细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本

细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本
（一）胰酶的配制：（浓度为1‰，1L）
1、认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。

2、称取牛胰蛋白酶1.0g；EDTA 2 g；
3、用超纯水溶解；
4、磁力搅拌器搅拌至胰酶完全溶解，溶液变得澄清；
5、超纯水定容至1L；
6、不锈钢滤器加0.22um滤纸两张高温灭菌后，在超净工作台过滤；
7、在血清瓶中加入少量滤好的胰酶，置于细胞培养箱中检测是否染菌，其余置于4℃待用；
8、过滤后洗净滤器再次灭菌，避免残留的胰酶降解蛋白。

（二）DMEM配制：
1、所需试剂及材料：
试剂：DMEM干粉（GIBCO 10L）、超纯水（Milli-Q）、Na2CO3 （Sigma）材料：10L玻璃瓶、500ml盐水瓶（灭菌）、0.22um滤膜、滤器（事先放好两层滤膜并高压灭菌）、磁力搅拌器大号搅拌子蠕动泵胶塞2、操作步骤：
(1)10L玻璃瓶洗涤，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。

(2)在10L玻璃瓶中加入超纯水9.5L，将DMEM干粉倒入，在磁力
搅拌器上搅拌溶解。

(3)按照3.7g/L 加入Na2CO3 。

(4)调节pH值至7.2~7.4。

(5)过滤分装，并注明名称及配制日期。

此过程注意无菌操作！
(6)最后用血清瓶取10ml左右置于细胞培养箱中检测是否染菌。

(7)清洗滤器，10L玻璃瓶，软管，将所有实验器具归位。

（三）1640、MEM培养基的配制同上，Na2CO3的用量见包装说明
（四）细胞间100×双抗（青霉素、链霉素）的配制
青霉素及链霉素配制的终浓度为1万单位/毫升。

配制的步骤以400ml为例：
1.认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗
3遍。

2.准备5瓶青霉素（80万单位/瓶）、4瓶链霉素（100万单位/瓶）。

3.加入1-2ml细胞间专用PBS进入青霉素、链霉素的瓶子内，浸泡
后吹吸数次至全部溶解，溶解后的液体吸入配制容器内。

用PBS 再次润洗装有青霉素及链霉素的小瓶子，将残留的青霉素及链霉素溶解，将液体并入配制容器内，重复润洗2次。

4.用细胞间专用PBS定容至400ml，搅拌均匀。

5.将配制的母液用0.22um的滤膜过滤除菌，分装到灭菌后的4ml
EP管内，2ml/ 管,冻存于-20℃。

( 4mlEP管需提前一天灭菌，烘干过夜。

)
（五）100×L-谷氨酰胺配制（浓度200mM= 29.2g/L ）
所需试剂及材料：L-谷氨酰胺干粉（Sigma）、超纯水（Mili-Q）、1L 烧杯、量筒、4ml EP管（灭菌）。

步骤：
1．认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。

2．称取相应质量的L-谷氨酰胺干粉，用超纯水溶解后，0.22um小滤器过滤除菌。

按需要分装（如2ml/管）-20℃保存。

注：勿高压灭菌，过滤后，尽快分装，切勿放在4℃过久！
（六）100×丙酮酸钠配制（浓度100mM 11g/L）
所需试剂及材料：丙酮酸钠（Sigma）超纯水（Mili-Q）1L烧杯，量筒，1.5ml EP管（灭菌）
步骤：
1．认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍
2．称取相应质量的丙酮酸钠干粉，用超纯水溶解后，0.22um小滤器过滤除菌。

按需要分装（如1ml/管）-20℃保存。

注：勿高压灭菌过滤后，尽快分装，切勿放在4℃过久！
（七）Verson配制
1.洗净容器：自来水10遍，去离子水5遍，超纯水3遍。

2.配制Verson（超纯水配制）：
Verson (1×) (g/L)
KCl 0.4
KH2PO40.06
NaCl 8.0
NaHCO30.35
Na2HPO4·12H20 0.08
EDTA 0.2
3.分装到500ml盐水瓶，盖上胶塞（不用灭菌，煮过即可），插上针
头（10mL以下的注射器针头），包上铝箔纸。

4.120℃，20min高压湿热灭菌，灭菌后，摆放至细胞间指定位置。

（八）细胞间PBS配液
PBS 缓冲液配方：【1L体系】
NaCl 8.0 g，KCl 0.2 g，Na2HPO4·12H2O 2.9 g，KH2PO4 0.24 g
调整pH 至7.4
具体步骤：
1. 清洗配液瓶,自来水10遍，去离子水5遍，超纯水3遍。

（一般使用细胞间配液瓶10 L 体系）；
2. 按上述配方准确称量物品，倒入配液瓶（注意：若药品潮解，应
更换）；
3. 加入超纯水（细胞间配液用，R206），定容至准确体系，溶解完全；
4. 使用细胞间pH计，调配pH至7.4；
5. 使用细胞间灭菌过的500mL 盐水瓶进行分装，标记，加橡胶塞针头，120℃，20min高压湿热灭菌；
6. 灭菌完，摆放至细胞间相应位置。

（九）磷酸钙转染试剂
配制试剂前，认真清洗配制容器，自来水10遍，去离子水5遍，超纯水3遍。

CaCl2 0.5 M （500ml）
CaCl2.2H2O (MW 147) SigmaUltra C5080 36.75 g
溶解于500ml超纯水，0.22um小滤器过滤除菌。

50ml样品管分装后，冻存于-20°C 。

HeBS 2x （1000ml）
NaCl (MW 58.44) SigmaUltra S7653 16.36 g (0.28 M final)
HEPES (MW 238.3) SigmaUltra H7523 11.9 g (0.05M final)
Na2HPO4, anhydrous (MW 142) SigmaUltra S79070.213 g (1.5 mM final)
800 ml超纯水溶解后，用1Mol NaOH溶液调PH值至6.98，然后定容至1000ml。

（准确的PH值对转染效率非常重要，请用细胞间内的精密PH计测量PH值，测量前要校正PH计，线型要在99％～101％）
0.22um小滤器过滤除菌。

50ml样品管分装后，冻存于-20°C 。

（十）酸液配制（1L）：
重铬酸钾 120g
浓硫酸 200ml
去离子水补至 1000ml
具体步骤：
1 在通风橱中架好塑料桶和搅拌器，确保稳定，不会侧翻。

2 在塑料桶中10L、15L、20L的位置划好刻度线，以利于后续步骤的定容。

3 在塑料桶中加入半桶去离子水，开动磁力搅拌器，缓慢倒入浓硫酸（硫酸遇水放热，倒太快会导致液体飞溅）。

4 缓慢倒入重铬酸钾，定容后，搅拌至完全溶解。

注意事项：废酸液应先用工业级的NaOH中和后方可倒往下水道，否则会腐蚀水管、污染环境，中和过程中会大量放热。