.5 水份的测定2.5.1 仪器和试剂：KF-1B水份测定仪、卡尔费休试剂、烧杯、微量进样器、无水甲醇、蒸馏水2.5.2 分析步骤A. 在贮液瓶中倒入适量卡尔费休试剂。
B. 加入无水乙醇（分析纯）于反应瓶中，至淹没电极裸露端。
C. 开启电源，调节搅拌器转速，仪器进入滴定状态。
D. 滴定结束后用微量进样器取蒸馏水10ul进行标定卡尔费休试剂，并输入所消耗的试剂量。
（卡氏试剂标定做2次平行样后取平均值）E. 把称好的样品滴定并输入所消耗的试剂量和样品重量。
F. 读取“百分含量”试剂。
2.5.3 注意事项A. 卡尔费休试剂具有腐蚀性，操作时应在通风的环境中进行。
B. 废液应做有害物质处理。
C. 测定酮类或醛类样品时，需要专用试剂。
D. 定期保养仪器2.6 澄清度的测定2.6.1 仪器和试剂试管、量筒、溶剂（一般为N,N-二甲基甲酰胺）、电子天平、称量纸、小勺2.6.2 分析步骤A. 称取0.3克样品，置于试管中。
B. 用量筒移取2ml溶剂加入试管中。
C. 摇均使之充分溶解，静置观察是否澄清，无黑点，无絮状物。
2.6.3 注意事项A. 样品溶解时，不能进行加热及其他外力加速其溶解。
B. 试管壁应洗干净，以免混淆视觉。
C. 澄清是指能使光线能很好通过。
2.6.4 要求及规定A. 溶液透明能透光。
B. 不要用强酸和强碱测试。
不能借助加热以及超声波。
C. 尽量首选DMF试做澄清度。
D. 在澄清度测试的溶液中（一般为2ml）发现少于等于6颗小杂点（包括：小黑点、小黄点、类似滤毛的毛状物）可以判定为合格产品。
如果重复3次测试，情况都在上述范围内，产品判定为合格产品。
并在检验报告备注栏中写明实际的测试情况。
2.7 分子量的测定2.7.1 仪器和试剂：LC-20AD泵、DGU-20A3在线真空脱气机、CTO-10Avp柱温箱、甲醇（分析醇）、乙晴(色谱纯)、蒸馏水、DMF等2.7.2 分析步骤A. 先把样品溶解，须离心分层，取上层清液，稀释。
B. 打开色谱工作站，进入操作界面后，打开CDL，BLOCK加热块进行预热，待温度到达设定的温度，然后打开氮气，高电压。
C. 编辑序列表，设定LC部分的参数及MS部分的参数，选择使用Tuning文件里的Esi文件或Apci文件，若样品为合成的保护氨基酸，还需选择扫描Positive或NegativeD. LC部分的参数设定好之后即可激活仪器，激活后待LC和MS处于进样等待状态，点击Strt键后即可进样。
E. 若样品需作LC-MS，则需改变管路，接上色谱柱，平衡后手动进样进入色谱系统。
F. 处理MS图谱时，选择TIC图谱中的某一点，观察该点分子量是否与样品理论分子量一致，若不一致，则选取另外的点观察。
点选择之后，应对TIC图谱中的分子离子峰积分，再减去空白溶剂中的杂质。
G. 图谱积分好后，进入Report，编辑报告，报告中的PDA谱与MS图尽量做到简洁，尽可能的减少图谱中的杂质峰。
H. 关机。
先关闭LC部分。
关闭时，先关周边设施，然后系统控制器，最后关电脑。
2.7.3 注意事项A. 每天做样后，须用异丙醇清洗Probe及相关部件。
B. Rotary Pump的换油周期是3000Hr。
C. 重新启动真空时，至少24Hr之后再进行分析。
D. 室内温度保持在18～28℃，湿度在40～70。
E. LC用水必须新鲜。
F. 自动进样器的清洗液原则上和流动相一致。
2.8 对应异构体光学纯度的测定2.8.1 仪器和试剂：10ml容量瓶、超声波、色谱柱：ChirobioticT、ChirobioticR和Daicel IC、微量进样器、手动进样器2.8.2 分析步骤A. 样品的制备：称取D型氨基酸5毫克、L型氨基酸5毫克、D型L型各5毫克混合物，分别加入10ml 容量瓶，用HPLC级甲醇溶解，甲醇加至10ml刻度线，超声波加速溶解，取上层清液供HPLC进样使用。
B. 待色谱柱平衡好后，用微量进样器吸取5ul待测氨基酸（D型或L型），进样分析。
C. 运行15分钟后，保存数据谱图。
D. 再次平衡色谱柱后，用清洗过的微量进样器吸取D型和L型5ul，进行分析，D型和L型完全分离。
E. 通过面积归一法对照两次数据谱图，得出D型氨基酸中含有多少L型氨基酸或者L型氨基酸中含有多少D型氨基酸。
2.8.3 要求及规定A. 21个Fmoc氨基酸，必须检测该项目。
B. 如果客户有手性要求，加测该指标。
2.9 干燥失重的测定2.9.1 仪器：真空干燥箱，干燥器，扁形称量瓶，天平2.9.2 操作步骤A. 在天平上用扁形称量瓶（保证干燥，用前最好恒重，或者平时储藏于干燥器中）称一定量的样品（做2个平行样及一个空白样），记录数据。
B. 把扁形称量瓶放入真空干燥箱，大约干燥2-3小时，取出称量瓶放入干燥器中冷却后称量，记录数据。
C. 数据处理。
2.9.3 注意事项A. 真空干燥箱的设定温度应低于样品熔点的1/2。
B 样品一定要冷却后称量（干燥器内至少冷却半小时）。
C. 拿放称量瓶时不要直接与手接触，配合干燥的纸巾拿放称量瓶。
2.10 游离氨基酸的测定2.10.1 仪器和试剂：天平，加热器，烧杯，试管，茚三酮，无水乙醇，苯酚，重蒸吡啶2.10.2 分析步骤A. 称取待测样5mg于试管中。
B. 配制三种检测试剂：a. 5g茚三酮溶解于100ml无水乙醇b. 80ml苯酚加入20ml无水乙醇混合c. 重蒸吡啶C. 在试管中加入三种检测试剂各两滴。
D. 试管放入100℃沸水中5min。
E. 取出试管，观察其颜色。
F. 与0.05%的游离氨基溶液作对照，浅了为＜0.05%（合格），深了为＞0.05%（不合格）。
2.10.3 注意事项A. 试管必须干净，否则造成颜色误差，影响检测结果B. 必须放在沸水中5分钟，时间长短颜色会有一定的误差2.11 TLC的测定2.11.1 仪器和试剂：三用紫外线分析仪，展开剂，薄层板，有机溶剂2.11.2 分析步骤：A. 点样点样用的毛细管为内径＜ lmm的管口平整的毛细管，将样品溶于有机溶剂。
用毛细管吸取样品在小心点样，如需重复点样，则应待前次点样的溶剂挥发后方可重点。
若在同一块板上点几个样，样品点间距离为5mm以上。
B. 展开展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑。
薄层的展开在密闭的容器中进行。
先将选择的展开剂放入广口瓶，再将点好试样的薄层板放入广口瓶中进行展开，点样的位置必须在展开剂液面之上，当展开剂上升到薄层的前沿（离前端5－10mm）或多组分已明显分开时，取出薄层板放平晾干，用铅笔划溶剂前沿的位置后，即可显色。
C. 显色如果化合物本身有颜色，就可直接观察它的斑点。
如果本身无色，可先在紫外灯光下观察有无荧光斑点（有苯环的物质都有），用铅笔在薄层板上划出斑点的位置；对于在紫外灯光下不显色的，可放在含少量碘缸中显色来检查色点（因为许多化合物都能和碘成黄棕色斑点）。