巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程
人类巨细胞病毒IgG
湖南省职业病防治院作业指导书标题：人类巨细胞病毒病毒（IgG）（酶联免疫法）修改记录湖南省职业病防治院作业指导书文件编号：标题：人类巨细胞病毒IgG（酶联免疫法）版号：第 1 版页码1/21、目的用于检测人体血清或血浆人类巨细胞病毒（IgG）.2、范围利用酶联免疫间接法原理（ELISA）定性检测人血清中的人类巨细胞病毒IgG 抗体，适用于人类巨细胞病毒病毒感染的辅助诊断。
3、职责检测人员按照本规程进行检测操作。
4、原理采用酶联免疫间接法原理定性检测人血清中的人类巨细胞病毒IgG抗体（HCMV-IgG），以纯化人类巨细胞病毒抗原包被酶联板。
待检血清中的人类巨细胞病毒与包被抗原反应，再与酶标记鼠抗人IgG抗体结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物。
加底物TMB显色，在酶标仪上比色后根据吸光度（A值）判定有无人类巨细胞病毒IgG抗体的存在。
5、样本要求5.1仅限于检测人体血清或血浆。
5.2常规方法采集。
5.3血清：采血后，室温放置1-2小时，待血液凝固，再于3000转/分钟离心15分钟。
5.4血浆：采血后，样品与抗凝剂反复轻摇混匀，再3000转/分钟离心15分钟。
5.5如果样品没有在8小时内测定，应将其保存于2℃-8℃。
如果样品不能在7天内测定，应将血清或血浆与血细胞分离， -20℃保存，避免反复冻融。
6．分析系统6.1分析仪器：Thermo Mk3型酶标仪，检测波长450nm，参考波长630nm。
6.2 37℃恒温箱。
6.3 振荡器用于样品、试剂的混匀。
6.4 微量加样枪。
6.5 试剂准备：试剂盒于冰箱保存，使用前应取出置37℃。
取试剂盒内洗涤液用蒸馏水作25倍稀释，置洗瓶中备用。
6.6 质控试剂：-20℃保存，溶解后随试剂一起冷藏，每天随样品一起检测并保存质控结果，每月一次质控小结，失控要有记录及纠正的结果。
7、分析步骤7.1 样品编号：从5号开始编号。
7.2设阴、阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各100微升。
ELISA法检测巨细胞病毒CMV抗体测定(CMV-IgM)标准操作程序
1.检测原理采用酶联免疫捕获法原理进行检测。
利用抗人IgM单克隆抗体制备包被板，辣根过氧化物酶标记CMV 抗原制备酶结合物。
通过免疫反应形成固相二抗-抗体-抗原-酶复合物，该复合物催化底物显色，显色强度与CMV-IgM抗体含量成正比。
2. 样本类型及处理方法3.试剂注意事项：开启所有试剂（包括校准品、标准品、质控品）需注明日期及签名。
每个试剂容器都需贴上写有以下内容的标签：启用日期、截止日期。
开启时应检查试剂是否变色，是否肉眼可见的细菌生长迹象、浊度、沉淀反应等，这些表示试剂已经变质或超过保质期。
不同批号试剂盒中各组份不可以互换，组份所标示量为最低分装量。
4.仪器设备备注：“溯源方式”栏填写送较、自校、送检、自检、比对等。
5.质量控制5.1使用的质控品5.2质控周期5.2.1每一批次标本均需运行一次质控。
5.2.2每一批标本最大量为：92个标本。
5.3变异系数CV<20%5.4质控判断标准即时质控法5.5失控处理：对质控失控需查找原因并进行分析5.5.1先观察整块酶标板显色是否正常。
5.5.2查找操作过程是否按照SOP文件进行。
5.5.3质控品S/CO值>3SD或质控品S/CO值<3SD，结合模式报告结果。
6.操作步骤6.1选用试剂：郑州安图生物工程股份有限公司6.2平衡：从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应放置室温平衡30分钟后方可使用，余者应及时放入有干燥剂的自封袋封存于冰箱中备用。
在平衡试剂的同时，待测标本需放置室温平衡30分钟后再行测试。
6.3配液：取1包固体洗液用500ml纯化水溶解后备用。
配制好的洗涤液如用不完可放置2-8℃冷藏储存，使用前应放置室温平衡20分钟后方可使用。
6.4加样：用移液器在反应孔中分别加入阴、阳性对照血清和CMV-IgM质控品各100ul，测定孔中加入样品稀释液100ul，再依次加入待测血清样品10ul，用封口膜封板。
巨细胞病毒感染诊疗指南与操作规范
巨细胞病毒感染诊疗指南与操作规范【概述】巨细胞病毒感染(cytomegalovirus infection，CMV)是由人巨细胞病毒引起的先天性或后天获得性感染，人群普遍易感。
主要通过母婴及水平传播。
本病基本病理特征为受染的细胞体积增大，胞核和胞浆内出现包涵体。
大多数感染者没有症状或亚临床表现。
但在先天感染、免疫缺陷、器官和骨髓移植患儿中可引起严重感染，甚至危及生命。
【病史要点】1．流行病学资料询问母亲在妊娠期间有无CMV原发感染或再发感染。
有无输血和输血液制品病史。
有无器官和骨髓移植病史。
有无免疫缺陷病史。
2．临床表现1)先天性感染①肝炎表现：有无黄疸，出现时间、程度、进展与否，有无白陶土粪便。
有无鼻衄、皮肤、注射部位出血倾向(警惕肝功能衰竭)。
是否伴食欲减退、腹泻、呕吐等症状。
②肺炎表现：有无咳嗽、呛奶、呼吸困难、气急、青紫、伴或不伴发热(先天感染多伴有严重肺炎)。
抗生素治疗后有无好转。
③神经系统症状：有无小头畸形、智力低下、视力障碍、脑瘫、抽搐及神经性耳聋(主要见于先天感染)。
2)获得性感染①婴儿感染：重点询问黄疸及其程度，有无肝功能异常。
有无咳嗽、气急、青紫(该年龄段可以并发肺炎)。
②儿童期感染：重点询问有无发热、皮疹、伴有黄疸或无黄疸，肝功能有无异常(多数感染CMV后没有症状)。
③免疫缺陷者感染(包括原发性免疫缺陷、艾滋病、器官及骨髓移植)：重点询问有无肺炎、肝炎、脑炎、视网膜炎、胃溃疡、糖尿病等多器官受累相应临床表现。
【体检要点】1．体检皮肤巩膜有无黄疸，程度(轻、中、重)，有无肝脾肿大，肿大程度、质地、边缘，有无腹部膨隆，腹壁静脉怒张，有无移动性浊音，是否伴有皮肤的出血点、浅表淋巴结肿大、浮肿。
2．体检智力发育及体格发育有无落后，有无小头畸形、视力减退、听力损害等。
3．注意有无气急、紫绀、呼吸困难、肺部啰音。
【辅助检查】1．病毒分离或巨细胞包涵体的检测病毒分离或巨细胞包涵体的检测的传统方法是从血、尿、唾液、脐血等受检标本中培养出病毒，若呈阳性即可确诊。
巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程
巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程血清抗巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程1、检测目的规范巨细胞病毒IgM抗体的检测实验，以保证检测结果的准确性和重复性。
2、检测方法)检测IgM抗体。
采用酶联免疫吸附法(ELISA3、检测原理采用捕获法原理检测人血清或血浆样品中人类巨细胞病毒IgM抗体(HCMV-IgM)，微孔中预包被鼠抗人-IgM(u链)，首先加入待检标本的血清或血浆样品后，样品中的IgM抗体都可被捕获，未结合的其他成份(包括特异的IgG抗体)将被洗涤除去;第二步，加入酶标记物，酶标记物是辣根过氧化物酶(HRP)标记的基因重组抗原HCMVrp52-65。
被捕获的IgM中的HCMV-IgM会与辣根过氧化物标记的HCMV重组抗原特异性的结合，洗去其他未结合物，最后用TMB底物显色。
通过酶标仪检测吸光度(A值)从而判定样品中HCMV-IgM抗体的存在与否。
4、实验条件(1)实验室应具有空调、离心机、加样水浴锅，酶标仪等设备。
(2)检验人员应经过操作前培训。
(3)用酶标仪测定。
5、操作程序(1)样本采集。
无抗凝静脉血2ml，当日不做的标本4?保存，必要时，-20?冻存。
(2)操作步骤。
参照试剂盒说明书进行操作。
一肌步骤如下:?取出已包被HCMV 抗原的微孔反应条板。
稀释待测血清(血清1ul加稀释液200u1)，加至微孔中，每孔100ul。
将强阳性、弱阳性、阴性对照各100ul加至相应孔内。
?37?温育30分钟;弃去孔内液，每孔加200--300ul洗涤液，共洗5次。
每次弃去孔内液体后均需在滤纸上拍于(下同)。
?每孔加酶标记抗体100ul，37?，30分钟。
洗板同上。
?加酶底物,色原溶液(OPD,TMB)，每孔100ul37?，15分钟。
?加终止液(2mo1,L HSO)，24每孔50ul。
于酶标仪上读取吸光度(A)值。
(3)结果判定:?阴性对照平均A值必须小于0 .2;弱阳性对照平均A值在0 .20,0 .65;弱阳性对照与阴性对照平均A值之比必须大于或等于2。
巨细胞病毒IgM抗体标准操作程序SOP文件
标本为无溶血血清。
[操作步骤]
1，样本稀释：用血清稀释液1：41稀释定标液、质控、血清，取稀释定标液、质控、血清150ul于另一管中，加吸收液150ul，彻底混匀，室温（21-25℃）静置20+/-5分钟。
2，加样：取包被板，加入吸收稀释定标液、质控、血清样本各100ul。并设空白对照一孔，室温（21-25℃）静置20+/-2分钟。甩去，加洗涤液一滴，蒸馏水洗涤5次，拍干。
3，反应：加酶结合物100ul，室温（21-25℃）静置20+/-2分钟。甩去，每孔加洗涤液一滴，蒸馏水洗涤5次，拍干。
4，显色：每孔加底物和显色液各100ul，室温（21-25℃）静置10+/-2分钟。以阳性对照出现明显蓝色为准。
ABCD医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-01-46
巨细胞病毒IgM抗体
ABCD医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-01-46
巨细胞病毒IgM抗体
版序：ABCD
页码：第1页，共2页
[前言]
巨细胞病毒（CMV）亦称巨细胞涵体病毒。由于感染的细胞肿大并具有巨大的核内包涵体而命名。CMV在人群中感染广泛，是最常见的先天性感染病毒，其通过胎盘侵袭胎儿，引起宫内感染，临床表现为肝脾肿大、血小板减少、溶血性贫血，甚至引起畸形或死胎。由于CMV引起的先天畸形常在生后几个月-几年中表现症状，主要为智力低下。因此，检测CMV对优生优育学有重要意义。检测抗-CMV·IgM近期感染的诊断。
[注意事项]
1、不同批号的试剂不可混用。
2、试剂盒用前先平衡至室温。含血球的标本易出现假阳性，应避免使用。
3、未用完的板条应及时封存于易封袋中。
免疫球蛋白M(IgM)测定标准操作程序SOP文件
mg/dl
g/l
mg/dl
g/l
40-230
0.4-2.3
男性:
50-320
女性:
60-370
0.5-3.2
0.6-3.7
8线性范围
本法线性范围为30-490mg/dl，不准确度允许范围 ±3SD，不精密度CV=2.9%，灵敏度为5mg/dl。
9注意事项
9.1血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
10.4乳糜：甘油三酯的浓度在1200mg/dl以下不会受到明显干扰。
10.5 IgM的浓度低于10000mg/dl时不会有HOOK效应。
10.6 IgA,IgG,IgM之间没有交叉反应。
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-45
免疫球蛋白M（IgM）测定
版序：ABCD
页码：第3页，共3页
9.2换算公式：mg/dl×0.01＝g/l
9.3仅应用于体外诊断。
10抗干扰能力：
10.1标准：回收率在90％－110％之间。
10.2黄疸：黄胆指数达到63时不会有明显干扰。（直接和间接胆红素浓度约为63mg/dl）
10.3溶血：溶血指数达到1000时不会有明显干扰。（血红素浓度约1000mg/dl）
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-45
免疫球蛋白M（IgM）测定
版序：ABCD
页码：第1页，共3页
1测定方法
免疫比浊法。
2测定原理
抗IgM抗体与标本中的IgM抗原发生反应形成抗原-抗体复合物，为颗粒状，浊度变化与IgM的量成比例，因此，检测浊度可测得IgM的含量。
优生四项检测标准操作规程
优生四项检测标准操作规程1.检验原理：本品系用抗人IgM抗体固相的硝酸纤维素膜和胶体金标记的巨细胞病毒抗原、弓形体抗原、风疹病毒抗原、单纯疱疹病毒Ⅱ型抗原及其他试剂制成，应用层析式捕获法的原理检测人血清或血浆中巨细胞病毒抗体（IgM）、弓形虫抗体（IgM）、风疹病毒抗体（IgM）、单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体（IgM），用于巨细胞病毒感染、弓形体感染、风疹病毒感染、单纯疱疹病毒Ⅱ型感染的临床辅助诊断。
2.试剂主要组成成分：巨细胞病毒抗体（IgM）、弓形虫抗体（IgM）、风疹病毒抗体（IgM）、单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体（IgM）联合检测卡；每一个检测卡组成为独立的检测单元，含有巨细胞病毒抗体（IgM）、弓形虫抗体（IgM）、风疹病毒抗体（IgM）、单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体（IgM）检测条各一条。
每一个检测条由吸水纸、纤维素膜、金标垫、样品垫、PVC衬板和包装塑料卡组成。
纤维素膜上喷有鼠抗人IgM单克隆抗体，金标垫上喷有胶体金标记的相应的巨细胞病毒、弓形体、风疹病毒、单纯疱疹病毒Ⅱ型基因工程抗原。
3.样本要求：待测样本为血清或血浆，应在2-8℃保存。
样本若需保存时间较长（超过2天），则应冰冻保存。
抗凝剂如EDTA钠盐、枸橼酸钠、肝素等对试验结果没有影响。
避免使用长菌或被污染的血清或血浆，避免使用溶血、混浊或脂血样本及反复冻融样本，否则可能会造成假阳性。
4.检验方法：将检测卡水平放置，在检测孔中加入10ul标本，再加1滴（或50ul）标本稀释液。
15—20分钟内观察结果，超过20分钟判读结果无效。
5.阳性判断值在20分钟内观察结果，超过20分钟判读结果无效。
只显示对照线为阴性；对照线和检测线均出现为阳性；对照线不显示，本次实验无效。
弓形虫抗体（IgM）、风疹病毒抗体（IgM）、单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体（IgM），表明近期没有感染巨细胞病毒或弓形体或风疹病毒或单纯疱疹病毒Ⅱ，但标本取样太早，也可能得出阴性结果。
因此阴性结果并不是结论性的6.2阳性结果代表标本中检测出巨细胞病毒，或弓形体，或风疹病毒，或单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体（IgM），表示患者急性感染了巨细胞病毒，或弓形体，或风疹病毒，或单纯疱疹病毒Ⅱ型，检测线颜色越浓，表示相应病原体IgM含量越高。
巨细胞病毒IGM抗体测体测定操作规程
巨细胞病毒IGM抗体测体测定操作规程用途：通过检测人血清样本中是否含有巨细胞病毒IGM抗体，用于辅助诊断患者近期感染了巨细胞病毒。
基本原理：本试剂盒采用鼠抗人IGM单克隆抗体包被微孔条，辣根过氧化物酶标记基因工程重组表达的巨细胞病毒特异性原原为示踪物，TMB显示系统，EIA捕获一步法检测人血中抗巨细胞IGM抗体。
试剂：巨细胞病毒IGM抗体检测试剂盒仪器：酶标检测仪样本要求：血清标本按常规方法由静脉采集，血浆标本可采用常规用量的肝素或枸橼酸钠抗凝，5天内测定的标本可以放置4℃保存。
标本放置在-20℃至少可以保存3个月。
标本避免溶血或反复冻溶，混浊或有沉淀的标本应离心或过滤澄清后再检测。
需保存的血清在采集、保存过程中应注意无菌操作。
试验方法：1、平衡：将试剂盒从冷藏环境中取出，置室温平衡30分钟后使用。
2、配液：将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20稀释备用。
3、设定：每次试验应预设空白对照1孔（暂不加任何液体），阴性对照3孔，阳对照2孔。
4、加样：按顺序在各反应孔中分别加入20υL待检标本和阴、阳性对照。
5、加酶：依次向每孔加入100υL酶结合物（空白对照不加），振荡混匀。
6、温育：在反应板上加盖封板膜，置37℃温箱或水浴锅中，反应60分钟。
7、洗板：将孔内液体甩干，在各反应孔加入稀释后的洗涤液300υL，静置15秒钟，甩弃洗涤洗涤液：如此洗涤5遍，最后一次扣干反应板。
8、显色：每孔依次加入底物A、B液务50υL（包括空白对照孔），加盖封板膜，振荡混匀，37℃避光显色15分钟。
9、终止：每孔加入终止液50υL（包括空白对照孔），振荡混匀终止反应。
10、测定：用空白对照孔调零，并尽快用酶标仪单波长450 nm测定各孔OD值。
也用双波长450nm/630-690nm测定各孔OD值。
结果解释1、临界值（CUT-OFF值）计算：临界值=0.10+阴性对照OD平均值（阴性对照OD平均值≤0. 05按0. 05计算）。
巨细胞病毒igm标准
巨细胞病毒igm标准
巨细胞病毒IgM标准。
巨细胞病毒（CMV）是一种广泛存在于人类群体中的病毒，它可以引起多种
临床疾病，尤其是对免疫功能不全的人群造成较大威胁。
在临床检测中，对巨细胞病毒IgM抗体的检测具有重要意义，因为它可以帮助医生及时了解患者的感染情况，从而进行有效的治疗和干预。
巨细胞病毒IgM标准是指对巨细胞病毒IgM抗体的检测结果进行判定的标准。
一般来说，巨细胞病毒IgM抗体阳性提示近期感染，而巨细胞病毒IgM抗体阴性
则表示没有近期感染。
然而，对于巨细胞病毒IgM标准的制定和应用，仍然存在
着一些争议和挑战。
首先，巨细胞病毒IgM抗体的检测方法和标准并不统一。
不同的实验室和医疗机构可能采用不同的检测试剂和标准，导致结果的差异性。
因此，需要建立统一的巨细胞病毒IgM标准，以确保检测结果的准确性和可比性。
其次，巨细胞病毒IgM标准的制定需要考虑到不同人群的特点和感染情况。
例如，对于孕妇和新生儿来说，巨细胞病毒感染可能会对胎儿造成严重影响，因此对于这部分人群的巨细胞病毒IgM标准需要进行特殊的制定和应用。
此外，巨细胞病毒IgM标准的制定也需要考虑到不同病情的临床表现和治疗需求。
对于免疫功能不全的患者来说，巨细胞病毒感染可能会引起严重的并发症，因此需要更加严格的巨细胞病毒IgM标准来进行监测和干预。
综上所述，巨细胞病毒IgM标准的制定和应用具有重要的临床意义，但也面临着一些挑战和争议。
未来，我们需要进一步完善巨细胞病毒IgM标准，以确保其
在临床诊断和治疗中的准确性和有效性，从而更好地保护患者的健康。
巨细胞病毒实验室检测方法流程及其评价
巨细胞病毒感染实验室测试的目的和流程如上所述，用于CMV检测的方法可用于免疫受损患者中CMV管理的不同方面。
具体地，这些测定可用于监测和筛选，预测和风险评估，快速和准确诊断，评估治疗反应，评估复发风险和检测抗病毒药物抗性。
图5-7描述了各种测定方法在免疫受损宿主中治疗CMV疾病的效用。
图5 使用CMV血清学对移植接受者及其捐献者的诊断流程。
筛查，监视和预防CMV实验室检测的最常见表现之一是疾病风险评估。
根据临床情况，可以使用血清学，抗原血症和分子检测。
移植受体的典型情况如图5所示。
CMV血清学用于确定孕妇原发感染或艾滋病患者再激活的风险。
在移植领域，对来器官捐献者和接受者的血液样品进行CMV 血清学检测，以确定原发感染或疾病再激活的风险。
在这些风险知识的了解影响每个患者人群的各种预防工作。
特别是，CMV D+/R-错配的SOT受者具有原发性巨细胞病毒病的风险最高，因此抗病毒预防或侵袭性CMV监测和抢先治疗具有很大的益处。
一些医疗中心也使用血清学来确定移植后原发性CMV疾病的持续风险，因为血清转换能显示出免受后续CMV 疾病[133]。
移植后使用抗原血症或NA T进行CMV复制的连续监测是早期的常见做法。
该诊断方法是针对CMV疾病的先发性治疗策略中不可或缺的组成部分（图6）。
使用该策略，在移植后的第一个12周内每周收集来自移植患者的血液样品，并通过NA T或pp65抗原血症测试CMV 的存在。
如果检测到CMV高于与后续CMV疾病高风险相关的预定阈值，抢先启动抗病毒治疗阻止其进展到临床疾病。
这种预防性方法的成功在很大程度上取决于诊断测试的性能特征，理想情况下，该测试应具有高度敏感性，高度特异性和高预测性。
这种情况下，PCR 和抗原血症测定已经进行测试并比较。
然而，目前使用哪种检测方法（PCR与抗生素血症）的争论备受争议，应该以每个中心机构的可用资源为指导[66,88,134-137]。
pp65抗原和分子方法已经在检测CMV和在引导抢先治疗展示出优秀的临床效用[82,137]。
免疫球蛋白IgM测定
免疫球蛋白IgM测定1检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2原理免疫透射比浊法抗免疫球蛋白M抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物，出现凝集，进行透射比浊检测。
通过加入PEG可促使反应迅速达到终点，可增加灵敏度，降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。
3标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.3 8h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置―150C――200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司IgM试剂盒,国械注进20142405056YZB/GER 5724-2014）4.1.1 试剂组成R1:TRIS 缓冲液：20 mmol/l，pH 8.0；氯化钠：200 mmol/L；PEG：3.6%；防腐剂和稳定剂。
R2:抗人免疫球蛋白M抗体（羊）：取决于滴度；TRIS缓冲液：20 mmol/l；氯化钠：150 mmol/L；防腐剂4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。
机上稳定期：90天。
4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。
4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的IgM校准品对自动分析仪进行校准4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
免疫球蛋白MIgM测定免疫比浊法-检验科免疫室作业指导书
免疫球蛋白MIgM测定免疫比浊法1.原理分析原理是液相免疫沉淀散射比浊终点测定法。
抗血清用缓冲液稀释后加到一份病人血清中，经过孵育后可以测定抗原抗体复合物产生的散射光。
散射光结果和血清中的IgM浓度成正比。
标本采集：标本采集前病人准备：受检者空腹标本种类：血清或血浆标本要求：取被检者静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
标本储存：待测标本在2-8℃存放不超过24小时，-20℃不超过三个月，-70℃长期保存。
避免反复冻融。
标本运输：室温运输标本拒收标准：细菌污染、溶血、脂血不能作测定。
试剂6.1试剂名称：免疫球蛋白M检测试剂盒6.2试剂生产厂家：芬兰Orion诊断试剂公司6.3包装规格：60Test/kit6.4试剂盒组成：缓冲液30ml空白缓冲液30ml抗血清试剂0.5ml定标液0.5ml磁卡1张仪器设备：仪器名称：OrionTurboxRplus特定蛋白分析仪仪器厂家：芬兰Orion集团公司仪器型号：Turboxplus8.操作步骤：8.1试剂配制：8.1.1抗血清应用液准备：吸取500ul抗血清加到反应缓冲液中，轻轻混匀，应用液2-8℃可保存12个星期。
8.1.2空白缓冲液：液体待用。
8.1.3定标液：用0.9%NaCL进行1：51稀释。
定标液根据IFCC提供的材料CRM470进行标定。
8.2收集与处理样品：样品用0.9%Nacl进行1：51稀释。
8.3为每一份样本测定准备一份样品空白，同样，为定标液另外准备一份定标液空白。
8.4准备两份定标液测定（定标完成后，标准曲线数据存储在磁卡内。
下次检测如使用同批试剂，可以不必做定标而直接使用磁卡上的定标信息）。
8.6轻轻摇动混匀，室温18-25℃放置30±5分钟。
8.7仪器测试步骤：参见TurboxR特定蛋白分析仪作业指导书。
9.结果计算：仪器直接计算并打印结果。
临床意义：IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是一种高效能抗体、能固定补体，具有溶菌、抑菌、中和病毒作用。
免疫球蛋白IgM操作程序
免疫球蛋白IgM操作程序1.目的规范免疫球蛋白IgM检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理人血清中的IgM与试剂中适量的特异性抗体发生反应,形成不溶性的免疫复合物,使反应液产生浊度,在抗体量一定的情况下,在340nm处浊度变化的高低与血清中的IgM浓度成正比关系5. 标本采集与处理5.1病人准备：采血前不作剧烈运动。
5.2标本类型：无溶血的血清，凝固后尽快分离血清，标本严格避免溶血。
5.3标本稳定性：血清中C4活力在室温保存可稳定3天, 2～8℃可稳定7天，-20℃可稳定30天。
6. 试剂6.1试剂：本科使用伊利康试剂盒，即用式液体试剂。
试剂内主要成分如下：规格: R1 1×60ml R2 1×20ml6．2试剂准备试剂为液体双试剂，开瓶即可使用。
6．3试剂稳定性原装试剂在2～8℃避光保存，稳定期12个月。
试剂开瓶载机2～8℃稳定30天。
7.仪器参数设定AU2700参数设定：伊利康试剂仪器参数具体参加试剂厂家提供的相应仪器的参数说明书.8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
8.1.2仪器经过大保养后。
8.1.3挪动仪器的安装地点。
8.1.4更换试剂批号。
8.1.5室内质控失控。
8．2 AU2700伊利康试剂系统的校准：8.2.1 准备：伊利康配套校准物.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期。
8.2.3保存位置：2号冰箱。
8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的相应位置放定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。
9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控品(批号:45612/45613)。
人抗巨细胞病毒抗体IgM(anti-CMV
人抗巨细胞病毒抗体IgM(anti-CMV IgM)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E09546h特异性：本试剂盒可检测人Anti-CMV IgM，且与其他相关抗体无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中Anti-CMV IgM含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.酶结合物（Conjugate）：2×6 ml/瓶。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：2×6 ml/瓶。
4.阳性对照（Positive Control）：1×0.5ml/瓶。
5.阴性对照（Negative Control）：1×0.5ml/瓶。
6.底物溶液A（Substrate A）：1×7 ml/瓶。
7.底物溶液B（Substrate B）：1×7 ml/瓶。
8.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。
9.终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶。
需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6. 蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
免疫球蛋白(IgM)定量测定试剂盒标准操作程序
免疫球蛋白（IgM）测定标准操作程序1.摘要本试剂盒适用于体外临床检验，用于测定人血清中免疫球蛋白IgM的含量。
IgM的主要功能是与抗原结合，并进一步触发抗原的分解。
IgM是初次接触新抗原后首先合成的免疫球蛋白。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中IgM的浓度。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定IgM浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的免疫球蛋白（IgM）试剂盒采用的是免疫透射比浊法。
5.原理样本中的IgM与试剂中相应的抗体相遇，立即形成抗原抗体免疫复合物，在特定的缓冲环境中形成浊度，其浊度在合适的抗体浓度存在时与抗原含量成正比，与相同条件下操作的校准品比较，即可求出样品中IgM的含量。
6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：磷酸缓冲液（PH7.2）、Tween20、PEG、NaN3、羊抗人IgM抗体。
7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
R1、R2：打开后冷藏于分析仪中可稳定28天。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用上海科华生物工程股份有限公司试剂盒内提供的标准品对自动分析仪进行校准。
由a、b、c、d、e五只组成，浓度见瓶签。
校准品可溯源至国际参考物质ERM470。
8.2质控品使用某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控结果进行转换，对质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
肺炎支原体IgM抗体检测SOP
肺炎支原体IgM抗体检测SOP一、检验目的规范实验室人员操作，以保证实验结果的准确性。
二、预期用途该产品用于定性检测血清、血浆或全血中的肺炎支原体IgM抗体。
是引起社区获得性呼吸道感染的主要病原体之一，可以导致支气管炎和非典型性肺炎。
主要引起人非典型肺炎、气管炎及支气管炎，多经口和呼吸道等途径传播，多发于儿童和青年人。
MP感染已占小儿呼吸道疾病30%以上，且有增加趋势。
人体感染肺炎支原体后，能产生特异性IgM和IgG抗体。
IgM 抗体出现早，一般在感染后1周出现，3~4周达高峰，以后逐渐降低。
再次感染或重复感染后，常在1-2周内出现较高水平的IgG抗体。
MP肺炎与一般呼吸道感染和肺炎的临床症状没有明显区别，MP感染早期诊断有利于MP肺炎的治疗。
血青学诊断法是临床常用的主要诊断方法之一，灵敏度和特异性适中，常用的主要有酶联免疫吸附试验和凝集试验。
三、检验原理本产品以胶体金作为指示标记，用胶体金标记抗人IgM单抗，以基因工程技术表达肺炎支原体P1蛋白抗原标被硝酸纤维素膜，应用“间接法”免疫层析技术原理，检测的肺炎支原体感染病人血清、血浆或全血中的肺炎支原体抗体IgM,在检测过程中，若样本中存在肺炎支原体抗体gM, 则肺炎支原体抗体1gM与样本吸附垫中的胶体金一抗人IgM单抗结合物形成复合物，复合物沿硝酸纤维素膜移动到检测区，与检测线上包被的肺炎支原体P1蛋白抗原结合，多余的未被结合的结合物继续移动到质控区，与质控线上包被的羊抗鼠IgG 抗体结合，反应膜上出现1条红色的检测线和1条红色的质控线；若样本中不存在肺炎支原体抗体IgM,则胶体金一抗人IgM单抗结合物直接沿硝酸纤维素膜移动到质控区，与质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体结合，仅形成一条红色的质控线。
四、主要组成成份1、试剂盒组分包括肺炎支原体1gM抗体检测卡，样品稀释液。
1.1、检测卡主要组分：包括金标垫和硝酸纤维素检测膜，金标垫内包被有胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体；硝酸纤维素检测膜的检测线上包被有基因工程技术表达的肺炎支原体P1蛋白抗原，质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体。
抗体效价测定操作规程
抗体效价测定操作规程 Hessen was revised in January 2021抗体效价测定操作规程操作步骤：一．IgG类1.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200μL加等体积2—Me溶液混合，封口，置37℃水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清600L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。
第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。
这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。
2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。
（如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1液3d，混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。
通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点，终点血清稀释度的倒数为效价（Titer），或称滴度。
二．IgM1.血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。
第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。
这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。
IGM基本操作规程
离石区人民医院检验科作业指导书主题内容血清IgM标准操作规程文件编号：MY-SOP-012版本:B/1生效日期：2011-10-01页码：第1页，共6页1、临床意义IgM占血清免疫球蛋白总量的6%主要存在血管内，是机体受抗原刺激后最先产生的抗体，起“先锋免疫”，具有很强的细胞毒活性和细胞溶解活性，由于IgM主要存在血管内，是抗血管内感染的第一线抗体，对防止败血症的发生有重要作用。
IgM升高见于：系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、硬皮病、急慢性肝病、弓形体病、4乙型脑炎等；降低见于：原发性无丙种球蛋白血症、非IgA和IgG型多发性骨髓瘤、霍奇金病、慢性淋巴细胞白血病、蛋白丧失性胃肠病等。
2、检测原理人血清或血浆中免疫球蛋白M与其相应抗体（羊抗人免疫球蛋白M抗体）在液相中相遇，立即形成抗原-抗体复合物，并形成一定浊度。
与通过同样处理的校准品比较，即可计算出样本中免疫球蛋白M含量。
3、样品准备样品为空腹血清；血浆（肝素抗凝，0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液；EDTA抗凝，1.8mg EDTA可抗凝1.0ml血液）样品稳定性：样品应在低温条件下运输保存，样品中免疫球蛋白M在2～8℃密闭可稳定7天。
-20℃保存可稳定3个月。
样品不宜反复冻融，以免影响测定结果4、试剂4.1、试剂组成R1：检测试剂1磷酸盐缓冲液PEG消脂剂防腐剂R2：检测试剂2磷酸盐缓冲液羊抗人IgM抗体防腐剂4.2、试剂准备R1试剂为即用型液体试剂,开瓶装载即可使用。
R2试剂为即用型液体试剂,开瓶装载即可使用。
4.3、试剂稳定性未开瓶试剂2～8℃储存可稳定至标签标明的失效期。
R1试剂开瓶后，在2～8℃保存时，请于1个月以内使用；R2试剂开瓶后，在2～8℃保存时，请于1个月以内使用。
4.4、试剂规格商品货号、试剂规格商品货号试剂规格使用规格（√）CH0101308 R1 60ml×3 R2 45ml×1CH0103308 R1 40ml×1 R2 10ml×1CH0105308 R1 40ml×2 R2 10ml×25、操作基本参数：方法：终点法样品/试剂： 1/100主波长： 340nm 反应温度： 37℃副波长： 700nm 反应时间： 10min操作：测定（U）校准（C1）校准（C2）校准（C3）校准（C4）空白（B）样品（ul） 3 -- -- -- -- -- 校准液（ul）-- 3 3 3 3 -- 蒸馏水（ul）-- -- -- -- -- 3试剂R1（ul）240 240 240 240 240 240 混匀，37℃恒温5分钟，340nm空白管调零，测定吸光度A1试剂R2（ul）60 60 60 60 60 60 混匀，37℃恒温5分钟，340nm，空白管调零，测定各管吸光度A2。
人抗巨细胞病毒抗体IgM(anti-CMV
人抗巨细胞病毒抗体IgM(anti-CMV IgM)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E09546h特异性：本试剂盒可检测人Anti-CMV IgM，且与其他相关抗体无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中Anti-CMV IgM含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.酶结合物（Conjugate）：2×6 ml/瓶。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：2×6 ml/瓶。
4.阳性对照（Positive Control）：1×0.5ml/瓶。
5.阴性对照（Negative Control）：1×0.5ml/瓶。
6.底物溶液A（Substrate A）：1×7 ml/瓶。
7.底物溶液B（Substrate B）：1×7 ml/瓶。
8.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。
9.终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶。
需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6. 蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
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血清抗巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程
1、检测目的
规范巨细胞病毒IgM抗体的检测实验，以保证检测结果的准确性和重复性。
2、检测方法
采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测IgM抗体。
3、检测原理
采用捕获法原理检测人血清或血浆样品中人类巨细胞病毒IgM抗体（HCMV-IgM），微孔中预包被鼠抗人-IgM（u链），首先加入待检标本的血清或血浆样品后，样品中的IgM抗体都可被捕获，未结合的其他成份（包括特异的IgG抗体）将被洗涤除去；第二步，加入酶标记物，酶标记物是辣根过氧化物酶（HRP）标记的基因重组抗原HCMVrp52-65。
被捕获的IgM中的HCMV-IgM会与辣根过氧化物标记的HCMV重组抗原特异性的结合，洗去其他未结合物，最后用TMB底物显色。
通过酶标仪检测吸光度（A值）从而判定样品中HCMV-IgM抗体的存在与否。
4、实验条件
（1）实验室应具有空调、离心机、加样水浴锅，酶标仪等设备。
（2）检验人员应经过操作前培训。
（3）用酶标仪测定。
5、操作程序
（1）样本采集。
无抗凝静脉血2ml，当日不做的标本4℃保存，必要时，-20℃冻存。
（2）操作步骤。
参照试剂盒说明书进行操作。
一肌步骤如下：①取出已包被HCMV 抗原的微孔反应条板。
稀释待测血清(血清1ul加稀释液200u1)，加至微孔中，每孔100ul。
将强阳性、弱阳性、阴性对照各100ul加至相应孔内。
②37℃温育30分钟；弃去孔内液，每孔加200--300ul洗涤液，共洗5次。
每次弃去孔内液体后均需在滤纸上拍于(下同)。
③每孔加酶标记抗体100ul，37℃，30分钟。
洗板同上。
④加酶
底物／色原溶液(OPD／TMB)，每孔100ul37℃，15分钟。
⑤加终止液(2mo1／L H
2SO
4
)，
每孔50ul。
于酶标仪上读取吸光度(A)值。
(3)结果判定：①阴性对照平均A值必须小于0 .2；弱阳性对照平均A值在0 .20～0 .65；弱阳性对照与阴性对照平均A值之比必须大于或等于2。
符合以上3个条件，
本次试验结果可信，否则必须重复检测。
②若待测血清孔呈色较弱阳性对照孔深则判为阳性，反之为阴性。
但在弱阳性对照A值±10％范围内应复测一次，如确实高于弱阳性对照则判为阳性。
6、参考区间
正常人血清抗巨细胞病毒抗体IgM为阴性。
7、质量控制
(1)不同试剂盒所用抗原可能存在差异，检测敏感性也有差别，应参照阳性、阴性对照设定cutoff(co)值。
(2)试剂盒自冰箱取出后应恢复至室温(18～25℃)后再开封使用。
(3)不同厂家、不同批号试剂不可混用，不得使用过期试剂。
(4)溶血、脂血、细菌污染血清不宜使用。
(5)洗涤微孔板时应彻底，孔内残留液体应在吸水纸上拍干，否则会影响测试结果。
(6)检验人员应经过操作前培训，熟悉判读结果；所使用加样器，酶标仪设备应定期进行校正，以确保实验数据的稳定。
8、临床意义
(1)巨细胞病毒(CMV)是人类病毒性感染的常见病原体之一。
CMV感染可引起多种传染性疾病，特别是围产期孕妇感染是引起胎儿宫内发育迟缓、发育畸形的主要原因，可影响神经系统发育及导致智力障碍。
(2)血清中抗HcMY-IgM抗体阳性有助于对急性或活动性HcMV感染的诊断，脐带血查出抗HcMV—lgM抗体说明胎儿宫内感染。
(3)抗HcMV—IgG抗体阳性对诊断既往感染和流行病学调查有意义，若间隔3周后抽取血清该抗体阳性滴度升高4倍以上(双份血清进行对比)，则对判断HCMV近期复发感染有意义。
(4)由于技术上的原因和生物学上的交叉反应，对阳性结果的意义应结合临床综合分析，尤其是孕妇，不应仅将抗HcMV—IgM抗体阳性作为终止妊娠的依据。