薄 层 Rf 值
薄层rf值的计算公式
薄层rf值的计算公式薄层色谱（TLC）中的 Rf 值（Retention factor）是一个用于描述化合物在色谱板上迁移程度的重要参数。
Rf 值的计算公式其实很简单，就是溶质移动的距离与溶剂前沿移动距离的比值。
比如说，我们在一块 TLC 板上进行实验。
先在起始线上点上了我们要研究的混合物样品，然后把这块板小心地放入展开剂中。
展开剂就像是一个神奇的“搬运工”，会带着混合物中的各种成分沿着板子往上跑。
假设展开结束后，溶剂前沿从起始线移动了 10 厘米，而我们关注的某个化合物移动了 5 厘米。
那么这个化合物的 Rf 值就是 5 厘米除以10 厘米，也就是 0.5 。
可别小看这个简单的计算公式，它能告诉我们很多有用的信息呢！比如说，如果两个化合物的 Rf 值不同，那就说明它们在这种展开剂中的迁移能力不同，很可能是不同的物质。
在实际的实验操作中，要得到准确的Rf 值可不是一件轻松的事儿。
有时候，展开剂的选择就很让人头疼。
不同的展开剂对化合物的“推动力”不一样，可能会导致 Rf 值发生很大的变化。
我记得有一次做实验，怎么都得不到理想的 Rf 值。
我换了一种又一种展开剂，结果不是化合物跑得太快，Rf 值接近1 ，就是几乎不动，Rf 值接近 0 。
那感觉就像是在和这些化合物玩捉迷藏，怎么都抓不住它们的规律。
后来我才发现，原来是我在点样的时候出了问题。
样点太大，导致化合物在起始线附近就扩散开了，这样跑出来的结果当然不准确啦！从那以后，我每次点样都格外小心，轻轻地点上一小滴，尽量让样点又小又集中。
而且，测量距离的时候也得仔细。
要用尺子精确地测量溶剂前沿和化合物移动的距离，哪怕有一点点误差，都会影响到 Rf 值的准确性。
总之，薄层 Rf 值的计算虽然简单，但是要想得到可靠的结果，还需要我们在实验的每一个环节都认真对待，不能有丝毫的马虎。
只有这样，Rf 值才能真正成为我们分析和鉴定化合物的有力工具！。
薄层板的铺制、活化、点板、展层、显色及Rf的计算
实验项目一1、实验项目名称：薄层板的铺制、活化、点板、展层、显色及R f的计算。
2、实验项目性质：验证性。
3、实验要求：必修。
4、计划学时数：6学时。
5、实验内容：（1）硅胶薄层板的铺制薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。
把欲分离的样品点在薄层板的一端，然后将点样端浸入适宜的展开剂中, 在密闭的层析缸中展开，使混合物得以分离的方法。
由于层析在薄层上进行故而得名。
薄层层析是一种微量、快速的层析方法。
它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定，还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。
先做一下准备工作：玻板（约10×6cm）羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液配成0.5%溶液，CMC-Na一般是要煮的，煮的时候应该缓缓加入CMC-Na，否则容易结成团块，影响浓度；煮好后一般放个两三天后，取上层清液使用，如果急着使用，也可以用过滤的方法。
硅胶H（小于260目）硅胶：CMC-Na=1g：3mL研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。
匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。
铺好的板，用手捏起来，平着一放，摔一摔，让玻板上的硅胶铺得更均匀。
（2）硅胶薄层板的活化铺好的硅胶板，放置过夜，就可使用，想活化的也可活化。
即移入烘箱，缓慢升温至105-110℃恒温活化半小时，取出放入干燥器中备用。
（3）硅胶薄层板的展层用点样毛细管取少量溶液点于硅胶板（离板底部大约0.5cm ）。
将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点2-3mm为宜（切勿将样点侵入展开剂中），密封顶盖，待展开至溶剂前沿达到规定的展距，取出薄层板，晾干。
（4）硅胶薄层板的显色及R f的计算分离的化合物若有颜色，很容易识别出来各个样点。
但多数情况下化合物没有颜色，要识别样点，必须使样点显色。
薄层色谱分析步骤及注意事项
薄层色谱分析步骤及注意事项薄层色谱法(thin layer chromatography简写TLC)是物理化学的分离技术，常用于药物的分离与分析现对此方法的分析步骤及注意事项提点建议。
薄层色谱分析步骤完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操作。
⑴制板在一平面支持物（通常玻璃）上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上进行。
一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。
常用的薄层板规格有：10cm×20cm、5cm ×20cm、20cm×20cm等。
称取适量硅胶,加入0。
2％～0。
5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC —Na),充分搅拌均匀，进行制板。
一般来说10cm×20cm的玻璃板,3～5g硅胶/块;硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1:2～1:4。
制好的玻璃板放于水平台上，注意防尘。
在空气中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放凉,并将其放于紫外光灯（254nm)下检视,薄层板应无花斑、水印,方可备用。
⑵点样用微量进样器进行点样。
点样，先用铅笔在层析上距末端lcm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，如果要重新点样,一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样,以免点样斑点过。
一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm.底线距基线1～2．5cm，点间距离为lcm左右,样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应，可将薄层板两边刮去1～2cm，再进行点样。
⑶展开将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用,展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后,取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。
①展开室应预饱和。
为达到饱和效果,可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖。
②展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂,并且临用时新配为宜。
氨基酸的薄层层析
氨基酸的薄层层析一、实验目的1．掌握薄层层析法的一般原理。
2．掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。
3.掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）。
二、实验原理1．薄层层析法是色谱分析技术的一种一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。
当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。
（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）硅胶吸附薄层层析吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶硅胶：表达式为SiO2-XH2O。
层析用硅胶是一种多孔性物质，它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基（一Si —OH）,这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附。
硅胶吸附薄层层析的特点：①硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱，其吸附活性也与含水量呈负性相关。
②硅醇基显较弱的酸性，因而，硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离，碱性成分不能用它分离。
③硅胶的活化温度通常为105℃ —110℃,不能过高。
但是实际操作时为70℃,活化1h 2．氨基酸与茚三酮的显色反应茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛，与此同时，还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。
3.记录结果，计算Rf值混合氨基酸被分离后，在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率一Rf值（rate of flow）来表示。
层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。
由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据 Rf值来鉴定被分离的物质。
三、材料与方法：材料：（一）分析样品：氨基酸混合液（二）试剂：吸附剂：硅胶粘合剂： 0.5%的羧甲基纤维素钠、氨基酸的异丙醇溶液、丙氨酸、精氨酸、甘氨酸。
rf值名词解释
rf值名词解释
RF值又称相对迁移值，是一种常用于薄层层析实验中的指标，用于衡量分离物在薄层层析板上的移动程度，是一种相对的衡量方法。
在薄层层析实验中，分离样品在固定相（薄层层析板）上的移动距离和流动相溶液前进的距离之比即为RF值。
RF值的计算是通过将分离物在薄层层析板上移动的距离除以流动相（溶液）移动的距离得到的，通常以数值的形式表达，无单位。
RF值的大小取决于许多因素，如固定相、流动相、温度和相对湿度等。
在薄层层析实验中，RF值主要用于帮助识别分离物和确定其纯度。
通过与已知化合物的RF值进行比较，可以初步确定待测化合物的身份。
总之，RF值是薄层层析实验中常用的一个参数，它反映了分离物在固定相上的运动情况，是化合物鉴定和分离的重要依据之一。
薄层色谱rf值计算
薄层色谱rf值计算薄层色谱（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种常用的分离和检测技术，广泛应用于化学分析、生物化学与药学等领域。
在TLC中，用于分离的试样溶液施于薄层担体上，随后通过溶剂的上升、扩散、吸附和洗脱等过程，分离出不同组分。
而rf值（Retention Factor）则是一种常用的评价TLC分离性能和计算物质迁移率的指标。
rf值的计算公式为：rf = 移动距离（色谱点至出发点的距离）/ 担体上色谱点至出发点的距离在实际操作中，可以通过一些步骤来计算rf值。
第一步是准备试样溶液和担体。
将待测物溶解在合适的溶剂中，得到一定浓度的试样溶液。
一般情况下，可以选择经过活性炭活化的薄层硅胶、铝箔或玻璃等作为担体。
第二步是施样。
将试样溶液以毛细管或自动样品施样器施于担体的一端，形成一个较小的样品斑点。
第三步是静置。
将施样后的担体在通风处静置片刻，使样品溶液充分渗透并与担体固定。
第四步是溶剂系统的组成和溶剂前处理。
选择合适的有机溶剂或有机溶剂的混合物作为溶剂系统进行溶剂的上升和分离。
如果其中一些有机溶剂不含水，可先用去离子水蒸馏或经纯化的无水溶剂拌匀。
第五步是上色。
将担体的一侧放在适量的上色溶液中，上色溶液稍高于担体的一端，使溶液由低处向上渗透。
第六步是从上色线的下端放置于封闭的槽中，使溶剂向上均匀渗透。
同时，密封槽可以减少有机溶剂的挥发，使溶剂系统的浓度保持恒定。
第七步是等待溶液前端达到担体的上端，将试片取出，然后迅速在未干燥的状态下烘干或观察。
干燥后可使用紫外灯观察施样迁移点和担体的均匀程度。
第八步是测量移动距离。
用尺规测量样品斑点至出发点的距离（即移动距离）和担体上色谱点至出发点的距离，分别记作d1和d2，然后代入rf值计算公式计算出rf值。
在计算rf值之前，需要注意以下几点问题：（1）rf值是相对数据，可以用来比较不同化合物的迁移速度以及同一化合物在不同实验之间的迁移变化。
薄层色谱分析步骤及注意事项
薄层色谱分析步骤及注意事项薄层色谱法(thin layer chromatography简写TLC）是物理化学的分离技术，常用于药物的分离与分析现对此方法的分析步骤及注意事项提点建议。
薄层色谱分析步骤完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操作.⑴制板在一平面支持物(通常玻璃）上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上进行。
一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。
常用的薄层板规格有：10cm×20cm、5cm ×20cm、20cm×20cm等。
称取适量硅胶,加入0.2%～0.5％羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na)，充分搅拌均匀,进行制板。
一般来说10cm×20cm的玻璃板,3～5g硅胶/块；硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1:2~1：4。
制好的玻璃板放于水平台上,注意防尘。
在空气中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5~lh，取出，放凉,并将其放于紫外光灯（254nm）下检视,薄层板应无花斑、水印，方可备用。
⑵点样用微量进样器进行点样。
点样，先用铅笔在层析上距末端lcm 处轻轻画一横线,然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样,如果要重新点样,一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样，以免点样斑点过。
一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm.底线距基线1～2．5 cm，点间距离为lcm左右,样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应，可将薄层板两边刮去1～2cm，再进行点样。
⑶展开将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中,由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进,前进至一定距离后,取出薄层板,样品组分固移动速度不同而彼此分离。
①展开室应预饱和.为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条,一端浸入展开剂中，密封室顶的盖。
②展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜.③薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。
薄层色谱法
薄层色谱法基本原理色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同，或和其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组份分开。
薄层色谱是一种微量、快速和简便的色谱方法。
由于各种化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，进行不同程度的解析，根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Rf）：化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因此Rf值较小。
在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据Rf值鉴别化合物。
薄层色谱可适用小量样品（几到几十微克甚至0.01μg）的分离：也可用于多达500mg 样品的分离，是近代有机化学中用于定性，定量的一种重要手段。
特别适用于那些挥发性小的化合物，以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析的物质。
实验流程铺板点样展开显色计算Rf值铺板取7.5x2.5cm左右的载玻片5片，洗净晾干。
在50mL烧杯中，放置3g硅胶G，逐渐加入0.5﹪羧甲基纤维素钠水溶液(CMC)8mL，调成均匀的糊状，涂于上述洁净的载玻片上，用手将带浆的玻片在水平的桌面上做上下轻微的颠动，制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，涂好的硅胶G的薄层板置于水平的玻璃板上，在室温放置0.5h后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5h后取出，稍冷后置于干燥器中备用。
点样点样用的毛细管为内径<lmm的管口平整的毛细管，将样品溶于低沸点的溶剂（乙醚、丙酮、乙醇、四氢呋喃等）配成溶液。
点样前，可先用铅笔在小板上距一端5mm处轻轻划一横线，作为起始线，然后用毛细管吸取样品在起始线上小心点样，如需重复点样，则应待前次点样的溶剂挥发后方可重点。
若在同一块板上点几个样，样品点间距离为5mm以上。
薄层色谱法测定操作规程
标准操作规程目的：为规范薄层色谱法测定检查操作，确保实验的准确性，依据《中国药典》2020版四部和《药品生产质量管理规范》（2010年修订），特制定本规程。
适用范围：适用于用薄层色谱法进行鉴别、检查或含量测定。
依据：《中国药典》2020版第四部57页0502“薄层色谱法”《药品生产质量管理规范》2010年修订责任：检验员负责本规程的实施。
内容：1.简述：薄层色谱法系将供试品溶液点样于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，亦可用薄层色谱扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。
2.TLC的原理：通常所说的薄层色谱一般是指吸附薄层色谱，可根据TLC所采用的涂层材料性质的不同，其物理化学原理也有所不同，可分为：2.1 吸附薄层色谱：采用硅胶、氧化铝等吸附剂铺成薄层，利用吸附剂表面对不同组分吸附能力的差别达到分离的方法。
最为广泛的方法由于混合物中的各个组分对吸附剂（固定相）的吸附能力不同，当展开剂（流动相）流经吸附剂时，发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前移动，吸附力强的组分滞留在后，由于各组分具有不同的移动速度，最终得以在固定相薄层上分离。
2.2 分配薄层色谱：由硅胶、纤维素铺成薄层，不同组分在指定的两相中有不同的分配系数。
2.3 离子交换薄层色谱：由含有交换活性基团的纤维素辅成薄层。
2.4 排阻薄层色谱：利用样品中分子大小不同，受阻情况不同加以分离，也称凝胶薄层。
3.仪器与材料：3.1 薄层板：按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。
固定相中可加入黏合剂、荧光剂。
硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、G、H表示含或不含石膏黏合剂。
F254为在紫外光254nm波长下显绿色背景的荧光剂。
按固定相粒径大小分为普通薄层板(10～40μm)和高效薄层板(5～10μm)。
氨基酸薄层层析
氨基酸薄层层析一、实验目的1、理解并掌握薄层层析法的原理。
2、掌握氨基酸薄层层析法的正确的操作步骤。
3、掌握根据不同物质的移动速率（Rf 值）来鉴定被分离的混合物的各种组分。
二、实验原理1.薄层层析原理薄层层析时一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。
当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。
（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）2.氨基酸与茚三酮的显色反应茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛，与此同时，还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。
3.基于相对迁移率Rf 值判定混合氨基酸组分薄层层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf 值即：Rf = 原点到溶剂前沿的距离距离原点到层析斑点中心的因为物质在一定溶剂中的分配系数是一定值，故其移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。
三、材料与方法A材料：1样品：（1）0.01mol/L丙氨酸：称取丙氨酸8.9mg溶于90%异丙醇溶液至10mol。
（2）0.01mol/L精氨酸：称取精氨酸17.4mg溶于90%异丙醇溶液至10mol。
（3）0.01mol/L甘氨酸：称取甘氨酸7.5mg溶于90%异丙醇溶液至10mol。
（4）混合氨基酸溶液：将0.01mol/L丙氨酸、精氨酸、甘氨酸按等体积制成混合溶液2试剂：（1）硅胶G(C.P)。
（2）0.5%羧甲基纤维素钠（CMCNa）：取羧甲基纤维素钠5g溶于1000ml蒸馏水中，煮沸，静置冷却，弃沉淀，取上清备用。
（3）展开溶剂：按80:10:10比例（V/V/V)混合正丁醇、冰醋酸及蒸馏水，临用前配制（4）0.1%茚三酮溶液：取茚三酮（A.R.)0.1g溶于无水丙酮（A.R.)至100ml。
薄层色谱的应用及常见问题
常用吸附剂
? 硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254 ? 聚酰胺 ? 硅藻土 ? 氧化铝 ? 纤维素 ? 表面改性固定相
硅胶：具有表面活性、略带酸性（ pH4-5）的多孔 硅胶（ Sio2·xH2O ），是至今薄层色谱法使用得最 普遍的薄层材料。
聚酰胺：属特殊类型有机薄层材料。具有表面酰胺 基，对酚、羧酸、氨基酸等能形成氢键的物质具 有特别的选择性。常用来鉴别黄酮、酚类化合物。
薄层色备拍摄 ? 薄层扫描仪（定量）
9.试剂
? (1). 样品处理用一般为分析纯，按样品稀释
要求处理。
? (2). 配制展开系统用分析纯，不能与被分离
物发生化学反应。
薄层色谱法的基本操作过程
薄层色谱法的基本操作过程
供试品溶液的制备：按规定的方法制备。
薄层色谱分析的实验器材
1.薄层板
? 市售薄层板 ? 自制薄层板
(1). 玻璃板：10×10cm、10×20cm、5×20cm、 20×20cm等。表面及四边要求光滑、平整（四角 均为直角）、薄厚均匀、质地均匀。洗净后不应 附水珠，于无尘处晾干，不应有斑痕，备用。必 要时用前用酒精棉球擦净晾干。
(2). 铺板器：能使吸附剂在载体 (玻璃板)上铺成一 层厚度符合要求的平整、均匀的薄层。分自动铺 板器和手动铺板器两种。手动铺板器包括铺板架 和涂布器，涂布器用金属或有机玻璃均可，规格 有0.2-1.0mm 不等。
色谱基础上发展起来的一种色谱技术。
? 薄层色谱法的特点：具有设备简单、操作
方便、分离快速、直观等特点。尤其对中 药分析，既可对已知有效成分的品种定性、 定量，又可对成分复杂的品种进行特征性 成分分析或进而作指纹图谱分析。
? 薄层色谱法的特点：薄层色谱是一种
薄层色谱的操作方法 薄层色谱操作规程
薄层色谱的操作方法薄层色谱操作规程薄层色谱是一种较新的色谱法，兼具柱色谱和纸色谱的优点，能快速分别和定性分析少量物质。
薄层色谱性能优异，操作也较简单。
1.选择吸附剂吸附剂一般要求直径为10～40m，需要依据被分别物质的性质选择，常用的吸附剂有以下几种。
硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物质分别氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中性物质分别纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分类亲水性物质。
聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、醇类化合物的分别。
2.制备薄层板薄层板的质量将决议分别的效果，应当尽量均匀且厚薄一致。
薄层板的制备紧要有两种方法：①将干净干燥的玻璃板置于铺板器中心，在铺板槽中倒入糊状物，自左向右推，将糊状物均匀地涂在玻璃板上。
②将调成糊状物倒在玻璃板上，或用角匙舀到玻璃板上，再用玻璃棒或角匙铺平并用手捏住玻璃板一角，轻轻碰敲桌面，使薄层表面均匀并除去糊状物中的气泡。
制备完成后还需要将涂好的薄层板水平放置于室温下晾干，然后放在烘箱内加热活化。
（硅胶板需在烘箱内渐渐升温至105—110度后保温30分钟；氧化铝板需在200—220度烘4小时）3.点样将待测样品溶在极性尽可能低的溶剂中配成1%的溶液。
用一支平口的细毛细管蘸取少量样品溶液点在薄板上。
4.打开薄层层析有多种打开方式，可分为上行、下行、双向打开等，这里介绍一下上行法和下行法。
上行法：在缸中加入充重量的打开剂，将点好样品的薄层板放入打开缸的打开剂中，密封缸盖，待展开前沿离薄板上端1cm时，取出薄层板，并用铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。
下行法：在打开缸的盖子上装一个小钩，将打开的纸片钩住，并通过一滤纸条将展开剂和纸片连起来。
待打开剂前沿离纸片下端1cm时，取出纸片，并用铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。
5.显色晾干薄板溶剂后对板上的组分进行定位。
将显色剂以喷雾方式直接喷到薄层板上可显示不同颜色的斑点。
此外对于无色样品，可接受带荧光剂的吸附剂做薄板，打开后在紫外光下显暗色斑点；对于在光学条件下不显色的物质，可将薄板置于含有少量碘晶体的密闭容器中，与碘作用呈棕色斑点。
氨基酸薄层层析 实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称氨基酸的薄层层析实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1.1.掌握薄层层析法的一般原理。
1.2.掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。
1.3.掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）。
二、实验原理2.1.薄层层析法是色谱分析技术的一种一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。
当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。
（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）。
2.2.氨基酸与茚三酮的显色反应茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛，与此同时，还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。
2.3.混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率—Rf值来表示。
层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。
由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。
（Rf=斑点至原点距离/溶剂前缘至原点距离）三、材料与方法：3.1.实验材料：3.1.1.实验试剂：①分析样品：氨基酸混合液；②吸附剂：硅胶；③粘合剂： 0.5%的羧甲基纤维素钠；④氨基酸的异丙醇溶液；⑤丙氨酸、精氨酸、甘氨酸；⑥展开-显色剂（正丁醇、乙酸、水、茚三酮溶液）3.1.2.实验器材：①层析板、尺子、铅笔；②烧杯、玻棒、量筒；③吹风机；④毛细管、层析缸；⑤药匙；⑥烘箱3.2.实验步骤：3.2.1.制板：①调浆：称取硅胶3克，加0.5%的羧甲基纤维素钠8毫升，调成均匀的糊状；②涂布：取洁净的干燥玻璃板均匀涂层；③干燥：将玻璃板水平放置，室温下自然凉干；④活化：70℃烘干30分钟。
薄层色谱(TLC)的使用指南
TLC铺板经验大全！！！薄层色谱（TLC）的使用指南综述：薄层色谱（TLC）是一种非常有用的跟踪反应的手段，还可以用于柱色谱分离中合适溶剂的选择。
薄层色谱常用的固定相有氧化铝或硅胶，它们是极性很大（标准）或者是非极性的（反相）。
流动相则是一种极性待选的溶剂。
在大多数实验室实验中，都将使用标准硅胶板。
将溶液中的反应混合物点在薄板上，然后利用毛细作用使溶剂（或混合溶剂）沿板向上移动进行展开。
根据混合物中组分的极性，不同化合物将会在薄板上移动不同的距离。
极性强的化合物会“粘”在极性的硅胶上，在薄板上移动的距离比较短。
而非极性的物质将会在流动的溶剂相中保留较长的时间从而在板上移动较大的距离。
化合物移动的距离大小用Rf值来表达。
这是一个位于0～1之间的数值，它的定义为：化合物距离基线（最先点样时已经确定）的距离除以溶剂的前锋距离基线的距离。
薄层色谱（TLC）实验步骤：1) 切割薄板。
通常，买来的硅胶板都是方形的玻璃板，必需用钻石头玻璃刀按照模板的形状进行切割。
在切割玻璃之前，用尺子和铅笔在薄板的硅胶面上轻轻地标出基线的位置（注意不要损坏硅胶面）。
借助锋利的玻璃切割刀和一把引导尺，你便可方便地进行玻璃切割。
当整块玻璃被切割后，你就可以进一步将其分成若干独立的小块了。
（开始的时候，也许你会感到有一些难度，但经过一些训练以后，你便会熟练地掌握该项技术。
）2) 选取合适的溶剂体系。
化合物在薄板上移动距离的多少取决于所选取的溶剂不同。
在戊烷和己烷等非极性溶剂中，大多数极性物质不会移动，但是非极性化合物会在薄板上移动一定距离。
相反，极性溶剂通常会将非极性的化合物推到溶剂的前段而将极性化合物推离基线。
一个好的溶剂体系应该使混合物中所有的化合物都离开基线，但并不使所有化合物都到达溶剂前端，Rf值最好在0.15~0.85之间。
虽然这个条件不一定都能满足，但这应该作为薄层色谱分析的目标（在柱色谱中，合适的溶剂应该满足Rf在0.2~0.3之间）。
生化薄层层析实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解薄层层析（TLC）的基本原理及其在生物化学研究中的应用。
2. 掌握薄层层析实验的操作步骤，包括样品制备、点样、层析、显色等。
3. 学会使用比移值（Rf值）进行样品的定性和定量分析。
二、实验原理薄层层析是一种利用固体吸附剂（如硅胶、氧化铝等）对混合物中各组分进行分离的技术。
在TLC实验中，样品被点在薄层板上，然后置于展开剂中。
由于样品中各组分的极性不同，它们在展开剂中的迁移速度也不同，从而实现分离。
三、实验仪器与药品1. 仪器：薄层板、点样器、层析缸、显色剂、烘箱、显微镜等。
2. 药品：硅胶、氧化铝、展开剂、显色剂、待分离的混合物等。
四、实验步骤1. 样品制备：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，制成适当浓度的溶液。
2. 点样：用点样器将样品溶液点在薄层板的一端，点样点应尽量小而圆。
3. 层析：将点有样品的薄层板置于层析缸中，加入适量展开剂，使展开剂液面略高于点样线。
待展开剂到达薄层板另一端时，取出薄层板，晾干。
4. 显色：根据样品的性质选择合适的显色剂，将显色剂喷洒在薄层板上，或将薄层板置于加热的显色剂中。
5. 观察与分析：观察薄层板上出现的色斑，测量色斑与点样线的距离，计算比移值（Rf值）。
五、实验结果与分析1. 样品分离：根据薄层板上出现的色斑数量和位置，可以初步判断样品中各组分的种类。
2. 比移值（Rf值）：比移值是样品中某一组分在展开剂中的迁移距离与展开剂前沿距离的比值。
通过比较不同组分的Rf值，可以进一步判断它们的相对极性。
3. 定量分析：通过测量样品中某一组分的峰面积或颜色深度，可以对其进行定量分析。
六、实验讨论1. 展开剂的选择对样品的分离效果有很大影响。
应根据样品的性质选择合适的展开剂。
2. 点样点的形状和大小对分离效果也有一定影响。
点样点应尽量小而圆。
3. 显色剂的选择对样品的鉴定和定量分析也很重要。
七、实验结论通过本次实验，我们掌握了薄层层析的基本原理和操作步骤，学会了使用比移值进行样品的定性和定量分析。
薄层色谱(TLC)的使用指南
TLC铺板经验大全！！！薄层色谱（TLC）的使用指南综述：薄层色谱（TLC）是一种非常有用的跟踪反应的手段，还可以用于柱色谱分离中合适溶剂的选择。
薄层色谱常用的固定相有氧化铝或硅胶，它们是极性很大（标准）或者是非极性的（反相）。
流动相则是一种极性待选的溶剂。
在大多数实验室实验中，都将使用标准硅胶板。
将溶液中的反应混合物点在薄板上，然后利用毛细作用使溶剂（或混合溶剂）沿板向上移动进行展开。
根据混合物中组分的极性，不同化合物将会在薄板上移动不同的距离。
极性强的化合物会“粘”在极性的硅胶上，在薄板上移动的距离比较短。
而非极性的物质将会在流动的溶剂相中保留较长的时间从而在板上移动较大的距离。
化合物移动的距离大小用Rf值来表达。
这是一个位于0～1之间的数值，它的定义为：化合物距离基线（最先点样时已经确定）的距离除以溶剂的前锋距离基线的距离。
薄层色谱（TLC）实验步骤：1) 切割薄板。
通常，买来的硅胶板都是方形的玻璃板，必需用钻石头玻璃刀按照模板的形状进行切割。
在切割玻璃之前，用尺子和铅笔在薄板的硅胶面上轻轻地标出基线的位置（注意不要损坏硅胶面）。
借助锋利的玻璃切割刀和一把引导尺，你便可方便地进行玻璃切割。
当整块玻璃被切割后，你就可以进一步将其分成若干独立的小块了。
（开始的时候，也许你会感到有一些难度，但经过一些训练以后，你便会熟练地掌握该项技术。
）2) 选取合适的溶剂体系。
化合物在薄板上移动距离的多少取决于所选取的溶剂不同。
在戊烷和己烷等非极性溶剂中，大多数极性物质不会移动，但是非极性化合物会在薄板上移动一定距离。
相反，极性溶剂通常会将非极性的化合物推到溶剂的前段而将极性化合物推离基线。
一个好的溶剂体系应该使混合物中所有的化合物都离开基线，但并不使所有化合物都到达溶剂前端，Rf值最好在0.15~0.85之间。
虽然这个条件不一定都能满足，但这应该作为薄层色谱分析的目标（在柱色谱中，合适的溶剂应该满足Rf在0.2~0.3之间）。
薄层板的铺制、活化、点板、展层、显色及Rf的计算
实验项目一1、实验项目名称：薄层板的铺制、活化、点板、展层、显色及R f 的计算。
2、实验项目性质：验证性。
3、实验要求：必修。
4、计划学时数：6 学时。
5、实验内容：（1）硅胶薄层板的铺制薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。
把欲分离的样品点在薄层板的一端，然后将点样端浸入适宜的展开剂中, 在密闭的层析缸中展开，使混合物得以分离的方法。
由于层析在薄层上进行故而得名。
薄层层析是一种微量、快速的层析方法。
它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定，还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。
先做一下准备工作：玻板（约io x 6cm羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液配成0.5%溶液，CMC-Ns一般是要煮的，煮的时候应该缓缓加入CMC-Na 否则容易结成团块，影响浓度；煮好后一般放个两三天后，取上层清液使用，如果急着使用，也可以用过滤的方法。
硅胶H （小于260 目）硅胶：CMC-Na=1g：3mL研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。
匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。
铺好的板，用手捏起来，平着一放，摔一摔，让玻板上的硅胶铺得更均匀。
铺好的硅胶板，放置过夜，就可使用，想活化的也可活化。
即移入烘箱，缓慢升温至 105-110 C 恒温活化半小时，取出放入干燥器中备用。
(3)硅胶薄层板的展层用点样毛细管取少量溶液点于硅胶板(离板底部大约0.5cm )。
将点好样品的薄层板 放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点 2-3mm 为宜(切勿将样点侵入展开剂 中)，密封顶盖，待展开至溶剂前沿达到规定的展距，取出薄层板，晾干。
(4)硅胶薄层板的显色及 R f 的计算分离的化合物若有颜色，很容易识别出来各个样点。
但多数情况下化合物没有颜色，要识别样点，必须使样点显色。
实验三 薄层色谱
实验三薄层色谱一．实验目的要求1．学习薄层色谱分离原理及方法。
2．学习薄层色谱的基本操作技术。
3．掌握手工涂布、薄板活化、点样、展开、显色等基本操作。
二．实验原理薄层色谱属于固—液吸附色谱。
样品在涂在玻璃板上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相，又称展开剂）之间进行分离。
由于各种化合物的吸附能力各不相同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。
比移值(Rf值)：是表示色谱图上斑点位置的一个数值，他可用下式计算：Rf=a/b。
图3—1 色谱中斑点位置鉴定图3—2直立式展开式中：a—溶质的最高浓度中心至样点中心的距离；b—溶剂前沿至样点中心的距离。
良好的分离，Rf值应在0.15～0.75之间，否则应该调换展开剂重新展开。
三．实验步骤1．吸附剂薄层色谱的吸附剂最常用的是硅胶和氧化铝，其颗粒大小一般为260目以上。
颗粒太大，展开时速度快，分离效果不好；反之，颗粒太小，溶剂移动太慢，斑点不集中，效果也不理想。
吸附剂的活性与其含水量有关，含水量越低，活性越高。
化合物的吸附能力与分子极性有关，分子越强，吸附能力越大。
国产硅胶：硅胶G、硅胶H＆硅胶F254，后者使用之后可在紫外灯下观察，有机化合物在亮的荧光板上盛暗色斑点。
硅胶常用于湿法铺层。
本实验用硅胶G2．展开剂选择薄层色谱展开剂的选择，主要根据样品中各组分的极性、溶剂对于样品中各组分溶解度等因素来考虑。
展开剂的极性越大，对化合物的洗脱力也越大。
选择展开剂时，除参照资料提供的溶剂极性来选择外，更多地采用试验的方法，在一块薄层板上进行试验：①若所选展开剂使混合物中所有的组分点都移到了溶剂前沿，此溶剂的极性过强；②若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动，留在了原点上，此溶剂的极性过弱。
当一种溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。
先用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组合。
聚酰胺薄层色谱rf值洗脱顺序
聚酰胺薄层色谱rf值洗脱顺序
【提问】“各种溶液在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强，可大致排列成下列顺序：
水→甲醇→氢氧化钠水溶液→甲酰胺→二甲基甲酰胺→尿素水溶液”
顺序是依照什么排出的？
【答案】答案:根据溶液的极性。
从左到右是极性从大到小的顺序。
【追问】为什么溶液极性大时洗脱能力弱？
【答案】答案:溶剂的影响:被吸附化合物在溶剂中的溶解度对吸附性能也有一定的影响。
通常一种物质在某种溶剂中的溶解度大，所以树脂对这种物质的吸附就弱。
比如有机酸盐或生物碱盐在水中的溶解度很大，所以树脂的吸附能力弱。
洗脱剂的影响：根据极性“相似相溶”的原理，对非极性大孔吸附树脂来说，洗脱剂极性越小，其洗脱能力越强，而对于中极性大孔吸附树脂和极性较大化合物，则用极性较大的溶剂较为合适。
★问题所属科目：执业药师---中药化学。
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薄层Rf 值
薄层色谱法中原点到斑点中心（origin) 的距离与原点到溶剂前沿(solvent front) 的距离的比值
是色谱法中表示组分移动位置的一种方法的参数。
定义为溶质迁移距离与流动相迁移距离之比。
在一定的色谱条件下，特定化合物的Rf值是一个常数，因此有可能根据化合物的Rf值鉴定化合物。
Rf=（distance moved from origin by component）÷（distance moved from origin by solvent）
在制备薄层板时，在大小适当的玻璃板上，均匀涂上吸附剂，厚度在一毫米以内，然后在距底边1。
5厘米处点上样品溶液，形成一个小点，称为“原点”。
再将薄层板置于盛有动相溶剂的玻缸内（此溶剂称为“展开溶剂”，玻缸称为“展开槽”）。
当溶剂沿薄层扩散到距原点以上一定距离时（一般10—12厘米），取出薄层板，记录展开溶剂扩展前沿距原点的距离A。
然后用喷洒显色试剂或紫外光线照射的方法使被分离的化合物显色，此过程称为“显谱”。
观察并记录所显斑点的中心距原点的距离。
斑点在薄层板上的位置通常用比移值（Rf）表示。
Rf值为斑点中心距原点的距离与溶剂展开前沿距原点距离的比值
Rf值是与物质在两相中分配系数相关的数值，因此，在特定条件下为一常数。
不同的物质由于在特定色谱条件下的两相间分配系数的差异，而有着不同的Rf值，这样就达到薄层色谱分离的目的。
极性溶剂概念及定义
极性溶剂指含有羟基或羰基等极性基团的溶剂，其极性强，介电常数大。
极性键与非极性键
首先化学共价键分为极性键与非极性键。
非极性键就是共用电子对没有偏移，出现在单质中比如O2；极性键就是共用电子对有偏移比如HCl。
而当偏移的非常厉害之后,看上去一边完全失电子另一边得到了电子，就会变成离子键了，如NaCl
极性分子与非极性分子
由于极性键的出现，所以就使某些分子出现了电极性，但是并不是说所有有极性键的分子都是极性分子。
比如CH4，虽然含有4个极性的C-H键，但是因为其空间上成对称的正四面体结构，所以键的极性相消，整个分子没有极性。
对于H2O，虽然与CO2有相同类型的分子式，也同样有极性共价键，但二者分子的极性却不同。
CO2是空间对称的直线型，所以分子是非极性分子，H2O是折线型，不对称，所以是极性分子，作为溶剂称为极性溶剂。
化合物的极性决定于分子中所含的官能团及分子结构。
各类化合物的极性按下列次序增加：
—CH3，—CH2—，—CH=，—CH三，—O—R，—S—R，—NO2，—N（R）2，—OCOR，—CHO，—COR,—NH2，—OH，—COOH，—SO3H 2
常用溶剂的极性顺序
水(最大) >甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇> 丙醇>丙酮>二氧六环>四氢呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚> 异丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)。