病毒感染的检查方法与防治原则
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病毒感染检查方法和防治原则
标本中的细菌或真菌等生长繁殖。尽量及时接种，如不能当时接种， 标本应保存在-70℃低温冰柜或液氮中。
• 供血清学检测的标本采集原则
– 取急性期（发病初期）和恢复期（病后1个月）双份血清，动态观 察双份血清抗体效价
二、病毒的分离
三 大
动物接种-动物模型
培 鸡胚培养
养
方 法
细胞培养
原代细胞培养 二倍体细胞培养
病毒在细胞内增殖的指征：
– 病毒致细胞病变效应（cytopathogenic effect, CPE）
• 病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱 缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。
• 普通光学倒置显微镜可观察
正常细胞
CPE
– 红细胞吸附现象
• 带有血凝素的病毒（如流感病毒）感染细胞后， 细胞膜上可出现病毒血凝素，能与加入的脊椎动 物（豚鼠、鸡、猴等）红细胞结合
第25章 病毒感染的检查方法和防治原则
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检： • 供分离病毒、检出核酸及抗原的标本采集原则
– 采集时间：发病初期（急性期）采集标本 – 标本类型：在感染部位采取，不同感染取不同部位的标本 – 标本运输：尽快冷藏送检，标本在处理、接种前切忌反复冻融 – 标本的处理与储存：采集标本时注意无菌操作。使用抗生素以抑制
减毒活疫苗：
Sabin脊髓灰质炎疫苗、风疹疫苗 麻疹疫苗、水痘疫苗、腮腺炎疫苗 甲型肝炎疫苗、乙型脑炎疫苗
其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗 等
• 人工主动免疫
– 灭活疫苗和减毒活疫苗
特点
免疫持续时间 保护力（与自然感染接近程度） 免疫球蛋白产生 粘膜免疫产生 细胞介导免疫产生 毒力回复 疫苗病毒运输和使用中的扩散 受宿主其他病毒干扰 室温稳定性
• 供血清学检测的标本采集原则
– 取急性期（发病初期）和恢复期（病后1个月）双份血清，动态观 察双份血清抗体效价
二、病毒的分离
三 大
动物接种-动物模型
培 鸡胚培养
养
方 法
细胞培养
原代细胞培养 二倍体细胞培养
病毒在细胞内增殖的指征：
– 病毒致细胞病变效应（cytopathogenic effect, CPE）
• 病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱 缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。
• 普通光学倒置显微镜可观察
正常细胞
CPE
– 红细胞吸附现象
• 带有血凝素的病毒（如流感病毒）感染细胞后， 细胞膜上可出现病毒血凝素，能与加入的脊椎动 物（豚鼠、鸡、猴等）红细胞结合
第25章 病毒感染的检查方法和防治原则
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检： • 供分离病毒、检出核酸及抗原的标本采集原则
– 采集时间：发病初期（急性期）采集标本 – 标本类型：在感染部位采取，不同感染取不同部位的标本 – 标本运输：尽快冷藏送检，标本在处理、接种前切忌反复冻融 – 标本的处理与储存：采集标本时注意无菌操作。使用抗生素以抑制
减毒活疫苗：
Sabin脊髓灰质炎疫苗、风疹疫苗 麻疹疫苗、水痘疫苗、腮腺炎疫苗 甲型肝炎疫苗、乙型脑炎疫苗
其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗 等
• 人工主动免疫
– 灭活疫苗和减毒活疫苗
特点
免疫持续时间 保护力（与自然感染接近程度） 免疫球蛋白产生 粘膜免疫产生 细胞介导免疫产生 毒力回复 疫苗病毒运输和使用中的扩散 受宿主其他病毒干扰 室温稳定性
(22、24)病毒的基本性状检查方法与防治原则
enveloped viruses
裂解（Disintegration）
naked virus
复制周期 (replication cycle)
病 毒 的 复 制 过 程
(二) 异常增殖与干扰现象
1. 异常增殖
顿挫感染(abortive infection)：病毒进入宿主细胞后 缺乏病毒复制所需的酶、能量和原料，不能复制出 有感染性的病毒颗粒；或虽合成部分或全部病毒成 分，但不能组装和释放出有感染型的病毒颗粒。
有包膜的为包膜病毒；无包膜的为裸露病毒。
病毒体结构模式图
包膜子粒
包膜
壳粒
包膜 病毒
衣壳
核衣壳
核心
基本结构
衣 壳
核心(nucleic acid)：位于 病毒体的中心，由一种 核酸构成。病毒复制、 遗传和变异的物质基础。 衣壳(capsid)：包绕在核 酸外的蛋白质外壳，由 壳粒组成，具有Ag性、 保护核酸和传染性。
急性感染后1年或数年，发生致 寻常病毒 麻疹病毒 死性的并发症。如麻疹病毒 prion
1) 杀细胞效应 (cytocidal effect)
病毒在感染细胞内增殖，引起细胞的裂解死亡
正常细胞
细胞病变作用(CPE)
2) 稳定状态感染 (steady state infection)
新抗原
为特异性Ag或 CTL细胞识别
多核巨细胞
多核巨细胞
3) 包涵体 (inclusion body)
隐性感染
病毒进入机体不引起 临床症状的感染
显性感染
病毒感染后引起疾病
感 染 过 程 时 间
急性感染
病毒进入机体后，在细胞 内增殖，经数日至数周的 潜伏期后发病。 病毒在机体持续存在数月 至数年，甚至数十年。
病毒感染的实验诊断
液中。 （8）尸检标本：应在死亡后尽早采取，
采集各种器官时要分开使用器械和
容器。
最新课件
10
（二）标本的运送和保存
标本采集后注意无菌、冷冻、保湿、 立即送检。
分离培养病毒的标本要尽快送到实 验室处理和接种。如不能及时送检，可 在4℃冷藏数小时，如需较长时间保存则 应 置 -70℃ 。 放 置 在 -20℃ ， 病 毒 容 易 灭 活，冻存液中需加入甘油或二甲亚砜等 作保护，避免反复冻融使病毒灭活。
应部位采取标本，处理标本时要考虑病
毒的生物学特性。常见分离病毒标本的
选择见教材P64表4-2。
（1） 心脏疾病
（2） 中枢神经系统感染
（3） 先天或新生儿感染
（4） 胃肠道疾病
（5） 呼吸道感染
最新课件
6
3．常见标本的采集方法
（1） 血液：以无菌手续抽取抗凝血10ml， 抗凝剂可选用100u/ml肝素钠。为了血清 学检查的需要，应抽取另一管5ml血液， 不抗凝送检。
程度上取决于标本的恰当采样和处理，为了保 证标本质量，应注意以下问题：
1．采样时间 尽可能在发病的初期，急性期 或患者入院的当天进行，越早越好，最好在治 疗之前。疾病后期体内产生免疫力，病毒量减 少或消失。
最新课件
5
2．标本种类的选择
根据临床感染的症状及流行病学资
料，判断可能感染病毒的种类，选择相
清学实验；后者主要是核酸杂交与PCR 及现代免疫学技术。
最新课件
3
病毒分离培养
病原学诊断 形态学检测
病 毒
分子生物学技术——病毒核酸
学
补体结合试验
检
中和试验
验
血清学诊断 血凝抑制试验
采集各种器官时要分开使用器械和
容器。
最新课件
10
（二）标本的运送和保存
标本采集后注意无菌、冷冻、保湿、 立即送检。
分离培养病毒的标本要尽快送到实 验室处理和接种。如不能及时送检，可 在4℃冷藏数小时，如需较长时间保存则 应 置 -70℃ 。 放 置 在 -20℃ ， 病 毒 容 易 灭 活，冻存液中需加入甘油或二甲亚砜等 作保护，避免反复冻融使病毒灭活。
应部位采取标本，处理标本时要考虑病
毒的生物学特性。常见分离病毒标本的
选择见教材P64表4-2。
（1） 心脏疾病
（2） 中枢神经系统感染
（3） 先天或新生儿感染
（4） 胃肠道疾病
（5） 呼吸道感染
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6
3．常见标本的采集方法
（1） 血液：以无菌手续抽取抗凝血10ml， 抗凝剂可选用100u/ml肝素钠。为了血清 学检查的需要，应抽取另一管5ml血液， 不抗凝送检。
程度上取决于标本的恰当采样和处理，为了保 证标本质量，应注意以下问题：
1．采样时间 尽可能在发病的初期，急性期 或患者入院的当天进行，越早越好，最好在治 疗之前。疾病后期体内产生免疫力，病毒量减 少或消失。
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2．标本种类的选择
根据临床感染的症状及流行病学资
料，判断可能感染病毒的种类，选择相
清学实验；后者主要是核酸杂交与PCR 及现代免疫学技术。
最新课件
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病毒分离培养
病原学诊断 形态学检测
病 毒
分子生物学技术——病毒核酸
学
补体结合试验
检
中和试验
验
血清学诊断 血凝抑制试验
病毒感染的检查方法与防治原则
真菌产物isochromophilones Ⅰ和Ⅱ及其衍生物能抑制 HIV 包膜表面 gp120 与 T 细胞表 面 CD4 分子结合，阻止病毒吸附和穿入细胞；放线菌产物chloropeptinsⅠ和Ⅱ也能有
效抑制 HIV gp120与 T 细胞 CD4 分子结合；新霉素 B 是一种氨基糖苷类抗生素，可作
3. 蛋白酶抑制剂：沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、替拉瑞韦、波普
瑞韦、西咪匹韦 4. 整合酶抑制剂：拉替拉韦、艾维雷韦
5. 神经氨酸酶抑制剂：奥司他韦、扎那米韦
医学微生物学（第9版）
二、干扰素和干扰素诱生剂
1. 干扰素（IFN）
具有广谱抗病毒作用，毒性小，使用同种IFN无抗原性，主要用于 HBV、HCV 人类疱疹病毒和乳头瘤病毒等感染的治疗。
用病毒复制中的调控因子，阻断 RNA 与蛋白质的结合，从而干扰病毒 RNA 的复制。
医学微生物学（第9版）
五、治疗性疫苗
是一种以治疗疾病为目的的新型疫苗，主要有 DNA 疫苗和抗原抗体复合物
第二节
病毒感染的特异性预防 prevention of viral infection
医学微生物学（第9版）
一、人工主动免疫常用生物制品
1. 灭活疫苗（inactivaed vaccine） 通过理化方法将具有毒力的病毒灭活后制成灭活疫苗，这种疫苗失去了感染
性但仍保留原病毒的抗原性，常用的有肾综合征出血热疫苗、狂犬病疫苗、甲型
炎病毒VP1结构蛋白、HBsAg及狂犬病病毒刺突糖蛋白等。
4. 基因工程疫苗（genetically engineering vaccine） 采用DNA重组技术，提取编码病毒保护性抗原基因，将其插入载体，并导入细
菌、酵母菌或哺乳动物细胞中表达、纯化后制成的疫苗。例如目前已广泛使用的重
效抑制 HIV gp120与 T 细胞 CD4 分子结合；新霉素 B 是一种氨基糖苷类抗生素，可作
3. 蛋白酶抑制剂：沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、替拉瑞韦、波普
瑞韦、西咪匹韦 4. 整合酶抑制剂：拉替拉韦、艾维雷韦
5. 神经氨酸酶抑制剂：奥司他韦、扎那米韦
医学微生物学（第9版）
二、干扰素和干扰素诱生剂
1. 干扰素（IFN）
具有广谱抗病毒作用，毒性小，使用同种IFN无抗原性，主要用于 HBV、HCV 人类疱疹病毒和乳头瘤病毒等感染的治疗。
用病毒复制中的调控因子，阻断 RNA 与蛋白质的结合，从而干扰病毒 RNA 的复制。
医学微生物学（第9版）
五、治疗性疫苗
是一种以治疗疾病为目的的新型疫苗，主要有 DNA 疫苗和抗原抗体复合物
第二节
病毒感染的特异性预防 prevention of viral infection
医学微生物学（第9版）
一、人工主动免疫常用生物制品
1. 灭活疫苗（inactivaed vaccine） 通过理化方法将具有毒力的病毒灭活后制成灭活疫苗，这种疫苗失去了感染
性但仍保留原病毒的抗原性，常用的有肾综合征出血热疫苗、狂犬病疫苗、甲型
炎病毒VP1结构蛋白、HBsAg及狂犬病病毒刺突糖蛋白等。
4. 基因工程疫苗（genetically engineering vaccine） 采用DNA重组技术，提取编码病毒保护性抗原基因，将其插入载体，并导入细
菌、酵母菌或哺乳动物细胞中表达、纯化后制成的疫苗。例如目前已广泛使用的重
24第二十四章 病毒的感染与检查方法
显性感染
显性感染是病毒侵入机体后，引起明显的临床症 状，即病毒性传染病。
1.急性感染
一般潜伏期短，发病急，病程数日至数周 2.持续性感染 持续性感染指病毒在宿主细胞内持续数月至数十年、 甚至终身。可出现也可不出现症状，但长期携带病 毒，成为重要的传染源。
持续性病毒感染可分为三种：
（1）慢性感染：病毒感染机体后，病毒长期存在 体内，机体表现有临床症状，病程持续时间较长。 如艾滋病、慢性乙型肝炎、传染性软疣等。
抗病毒治疗
目前常用无环鸟苷、阿糖腺苷、金刚烷胺等
谢谢观赏
普通显微镜检查 电子显微镜检查
免疫标记技术
病毒核酸的检测
五、病毒感染的防治原则
人工自动免疫 1.灭活疫苗
流行性乙型脑炎疫苗、狂犬病疫苗和流感疫苗。
2.减毒活疫苗
脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗、风疹疫苗、腮腺炎疫 苗、甲肝疫苗。
3.基因工程疫苗 乙型肝炎重组疫苗
人工被动免疫
人血清丙种球蛋白、胎盘丙种球蛋白、转移因子
鸡胚培养
鸡胚对多种病毒敏感。根据病毒种类不同，可 将标本接种于鸡胚的羊膜腔、尿囊腔、卵黄囊或绒 毛尿囊膜上。
细胞培养
细胞培养最常用于培养病毒，根据细胞的来源， 染色体特性及传代次数又可分为下列类型：原代和 次代细胞培养，二倍体细胞株和传代细胞系。
病毒在细胞内增殖可引起细胞形态学改变，称为 细胞病变效应（ CPE）。常见的 CPE 有细胞圆缩、 空泡、聚集、拉丝、脱落、融合形成多核巨细胞、 形成包涵体等。
指病毒进入机体后在细胞内增殖，导致宿
主细胞溶解、死亡的作用。
2.细胞膜改变 有些病毒感染宿主细胞后并不使细胞发生溶解、死 亡，而是引起宿主细胞膜的改变： ①细胞融合 ②细胞膜上出现新抗原
《医学微生物学》第二十五章和第二十六章复习题及答案
《医学微生物学》第二十五章和第二十六章复习题及答案第二十五章病毒感染的检查方法与防治原则一、单项选择题1.进行病毒病原学检查的标本递送要求是：A.孵箱保存B.室温保存C.加入防腐剂D.冷藏速送E.加入含抗生素和蛋白质的运输培养基中冷藏速送2.细胞病变效应不包括：A.细胞圆缩.脱落B.细胞融合C.形成包涵体D.干扰现象E.胞裂解3.可用于制备病毒灭活疫苗的的理化因素是：A.紫外线B.甲醇C.甲醛D.乙醇E.乙醛4.IFN-γ的产生细胞主要是：A.活化的T细胞B.活化的B细胞C.白细胞D.成纤维细胞E.巨噬细胞5.防病毒感染最有效的方法是A.使用抗生素B.使用抗病毒化学疗剂C.使用中草药D.使用疫苗E.使用抗菌药物6.下列关于减毒活疫苗缺点的叙述，错误的是：A.偶尔可能恢复为毒力株而致病B.进入人体偶尔引起并发症C.对人体免疫系统刺激过强而引起免疫麻痹D.可能活化其他的潜伏病毒E.偶尔可能引起持续感染7.病毒的致病因素是：A.内毒素B.外毒素C.侵袭力D.表面结构E.以上均不对8.下述药物对治疗病毒感染无效的是：A.干扰素B.抗生素C.聚肌苷酸D.黄连.黄苓E.三氮唑核苷9.灭活疫苗的缺点不包括：A.需多次注射B.免疫维持时间短C.疫苗成本高D.诱导细胞免疫反应差E.可发生干扰现象降低免疫效果10.人工被动免疫最常用的制剂是：A.转移因子B.干扰素C.免疫核糖核酸D.免疫球蛋白E.白蛋白11.机体在抗病毒感染中起主要作用的是：A.干扰素B.中性粒细胞C.致敏T细胞D.中和抗体E.抗毒素二、多项选择题1.病毒在细胞内增殖的指标有：A.CPEB.干扰现象C.红细胞吸附D.细胞培养液浑浊E.免疫荧光法可检测到病毒抗原2.细胞病变包括：A.变圆B.坏死C.溶解D.脱落E.融合3.送检标本分离病毒应做到：A.冷藏.速送B.加入石碳酸防治污染C.60℃加热灭菌D.置50%甘油盐水保存运送E.加入青霉素.链霉素抗菌4.能抑制病毒核酸合成的药物是：A.金刚烷胺B.阿糖腺苷C.阿糖胞苷D.无环鸟苷E.三氮唑核苷5.临床上常取粪便标本作为检测材料的病毒是：A.甲型肝炎病毒B.狂犬病病毒C.脊髓灰质炎病毒D.乙型肝炎病毒E.EB病毒6.干扰素抗病毒作用的特点包括：A.有种属特异性B.间接作用C.发挥效应早D.广谱抗病毒作用E.低毒性三、名词解释1.CPE2.减毒活疫苗3.亚单位疫苗4.IFN四、简答题1.比较减毒活疫苗和灭活疫苗的异同？2.目前可用疫苗预防的病毒性疾病有哪些？3.其抗原性不同，人类IFN分为几种？各自有何特点？答案一、单项选择题1.E2.D3.C4.A5.D6.C7.E8.B9.E 10.D 11.C二、多项选择题1.ABCE2.ABCDE3.ABD4.BCDE5.AC6.ABCDE三、名词解释1. CPE（细胞病变效应）：在体外实验中，通过细胞培养和接种杀细胞性病毒经过一定时间后，可用显微镜观察到细胞变圆.坏死，从瓶壁脱落等现象，称细胞病变效应。
病毒感染的检查方法与防治原则e
9
Viral Growth and Cell culture Viral Detection Viral Identification Interpretation of culture results
10
People Animals: cows, chickens, mice,rats, suckling mice Embryonated eggs Organ and tissue culture Organ culture Primary tissue culture Cell lines: diploid Tumor or （immortalized ）cell line
.
1
Blood, Urine, Stool, nasal washing, nasal swab , throat swab, saliva , sputum, rectal swab, vesicle fluid( scraping or swab), tissue ,brain biopsy, cerebrospinal fluid, et al.
Characteristic histological changes:inclusion
bodies in the nucleus or cytoplasm, margination of chromatin Syncytia: multinucleated giant cells caused by virus-induced cell-cell fusion
11
CPE Hemadsorption Interfere Metabolize of cell
病原生物与免疫学基础第六章 病毒的基本特性
干扰现象的意义：能终止病毒感染，使机体康复， 属于机体非特异性免疫的一部分；给机体接种病毒减毒 活疫苗可阻止毒力较强的病毒感染；使用各种病毒性疫 苗预防接种时应避免发生干扰现象以提高免疫效果。
四、病毒的抵抗力
病毒在某些理化因素作用下可失去感染性称为灭活。 1. 物理因素：病毒耐冷不耐热，经加热56℃30分钟
2. 免疫病理损伤 体液免疫的病理损伤 细胞免疫的病理损伤 免疫抑制 免疫耐受性
二、抗病毒免疫 （一） 固有免疫
屏障作用 吞噬细胞和NK细胞作用 体液中的抗病毒物质
（二）适应性免疫
特异性体液免疫作用 特异性细胞免疫作用
第三节 病毒感染的检查方法与防治原则
一、标本采取与送检
（一）标本采集的原则和要求 1.临床评估及病程采集不同标本 2.无菌操作 3.早期采集 4.由感染部位采集 5.血清学检查的标本采取
（四）防治原则
1．人工主动免疫 ①灭活疫苗 ②减毒活疫苗 ③基因工程疫苗
2．人工被动免疫 免疫血清、人血清丙种球蛋白等
3． 干扰素治疗 4 ．化学药物治疗 5 ．中草药治疗
第二篇 病原微生物
第六章 病毒的基本特性
第一节 病毒的生物学性状 第二节 病毒与宿主的相互关系 第三节 病毒感染的检查方法与防治原则
病毒（Virus）是一类个体微小，结构简单 的非细胞型微生物。主要特点是其基本结构由 白质与核酸组成，基因组只含一种核酸（DNA 或RNA），缺乏产生能量的酶系统，对抗生素 不敏感，只能寄生在敏感的宿主细胞内以复制 方式进行增殖。
或100℃几秒钟即可被灭活。病毒在 pH6.0～9.0的 范围内比较稳定；X射线、紫外线等均可破坏病毒。 2. 化学因素：包膜病毒对脂溶剂敏感。病毒对过氧化 氢、高锰酸钾、含氯石灰、碘和碘化物很敏感，卤素 类化学物质是病毒的有效灭活剂。抗生素对病毒无抑 制作用，某些中草药如板蓝根、大青叶等对某些病毒 有一定的抑制作用。
四、病毒的抵抗力
病毒在某些理化因素作用下可失去感染性称为灭活。 1. 物理因素：病毒耐冷不耐热，经加热56℃30分钟
2. 免疫病理损伤 体液免疫的病理损伤 细胞免疫的病理损伤 免疫抑制 免疫耐受性
二、抗病毒免疫 （一） 固有免疫
屏障作用 吞噬细胞和NK细胞作用 体液中的抗病毒物质
（二）适应性免疫
特异性体液免疫作用 特异性细胞免疫作用
第三节 病毒感染的检查方法与防治原则
一、标本采取与送检
（一）标本采集的原则和要求 1.临床评估及病程采集不同标本 2.无菌操作 3.早期采集 4.由感染部位采集 5.血清学检查的标本采取
（四）防治原则
1．人工主动免疫 ①灭活疫苗 ②减毒活疫苗 ③基因工程疫苗
2．人工被动免疫 免疫血清、人血清丙种球蛋白等
3． 干扰素治疗 4 ．化学药物治疗 5 ．中草药治疗
第二篇 病原微生物
第六章 病毒的基本特性
第一节 病毒的生物学性状 第二节 病毒与宿主的相互关系 第三节 病毒感染的检查方法与防治原则
病毒（Virus）是一类个体微小，结构简单 的非细胞型微生物。主要特点是其基本结构由 白质与核酸组成，基因组只含一种核酸（DNA 或RNA），缺乏产生能量的酶系统，对抗生素 不敏感，只能寄生在敏感的宿主细胞内以复制 方式进行增殖。
或100℃几秒钟即可被灭活。病毒在 pH6.0～9.0的 范围内比较稳定；X射线、紫外线等均可破坏病毒。 2. 化学因素：包膜病毒对脂溶剂敏感。病毒对过氧化 氢、高锰酸钾、含氯石灰、碘和碘化物很敏感，卤素 类化学物质是病毒的有效灭活剂。抗生素对病毒无抑 制作用，某些中草药如板蓝根、大青叶等对某些病毒 有一定的抑制作用。
病毒基本性状、感染与免疫、诊断与防治【共58张PPT】
• 病毒体形状和大小
• 病毒体形态结构
• 对脂溶剂敏感性
二、病毒分组
• DNA病毒
• RNA病毒
• DNA 和RNA 逆转录病毒
• 嗜肝DNA病毒科（Hepadnasviridae） • 逆转录病毒科（ Retroviridae ）
三、亚病毒
1. 类病毒（Viroids）
• 很小 (250～400nt) ，杆状 RNA 分子，有二级结构
– 装配（assembly） – 成熟（maturation） – 释放（ release ）
1. 吸附和穿入
• 接触→结合→特异性吸附（病毒配体位点与细胞膜特异受体结合）
融合 --- 包膜病毒
• 穿入
胞饮 --- 无包膜病毒
HIV
2. 脱壳
--病毒在细胞内必须脱去衣壳，其核酸方可在宿主细胞中发挥指令作用 --多数病毒在穿入时已在细胞的溶酶体酶作用下脱壳并释放出病毒的基因组 --少数病毒的脱壳过程较复杂。这些病毒往往是在脱衣壳前，病毒的酶已在起转录 mRNA的作用
目录
• 病毒的基本性状
–第一部分 病毒形态、结构和基因组特点
–第二部分 病毒的增殖 –第三部分 病毒的分类
• 病毒感染与免疫
• 病毒感染的实验室诊断与防治原则
一、病毒的增殖特点
• 必须中活细胞中进行 • 敏感细胞
• 增殖方式为自我复制（self replication）
二、病毒的复制（Replication of viruses）
3. 核衣壳（Nucleocapsid）的对称形式
核衣壳：核心+衣壳
•螺旋对称型（Helical Symmetry）
•二十面体立体对称型（ Icosahedral Symmetry ）
• 病毒体形态结构
• 对脂溶剂敏感性
二、病毒分组
• DNA病毒
• RNA病毒
• DNA 和RNA 逆转录病毒
• 嗜肝DNA病毒科（Hepadnasviridae） • 逆转录病毒科（ Retroviridae ）
三、亚病毒
1. 类病毒（Viroids）
• 很小 (250～400nt) ，杆状 RNA 分子，有二级结构
– 装配（assembly） – 成熟（maturation） – 释放（ release ）
1. 吸附和穿入
• 接触→结合→特异性吸附（病毒配体位点与细胞膜特异受体结合）
融合 --- 包膜病毒
• 穿入
胞饮 --- 无包膜病毒
HIV
2. 脱壳
--病毒在细胞内必须脱去衣壳，其核酸方可在宿主细胞中发挥指令作用 --多数病毒在穿入时已在细胞的溶酶体酶作用下脱壳并释放出病毒的基因组 --少数病毒的脱壳过程较复杂。这些病毒往往是在脱衣壳前，病毒的酶已在起转录 mRNA的作用
目录
• 病毒的基本性状
–第一部分 病毒形态、结构和基因组特点
–第二部分 病毒的增殖 –第三部分 病毒的分类
• 病毒感染与免疫
• 病毒感染的实验室诊断与防治原则
一、病毒的增殖特点
• 必须中活细胞中进行 • 敏感细胞
• 增殖方式为自我复制（self replication）
二、病毒的复制（Replication of viruses）
3. 核衣壳（Nucleocapsid）的对称形式
核衣壳：核心+衣壳
•螺旋对称型（Helical Symmetry）
•二十面体立体对称型（ Icosahedral Symmetry ）
(7)病毒的实验室诊断与防治
• 二倍体细胞培养(Diploid cell cultune)
• 原代细胞只能传2-3代细胞就退化，在多数细胞 退化时，少数细胞能继续传下来，且保持染色体 数为二倍体，称为二倍体细胞。二倍体细胞生长 迅速，并可传50代保持二倍体特征，通常是胚胎 组织的成纤维细胞。
• 二倍体细胞一经建立，应尽早将细胞悬 浮于10%二甲基亚砜中，大量分装安瓿 贮存于液氮（-196℃ ）内，做为“种 子”，供以后传代用。目前多用二倍体 细胞系制备病毒疫苗，也用于病毒的实 验室诊断工作。
• （一）尽早采取
• 在发病初期（急性期）采取，较易检出 病毒，越迟阳性率越低。
• （二）部位适宜
• 由感染部位采取，如呼吸道感染采取鼻 咽洗漱液或咯痰；肠道感染采取粪便； 脑内感染采取脑脊液；皮肤感染采取病 灶组织；有病毒血症时采取血液。
• （三）冷藏速送
• 病毒离活体后在室温下很易死亡，故采得 检材应尽快送检。若距离实验室较远，应 将检材放入装有冰块或干冰的容器内送检。 污染检材，如鼻咽分泌液、粪便等应加入 青霉素、链霉素或庆大毒素等，以免杂菌 污染细胞或鸡胚，而影响病毒分离。
• 原代细胞培养(Primary cell culture)
• 用胰蛋白酶将人胚（或动物）组织分散成单细胞， 加一定培养液，37℃孵育1-2天后逐渐在培养瓶 底部长成单层细胞，如人胚肾细胞、兔肾细胞。 原代细胞均为二倍体细胞，可用于产生病毒疫苗， 如兔肾细胞生产风疹疫苗，鸡成纤维细胞产生麻 疹疫苗，猴肾细胞生产脊髓灰质炎疫苗。因原代 细胞不能持续传代培养，故不便用于诊断工作。
• 含轮状病毒的粪便标本经热变性处理，点 到膜上，使用轮状病毒体外转录的放射标 记探针做斑点杂交，敏感性高于ELISA （酶联免疫吸附剂测定enzyme linked immunosorbent assay ）。肠道病毒也可 用互补的DNA探针做斑点杂交。
《医学微生物学》教案 病毒的感染与免疫(2)第24章 病毒感染的检查方法与防治原则
2.重点
（1）干扰素定义、种类及抗病毒机理和特点。 （2）中和抗体的概念、种类及作用机制。 （3）病毒的培养方法。
3.难点：
（1）干扰素诱生、抗病毒作用机理。 （2）病毒在细胞培养中的增殖指标。 （3）抗病毒药物作用机制。
教学过程设计（包括讲授内容、教学方法、时间分配、教学媒体选用、板书、互动设计等）：
新抗生素、治疗性疫苗、治疗性抗体、基因治疗剂。
媒体选用
采用具体的举例和多媒体、彩色投影图片等多种教学手段，使抽象的理论具体化和形象化。
板书设计
（1） 抗病毒免疫。 （2） 抗病毒免疫持续时间。 （3） 抗病毒感染的检查方法。 （4） 病毒感染的特异性预防 教学小结
干扰素是病毒或其他干扰素诱生剂刺激细胞所产生的一类分泌性蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调 节等多种生物学活性；IFN 不能直接灭活病毒，而是通过诱导细胞合成抗病毒蛋白发挥抗病毒效应；病毒 中和抗体指针对病毒某些表面抗原的抗体，其作用机制为直接封闭与细胞受体结合的病毒抗原表位，或改 变病毒表面构型；阻止病毒吸附、侵入易感细胞；感染细胞内病毒的清除主要依赖于细胞免疫，构成病毒 特异性细胞免疫反应的主要效应因素是：CD8+ CTL 和 CD4+ Th1 细胞；抗病毒免疫持续时间与是否是全 身性病毒感染、病毒血清型种类和是否易发生变异有关。
（2） 熟悉标本的采集与送检；病毒感染的特异性预防。 （3） 了解细胞免疫抗病毒作用特点及机理；抗病毒免疫持续时间；病毒感染的诊断与治疗。
主要知识点、重点与难点：
1. 主要知识点
（1） 抗病毒固有免疫。 （2） 抗病毒适应性免疫。 （3） 抗病毒免疫持续时间。 （4） 病毒感染的检查方法。 （5） 病毒感染的特异性预防。 （6） 病毒感染的治疗。
（1）干扰素定义、种类及抗病毒机理和特点。 （2）中和抗体的概念、种类及作用机制。 （3）病毒的培养方法。
3.难点：
（1）干扰素诱生、抗病毒作用机理。 （2）病毒在细胞培养中的增殖指标。 （3）抗病毒药物作用机制。
教学过程设计（包括讲授内容、教学方法、时间分配、教学媒体选用、板书、互动设计等）：
新抗生素、治疗性疫苗、治疗性抗体、基因治疗剂。
媒体选用
采用具体的举例和多媒体、彩色投影图片等多种教学手段，使抽象的理论具体化和形象化。
板书设计
（1） 抗病毒免疫。 （2） 抗病毒免疫持续时间。 （3） 抗病毒感染的检查方法。 （4） 病毒感染的特异性预防 教学小结
干扰素是病毒或其他干扰素诱生剂刺激细胞所产生的一类分泌性蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调 节等多种生物学活性；IFN 不能直接灭活病毒，而是通过诱导细胞合成抗病毒蛋白发挥抗病毒效应；病毒 中和抗体指针对病毒某些表面抗原的抗体，其作用机制为直接封闭与细胞受体结合的病毒抗原表位，或改 变病毒表面构型；阻止病毒吸附、侵入易感细胞；感染细胞内病毒的清除主要依赖于细胞免疫，构成病毒 特异性细胞免疫反应的主要效应因素是：CD8+ CTL 和 CD4+ Th1 细胞；抗病毒免疫持续时间与是否是全 身性病毒感染、病毒血清型种类和是否易发生变异有关。
（2） 熟悉标本的采集与送检；病毒感染的特异性预防。 （3） 了解细胞免疫抗病毒作用特点及机理；抗病毒免疫持续时间；病毒感染的诊断与治疗。
主要知识点、重点与难点：
1. 主要知识点
（1） 抗病毒固有免疫。 （2） 抗病毒适应性免疫。 （3） 抗病毒免疫持续时间。 （4） 病毒感染的检查方法。 （5） 病毒感染的特异性预防。 （6） 病毒感染的治疗。
感染病的预防和控制措施
发挥社区和基层组织作用
调动社区和基层组织的积极性，发挥其在感染病防控中的前沿阵地 作用。
信息报告和共享平台建设
建立信息报告制度
明确感染病疫情的报告程序、时限和要求，确保疫情信息及时、准 确上报。
构建信息共享平台
利用现代信息技术手段，构建感染病防控信息共享平台，实现各部 门间信息的实时共享。
加强信息分析和利用
02
在制定治疗方案时，需充分考虑患者的基础疾病和药物过敏史
，避免药物不良反应的发生。
调整治疗方案
03
根据患者的病情变化和治疗反应，及时调整治疗方案，以达到
最佳治疗效果。
04 隔离观察与康复期管理
隔离观察原则及实施方法
早发现、早隔离
一旦发现疑似病例或确 诊病例，应立即采取隔 离措施，防止疫情扩散 。
应对措施。
03
《医院感染管理办法》
规范了医疗机构在感染防控方面的职责和要求，保障了患者和医务人员
的健康安全。
地方政府配套政策措施
地方政府根据国家法律法规，结合当 地实际情况，制定了相应的感染病防 控政策措施，如加强监测预警、落实 防控责任、加强宣传教育等。
针对特定感染病，地方政府还会制定 专门的防控方案，明确各部门职责， 协调各方力量，共同做好防控工作。
B
寄生虫性感染病
由寄生虫引起的感染病，如疟疾、血吸虫病 、蛔虫病等。这类疾病多通过虫媒或接触传 播，对人群健康造成较大威胁。
D
危害程度评估
评估因素
感染病的危害程度评估需考虑病原体的 传染性、致病力、病死率以及传播途径 等多个因素。
VS
等级划分
根据危害程度不同，感染病可分为甲类、 乙类和丙类三个等级。甲类感染病包括鼠 疫和霍乱，具有极高的病死率和传染性； 乙类感染病包括传染性非典型肺炎、艾滋 病、病毒性肝炎等，具有较高的危害程度 ；丙类感染病包括流行性感冒、流行性腮 腺炎等，危害程度相对较低。
调动社区和基层组织的积极性，发挥其在感染病防控中的前沿阵地 作用。
信息报告和共享平台建设
建立信息报告制度
明确感染病疫情的报告程序、时限和要求，确保疫情信息及时、准 确上报。
构建信息共享平台
利用现代信息技术手段，构建感染病防控信息共享平台，实现各部 门间信息的实时共享。
加强信息分析和利用
02
在制定治疗方案时，需充分考虑患者的基础疾病和药物过敏史
，避免药物不良反应的发生。
调整治疗方案
03
根据患者的病情变化和治疗反应，及时调整治疗方案，以达到
最佳治疗效果。
04 隔离观察与康复期管理
隔离观察原则及实施方法
早发现、早隔离
一旦发现疑似病例或确 诊病例，应立即采取隔 离措施，防止疫情扩散 。
应对措施。
03
《医院感染管理办法》
规范了医疗机构在感染防控方面的职责和要求，保障了患者和医务人员
的健康安全。
地方政府配套政策措施
地方政府根据国家法律法规，结合当 地实际情况，制定了相应的感染病防 控政策措施，如加强监测预警、落实 防控责任、加强宣传教育等。
针对特定感染病，地方政府还会制定 专门的防控方案，明确各部门职责， 协调各方力量，共同做好防控工作。
B
寄生虫性感染病
由寄生虫引起的感染病，如疟疾、血吸虫病 、蛔虫病等。这类疾病多通过虫媒或接触传 播，对人群健康造成较大威胁。
D
危害程度评估
评估因素
感染病的危害程度评估需考虑病原体的 传染性、致病力、病死率以及传播途径 等多个因素。
VS
等级划分
根据危害程度不同，感染病可分为甲类、 乙类和丙类三个等级。甲类感染病包括鼠 疫和霍乱，具有极高的病死率和传染性； 乙类感染病包括传染性非典型肺炎、艾滋 病、病毒性肝炎等，具有较高的危害程度 ；丙类感染病包括流行性感冒、流行性腮 腺炎等，危害程度相对较低。
病毒学病毒感染的检查方法和防治原则讲义
• 医学微生物学 （第9版）
三、病毒感染的诊断
（一）形态学检查
1. 电镜和免疫电镜检查：病毒形态和大小
（李凡主编的第 8 版医学微生物学 图 27-1，258 页）
• 医学微生物学 （第9版）
三、病毒感染的诊断
（一）形态学检查
2. 光学显微镜检查：病毒形成的包涵体、合胞体等
（李凡主编的第 8 版医学微生物学 图 33-2，314 页）
（二）病毒的鉴定
二、病毒的分离与鉴定
1. 病毒感染的常用鉴定方法
（2）病毒血清学鉴定：用已知特异性抗体对病毒进行种、型和亚型的鉴定
• 医学微生物学 （第9版）
（二）病毒的鉴定
二、病毒的分离与鉴定
1. 病毒感染的常用鉴定方法
（3）病毒分子生物学鉴定：对病毒的蛋白抗原和核酸进行检测，方法包括 蛋白印迹技术、核酸扩增、核酸杂交、基因芯片和基因测序等
• 医学微生物学 （第9版）
• 医学微生物学 （第9版）
三、病毒感染的诊断
（二）病毒成分检测
1. 病毒蛋白抗原检测 用已知特异性抗体对病毒抗原进行早期诊断，常用方法酶免疫测定
（enzyme immunoassay，EIA）、免疫荧光测定（immunofluorescence assay，IFA）、蛋白印迹（Western blot）
• 医学微生物学 （第9版）
二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒的分离培养
1. 动物接种
（1）应用：无敏感细胞培养的病毒 （2）优点：结果易观察，可建立动物模型 （3）缺点：要有饲养条件，费用高，可能有潜伏病毒，对许多人类病毒不敏感
• 医学微生物学 （第9版）
二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒的分离培养
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病毒在细胞内增殖的指标
正常细胞 病变细胞
干扰现象
概念：两种不同病毒或同种异型病毒、感染同一细胞 时，一种病毒抑制另一病毒增殖的现象。
病毒诱导宿主细胞产生干扰素:抑制被干扰病毒的 生物合成。
竞争干扰：一种病毒破坏宿主细胞的表面受体， 因而阻断另一病毒吸附。
改变宿主细胞的代谢途经：从而阻止第二种病毒 的mRNA的合成或其他生物合成过程。
制作用。
❖ （2）病毒蛋白酶抑制剂：通过抑制病毒 蛋白酶的活性，阻止病毒的复制.
常用药物有印地那韦、利多那韦等，对 HIV有一定抑制作用。
❖ （3）其它抗病毒药物：金刚烷胺或甲基 金刚烷胺用于甲型流感的治疗，甲酸磷 霉素用于疱疹病毒感染的治疗。
❖ 2．干扰素及干扰素诱生剂 : 干扰素具有广谱抗病毒作用，主要用
Microplate ELISA for HIV antibody: coloured wells indicate reactivity
五、特异性抗体的检测
❖ 病毒感染后通常诱发针对病毒一种或多种抗 原免疫应答，特异性抗体效价升高或lgM抗 体出现有辅助临床诊断的价值。
（一）补体结合试验（CF） （二）中和试验（NT） （三）血凝抑制试验 （HIA）
易感的动物→出现病状 鸡胚→病变或死亡 细胞培养→细胞病变
→鉴定病毒种型(血清学方法)
（二）分离病毒的鉴定
1．病毒在细胞内增殖的指征 （1）细胞致病作用(Cytopathogenic effect,CPE):病
毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱缩、 变圆、出现空泡、死亡和脱落。某些病毒产生特征性 CPE，普通光学倒置显微镜下可观察上述细胞病变， 结合临床表现可做出预测性诊断。 （2）红细胞吸附现象 （3）干扰现象 （概念、作用机理、意义） 2．病毒感染性的定量测定 ：
二、人工被动免疫
❖ 常用制剂有：
❖ ①抗病毒免疫血清:现有抗麻疹、
抗狂犬病、抗乙型脑炎免疫血清等，这些 免疫血清具有显著的预防作用；
②人免疫球蛋白制剂:包括人血清丙种球蛋 白、胎盘球蛋白
❖ ③特异性免疫球蛋白：从某种病毒感染者 的血清中提取、纯化后制备的免疫球蛋白 ，可紧急预防相应的病毒感染，如乙型肝 炎免疫球蛋白（HBIg）。
IFN-α，副作用小，对某些病毒性疾病的防 治有较好的效果 。
❖ 3．中草药: 黄芪、大青叶、板兰根、贯众。
❖ 4．其他:单克隆抗体、治疗性疫苗、细胞因
免疫荧光
ELISA
杂交
分子生物学技术 PCR
第二节 病毒感染的免疫预防
一、人工主动免疫
❖ 人工主动免疫制剂——病毒疫苗： （一）减毒活疫苗
是由从自然界或人工突变培育筛选出的致病性减弱 或丧失的病毒突变株制备而成的疫苗，如脊髓灰质炎 活疫苗。 （二）灭活疫苗 是利用某些理化因素处理活病毒，使其失去感染性后制 备而成。如乙型脑炎灭活疫苗。 （三）亚单位疫苗 是将病毒中有效的免疫原成分提取制备而成。 （四）基因工程疫苗 利用基因工程技术制备的病毒疫苗主要有：①基因工程 亚单位疫苗；②基因工程载体疫苗；③核酸疫苗。
产生缺陷病毒:其基因不能正常复制，但能干扰感 染性病毒体的复制，这种缺陷病毒称为缺陷干扰 颗粒。
四、病毒成分（核酸及抗原）的直接检出
❖ （一）直接检出病毒核酸
1．核酸杂交 2．多聚酶链反应 3. 基因芯片技术
❖ （二）直接检测病毒抗原
1．免疫荧光（IF）技术 2．酶联免疫吸附试验（ELISA）
ELISA
❖ （3）运输:冷藏速送。病毒离活体后在室温下很易 死亡，故采得检材应尽快送检。远距离运送，应将 检材放入装有冰块或干冰的空器内送检。病变组织 则应保存于50%的甘油缓冲盐水中。
❖ （4）处理：无菌操作；污染检材，加双抗生素或 氯仿处理。如鼻咽分泌液、粪便等应加入青霉素、 链霉素等，以免杂菌污染细胞或鸡胚，而影响病毒 分离。
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检：
（一）供病毒分离培养、检测核酸和抗原
1、采集的标本：通常采集血液、鼻咽分 泌液、咯痰、粪便、脑脊液、疱疹内容 物、活检组织或尸检组织等。
2、采集原则
❖ （1）时间:在发病初期（急性期）采取，较易检出 病毒，越迟阳性率越低。
❖ （2）类型:在感染部位采取。如呼吸道感染采取鼻 咽洗漱液或咯痰；
❖ 电子显微镜（EM）:能观察病毒颗粒的形态和 大小。
❖ 光学显微镜:能观察病毒感染细胞内的病理变 化，如包涵体或多核巨细胞等。
例如，狂犬病病毒感染后可在脑神经细胞浆中检 出嗜酸性包涵体，称为内基小体，可辅助诊断狂 犬病。
三、病毒的分离培养
（一）病毒分离的一般程序是
检验标本→杀灭杂菌(青、链霉素)→接种
第三节 病毒感染的治疗
❖ 1．抗病毒的化学制剂：目前抗病毒化学药物主要 有核苷类药物。
（1）核苷类药物：通过阻抑子代病毒基因的合成与 表达，抑制病毒复制 .
常用药物有: 用于DNA病毒感染:阿糖腺苷、碘尿苷、无环鸟苷
（阿昔洛韦）、丙氧鸟苷； 用于HIV感染:叠氮脱氧胸苷（AZT） 广谱抗病毒:3-氮唑核苷，对多种RNA或DNA病毒有抑
（二）供血清学检查的标本的采集原则
1、检测特异性抗体需要采取急性期与恢复 期双份血清，第一份尽可能在发病后立即 采取，第二份在发病后2～3周采取。 2、血清标本放4℃-20℃保存，试验前血 清标本以56℃30分钟处理去除非特异性物 质及补体。 3、无菌性脑炎患者也可取脑脊液检测特异 性lgM。
二、形态学检查