细胞生物学实验之ppt(精)
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细胞生物学实验技术 PPT
• 单个细胞虽能生长繁殖, 但不如群体细胞能力强，
当相邻细胞接触，便导致运动停止 细胞相互沟通生物信息的结果
• 对细胞外基质仍有依存性
– 差异：失去原有组织结构和细胞形态， 分化减弱或 不明显
• 细胞外基质
– 存在于组织中，由细胞合成并分泌至胞外的成分， 分布在细胞表面或细胞之间的大分子，包括纤维性 成分(胶原蛋白、弹性蛋白和网织蛋白)、连接蛋白 (纤维粘连蛋白、层粘连蛋白)和空间充填分子(主要 为糖胺聚糖)等，其对细胞增殖和分化发挥重要调控 作用。 – 这些物质构成复杂的网架结构，支持并连接组织结 构、调节组织的发生和细胞的生理活动。
• 贴附型细胞的分类
– 成纤维细胞型 – 上皮型细胞 – 游走细胞型 – 多型细胞型
• 成纤维细胞型
– 梭型或不规则三角形，生长时呈放射状。 – 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织， 如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。 – 凡培养中形态与成纤维类似时皆可称为成纤维细胞。
– 上皮型细胞： • 扁平不规则多角形，彼此紧密相连。生长时呈膜状移动， 细胞很少单独行动。 • 起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化 管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。
• 游走细胞型：
– 散在生长，不连成片， 呈活跃游走或变形运 动，方向不规则。 – 此型细胞不稳定，有 时难以和其他细胞相 区别。
• 当细胞发生遗传改变，如获永生性或恶性转化时，细胞的生 存期才可能发生改变。
• 生命周期的三个阶段
– 原代培养期 – 传代期 – 衰退期
原代培养（Primary Culture）期
• 原代培养：从体内取出组织,分离出细胞、接种培养 到 第一次传代。
• 原代培养细胞与体内原组织细胞在形态结构和功能上 相似性大。 • 特点
当相邻细胞接触，便导致运动停止 细胞相互沟通生物信息的结果
• 对细胞外基质仍有依存性
– 差异：失去原有组织结构和细胞形态， 分化减弱或 不明显
• 细胞外基质
– 存在于组织中，由细胞合成并分泌至胞外的成分， 分布在细胞表面或细胞之间的大分子，包括纤维性 成分(胶原蛋白、弹性蛋白和网织蛋白)、连接蛋白 (纤维粘连蛋白、层粘连蛋白)和空间充填分子(主要 为糖胺聚糖)等，其对细胞增殖和分化发挥重要调控 作用。 – 这些物质构成复杂的网架结构，支持并连接组织结 构、调节组织的发生和细胞的生理活动。
• 贴附型细胞的分类
– 成纤维细胞型 – 上皮型细胞 – 游走细胞型 – 多型细胞型
• 成纤维细胞型
– 梭型或不规则三角形，生长时呈放射状。 – 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织， 如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。 – 凡培养中形态与成纤维类似时皆可称为成纤维细胞。
– 上皮型细胞： • 扁平不规则多角形，彼此紧密相连。生长时呈膜状移动， 细胞很少单独行动。 • 起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化 管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。
• 游走细胞型：
– 散在生长，不连成片， 呈活跃游走或变形运 动，方向不规则。 – 此型细胞不稳定，有 时难以和其他细胞相 区别。
• 当细胞发生遗传改变，如获永生性或恶性转化时，细胞的生 存期才可能发生改变。
• 生命周期的三个阶段
– 原代培养期 – 传代期 – 衰退期
原代培养（Primary Culture）期
• 原代培养：从体内取出组织,分离出细胞、接种培养 到 第一次传代。
• 原代培养细胞与体内原组织细胞在形态结构和功能上 相似性大。 • 特点
细胞生物学实验PPT课件
细胞生物学实验ppt课件
目录
• 引言 • 细胞生物学基础知识 • 实验操作流程 • 实验结果分析 • 结论
01 引言
实验目的
01
02
03
04
掌握细胞生物学的基本 实验技能
了解细胞的结构和功能
学习细胞培养和细胞转 染技术
探究细胞信号转导的机 制
实验背景
细胞是生命的基本单位，是生物体结 构和功能的基础
能量转换
细胞中的线粒体和叶绿体 可以将光能或化学能转换 为细胞可利用的ATP等能 量形式。
信息传递
细胞通过分泌化学信号和 电信号传递信息，协调各 种生理活动。
细胞的生命活动
细胞分裂
通过有丝分裂和减数分裂，细胞 可以复制自身并产生新的子细胞。
细胞分化
在发育过程中，细胞会逐渐失去其 全能性，并获得特定的功能和形态。
定性分析
根据实验结果，对实验现象进行解释 和推理，探究可能的机制和影响因素 。
结果解读与讨论
结果解读
根据实验结果，结合理论知识，对实验结果进行解释和解读，明确实验目的和 结论。
结果讨论
对实验结果进行深入讨论，探讨实验的局限性和改进方向，提出可能的假设和 研究方向。
05 结论
实验总结
实验目的
通过实验，学生能够掌握细胞生物学的基本实验技能，了 解细胞的结构和功能，以及细胞的生命活动规律。
实验步骤
实验包括细胞培养、显微观察、细胞计数等步骤，每个步 骤都有详细的操作说明和注意事项。
实验原理
实验涉及细胞培养、显微观察、细胞计数等技术，通过这 些技术，学生可以深入了解细胞的结构和功能，以及细胞 分裂、分化等生命活动过程。
实验结果
实验结果清晰，学生能够观察到细胞的形态、结构和功能 ，并得出准确的实验结论。
目录
• 引言 • 细胞生物学基础知识 • 实验操作流程 • 实验结果分析 • 结论
01 引言
实验目的
01
02
03
04
掌握细胞生物学的基本 实验技能
了解细胞的结构和功能
学习细胞培养和细胞转 染技术
探究细胞信号转导的机 制
实验背景
细胞是生命的基本单位，是生物体结 构和功能的基础
能量转换
细胞中的线粒体和叶绿体 可以将光能或化学能转换 为细胞可利用的ATP等能 量形式。
信息传递
细胞通过分泌化学信号和 电信号传递信息，协调各 种生理活动。
细胞的生命活动
细胞分裂
通过有丝分裂和减数分裂，细胞 可以复制自身并产生新的子细胞。
细胞分化
在发育过程中，细胞会逐渐失去其 全能性，并获得特定的功能和形态。
定性分析
根据实验结果，对实验现象进行解释 和推理，探究可能的机制和影响因素 。
结果解读与讨论
结果解读
根据实验结果，结合理论知识，对实验结果进行解释和解读，明确实验目的和 结论。
结果讨论
对实验结果进行深入讨论，探讨实验的局限性和改进方向，提出可能的假设和 研究方向。
05 结论
实验总结
实验目的
通过实验，学生能够掌握细胞生物学的基本实验技能，了 解细胞的结构和功能，以及细胞的生命活动规律。
实验步骤
实验包括细胞培养、显微观察、细胞计数等步骤，每个步 骤都有详细的操作说明和注意事项。
实验原理
实验涉及细胞培养、显微观察、细胞计数等技术，通过这 些技术，学生可以深入了解细胞的结构和功能，以及细胞 分裂、分化等生命活动过程。
实验结果
实验结果清晰，学生能够观察到细胞的形态、结构和功能 ，并得出准确的实验结论。
细胞生物学实验课-76页PPT资料
显微镜下可发现细胞回缩变圆，细胞间隙增大，此时应立 即终止消化
加入完全培养基5mL，用吸管反复吹打 计数板计数 分瓶培养
细胞的消化传代方法
生长细胞形态
四、作业与思考
1．简述细胞传代培养的操作程序及注意事项。 2．细胞培养获得成功的关键要素是什么? 3．简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段。 4．绘制细胞生长曲线图。 5．绘制细胞分裂指数图。
4、金属器材的清洗处理方法 金属器材的清洗处理方法 纸擦去表面的油脂
洗衣粉煮沸或用1%碳酸氢钠化传代方法
吸除或倒掉旧培养液
加入2mL，无钙、镁PBS，漂洗一次后倒掉 加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.02%EDTA或混合液）
肉眼可观察到“薄膜”现象时，倒掉消化液 继续作用2～3分钟
分别在5min、15min、20min观察细胞融合
细胞融合
2、PCC诱导和观察
90分钟后离心弃上清 加入0.075mol/lKCl8ml
混匀37℃25分钟 加入1ml固定液混匀离心弃上清
加7ml固定液固定20min 离心弃上清加0.5ml固定液 滴片（冰、高、烤）Giemsa染色12min
水冲、晾干、镜检
细胞工程实验
新乡医学院生命科学实验教学中心
课程组成员：杨慈清 、李虎、王红霞、许重洁
办公电话：3029114
目录
实验一 动物细胞的培养 实验二 细胞融合技术与染色体提前凝集标本制 备实验三 小鼠MEF饲养层的制备 实验四 MS培养基的配制和愈伤组织诱导 实验五 原生质体的分离、纯化和活力鉴定
实验一 动物细胞的培养
显微镜下的培养细胞
三、实验方法
方法
1、玻璃器材的清洗处理方法 2、塑料器材的清洗处理方法 3、橡皮器材的清洗处理方法 4、金属器材的清洗处理方法 5、细胞的消化传代方法
加入完全培养基5mL，用吸管反复吹打 计数板计数 分瓶培养
细胞的消化传代方法
生长细胞形态
四、作业与思考
1．简述细胞传代培养的操作程序及注意事项。 2．细胞培养获得成功的关键要素是什么? 3．简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段。 4．绘制细胞生长曲线图。 5．绘制细胞分裂指数图。
4、金属器材的清洗处理方法 金属器材的清洗处理方法 纸擦去表面的油脂
洗衣粉煮沸或用1%碳酸氢钠化传代方法
吸除或倒掉旧培养液
加入2mL，无钙、镁PBS，漂洗一次后倒掉 加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.02%EDTA或混合液）
肉眼可观察到“薄膜”现象时，倒掉消化液 继续作用2～3分钟
分别在5min、15min、20min观察细胞融合
细胞融合
2、PCC诱导和观察
90分钟后离心弃上清 加入0.075mol/lKCl8ml
混匀37℃25分钟 加入1ml固定液混匀离心弃上清
加7ml固定液固定20min 离心弃上清加0.5ml固定液 滴片（冰、高、烤）Giemsa染色12min
水冲、晾干、镜检
细胞工程实验
新乡医学院生命科学实验教学中心
课程组成员：杨慈清 、李虎、王红霞、许重洁
办公电话：3029114
目录
实验一 动物细胞的培养 实验二 细胞融合技术与染色体提前凝集标本制 备实验三 小鼠MEF饲养层的制备 实验四 MS培养基的配制和愈伤组织诱导 实验五 原生质体的分离、纯化和活力鉴定
实验一 动物细胞的培养
显微镜下的培养细胞
三、实验方法
方法
1、玻璃器材的清洗处理方法 2、塑料器材的清洗处理方法 3、橡皮器材的清洗处理方法 4、金属器材的清洗处理方法 5、细胞的消化传代方法
细胞生物学实验ppt课件
nuclei
28
四、作业
1．绘制口腔上皮细胞(点线绘图法) 2．低倍镜、高倍镜下测微尺的标定方法及结果 3．计算核质比
29
镜台测微尺
30
目镜测微尺（200小格）
31
实验二、细胞生理活 动的实验观察
32
实验目的
通过制片与观察加深理解细胞吞噬等生理活动 掌握死活细胞鉴别的原理及方法
许多酸性染料不易穿过活细胞的质 膜进入细胞内，却能渗入死亡的细胞 内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
8
9
(一)临时制片——口腔上皮细胞标本的制备
取载玻片一张(揩净)→加一滴生理盐水→取材(口腔内颊 部上皮细胞)→涂于生理盐水中→盖盖玻片→染色(甲基 蓝)1’→观察
10
(二)显微测量
1．显微测量计
目镜测微尺 镜台测微尺
11
(1) 目镜测微尺
1.外形是一圆形玻片，装入目镜镜筒中。 用于测量标本用。 2.刻度标记0~100，实际分为200等份，每一个格的长
度需用镜台测微尺标定。
12
(2) 镜台测微尺
1.外形是一载玻片，上有一带精细刻度的标尺。 2.总长度为1mm，分为100等份，每一个格的长度为
0.01mm(10μm)。
13
(3)标定方法
①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺，使之与目镜测微尺平行且
左端对齐(0刻度重合)。
using of the microscope
(I) Use of low objective lens (II) Use of high objective lens
7
Structure of the microscope Mechanical part Optics part Lighting part
28
四、作业
1．绘制口腔上皮细胞(点线绘图法) 2．低倍镜、高倍镜下测微尺的标定方法及结果 3．计算核质比
29
镜台测微尺
30
目镜测微尺（200小格）
31
实验二、细胞生理活 动的实验观察
32
实验目的
通过制片与观察加深理解细胞吞噬等生理活动 掌握死活细胞鉴别的原理及方法
许多酸性染料不易穿过活细胞的质 膜进入细胞内，却能渗入死亡的细胞 内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
8
9
(一)临时制片——口腔上皮细胞标本的制备
取载玻片一张(揩净)→加一滴生理盐水→取材(口腔内颊 部上皮细胞)→涂于生理盐水中→盖盖玻片→染色(甲基 蓝)1’→观察
10
(二)显微测量
1．显微测量计
目镜测微尺 镜台测微尺
11
(1) 目镜测微尺
1.外形是一圆形玻片，装入目镜镜筒中。 用于测量标本用。 2.刻度标记0~100，实际分为200等份，每一个格的长
度需用镜台测微尺标定。
12
(2) 镜台测微尺
1.外形是一载玻片，上有一带精细刻度的标尺。 2.总长度为1mm，分为100等份，每一个格的长度为
0.01mm(10μm)。
13
(3)标定方法
①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺，使之与目镜测微尺平行且
左端对齐(0刻度重合)。
using of the microscope
(I) Use of low objective lens (II) Use of high objective lens
7
Structure of the microscope Mechanical part Optics part Lighting part
细胞生物学实验课件ppt-PowerPointPres
盖上盖玻片,显微镜下观察
实验内容与实施过程
2. 植物细胞液泡系的超活染色与观察 取小麦种子发芽的根尖 用刀片纵切根尖 放入中性红染液滴中，染色5～10min。 吸 去染液，滴一滴Ringer液 盖上盖玻片进行镜 检(镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利 于观察)
实验内容与实施过程
3.实验结果
在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞， 可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆 形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延 长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色 较浅，体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般 只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分， 将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。
③詹纳斯绿B：詹纳斯绿B能专一的对线粒 体进行活体染色。线粒体中细胞色素氧 化酶使染料保持氧化状态，即有色状态， 呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被 还原，成为无色状态
三、实验仪器
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、 双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖 玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
实验一 血涂片的制备及细胞 大小的测量
一、实验目的
1.掌握血涂片的制备方法；
2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态；
3.掌握显微测微尺的使用方法。
二、实验原理
涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血 液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对 血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、 细胞大小测量等工作。
2. 掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝聚
的原理。
3. 观察凝集的现象
Company Logo
二、 实验原理
①细胞质膜外表面的一层黏性多糖物质构成的细 胞全委会被在细胞间的联系和识别、细胞的生长分化、 免疫反应及肿瘤发生等过程中发挥着重要作用。
实验内容与实施过程
2. 植物细胞液泡系的超活染色与观察 取小麦种子发芽的根尖 用刀片纵切根尖 放入中性红染液滴中，染色5～10min。 吸 去染液，滴一滴Ringer液 盖上盖玻片进行镜 检(镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利 于观察)
实验内容与实施过程
3.实验结果
在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞， 可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆 形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延 长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色 较浅，体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般 只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分， 将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。
③詹纳斯绿B：詹纳斯绿B能专一的对线粒 体进行活体染色。线粒体中细胞色素氧 化酶使染料保持氧化状态，即有色状态， 呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被 还原，成为无色状态
三、实验仪器
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、 双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖 玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
实验一 血涂片的制备及细胞 大小的测量
一、实验目的
1.掌握血涂片的制备方法；
2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态；
3.掌握显微测微尺的使用方法。
二、实验原理
涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血 液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对 血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、 细胞大小测量等工作。
2. 掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝聚
的原理。
3. 观察凝集的现象
Company Logo
二、 实验原理
①细胞质膜外表面的一层黏性多糖物质构成的细 胞全委会被在细胞间的联系和识别、细胞的生长分化、 免疫反应及肿瘤发生等过程中发挥着重要作用。
细胞生物学试验课件
小鼠的脱臼处死法
3．给药方法： 小自鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、
尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。 我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住 小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱 和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方 向刺入皮下，进针1～2mm后，再以45°角刺穿 腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。 针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或 肝脏。注意每次注入的液体量应为0.1～0.2ml／ 10克体重。
[作业] 一、比较四种特殊的光学显微镜。 二、为什么说倒置相按显微镜是观察培养活细胞的最有效
显微镜? 三、荧光显微镜的两种滤光片各起什么作用? 四、描述在特殊光镜观察到的盐藻形态。
实验三、显微摄影技术
『目的要求』： 掌握显微摄影原理、装置及其操作技术，能独立完
成全过程
『实验用品』: 复式光学显微镜、摄影装置、各色滤光镜、胶片、
小白鼠
小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。
1．捉拿方法：
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉， 小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶 部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
2．处死方法：
处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速死亡。 常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧化碳吸入法等。 断头法需用特殊的断头器，二氧化碳吸入法则将小鼠放 入盛有二氧化碳的容器内即可。颈椎脱位法的具体方法 是：左手拇指和食指按住小白鼠的头部，左手捉住其尾 巴迅速向后猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。
完整和正常，并进行必要的清洁工作，然后将显微镜放置 在自己左肩前方的实验台上，离桌子边缘3—6cm为宜，以 便观察。
(一)低倍镜的使用方法 1．对光 2．放置玻片标本 3．调节焦距
细胞生物学实验ppt精选课件
.
2、几种光学显微镜
.
1、普通复式光学显微镜：其重要的性能参数是分辨率。
2、暗视野显微镜：具有特殊的聚光器。光源中心束不直 入物镜，所以视野灰暗。而被检测细胞由于光的衍射及反 射而较亮
3、相差显微镜：利用光的干涉原理。在物镜与聚光器上 做了改动。把肉眼看不见的相位差改为可见的振幅差， 使人能够看清楚。 4、荧光显微镜：是在光镜水平上对细胞内特异的蛋白质、 核酸、糖类、脂质以及某些离子等组分进行定性定位研 究的有利工具。
.
.
三、实验器材
观察材料（草履虫，洋葱内表皮，紫鸭趾 草等花粉，菠菜叶），普通光学显微镜， 暗视野显微镜，相差显微镜，荧光显微镜， 载玻片，盖玻片，吸管，镊子，剪刀等。
.
四、实验方法
.
1．观察草履虫的外形、运动、纤毛、食物泡等。 取少许棉花纤维或擦镜纸纤维，放于载玻片上，在 其上滴一滴草履虫悬液，然后加盖玻片观察。 2．洋葱表皮细胞和菠菜叶的细胞核、叶绿体的观 察在载玻片上滴一滴水，撕洋葱鳞茎内表皮或菠菜 下表皮一小块放于其中，使其展开，然后加盖玻片 观察。 3．紫鸭趾草花粉外形、表面突起的观察在载玻片 上滴一滴水，取紫鸭趾草雄蕊在其中沾几下，然后 盖片观察。
实验一、几种光学显微镜的使用
.
一、实验目的：
了解几种光学显微镜的结构、
二、实验原理
.
1、基本原理
一般光学显微镜主要是由目镜、物镜、 聚光器以及反光镜等构成。 各种光学显微镜的放大原理基本相同， 各种特殊用途的显微镜只是在主要器 件上进行了稍微改动而已。
.
镜普 通 复 氏 显 微
镜相 差 显 微
.
镜暗 视 野 显 微
镜荧 光 显 微
3、如何提高显微镜 分辨率
2、几种光学显微镜
.
1、普通复式光学显微镜：其重要的性能参数是分辨率。
2、暗视野显微镜：具有特殊的聚光器。光源中心束不直 入物镜，所以视野灰暗。而被检测细胞由于光的衍射及反 射而较亮
3、相差显微镜：利用光的干涉原理。在物镜与聚光器上 做了改动。把肉眼看不见的相位差改为可见的振幅差， 使人能够看清楚。 4、荧光显微镜：是在光镜水平上对细胞内特异的蛋白质、 核酸、糖类、脂质以及某些离子等组分进行定性定位研 究的有利工具。
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三、实验器材
观察材料（草履虫，洋葱内表皮，紫鸭趾 草等花粉，菠菜叶），普通光学显微镜， 暗视野显微镜，相差显微镜，荧光显微镜， 载玻片，盖玻片，吸管，镊子，剪刀等。
.
四、实验方法
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1．观察草履虫的外形、运动、纤毛、食物泡等。 取少许棉花纤维或擦镜纸纤维，放于载玻片上，在 其上滴一滴草履虫悬液，然后加盖玻片观察。 2．洋葱表皮细胞和菠菜叶的细胞核、叶绿体的观 察在载玻片上滴一滴水，撕洋葱鳞茎内表皮或菠菜 下表皮一小块放于其中，使其展开，然后加盖玻片 观察。 3．紫鸭趾草花粉外形、表面突起的观察在载玻片 上滴一滴水，取紫鸭趾草雄蕊在其中沾几下，然后 盖片观察。
实验一、几种光学显微镜的使用
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一、实验目的：
了解几种光学显微镜的结构、
二、实验原理
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1、基本原理
一般光学显微镜主要是由目镜、物镜、 聚光器以及反光镜等构成。 各种光学显微镜的放大原理基本相同， 各种特殊用途的显微镜只是在主要器 件上进行了稍微改动而已。
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镜普 通 复 氏 显 微
镜相 差 显 微
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镜暗 视 野 显 微
镜荧 光 显 微
3、如何提高显微镜 分辨率
细胞生物学实验PPT课件：细胞中DNA、RNA的显示
– Schiff试剂的质量：在做Feulgen反应时，一个重要 的成功因素就是Schiff试剂的质量问题。实验时，要 注意试剂颜色是否正常、有无SO2的气味。
– 洗涤剂的重要性：漂洗时，所用的亚硫酸水，最好在 每次实验前临时配制，以便保持较浓的SO2。
– 实验对照组：一定要做对照片，以便说明实验结果的 真实性。
三、实验仪器、材料和试剂
（一）器材 显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸 （二）材料 洋葱鳞茎表皮 （三）试剂 Unna试剂：甲基绿—派洛宁（Methyl greenPyronin）染色液 1M醋酸缓冲液（pH=4.8） 5%三氯醋酸
四、实验步骤
用镊子撕洋葱鳞茎内表皮
↓
5%三氯醋酸1ml ↓ 90 ℃，15分钟
↓ Schiff试剂(没过材料即可)遮光染色30分钟
↓ 新鲜配制的亚硫酸水1ml洗3次，每次2分钟
↓ 蒸馏水水洗5分钟
↓ 将染色后的鳞茎内表皮制片
↓ 镜检
注意问题：
– 水解时间：水解时间一定要合适，不宜过长或不足， 否则会影响实验结果。水解时间一般在8－15分钟之 间。水解时间的长短要随不同的材料而定。
70%乙醇洗1分钟
↓
Unna试剂染色30分钟←
↓
用镊子撕洋葱 鳞茎内表皮
蒸馏水水洗两次
↓ 制片
↓ 镜检
五、思考题
1.简述Brachet反应的原理。 2.绘图示细胞中RNA和DNA的分布。
方法。
二、实验原理
Feulgen反应的原理是根据DNA经1mol/L 弱酸水解后，打开嘌呤和脱氧核糖连接的键， 在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。这些醛基 就在原位与Schiff试剂结合，形成含醌基的化 合物，醌基是一个发色团所以具有颜色，因此 凡有DNA的部位，就呈现紫红色。
– 洗涤剂的重要性：漂洗时，所用的亚硫酸水，最好在 每次实验前临时配制，以便保持较浓的SO2。
– 实验对照组：一定要做对照片，以便说明实验结果的 真实性。
三、实验仪器、材料和试剂
（一）器材 显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸 （二）材料 洋葱鳞茎表皮 （三）试剂 Unna试剂：甲基绿—派洛宁（Methyl greenPyronin）染色液 1M醋酸缓冲液（pH=4.8） 5%三氯醋酸
四、实验步骤
用镊子撕洋葱鳞茎内表皮
↓
5%三氯醋酸1ml ↓ 90 ℃，15分钟
↓ Schiff试剂(没过材料即可)遮光染色30分钟
↓ 新鲜配制的亚硫酸水1ml洗3次，每次2分钟
↓ 蒸馏水水洗5分钟
↓ 将染色后的鳞茎内表皮制片
↓ 镜检
注意问题：
– 水解时间：水解时间一定要合适，不宜过长或不足， 否则会影响实验结果。水解时间一般在8－15分钟之 间。水解时间的长短要随不同的材料而定。
70%乙醇洗1分钟
↓
Unna试剂染色30分钟←
↓
用镊子撕洋葱 鳞茎内表皮
蒸馏水水洗两次
↓ 制片
↓ 镜检
五、思考题
1.简述Brachet反应的原理。 2.绘图示细胞中RNA和DNA的分布。
方法。
二、实验原理
Feulgen反应的原理是根据DNA经1mol/L 弱酸水解后，打开嘌呤和脱氧核糖连接的键， 在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。这些醛基 就在原位与Schiff试剂结合，形成含醌基的化 合物，醌基是一个发色团所以具有颜色，因此 凡有DNA的部位，就呈现紫红色。
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二、实验原理
n 涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血 液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对 血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、 细胞大小测量等工作。
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三、实验用品
1.器材:医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经 脱脂洗净的载玻片 、双凹片（推片） 。
再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前 缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片 端展开成线状。
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两玻片的角度以30~45°为宜，轻轻将双凹片向 前匀速推进，即涂成血液薄膜。
30~45°
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实验作业
将观察到的现象列入下表，对实验结 果进行比较和分析。
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实验作业
试管编号
1.10ml氯化钠+1ml稀释羊血 2.10ml氯化铵+1ml稀释羊血 3.10ml醋酸铵+1ml稀释羊血
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实验三 细胞膜的渗透性
一、实验目的：
了解细胞膜的渗透性及各类物质进 入细胞的速度。
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二、 实验原理
细胞膜为一种半透膜，对物质的通透具有选择性。
当红细胞放入低渗溶液中时，细胞吸水膨胀而发生溶
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采血
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医学细胞生物学实验_PPT幻灯片
颗粒白细胞 嗜中性颗粒白细胞；嗜酸性颗粒白细胞；嗜碱性颗粒白 细胞
无颗粒白细胞 淋巴细胞；单核细胞
血小板
【作业】 绘图：各种细胞的形态结构，并标示出 细胞的各部分
实验报告要求：
实验名称： 实验目的： 实验原理： 实验步骤： 实验结果和分析：
实验二 线粒体的超活染色 和细胞显微结构的观察
【实验步骤】
A. DNA和RNA的定位
制备蛙血涂片1张，晾干。 固定：70％乙醇固定5min。 染色：滴1d甲基绿-哌洛宁染液染色5-10min，
水冲洗后在纯丙酮中分化处理2-3s。 观察绘图
【实验步骤】
B. 血细胞计数
制备蛙血细胞悬液，稀释400-600× 熟悉血细胞计数板，找到计数室和计数区域 盖玻片盖在计数板槽上，吸取1d血细胞悬液滴在盖
【作业】
绘图：人口腔上皮细胞（显示线粒体） 小鼠肝细胞（显示线粒体） 兔脊神经节细胞（显示高尔基体）
光镜下高尔基复合体
实验三 细胞内核酸的定位 和细胞计数
【实验目的】
掌握细胞化学技术定位细胞组分的一般方法； 掌握细胞内核酸的分布特点； 掌握活细胞计数的方法。
【实验原理】
A. 细胞化学染色与DNA和RNA的定位
核酸分为DNA和RNA，呈酸性, 可与碱性染料 反应而显色和定位。由于两类核酸分子聚合程 度不同，对不同的碱性染料亲和力不同，甲基 绿-哌洛宁染料的两种组分分别对DNA和RNA 有高亲和力，并分别将二者染成蓝绿色和红色。
【实验原理】
B. 细胞计数
血细胞计数板包括2个计数室，每个计数室有9个 大格，每大格的体积为0.1mm3，计数4大格内（4 个角）的细胞数，根据每大格的体积和细胞悬液 的稀释倍数即可算出细胞密度。
玻片外侧边缘，使其渗入计数室 10×物镜下计数（四角的4大格） 细胞密度换算： 细胞数/ml=4大格细胞数/4 ×10000×稀释倍数
无颗粒白细胞 淋巴细胞；单核细胞
血小板
【作业】 绘图：各种细胞的形态结构，并标示出 细胞的各部分
实验报告要求：
实验名称： 实验目的： 实验原理： 实验步骤： 实验结果和分析：
实验二 线粒体的超活染色 和细胞显微结构的观察
【实验步骤】
A. DNA和RNA的定位
制备蛙血涂片1张，晾干。 固定：70％乙醇固定5min。 染色：滴1d甲基绿-哌洛宁染液染色5-10min，
水冲洗后在纯丙酮中分化处理2-3s。 观察绘图
【实验步骤】
B. 血细胞计数
制备蛙血细胞悬液，稀释400-600× 熟悉血细胞计数板，找到计数室和计数区域 盖玻片盖在计数板槽上，吸取1d血细胞悬液滴在盖
【作业】
绘图：人口腔上皮细胞（显示线粒体） 小鼠肝细胞（显示线粒体） 兔脊神经节细胞（显示高尔基体）
光镜下高尔基复合体
实验三 细胞内核酸的定位 和细胞计数
【实验目的】
掌握细胞化学技术定位细胞组分的一般方法； 掌握细胞内核酸的分布特点； 掌握活细胞计数的方法。
【实验原理】
A. 细胞化学染色与DNA和RNA的定位
核酸分为DNA和RNA，呈酸性, 可与碱性染料 反应而显色和定位。由于两类核酸分子聚合程 度不同，对不同的碱性染料亲和力不同，甲基 绿-哌洛宁染料的两种组分分别对DNA和RNA 有高亲和力，并分别将二者染成蓝绿色和红色。
【实验原理】
B. 细胞计数
血细胞计数板包括2个计数室，每个计数室有9个 大格，每大格的体积为0.1mm3，计数4大格内（4 个角）的细胞数，根据每大格的体积和细胞悬液 的稀释倍数即可算出细胞密度。
玻片外侧边缘，使其渗入计数室 10×物镜下计数（四角的4大格） 细胞密度换算： 细胞数/ml=4大格细胞数/4 ×10000×稀释倍数
《细胞生物学实验》课件
05
结论与讨论
实验结论
01 02
实验结论总结
通过本次实验，我们成功地观察到了细胞分裂的各个阶段，验证了细胞 周期的存在和细胞分裂的机制。实验结果与预期一致，进一步证实了细 胞生物学理论的正确性。
实验结果的意义
本实验结果对于深入理解细胞分裂和增殖的机制具有重要意义，为后续 的细胞生物学研究和应用提供了有力支持。
《细胞生物学实验》 ppt课件
目录
CONTENTS
• 实验概述 • 实验材料 • 实验操作 • 实验结果 • 结论与讨论
01
实验概述
实验目的
掌握细胞培养技术
通过本实验，学生将熟悉并掌握细胞培养的基本技术和方法，了 解细胞在体外生长和繁殖的条件和要求。
理解细胞形态与功能的关系
通过观察不同类型细胞的形态和生长特点，学生将进一步理解细胞 形态与其功能之间的关系。
培养实践操作能力
本实验将提供实际操作的机会，培养学生的实验技能和动手能力， 提高其解决实际问题的能力。
实验原理
细胞培养的生物学基础
细胞生长与增殖的过程
介绍细胞培养的基本概念、发展历程 和应用领域，为学生提供相关的生物 学基础知识。
解释细胞在体外生长和增殖的过程， 包括细胞周期、分裂方式、接触抑制 等基本概念。
03
实验结论的应用
实验结论可应用于教学、科研和实际生产中，有助于提高人们对细胞生
物学领域的认识和理解。
结果分析
数据分析方法
在实验过程中，我们采用了显微 观察、图像处理和统计分析等多 种方法，确保实验结果的准确性
和可靠性。
实验误差分析
在实验过程中，可能存在一些误 差，如观察角度、显微镜倍数等 因素可能影响实验结果。我们通 过多次重复实验和交叉验证等方
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——————————————————— 坏死 凋亡 ———————————————————
1.性质 病理性，非特异性 2.诱导因素 强烈刺激，随机发生 生理性或病理性，特异性 较弱刺激，非随机发生 3.生化特点 被动过程，无新蛋白合成， 不耗能 4.形态变化 细胞结构全面溶解、破坏、 细胞肿胀 5.炎症反应 溶酶体破裂，局部炎症 反应 6.DNA电泳 弥散性降解，电泳呈均一 DNA片状 7.凋亡小体 无 8.基因调控 无 主动过程，有新蛋白合成， 耗能 胞膜及细胞器相对完 整细胞皱缩，核固缩 溶酶体相对完整，局部 无炎症反应 DNA片段化（180-200bp）， 电泳呈“梯”状条带 有 有
细胞凋亡有别于细胞坏死。
似秋叶的凋零， 告生命的末端； 啊，活性氧处处肆虐， 钙波涛惊石裂岸， 线粒体把生命之光一点一点拧淡;
危难中的细胞啊， 你沉稳不乱， DNA片片切割， 化云梯直通天堂； 细胞体分团相聚， 把生命的凝重浓集在小体上； 分别了朝夕相处的伙伴， 再见了快乐美好的时光； 这一切的一切又融入临近的胞体， 腾出的空间再写生命的篇章。
细胞凋亡与细胞坏死的区别
———————————————————
细胞凋亡的形态特征
（1）凋亡的起始；微绒毛的消失，细胞间接触的消失，与周围的细胞 脱离，细胞质中，线拉体大体完整，染色质固缩
（2） 细胞质密度增加，线粒体膜电位消失，通透性改变，释放细胞色 素C到胞浆，膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面
（4） 取25μl培养的细胞悬液滴于载玻片上，稍风干后，加入AO/EB 1:1混合液染色，并盖上盖玻片。 （5） 荧光显微镜下观察。
细胞凋亡的检测——
注意事项
1、EB为强诱变剂，使用时要注意防护 2、试剂与细胞孵育完毕后，要立即检测 3、正确使用显微镜，保护好镜头和滤光片
细胞凋亡的检测——
课后作业及思考
细胞凋亡的检测——
实验步骤
（1）Hela细胞贴壁生长于DMEM培养液中含10%胎牛血清，置37℃ 5%CO2培养箱中培养2~3天，待细胞形成单层融合状态。 （2）去细胞培养液，加入0.215mol/L双氧水的10%胎牛血清培养液 中，继续培养24~36小时。
（3）收集细胞：用细胞消化液消化细胞使细胞脱壁，制成单细胞悬 液。1000X g离心力离心5分钟，弃上清。
细胞生物学实验之
实验十三
细胞凋亡的检测
南开大学生命科学学院
二零零七年六月
细胞凋亡的检测——
实验目的
了解细胞凋亡的检测方法 加深对细胞凋亡现象及本质的理解
练习从形态学角度评价细胞凋亡
掌握荧光显微镜的使用方法
细胞凋亡的检测——
实验原理
基本概念：
细胞凋亡(Apoptosis)是指细胞基因调控的一种自主性的自 杀现象。或者说在一定的生理或病理条件下，细胞遵循自 身的程序，自我结束生命的死亡方式。由于这种死亡方式 是由基因调控的死亡过程，因此又称之为程序性细胞死亡 (Programmed Cell Death) 。
1、练习用AO/EB法检测凋亡的细胞，掌握荧光显 微镜的使用 2、查阅相关文献，理清细胞凋亡与细胞坏死的区别 3、了解其它可用于细胞凋亡检测的方法及其原理
细胞凋亡的检测——
课后作业及思考
1、了解细胞凋亡的最新研究进展，结合自己的 知识预测未来细胞凋亡的研究方向
2、你认为对细胞凋亡机制的深入研究，会对生 命科学和医学带来何种影响
?
?
?
细胞凋亡的检测——
实验原理
基于形态学观察的染色法 膜联蛋白检测法 基于DNA 片断化的检测法
细胞凋亡检测方法
流式细胞仪定量分析法
Caspase酶分析法
细胞凋亡的检测——
实验仪器、材料及试剂
1、仪器、用具：荧光显微镜、显微载玻片、盖玻片、微量 移液器、高压灭菌锅、细胞培养用具 2、培养的细胞材料：HeLa细胞 3、试剂： 吖碇橙/溴化乙锭（AO/EB)的PBS溶液：PBS溶液中分别加入 100µ g/mL 的AO与100µ g/mL 的EB，配成两种溶液，用时再混合。 磷酸盐缓冲液（PBS)：800mL蒸馏水中溶解8g NaCL、0.2g KCL、 1.44g Na2HPO4 、0.24g kH2PO4 ，用盐酸调pH到7.4，加水定容到 1L。高压灭菌保存。
（3）凋亡小体的形成。核膜核仁破碎，核染色质断裂为大小不等的片 段，与某些细胞器如线粒体一起聚集，为反折的细胞膜所包围 （4）凋亡小体逐渐被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬。
细胞凋亡的形态学特征
细胞凋亡与疾病
细胞凋亡不足：
肿瘤，自身免疫病
细胞凋亡过度：
心肌缺血，心力衰竭，神经元 退行性疾病，病毒感 染