梅毒实验室检测汇总PPT课件

非梅毒螺旋体抗原血清学试验
? 原理（抗心磷脂抗体）：
? 人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的 一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激 机体产生类脂质抗体（反应素）。
? 主要是IgM和IgG混合抗体。 ? 抗体产生时间
? 感染3周-4周，硬下疳出现1周-2周 ? 一般在感染后5～7周（或硬下疳出现后2～3周）产生。
应是真阳性还是假阳性。 ? 一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。
方法特点
? 特异性强，敏感性高
?很少出现假阳性。据统计，在普通人群中， 有
1%的生物学假阳性发生。 ① 如系统性红斑狼疮患者血清可使 FTA-ABS 试验
呈假阳性反应，但大多数病例中螺旋体呈串株状 荧光。 ② 传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体所 致，可使 TPHA呈假阳性。 ③麻风患者也可使特异试验呈阳性。
结果判断
? 1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集为 有效试验。
? 2. 观察凝集反应强度：分级如下。
4+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠。 3+： 颗粒光滑覆盖大部分孔底。 2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。 1+： 颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒 环。 ±：颗粒沉集孔底，中央形成一小点。 一：颗粒紧密沉积孔底中央。
孔内，第1孔100微升，第2～4孔各25微升。 3. 样本稀释：取血清25微升加至第1孔，混匀后取25微升至第
2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升至第4孔， 混匀后弃去25微升。 4. 加对照液：第3孔加未致敏颗粒25微升，第4孔加致敏颗粒 25微升。 5. 混合：将反应板置振荡器振荡30秒。 6.反应：置有盖湿盒，孵育2 h，或放4℃冰箱过夜观察结果。
? 暗视野显微镜、镀银染色法和直接 荧光法
? 在暗视野显微镜下，光线从聚光器的 边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发 出亮光，从而可根据其特殊形态和运 动方式进行检测。白色发光，螺旋整 齐，运动规律（旋转、伸缩或蛇行运 动）
病原学检查的临床意义
? 病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床 可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的 特点。
? 螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法， 对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽 早切断传染源都有十分重要的意义。
? 如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的 可能性。
梅毒血清学检测方法
梅毒血清学检测分类
1. 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）
2. 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）
② 加样：
? 吸取50μl血清(浆)与各圈中盐水作系列稀释，并 涂布满整个圈内。
③ 重复定性试验后两步。
凝集反应强度分级：
3+～4+：圆圈内出现中到大的红色絮状物，液 体清亮。
2+：圆圈内出现小到大的红色絮状物，液体较 清亮。
1+：圆圈内出现小的红色絮状物，液体浑浊。
—：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀分 散。
梅毒的实验室诊断
病原体
?为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺 旋体苍白亚种(Treponema pallidum
subspecies pallidum)
苍白螺旋体 密螺旋体属
苍白亚种 地方亚种 极细亚种
梅毒 地方性梅毒 雅司病
品他螺旋体
品他病
梅毒螺旋体的生物学特性
1、直径 0.10~0.15μm，有8~14个致密而规则的 小螺旋，两端尖直。
RPR结果解释示意图
早
一期
期
二期
早期潜伏
晚 晚期潜伏
期
三期
治疗前
治疗后
阳性
阴性
TPPA 结果解释示意图
早
一期
期
二期
早期潜伏
晚 晚期潜伏
期
பைடு நூலகம்
三期
治疗前
治疗后
阳性 阴性
梅毒血清学试验适用范围
检测方法
样品种类
血清 血浆 末梢血 脑脊液
非梅毒螺旋体试验
快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) ? ?
甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）
? 风湿性心脏病
? 干燥综合征
? 毒品瘾者
? 慢性肾炎
? 肝硬化
? 老年
? 麻风 (是唯一产生慢 性生物学假阳性的感染 性 疾病)
妊娠的假阳性反应
这是一种生理情况下的生物学假阳性 假阳性发生率较低有报告为0.4%，滴度低。
假阳性问题
? 梅毒假阳性反应的处理
? 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假 阳性反应，经过重复试验即可除外。
荧光螺旋体抗体吸收试验 （FTA-ABS ）
? 原理
? 将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸 收剂（用 Reiter 螺旋体制备而成）吸收过的梅毒 患者血清形成抗原抗体复合物，再加入异硫氰酸 荧光素（ FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅 毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。 在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光， 即为阳性反应。
100%
98%
同前+EDTA+ 氯 化胆碱
稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月
不需灭活 玻片，肉眼或 显微镜
77%-88%
100%
99%
同前+EDTA+ 氯 化胆碱 +活性 炭
稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月
不需灭活 纸卡片，肉眼
结果容易判断
77%-99%
100%
98%
同前+EDTA+氯化胆碱 +甲苯胺红 稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月
可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和/或抗 T.pallidum 抗体的交叉抗原；
梅毒血清学试验结果解释
梅毒血清学试验结果的临床意义
RPR TRUST
阴性
阳性
阳性 阴性
TPPA TP-ELISA
临床意义
阴性
排除梅毒 （一期梅毒的早早期）
阳性
现症梅毒 (梅毒孕妇所生的婴儿除外)
阴性
生物学假阳性
阳性
早期梅毒经治疗后 （早期梅毒）
? 对急性生物学假阳性反应，应做 TPHA（TPPA ） 等试验进行排除。
前带现象
? 原理
? 指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中， 有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、 不典型或阴性反应的结果。
? 处理
? 将血清稀释后再进行试验。
血清固定
? 耐血清性（血清固定）
? 指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验 在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗 量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系 统梅毒等因素有关。
梅毒螺旋体抗原血清学试验
试验原理
? 检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗 原的抗体（ IgG 和IgM ）。
? 特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后 即可测出。
实验方法
? 梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA) ? 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA) ? 梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA） ? 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT) ? 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） ? 化学发光免疫分析法（CLIA） ? 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）
不需灭活 纸卡片，肉眼
结果容易判断
77%-99%
100%
99%
RPR/TRUST检测流程
? 试验前期准备
? RPR仪(水平旋转仪器 ) 必须滴！！ ? 试剂 ? 50μl移液器、吸头 ? 记号笔、废物缸 ? 工作服 ? 一次性手套、口罩、帽子 ? 生物安全柜
梅毒自动旋转仪
测速:100转/MIN （±2转）
? 抗体作用
? 无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长 期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。
原理和方法
? 反应原理
? 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉 眼所见
? 抗原基本成分
? 心磷脂、卵磷脂和胆固醇
? 方法包括：
? 快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) ? 不加热血清反应素(USR) ? 甲苯胺红不加热血清试验（ TRUST） ? 性病研究实验室试验 (VDRL)等。
2、原生质圆柱体上紧绕着3~4根周浆鞭毛，故运 动活跃，运动方式多样。
3、G-，但不易着色。Fantana镀银染色呈棕褐色。 4、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。 5、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉
素、四环素、红霉素等抗生素敏感。在干燥条件下不易 生存。肥皂水和一般消毒剂以及加温42℃以上均极易将其 杀灭。
梅毒螺旋体
传播途径
? 性接触是主要的传染途径
? 未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性 ? 随着病期的延长，传染性越来越小 ? 到感染后2年，通过性接触一般无传染性 ? 母婴传播 ? 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗
者，虽已无性传播（病期>2年），但妊娠时仍可传染给 胎儿 ? 病期越长，传染性越小; ? 输血传染 ? 间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径（接 触部位附有梅毒螺旋体） 。
??
性病研究实验室试验 (VDRL)
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?
梅毒螺旋体试验
梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA)
临床意义
? 作为RPR初筛阳性标本的确证试验。 ? 不能作为疗效观察的指标。 ? 阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合
RPR结果进行诊断。
假阳性问题
? 存在交叉反应的抗体 ? 处理方法：用Reiter株吸收血清中交叉反应的
抗体。
老年人抗体阳性的问题
? 1、真阳性 ? 2 、假阳性：这些老年患者所患的基础疾病