Aurora-A表达与胰腺癌吉西他滨耐药关系的实验研究

Aurora-A表达与胰腺癌吉西他滨耐药关系的实验研究

何永礼;施福田;严秋亮;朱锦辉

【摘要】目的探讨Aurora-A的表达与胰腺癌吉西他滨耐药之间的关系.方法 40只裸鼠采用随机数字表法分为两组,分别采用人胰腺癌细胞株PAN C-1和吉西他滨耐药株PANC-1/R2皮下移植再原位移植的方法构建动物模型(PANC-1组、PANC-1/R2组).采用实时定量基因扩增(qPCR)法测定PANC-1和PANC-1/R2中Aurora-AmRNA的表达.建模后第5周处死裸鼠,测定并比较两组裸鼠体重、肿瘤转移情况、肿瘤质量;采用免疫组化方法测定并比较两组瘤体Aurora-A蛋白的表达.结果 PANC-1组、PANC-1/R2组第5周裸鼠体重、肿瘤重量及肿瘤转移率分别为(23.2±1.41)g、(0.453±0.110)g、36.8％及(22.91±1.13)g、

(0.564±0.203)g、50.0％,两组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05),两组Aurora-A mRNA表达分别为1.002±0.040及1.845±0.069,差异有统计学意义(P ＜0.05);两组Aurora-A蛋白阳性表达率分别为83.3％及57.9％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Aurora-A高表达与胰腺癌细胞株的吉西他滨耐药有关,新方法构建的PANC-1/R2耐药株Aurora-A高表达,可用于胰腺癌吉西他滨耐药研究的载体.

【期刊名称】《浙江医学》

【年(卷),期】2016(038)011

【总页数】4页(P810-813)

【关键词】Aurora-A;胰腺癌;多药耐药;吉西他滨

【作者】何永礼;施福田;严秋亮;朱锦辉

【作者单位】金华文荣医院普外科;金华文荣医院普外科;金华市人民医院普外科;310009 杭州,浙江大学医学院附属第二医院外科

【正文语种】中文

【 Abstract】 Objective To assess the relationship of Aurora-A expression with gemcitabine-resistance in pancreatic cancer cells. Methods Pancreatic cancer model was established by inoculation in nude mice with human pancreatic cancer PANC-1 cells and drug resistant pancreatic cancer PANC-1/R2 cells,respectively(n=20 in each group).The expression of Aurora-A mRNA in PANC-1 and PANC-1/R2 cells were tested by qPCR technique.Animals were sacrificed after 35d and the tumor tissue samples were collected.The expression of Aurora-A protein in tumor tissues of two groups was detected by immunohistochemistry. Results In PANC-1 and PANC-1/R2 groups,the metastatic rate in 5 ws was 36.8%(7/19)and 50.0% (9/18)(χ2=4.21,P＜0.05),the mean weight of tumor was 0.453±0.110g and 0.564±0.203g(t=9.35,P＜0.05),the weight of mice was 23.2±1.41 g and 22.91±1.13g(t=20.36, P＜0.05).The expression of Aurora-A mRNA in PANC-1 cells and in PANC-1/R2 cells was 1.002± 0.040 and 1.845±

0.069,respectively(t=35.02,P＜0.05).Positive expression of Aurora-A protein was detected in 15 out 18 mice of PANC-1/R2 group,while it was in 11 out 19 mice of PANC-1 group(χ2=5.023,P＜0.05). Conclusion High expression of Aurora-A gene is associated with gemcitabine-resistance in pancreatic cancer cells.

胰腺癌是常见的病死率很高的恶性肿瘤，化疗效果不理想。作为治疗胰腺癌的首选

药物吉西他滨，其化疗有效率也仅为25%[1]，多药耐药是导致化疗效果欠佳的重要原因。Aurora-A蛋白作为DNA修复功能的蛋白，具有参与修复DNA的作用。目前发现，在食管癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等的化疗中，抑制Aurora-A的表达能增强肿瘤的化疗敏感度[2-4]。本文采用人胰腺癌细胞株PANC-1和吉西他滨耐药株PANC-1/R2细胞株皮下移植再原位移植的方法构建动物模型，以此研究Aurora-A差异表达与吉西他滨的耐药关系，现将结果报道如下。

1.1 材料（1）实验动物：40只雄性BALB/c裸小鼠由浙江中医药大学动物实验中心提供，鼠龄42～56（47± 12）d；质量18～20（19.2±0.7）g；饲养于恒温（25～27℃）、恒湿（45%～50%），且符合无特定病原体条件的裸鼠室内；饮

用水及标准食疗均经灭菌后供动物自由食用。（2）细胞株：PANC-1由浙江大学医学院附属第二医院外科研究所提供。PANC-1/R2为体外培养体内诱导循环筛选的新方法获得的PANC-1的吉西他滨耐药株。（3）主要仪器和试剂：实时定量基因扩增（qPCR）仪购自Biorad公司，IS1000凝胶成像系统购自美国法莫西亚公司，Beckman Coul ter Avanti J-20低温离心机购自德国Heraeus公司，鼠抗人Aurora-A单克隆抗体购自美国Santa Crus Biotechnology公司，Taq DNA聚

合酶购自日本Takara公司，RNA酶抑制剂购自美国Promega公司，ABC免疫

组化检测试剂盒购自华美生物工程公司。

1.2 方法

1.2.1 分组方法将40只裸小鼠采用随机数字表法分成两组，每组20只，分别用PANC-1和PANC-1/R2两种细胞株皮下移植再原位移植的方法建模（即PANC-

1组及PANC-1/R2组）。两组裸鼠每天检查、每周称重，于建模后第5周称重后处死。实验过程中，PANC-1组术后1周因腹腔感染死亡1只，故PANC-1组19只进入后续实验，PANC-1/R2组术后10d及2周时因腹腔感染各死亡1只，故

18只进入后续实验。收集两组裸鼠肿瘤病灶及淋巴结和内脏等标本组织。胰腺肿