仪器分析实验报告

仪器分析实习报告

姓名：

班级：农学(药用植物)

院系：林学院植物资源利用系

学号：

指导教师：

日期：2011年12月26日到2011年12月30日

一﹑实习目的

通过本次实习，进一步了解和熟悉仪器分析理论课上学习的相关仪器的构造﹑分类﹑应用﹑图谱分析方法以及部分仪器的简单的操作方法等。理论联系实际，使自己对仪器分析这门课有更加深刻的了解，为以后走入社会奠定一定的基础。

二﹑实习时间

2011年12月26日到2011年12月30日。

三﹑实习地点

云南省昆明植物研究所﹑西南林学院实验室。

四、实习内容

(一)高效液相色谱仪

1、简介

高效液相色谱(HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，引入气相色谱理论，并在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器而实现分离分析的方法。该方法具有分离速度快、分离效率高、选择性好、检测灵敏度高、操作自动化程度高和应用范围广等特点。

2、结构

高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。

3、工作原理

储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。

使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。

3、应用

高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。

广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。

5、使用方法

(1)过滤流动相，根据需要选择不同的高效液相色谱仪滤膜。

(2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

(3)打开高效液相色谱仪工作站(包括计算机软件和高效液相色谱仪)，连接好流动相管道，连接检测系统。

(4)进入高效液相色谱仪控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

(5)有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。

(6)调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

(7)设计走样方法。点击file，选取se-lect users andmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。

一个完整的走样方法需要包括：

a.进样前的稳流，一般2-5分钟；

b.基线归零；

c.进样阀的loading-inject转换；

d.走样时间，随不同的样品而不同。

(8)进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

(9)关机时，先关计算机，再关液相色谱。

(二)红外光谱仪

1、基本原理

利用红外光谱对物质分子进行的分析和鉴定。将一束不同波长的红外射线照射到物质的分子上，某些特定波长的红外射线被吸收，形成这一分子的红外吸收光谱。每种分子都有由其组成和结构决定的独有的红外吸收光谱，据此可以对分子进行结构分析和鉴定。红外吸收光谱是由分子不停地作振动和转动运动而产生的，分子振动是指分子中各原子在平衡位置附近作相对运动，多原子分子可组成多种振动图形。当分子中各原子以同一频率、同一相位在平衡位置附近作简谐振动时，这种振动方式称简正振动(例如伸缩振动和变角振动)。分子振动的能量与红外射线的光量子能量正好对应，因此当分子的振动状态改变时，就可以发射红外光谱，也可以因红外辐射激发分子而振动而产生红外吸收光谱。分子的振动和转动的能量不是连续而是量子化的。但由于在分子的振动跃迁过程中也常常伴随转动跃迁，使振动光谱呈带状。所以分子的红外光谱属带状光谱。分子越大，红外谱带也越多。

2、色散型红外光谱仪主要部件

(1)、光源：红外光谱仪中所用的光源通常是一种惰性固体,用电加热使之发射高强度的连续红外辐射。常用的是Nernst灯或硅碳棒。

能斯特灯：在室温下是非导体，使用前需有辅助加热器预热，就可使之导电。特点是发光强度大，使用寿命长，稳定性较好。

硅碳棒：由碳化硅烧结而成，不需预热；坚固，发光面积大。特点是：寿命长、便宜、发光面积大，较适合长波区，但工作时需要预热。

(2)、单色器：由色散元件、准直镜和狭缝构成。光栅是常用的色散元件；傅立叶变换红外光谱仪不需要分光。