灵芝背景介绍

目录

一、灵芝多糖(GLP) (3)

1.结构特点 (3)

2.1 免疫调节作用 (3)

2.2抗肿瘤作用 (3)

2.药理作用[4] (4)

2.3抗辐射作用 (4)

2.4延缓衰老抗氧化作用 (4)

2.5对血糖的调节作用 (4)

2.6其他作用 (4)

3.含量测定 (5)

3.1提取工艺 (5)

3.2显色方法及检测条件 (5)

二、灵芝三萜 (6)

1.化学成分 (6)

2.药理作用[10] (6)

2.1抗肿瘤 (6)

2.2抗微生物 (6)

2.3降血脂 (6)

2.4抗炎症反应 (6)

2.5免疫调节 (7)

3.质量控制 (7)

3.1灵芝三萜的HPLC指纹图谱 (7)

3.2含量测定 (7)

灵芝研究背景资料

灵芝为担子菌纲，多孔菌科，灵芝属真菌赤芝(Ganoderma lucidum)和紫芝(Ganoderma sinense)的总称。灵芝分布在我国黑龙江、吉林、河北、山东、山西、内蒙古、安徽、江苏、浙江、江西、广东、广西、贵州、云南、湖南、福建及台湾等地。野生灵芝资源有限，而且越来越少，人工栽培灵芝的技术已在全国推广，其产量与数量早已超过野生灵芝。灵芝在我国有悠久的药用历史，始载于《神农本草经》，具有补中益气，滋外强壮，扶正固本，延年益寿等功效。现代研究表明灵芝的有效成分主要为灵芝多糖和灵芝三萜。现将这两类化合物从化学组成，药理作用，分析方法角度分别讨论如下。

一、灵芝多糖(GLP)

1. 结构特点

灵芝多糖为米黄色，沸水回流法从赤灵芝子实体中提取得率为2% 左右，其含量≥43%, 质量主要为2×105的生物大分子[1]。灵芝多糖含有三螺旋体构型，GC-MS分析灵芝多糖的主要单糖组分为葡萄糖，还有少量的半乳糖、甘露糖、木糖和艾杜糖，IR及1H-NMR分析多糖为β-构型，HIO4氧化、Smith降解和甲基化分析表明：多糖主要为(1-3)糖苷键连接构型，并伴有少量的1-6位支链键连接的结构，灵芝多糖是由D-葡萄糖单元通过β-(1-3)糖苷键连接葡聚多糖，其主要构型特征为(1-3)β-D-线性连接的骨架结构[2]。

2.1 免疫调节作用

2.1.1对T细胞的作用：李明春等研究表明，GLP能迅速提高静息T细胞中三磷酸肌醇(IP3 )的浓度，且被Gp蛋白抑制剂PTX所抑制，还可显著促进静息T细胞中二酞基甘油(DAG)的合成，而对活化T细胞则无作用。

2.1.2 对B细胞的作用：成熟的B细胞膜上存在CD35 (C3b，受体)。刘景田等研究表明，采用GLP作用过的红细胞做红细胞C3b受体花环率试验，其花环形成率明显提高，说明GLP 的作用可能与提高红细胞膜C3b免疫活性有关。

2.1.3 对巨噬细胞（Mφ）的作用：GLP并无细胞毒作用，不能直接杀死肿瘤细胞，而是通过增强Mφ细胞的吞噬功能、促进T淋巴细胞增殖、增强NK细胞的细胞毒作用、诱导某些免疫因子生成等途径来抑制肿瘤的生长。

2. 1.4 对细胞因子的影响：GLP可促进小鼠脾细胞原代培养时IL-1α及TNFαmRNA的表达，从而促进IL-1及TNFα的合成与分泌；并促进IL-2及IL-3 mRNA的表达，增强IL-1和IL-3的合成与分泌。

2.2 抗肿瘤作用

在体外GLP不能直接抑制或杀伤肿瘤细胞，也不能诱导肿瘤细胞凋亡，但GLP能够增强巨噬细胞的吞噬功能，促进淋巴细胞增生，增强T杀伤细胞的细胞毒作用，促进免疫细胞产生IL-2、IFNγ、TNFα等而间接诱导肿瘤细胞凋亡。

2. 药理作用[4]

2.3 抗辐射作用

辐射对机体造成损害的机制之一是产生大量自由基，引发一系列脂质过氧化反应，引起细胞中核酸、蛋白质分子结构的破坏，最终对各组织和器官造成严重的损害，同时，辐射引发免疫功能降低，造成死亡。吴京燕等观察了GLP合剂对辐照小鼠外周血白细胞及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。发现受试组白细胞数量及SOD活性较模型组显著提高。

2.4 延缓衰老抗氧化作用

游育红等发现，灵芝多糖肽(GLPS)体外给药瞬间即可迅速减少静息状态小鼠腹腔巨嗜细胞氧自由基含量，表明GIPS可能对已经存在的自由基有直接清除作用，使细胞内总自由基水平迅速下降。

2.5 对血糖的调节作用

GLP具有显著的降血糖功效。罗少洪等发现，GLP的灌胃剂量≥100 mg／kg时，可明显降低高血糖小鼠血糖水平，无剂量-效应关系；剂量为200mg／kg时，可降低正常小鼠的血糖，明显刺激胰岛素分泌，并明显增强高血糖小鼠对葡萄糖的耐受力。

2.6 其他作用

GLP还具有多种生物活性：对循环系统的调节作用，降低血脂，保护肝脏，促进骨髓和血液合成DNA、RNA及蛋白质，促进人体产生抗体、干扰素，抗病毒感染等。

3. 含量测定

近年来文献中灵芝多糖的含量测定方法基本为水提醇沉，紫外检测，操作步骤为：

A：灵芝药材或制剂加水提取。

B：水提液加适量乙醇（灵芝多糖在一定的乙醇浓度下溶解度最低），使灵芝多糖沉淀。

C：多糖沉淀加水溶解，加显色剂显色。

D：用紫外分光光度计测定吸光度。

3.1 提取工艺

灵芝多糖是一种大分子的化合物，分子量从数千到数十万，不溶于高浓度的乙醇，微溶于低浓度乙醇及冷水中，可在热水中溶解[5]。可见，灵芝多糖的性质不同于一般小化合物，为确保含量测定结果的准确度和精密度，应首先对其提取工艺进行考察。

张志军[6]等以赤芝为样品，对浸提过程中的温度、时间以及固液比3 个因素进行了单因素试验和正交试验, 结果表明,灵芝多糖的最佳提取条件为浸提温度90 ℃,浸提时间2.0 h ,料液比1∶15 ;浸提温度对多糖提取率的影响最大,其次为浸提固液比和浸提时间。其试验结果表明，60～90℃间，随着浸提温度的提高，提取率也不断增加，90～100℃间，随着浸提温度的提高，提取率基本不变。

李艳[7]等优化确定的灵芝多糖提取工艺为:一提料液比为1∶30, 提取时间为3 h, 提取温度100℃, 盐浓度0.5 ;二提料液比为1∶15, 提取时间为1 h,提取温度为100℃,盐浓度为0.5 。将水提液浓缩,然后用截留分子量为1 000的超滤膜除盐或加入1. 2倍的乙酸除盐,再用95乙醇将溶液乙醇浓度调至75 ,得到的沉淀真空干燥,即可得到灵芝粗多糖。

3.2 显色方法及检测条件

常用的显色方法有硫酸蒽酮显色法和硫酸苯酚显色法。

毛维伦[8]等用0.2%的硫酸蒽酮溶液做显色剂，沸水浴加热3min，室温放置20min，波长625nm下测定。

李坚等[9]通过方法优化确定以无水葡萄糖为对照品，用5％苯酚溶液1.0 ml和硫酸5.0 ml 做显色剂，于100℃水中放置30 min，在490 nm最大吸收波长处进行灵芝多糖含量测定的方法。

《中国药典》2010年版[10]对灵芝多糖的测定采用硫酸蒽酮法。该法以无水葡萄糖为对照品，0.1％硫酸蒽酮溶液为显色剂，于沸水浴加热15min，冰浴15min，在625nm下测定吸光度。郭晓蕾[11]等比较了药典中硫酸蒽酮法和硫酸苯酚法测定灵芝多糖的差异。通过方法学验证，证明硫酸蒽酮法的重现性好于硫酸苯酚法。原因可能是硫酸苯酚法的影响因素较多，如硫酸加入量，苯酚加入量，反应时间，反应温度等，另外，苯酚不稳定，见光或氧即逐渐氧化成淡红色，在490nm测定条件下造成干扰。多糖含量测定应用滴定法的报道较少，主要有姆松－华尔格法。黄祥远[12]等以姆松－华尔格法测定灵芝提取物中多糖的含量，以菲绕林亚铁为指标剂，以高锰酸钾滴定液滴定.记录消耗高锰酸钾滴定液含量，再查哈蒙德表即可计算相应的糖量。实验表明：该法测定结果重复性好，其测得值与苯酚硫酸法接近，且RSD 值小于后法，但操作步骤比后法多。