实验二放线菌真菌形态观察

细菌芽孢染色
绘图示青色链霉菌的气生菌丝、孢子丝； 绘图示酵母菌的形态。
思考题： 为Βιβλιοθήκη Baidu么芽孢染色法中用酸性复红初染时需要加热并 维持5 min？
美蓝染色可区分死活细胞，因为在活细胞中美蓝 被还原为无色，死细胞不能使美蓝发生还原反应， 故死细胞呈现为蓝色。
本实验中芽孢染色采用石炭酸复红初染（加热） 和美蓝复染法，基于石炭酸复红为酸性染料，与 菌体结合差，易被水冲洗掉，而芽孢中的复红染 料却难以脱去（芽孢壁较厚，芽孢一旦着色后难 以脱色）。结果是菌体被染成蓝色，芽孢呈红色。
芽孢染色
材料：破伤风杆菌培养物 石炭酸复红染液，吕氏美蓝染液 玻片、95%酒精
方法： 1． 涂片 2． 染色： （1）以石炭酸复红染液滴加于一固定好的涂片上，并 加热到有蒸汽发生为止，染色 5 min，注意随时添加染液以免蒸 干。 （2）水洗后，95%酒精脱色 2 min。 （3）水洗后，以吕氏美蓝染液染 1 min。 （4）水洗，吸干，油镜检查。
实验二 放线菌、真菌形态的观察 细菌芽孢染色
目的要求
学习观察放线菌和真菌形态的基本技术； 加深对放线菌和真菌形态特征的理解； 掌握细菌芽孢染色的方法。
原理
放线菌与真菌虽然都有分支状菌丝，但两者在系统 发育学上分属两大界：放线菌---原核生物， 16SrRNA；真菌---真核生物（低等），18SrRNA。
链霉菌是放线菌的重要类群，其菌丝体分为基内菌 丝（营养菌丝）、气生菌丝两部分，气生菌丝的顶 端分化为孢子丝，生长到一定时期形成成熟的孢子。 可用插片法观察链霉菌的孢子。
酵母菌是单细胞真核微生物，其细胞比细菌细胞大， 呈卵圆形或柱形。
可制成水浸片在高倍镜下观察酵母菌的形态和繁殖 方式（芽殖）。
原理（2）
插片法
高氏1号琼脂培养基倒平板 无菌盖玻片斜 插（45oC）入琼脂 划线接种放线菌 28oC培养6-7d 取出盖玻片 固定 染色 水洗 镜检
水浸片
滴加吕氏美蓝于载玻片 接种环取酵母培养物
盖上盖玻片（防止气泡产生）
镜检
Streptomyces scabies
Saccharomyces cerevisiae