小鼠骨髓染色体实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
小鼠骨髓染色体制备及观察
1000转/分，离心10分钟，弃上清，加入固定液，混匀后， 室温放置25分钟，再次离心去上清，重复固定一次，离心后， 向沉淀中加入1ml固定液，将细胞重悬。
预冷的玻片
滴片后，将 片子晾干， 滴加适量 Giemsa染 液染色 10~15分 钟，弃去染 液，水洗， 镜检。
实验结果
苯酚品红染色效果
主要实验步骤
秋水仙素注射 解剖小鼠 离心 低渗 固定 制备细胞悬浮液 滴片 空气干燥 染色 水洗 显微镜观察结果
方法与步骤
取材前3～4 h，向腹腔内注 射秋水仙素。注射浓度随动 物种类不同而异。秋水仙素 的主要作用是使分裂细胞阻 断在有丝分裂中期，增加中 期分裂相的比例。
腹腔内注射秋水 仙素3~4小时后， 断头处死小鼠。
载玻片 （冰片）
3、实验材料
溶液配制：
一．0.01％秋水仙素：称10 mg秋水仙素，溶于100 mL生理盐水中。 二．低渗溶液：称5.59克KCl溶于1,000 mL蒸馏水中，其浓度为0.075M。 2%柠檬酸钠溶液：：称2.28克柠檬酸钠溶于100ml蒸馏水中。 Giemsa溶液
4、实验方 法
枸橼酸根与血中钙离子形成难解离的络合物， 钙离子是凝血过程中所需的物质之一，血液中 钙离子减少，而使血液凝固受阻。
#2022
低渗的作用：
思考题
一．KCl溶液低渗处理与滴片过程在染色体制片中有何 联系，对制片结果各有何影响？
二．骨髓细胞染色体标本制作时，为什么要采用冰片滴 片？冰片滴片时滴液高度有什么要求？为什么滴片 后要马上吹散？冰片温度为什么越冰越好？
结果显示
在显微镜寻找分散良好的 中期分裂相。小白鼠染色 体一般呈“U”形，都为 近端着丝粒染色体。染色 体数2n=40。 图示为吉姆萨染色效果
小鼠骨髓的综合性实验报告
小鼠骨髓的综合性实验报告本科学生综合性实验报告学号姓名学院专业、班级实验课程名称:教师及职称开课学期至学年学期填报时间年月日云南师范大学教务处编印一( 实验设计方案实验名称实验序号实验室实验时间一、实验目的1、学习并掌握小鼠骨髓细胞染色体的制备方法。
2、观察小鼠染色体的形态特征,统计细胞的染色体数目。
3、了解微核发生的机制;4、掌握微核实验的一般程序和实践意义;5、掌握对实验动物进行药物处理的一般程序;6、掌握进行实验设计的一般程序和规则，并锻炼实践能力。
二、实验原理、实验流程或装置示意图1、骨髓细胞具有高度的分裂增殖能力。
因此可以直接得到中期细胞而不必象血淋巴细胞或组织那样要经过体外培养。
经秋水仙素处理后，分裂增殖中的骨髓细胞由于纺缍体的形成受到抑制，染色体不能正常趋向两极而使之停留于中期，同时染色体缩短，轮廓清晰，把收获的细胞进行低渗，固定处理，使细胞处于膨胀状态，再将细胞悬液滴在载片上，使细胞破裂，染色体散开，染色后即可观察到染色体。
2、微核(Micronucleus):染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然遗留在细胞质中。
末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称为微核。
凡能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物，都可用微核试验来检测。
各种类型的骨髓细胞都可形成微核，但有核细胞的胞质少，微核与正常核叶及核的突起难以鉴别。
嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞由幼年发展为成熟红细胞的一个阶段，此时红细胞的主核已排出，因胞质内含有核糖体，姬姆萨染色呈灰蓝色，成熟红细胞的核糖体已消失，被染成淡桔红色。
骨髓中嗜多染红细胞数量充足，微核容易辨认，而且微核自发率低，因此，骨髓中嗜多染红细胞成为微核试验的首选细胞群。
三、实验设备及材料1、材料:小白鼠(2n=40)2、器具:注射器(1ml，5ml各一支)、托盘、解剖剪、镊子、吸管、离心管、离心机、载片、滤纸、白纱布小块等。
骨髓实验报告
实验名称：小鼠骨髓细胞染色体制备与观察实验时间：2023年10月25日实验地点：生物实验室一、实验目的1. 学习骨髓细胞染色体制备的基本方法。
2. 观察并分析小鼠骨髓细胞的染色体形态和结构。
3. 掌握显微镜观察细胞染色体的技能。
二、实验原理骨髓是人体造血的重要器官，骨髓细胞具有丰富的染色体。
通过染色体制备技术，可以将骨髓细胞的染色体进行染色和制片，便于在显微镜下观察和分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠骨髓细胞、秋水仙素、甲醇、醋酸、Giemsa染液等。
2. 仪器：显微镜、离心机、移液器、培养皿、载玻片、盖玻片、镊子等。
四、实验步骤1. 取小鼠骨髓细胞，用秋水仙素处理，使细胞染色体浓缩。
2. 收集处理后的细胞，加入甲醇和醋酸固定，进行低渗处理。
3. 将低渗细胞进行离心，制成细胞悬液。
4. 将细胞悬液滴在载玻片上，用盖玻片覆盖。
5. 将载玻片放入烤箱，进行空气干燥。
6. 将干燥后的载玻片放入Giemsa染液中染色。
7. 将染色后的载玻片取出，用蒸馏水冲洗，晾干。
8. 使用显微镜观察染色后的骨髓细胞染色体。
五、实验结果与分析1. 观察到小鼠骨髓细胞染色体呈条状，具有明显的着丝粒。
2. 染色体长度不一，有的较短，有的较长。
3. 部分染色体存在交叉现象，表明存在同源染色体。
4. 部分染色体出现断裂，可能是由于秋水仙素处理不当导致。
六、实验讨论1. 秋水仙素是一种诱导细胞有丝分裂的药物，能够使细胞染色体浓缩，便于观察。
2. 甲醇和醋酸固定能够使细胞染色体固定在一定的形态，有利于染色。
3. 低渗处理能够使细胞染色体膨胀，便于观察。
4. 染色体制备过程中，应注意操作规范，避免染色体断裂和交叉现象。
七、实验总结本次实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体，并进行了观察和分析。
通过实验，掌握了骨髓细胞染色体制备的基本方法，提高了显微镜观察细胞染色体的技能。
在实验过程中，应注意操作规范，避免染色体断裂和交叉现象。
同时，还需加强对实验原理和操作技巧的学习，为今后的实验研究打下坚实基础。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
取材，收集细胞 低渗 固定、再固定 滴片 染色
实验目的与要求：
熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。 了解小鼠染色体核型。 认识秋水仙素对细胞增殖的作用。
器材与试剂
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中心体 二、高尔基体
一、中心体（4×10）
马蛔虫子宫横切片全貌
中心体（10×10）
中心体（40×10）
二、高尔基体（4×10）
脊神经节切片
高尔基体（10×10）
高尔基体（40×10）
高尔基体（40×10）
内容与方法
小鼠骨髓细胞染色体制备 预处理
腹腔内注射秋水仙素2~3小时后，颈椎脱臼处死小鼠。
取材前2～3h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
小白鼠骨骼标本
取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。
实验二 小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
汇报人姓名
汇报时间：12月20日
Annual Work Summary Report
实验原理
小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞数量较多。
秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
作业与思考题
绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。
简述实验中应注意那些关键问题？
实验九小鼠骨髓细胞染色体标本制备
四、实验步骤
1、预处理：实验 。作用：
2、处死动物：断颈处死小白鼠， 解剖小鼠内生殖器官，鉴别雌雄性别
3、取股骨：剥取股骨，剔去肌肉 组织，剪去两端的股骨头。
11、滴片：用吸管吸取细胞悬液， 滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰 上微微加热，室温晾干。预冷载玻片 的作用：
12、染色：10% Giemsa染液染色30分 钟。
13、镜检：低倍———高倍 。
五、作业
1、选择染色体清晰，分散好的 中期分裂相，计数染色体，显微摄影、 并打印出照片。
2、分析成功或失败的原因。
4、取骨髓：注射器吸取0.6ml生 理盐水, 针头插入股骨一端,反复冲 洗骨髓到10ml的离心管中。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用
6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定；
同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具：
注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品： 0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨 髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造 血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
实验五：小鼠骨髓染色体的制备与C带染色
一.小鼠骨髓染色体的制备
【实验目的】 n 学会小鼠骨髓染色体标本的制备
【实验原理】
n 处于分裂期的细胞经秋水仙素处理,由于阻断了 纺锤丝微管的组装,使细胞分裂停止于中期,此 时染色体达到最大收缩,具有典型的形态。
n 本实验所用的小鼠骨髓细胞具有高度的分裂活 性并且数量非常多,经秋水仙素处理后,可使分 裂的细胞阻断在有丝分裂中期,再经低渗、固定、 滴片染色等处理,便可制作较好的小鼠骨髓细胞 染色体标本。
【仪器、材料和试剂】
n （一）仪器 光学显微镜,冰箱,恒温水浴锅。
n （二）材料 n 已制备好的小鼠骨髓染色体载玻片,染色缸,烧杯,镊子
等。 n （三）试剂 n 盐酸(0.2mol/l),5％Ba(OH)2(50℃预热),2×SSC溶液
(60-65℃预热),Giemsa染液
【实验步骤】
1.按上述小鼠骨髓染色体的制备步骤制备染色体
二.染色体C带的制备
【实验目的】 学会小鼠骨髓染色体C带的制备
【实验原理】
n 借助特殊的燃料及染色程序,使染色体的一定部 位呈现深浅不同的带纹,可用来鉴别染色体组, 单个染色体以及深入认识染色体的结构和功能。
n C带可使着丝粒区,端粒区的异染色质及其他染 色体区段的异染色质部分呈Giemsa深染,其他 部分呈淡染。
（三）试剂
n 1．秋水仙素:以1mg/mL的浓度溶于0.85％ 生理盐水中。
n 2．低渗液: 0.075mol/lKCl取5.59gKCl加 到1000mL蒸馏水中,在37℃下预热。
n 3．固定液:甲醇:冰醋酸以3:1配制(新鲜的)
【实验步骤】
1.取雌雄小鼠各一只,注射秋水仙素0。1mL于腹腔中,经3。54h后拉颈椎处死。 2.剪开腹腔,剥离出两条后肢,由股骨关节处剪断,取下后肢(注 意不要将股骨剪断)。 3.将骨骼外面的肌肉尽可能剪掉,剩下附着在骨骼上的少许肌 肉,用棉花或 纱布蘸75％酒精来回搓,直到骨骼外面不带任何肌肉为止。 4.剥离股骨,并将股骨头的两端减去少许,然后用4号针头插入 骨髓腔内,将股骨穿通(注意:不要用力过大,以防骨骼破裂)。
骨髓穿刺实验报告总结(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在通过骨髓穿刺技术，观察骨髓细胞的形态和数量，了解骨髓的造血功能，为临床诊断和治疗提供依据。
二、实验原理骨髓是人体重要的造血器官，骨髓穿刺是通过穿刺针从骨髓腔中抽取骨髓液，对骨髓细胞进行观察和分析，从而了解骨髓的造血功能。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 实验仪器：骨髓穿刺针、注射器、显微镜、载玻片、盖玻片、酒精灯、火柴等3. 实验试剂：肝素钠、生理盐水、甲醇、吉姆萨染液等四、实验方法1. 将小鼠麻醉，固定在实验台上。
2. 用消毒棉签擦拭小鼠的骨髓穿刺部位，酒精灯火焰消毒。
3. 使用骨髓穿刺针，从小鼠的骨髓穿刺部位穿刺入骨髓腔。
4. 用注射器抽取骨髓液，注入载玻片中，加入适量的肝素钠抗凝。
5. 用显微镜观察骨髓细胞，记录细胞数量和形态。
6. 将载玻片放入酒精灯火焰上烤干，然后用甲醇固定。
7. 用吉姆萨染液染色，观察细胞核和细胞质的染色情况。
8. 对骨髓细胞进行分类和计数。
五、实验结果1. 骨髓细胞分为红系、粒系、巨核系和淋巴细胞等。
2. 骨髓细胞数量和形态正常，符合正常骨髓细胞特征。
3. 红系细胞比例较高，说明骨髓的造血功能正常。
1. 骨髓穿刺是一种安全、简便、可靠的实验方法，可以观察骨髓细胞的形态和数量，了解骨髓的造血功能。
2. 通过骨髓穿刺实验，可以初步判断骨髓细胞的异常情况，为临床诊断和治疗提供依据。
3. 本实验中，小鼠骨髓细胞数量和形态正常，说明骨髓的造血功能正常。
七、实验总结1. 骨髓穿刺实验是临床医学和基础医学研究的重要方法之一，对于诊断和治疗血液系统疾病具有重要意义。
2. 通过本次实验，我们掌握了骨髓穿刺的操作技巧，了解了骨髓细胞的形态和数量，为今后临床实践打下了基础。
3. 在实验过程中，应注意无菌操作，避免感染。
同时，要熟悉骨髓穿刺的适应症和禁忌症，确保实验安全。
八、实验建议1. 在进行骨髓穿刺实验时，要严格遵守无菌操作规程，避免感染。
2. 对骨髓细胞进行观察和分析时，要注意细胞形态和数量的变化，以便为临床诊断和治疗提供依据。
染色体的实验报告
一、实验目的1. 掌握染色体标本的制作方法。
2. 观察并识别有丝分裂中期相的染色体形态。
3. 了解染色体的形态特征及其数目。
二、实验原理染色体是细胞核中具有遗传信息的结构，由DNA和蛋白质组成。
在细胞分裂过程中，染色体复制并分离到子细胞中，从而保证遗传信息的传递。
本实验通过制作染色体标本，观察染色体的形态特征和数目，以了解染色体的结构及其在细胞分裂中的作用。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：小鼠骨髓细胞2. 试剂：甲醇、冰醋酸、秋水仙素、生理盐水、卡诺氏固定液、Giemsa染液、载玻片、盖玻片、显微镜等四、实验步骤1. 注射：提前2小时向小鼠注射秋水仙素，使其细胞分裂。
2. 处死小鼠：处死小鼠后，剪下四肢，剔除肉等，剪碎骨。
3. 制备细胞悬液：将剪碎的骨加入生理盐水，制成细胞悬液。
4. 离心：将细胞悬液离心，取沉淀物。
5. 低渗处理：将沉淀物用生理盐水洗涤，加入低渗液，使细胞膜破裂，染色体释放。
6. 预固定：将低渗处理后的细胞用卡诺氏固定液固定，使染色体固定在特定时期。
7. 染色：将固定后的细胞用Giemsa染液染色，使染色体着色。
8. 滴片：将染色后的细胞滴在载玻片上，盖上盖玻片。
9. 观察与记录：在显微镜下观察染色体的形态特征和数目，并进行记录。
五、实验结果与分析1. 染色体形态特征：观察到的染色体呈带状，具有明显的着丝粒，染色体长度不一，数目与小鼠染色体数目一致。
2. 染色体数目：通过观察，记录小鼠染色体的数目，与文献报道的小鼠染色体数目相符。
六、实验讨论1. 秋水仙素在实验中的作用：秋水仙素可以抑制纺锤体的形成，使染色体停留在有丝分裂的中期，便于观察染色体的形态特征。
2. 染色体固定液的选择：卡诺氏固定液是一种常用的染色体固定液，可以使染色体固定在特定时期，便于观察。
3. 染色体的着色：Giemsa染液是一种常用的染色体染色剂，可以使得染色体着色，便于观察。
七、实验结论本实验成功制作了小鼠骨髓染色体标本，并观察了染色体的形态特征和数目。
小鼠骨髓染色体制备及观察
小鼠骨髓染色体制备及观察许多化学毒物具有遗传毒性基因突变：碱基置换和移码突变。
染色体畸变（structural chromosome aberration)：是指由于染色体或染色单体断裂，造成染色体或染色单体缺失或引起各种重排，从而出现染色体结构异常颜色体数目异常：整倍性和非整倍性改变。
染色体损伤的类型：☐染色体数目的改变①非整倍体：亚二倍体或超二倍体。
②整倍性改变：染色体成倍增加。
☐染色体结构的改变1.断裂和裂隙：2.微小体；较断片小而呈圆形。
3.有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝点断片。
4.无着丝点环：成环状结构。
5.插入/重复8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等整倍性畸变非整倍性畸变如何评价化合物的遗传毒性？鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）：是最常用的检查基因突变的方法。
检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力☐评价染色体损伤的试验方法包括：常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验 体外培养细胞或者体内染色体畸变试验2、实验原理☐有丝分裂：真核细胞的染色质凝集成染色体，复制的姐妹染色单体在纺锤丝的牵拉下分向细胞的两极，从而产生两个染色体数目和遗传性相同的子细胞的一种细胞分裂的类型。
☐细胞周期：从一次有丝分裂完成时开始，到下一次有丝分裂结束时为止，成为一个细胞周期。
G1：从有丝分裂结束到DNA 复制之前；S: DNA 合成；G2：DNA 复制结束到有丝分裂开始；M ：有丝分裂期✓增殖群细胞，细胞始终保持分裂能力，持续进入分裂循环；✓不再增殖细胞，比如神经细胞；✓暂不增殖细胞，比如肝脏细胞。
端着丝粒染色体。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
细胞培养：在适宜的条件下将细胞从体内分离出来进行体外培养 传代：将培养的细胞按照一定的比例进行分装使细胞能够继续生长
制备前的准备：选 择合适的细胞培养 并维持细胞生长。
细胞固定：使用固 定剂将细胞固定在 一定位置防止细胞 移动。
细胞染色：根据实 验需求选择合适的 染色剂进行染色。
观察与拍照：使用 显微镜观察染色后 的细胞并记录照片 。
小鼠骨髓细胞染色体 制备与观察
汇报人：
目录
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实验准备
染色体制备
观察和分析
实验结论
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实验准备
小鼠骨髓细胞
培养基
胰蛋白酶
秋水仙碱
实验仪器：显微镜、离心机、细胞培养皿、细胞 刮刀等
实验试剂：生理盐水、胰蛋白酶、甲醇、冰醋酸、 Giems染料等
准备实验器材：显微镜、染色剂、 细胞培养皿等
染色体测量：使用显微测微尺等工具测量染色体的长度、宽度、着丝粒位置等特征有助于分析染色体的形态和结 构。
染色体组型分析：根据染色体的数目、形态和结构特征进行染色体组型分析有助于了解小鼠骨髓细胞的遗传特征 和变异情况。
染色体核型分析：通过观察染色体的数目、形态和排列方式分析染色体的核型有助于了解小鼠骨髓细胞的染色体 异常和遗传疾病。
实验前要洗手戴手套避免手上的杂 菌污染细胞。
染色体制备过程中要控制好温度和 时间避免温度过高或时间过长导致 细胞死亡。
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染色体制备过程中要保持细胞活性 避免细胞死亡。
染色体制备过程中要选择适当的染 色剂避免使用过多的染色剂导致细 胞死亡。
观察和分析
观察步骤：将制备好的小鼠骨髓细胞染色体放在显微镜下调整焦距观察染色体的形态和分布
实验报告骨髓细胞(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解骨髓细胞染色体制备的基本原理和操作步骤。
2. 掌握染色体制片技术，观察骨髓细胞染色体结构。
3. 熟悉显微镜的使用方法，提高观察细胞结构的能力。
二、实验原理骨髓细胞染色体制备是研究染色体结构、数量及异常的重要方法。
通过染色体制备，可以在显微镜下观察到细胞的染色体结构，从而分析细胞的遗传特性。
本实验采用小鼠骨髓细胞作为实验材料，通过秋水仙素处理使细胞分裂阻滞在中期，再进行低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，制备染色体标本。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠骨髓细胞、秋水仙素、柠檬酸钠、固定液、染色液等。
2. 实验仪器：显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、滴管、烧杯等。
四、实验步骤1. 实验前准备：将小鼠处死，取出骨髓组织，放入装有柠檬酸钠的小烧杯中，用剪刀剪碎，使骨髓细胞游离出来。
2. 低渗处理：将骨髓细胞悬浮液放入离心管中，离心后弃去上清液，加入适量固定液，再次离心，弃去上清液。
3. 染色：将固定后的细胞沉淀用染色液染色，室温放置10-15分钟。
4. 滴片：将染色后的细胞沉淀用滴管滴在载玻片上，盖上盖玻片，用显微镜观察。
五、实验结果与分析1. 观察到细胞呈圆形，细胞核较大，染色质清晰可见，染色体呈X形，可见有丝分裂中期细胞。
2. 观察到染色体数目与小鼠的正常染色体数目一致，染色体结构完整，无断裂、缺失、易位等异常。
六、实验讨论1. 秋水仙素处理：秋水仙素是一种细胞分裂抑制剂，能使细胞分裂阻滞在中期，有利于观察染色体结构。
2. 低渗处理：低渗处理可以使细胞膨胀，便于观察染色体结构。
3. 固定：固定可以使细胞和染色体保持原状，便于观察。
4. 染色：染色可以使染色体着色，便于观察。
七、实验总结本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本，并观察到了染色体结构。
通过本实验，我们掌握了染色体制备的基本原理和操作步骤，提高了观察细胞结构的能力。
在今后的实验中，我们将进一步学习染色体分析技术，为遗传学研究提供有力支持。
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的观察
四、实验步骤
1.预处理：实验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml， 给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2.断颈处死动物.
3.剥取股骨和胫骨，剔去肌肉组织，剪去两端的股 骨头
4.冲洗骨髓：吸取2%柠檬酸钠,注射器针头插入骨 一端,反复冲洗骨髓,取6ml至离心管中.1000rpm 离心5min,弃上清.
染色体
介于4～5号
介于18～19号
家兔
44
中央、亚中央近端着丝粒 亚中央着丝粒染色 近端着丝粒染色体，
染色体
体，介于5～6号 介于19～20号
六、注意事项
低渗与离心等步骤的操作要轻。 观察细胞的标准为：
1.细胞完整，轮廓清晰，染色体分布在同一水平面上
2.染色体形态和分布良好。 3.最好无重叠，即使有个别重叠，也要能明确辩认，
制得好的标本应是细胞多、颜色为紫红色。 此时间期细胞由于低渗和固定处理，细胞膜和质 已被去掉，镜下看到的仅为膨胀后呈圆形的细胞 核。分裂期细胞染色体集中在一起，其外也无细 胞膜包裹，染色体之间无重叠，易分辨，臂的长 度适中。但最重要的是分裂相要多。
2012年11月（生技101班）
2012年11月（生技101班）
8.离心：1000rpm离心6分钟，弃上清液。
9.固定II：同固定I。 10.离心：同8离心后,加1mL固定液，吸管吹打成
细胞悬液。 11.滴片：用吸管吸取细胞悬液，滴在预冷的载玻
片上，室温晾干 12.染色：10% Giemsa染液染色30分钟
五、实验结果
在显微镜下观察Giemsa染色之后的染色体 片(染色体呈紫红色)，找出分散适度的中期染色 体图象, 观察小白鼠的染色体形态，统计其染色 体数目。
以免差错。 4.所观察的细胞处于同一有丝分裂阶段，即染色体螺
遗传学实验报告：小鼠骨髓染色体标本制备
小鼠骨髓染色体标本制备实验报告一、实验目的掌握实验动物骨髓染色体标本的一般制备方法；识别有丝分裂中期相的染色体形态；了解小鼠染色体的形态特征及其数目。
二、实验原理用于染色体制备的细胞系需要是分裂增殖旺盛的。
一般临床采用外周血细胞培养，利用植物血凝素刺激淋巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞。
动物骨髓细胞是另一种具有旺盛分裂增殖能力的细胞。
在骨髓细胞中处于分裂相的细胞数目较多。
为了有效积累更多的有丝分裂中期细胞，可在收集骨髓细胞前用秋水仙素对其进行处理，其作用是抑制细胞分裂过程纺锤丝的形成，使细胞有丝分裂停止于中期，可以积累中期分裂相细胞，以便于染色标本的制备。
制备过程中用KCL低渗处理，可使细胞体积膨大，染色体分散。
低渗后，需要用固定液固定染色体。
高位滴片和吹散滴液，可使染色体进一步分散。
用预冷的载玻片滴片后，迅速过火，可使染色体进一步扩散和固定，以便于制片和观察分析。
通过制备小鼠骨髓染色体标本，可以评价毒性物质对动物细胞染色体的影响。
本法可应用于环境致突变剂的检测，具有简单、直接、利于掌握的特点，普通实验室均可应用。
因此本法是检测有害物质对机体遗传物质损伤的常用实验方法之一。
三、实验步骤1、取材：小鼠股骨骨髓细胞取材前4小鼠于小鼠腹腔内注入0.04%的秋水仙素（0.01ml/10g）以积累中期分裂相。
颈椎脱臼法处死小鼠，取其两侧股骨。
将处死后的小鼠腹面朝上，用酒精棉球将皮毛擦拭干净，从外生殖口剪开皮肤，剃净肌肉及内脏，用酒精纱布清除其上粘附的肌肉及结缔组织。
剔除干净后，用剪刀剪去股骨两端少许骨垢及骨皮质，暴露出红骨髓，用5ml预温37℃的0.075M KCL分两次分别从股骨两端冲洗骨髓腔，将冲洗液收集到同一5ml刻度离心管中。
2、低渗：用吸管吸打混匀骨髓细胞，将离心管放置在37℃恒温箱中，低渗处理15-20分钟，使细胞膨胀，染色体分散。
3、预固定：低渗处理完，加入低渗细胞中2-3滴现配的现配的固定液（甲醇：冰醋酸=3:1），立即吹打均匀，平衡后离心，2500rpm，离心5min，去上清，留沉淀。
实验6小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
4、预固定：加1mlCarnoy 、预固定： 固定液混匀 配平， 混匀， 固定液混匀，配平，离心 1000rpm/8分钟。 分钟。 分钟
3、低渗：37度恒温水浴 分钟。 3、低渗：37度恒温水浴30分钟。 度恒温水浴30分钟
5、固定：弃上清，再加 、固定：弃上清， Carnoy 固定液至 固定液至6ml刻度， 刻度， 刻度 悬浮，静置20分钟 分钟， 悬浮，静置 分钟，离心 同上。 同上。
实验原理
小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性， 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。 数量较多。
秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成， 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内， 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
收集到离心管中, 收集到离心管中
定容至6ml. 定容至
滴片： 滴片：
滴于玻片上， 滴1~2滴于玻片上，吹气， 滴于玻片上 吹气， 在酒精灯火焰过火2~3次， 次 在酒精灯火焰过火 做记号，凉干， 做记号，凉干，染色
作业与思考题
1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞 、 染色体中期分裂相。 染色体中期分裂相。 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液 、本实验中秋水仙素、低渗液、 各起什么作用？ 各起什么作用？ 3、简述实验中应注意那些关键问题？ 、简述实验中应注意那些关键问题？
内容与方法
1、动物预处理：取材前 、动物预处理： 3~4小时，腹腔注射 小时， 小时 0.01%的秋水仙素。 的秋水仙素。 的秋水仙素 2、取材：处死小白鼠，剥取股 、取材：处死小白鼠， 暴露骨髓腔， 骨，暴露骨髓腔，用4~5ml KCl 冲洗骨髓腔获得骨髓细胞， 洗骨髓腔获得骨髓细胞，定容 至6ml。 。
小鼠骨髓细胞染色体的制备
10. 将干净载玻片事先预浸在0 ℃冰水中，用时 取出，将载玻片倾斜45o，用吸管取细胞悬 液。滴在载玻片上1~2滴（避免重叠），立 即用力吹散，使细胞分散均匀，然后置酒 精灯上微微加热干燥。 11. 取晾干的玻片，用Giemsa染液染色5~15min ，自来水冲洗，自然干燥。 12 . 镜检：显微镜下观察染色体制片的情况。
的形态。
实验十一 小鼠骨髓细胞染色体的
制备
一、实验目的
1 .掌握小鼠骨髓细胞染色体制备方法
2 .观察染色体的形态特征以及数目
二、实验原理
用适量的秋水仙素溶液注入动物体内，处于分裂 期的细胞经秋水仙素处理，由于阻断了纺锤丝的形 成，使细胞分裂处于中期，此时的染色体具有典型 的形态。骨髓中具有丰富的细胞，这些细胞具有高 度的分裂活性，经秋水仙素处理后，可使分裂期细 胞处在有丝分裂中期，再经过低渗处理、固定、滴 片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞染色体的 标本。
5. 加0.075M KCl(事先在37 ℃温箱中预热)3~4ml ，用吸管抽打均匀后，置于37 ℃温箱中低渗 处理30 min. 6. 低渗处理后，1000rpm离心10min去上清，仅 保留0.5ml上清，用吸管轻轻吹打均匀。 7. 加入新配置的卡诺固定液4~5ml，同时用吸管 轻轻吹打均匀，静置20min。 8. 1000rpm离心10min,去上清，再加入卡诺固定 液4~5ml，固定15min。 9. 1000rpm离心10min,去上清，约剩0.5ml左右上 清，用吸管吹打成悬液。
三、实验步骤
1. 取小白鼠一只，体重20g左右，在实验前3.5~ 4 h 腹腔注射0.80g/L的秋水仙素0.2毫升。 2. 实验开始时，小鼠拉颈椎处死，取两侧股骨， 用酒精纱布擦去股骨上的肌肉。 3. 针插入骨髓腔内，将骨髓腔穿通，然后用1ml 注射器插入，置于含有5ml0.85%生理盐水的 离心管，反复抽打，使骨髓腔内的骨髓细胞 全部冲洗到离心管中。 4. 在1000rpm离心10min，弃上清。
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察一、实验目的了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。
观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。
利用显微照相技术对所得切片进行照相。
二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。
因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。
进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。
如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。
这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。
对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。
对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。
人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。
三、实验用具及材料实验材料：体重20克左右的小鼠一只实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸光学显微镜、带数码相机的光学显微镜四、实验步骤1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。
2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。
收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。
3低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。
4固定：之后取出并加1ml的固定液，吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。
5离心：然后将1000rpm离心10分钟，弃去上清。
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实验课名称遗传学实验实验名称小鼠骨髓细胞染色体的制备与观察成绩________________
姓名王大锤实验报告系列年级学号组别时间温度
实验原理及目的
实验目的
1、学习小鼠骨髓细胞染色体制片程序；
2、掌握空气干燥法制片方法；
3、观察了解小鼠的端着丝粒染色体的形态。
实验原理
1、染色体标本
制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是其它技术（如显带、原位杂交等）的先决条件。
2、骨髓细胞染色体
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
动物染色体制备最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。
在骨髓细胞中，有丝分裂的指数很高，可以直接得到中期细胞而不必像血淋巴细胞或其它组织需要经过体外培养。
3、空气干燥法
指细胞经过秋水仙素处理、低渗处理、充分固定和滴片等步骤之后，使载片在空气中自然干燥的方法。
实验材料、仪器及试齐U
仪器：
光学显微镜，2mL注射器，5号针头，10mL刻度离心管，吸管，试管，试管架，载玻片，盖片，离心机，光学显微镜，解剖器具（解剖盘，剪子、镊子）。
材料：
小白鼠（Mus musculus 2n=40 ）,体重约18-20g （65-90日龄），雌雄皆可。
试剂及其他：
秋水仙素溶液（100卩g/mL）, 2%柠檬酸钠溶液，0.075M KCl，冰醋酸，甲醇，Giemsa原液, 0.01 M 磷酸缓冲液（PBS, pH 7.4）1•预处理生命与环境科学学院实验报告
进行秋水仙素处理。
取骨髓前3-4h给小鼠经腹腔注入秋水仙素（100卩g/ mL）0.3-0.4mL。
2. 取骨髓
处死动物，立即取后肢骨。
用剪刀剪掉、清除腿部的皮肤和肌肉，然后从股骨两端关节头处剪下股骨，立即用2%柠檬酸钠溶液冲洗干净。
剪掉股骨两端膨大的关节头，使其露出骨髓腔，用吸有适当量的柠檬酸钠溶液注射器，从一端插入注射针头，将骨髓吹入10mL刻度离心管中，可反复吹洗数次，直至股骨变白为止。
此时离心管中的细胞悬浮液可达4〜6mL。
3. 低渗处理
将所获得的细胞悬浮液经1500rpm离心10min，吸去上清液；加0.075M KCl 6〜8 mL ,立即将细胞团吹散打匀。
室温下静止15 min。
4. 固定
低渗处理后的细胞，立即经1500rpm离心10 min。
吸去上清液，沿管壁加7 mL 3 : 1甲醇冰醋酸固定液，马上吹散细胞团，使其在固定液中悬浮均匀。
静止固定40 min。
离心后弃去上清液。
用1: 1甲醇冰醋酸固定液再次固定，20min后弃去上清液，仅留约约1mL的细胞团和上清液，摇匀制成细胞悬液。
5. 滴片和空气干燥
取事先在冰水中预冷的载玻片，滴1〜2滴细胞悬液于粘有冰水的载玻片上，立即用吸管轻轻吹
气，使细胞迅速分散。
将制片平放或45。
斜放，待其自然干燥。
6. 染色
取经过空气干燥的染色体制片插入染色缸中，用Giemsa染液进行染色，将染液用吸管缓缓地加入，不要形成气泡。
染色30min后，用蒸馏水冲洗。
7. 观察
①在低倍镜下观察Giemsa染色之后的中期分裂相的形态。
②在高倍镜下选择分散适度，不重叠的染色体的分裂相，在油镜下进行观察，获取图像。
③观察小鼠染色体的端着丝点染色体的特征，识别着丝点、染色单体、染色体。
④计算2n的染色体数目。
寻找两性之间在核型上的差别。
实验步骤
实验结果
cf亠：勺》,
J c e A 4 八；& a v 协 u o
少2
a.雄鼠
b.雌鼠
图1小鼠骨髓细胞染色体(1000沟
分析讨论
1. 获取不同时期染色体的图像，以图像说明小鼠细胞染色体的基本特征。
如图1,小鼠骨髓细胞染色体形态上多为中部着丝粒染色体，染色体数目2n= 40,雄性小鼠有一条染色体略小，即Y染色体。
2. 讨论要获得较好的有丝分裂相需要注意哪些问题。
1) 秋水仙素的注射：秋水仙素可以使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，这样使得染色体停在中期状态，因此处于细胞分裂中期的细胞在整个分裂期中占的
比例会提升，有利于观察结果。
2) 取骨：取骨要取小鼠大腿骨，特别注意取骨后一定要把肌肉除净，否则最后的制片会受到影响，即影响有丝分裂相的观察。
3) 低渗处理：低渗液可以使细胞充分吸水膨胀而不破裂，从而一直保持在胀得很大而又没有破裂的状态。
进而使得细胞内的中期染色体就能够足够分散开
来，从而使得经固定等步骤后仍然处于膨胀状态。
之后经过滴片时的摔打和骤降温过程，使细胞很快破碎，染色体进一步分散开。
如果细胞低渗处理不
够，在细胞从高处掉下也无法摔碎，染色体将难以观察。