2015-动物实验基本操作

2015-动物实验基本操作动物实验

基本操作一（固定、性别判定、标

识）【实验目的】在做动物试验

时，为确保给药、实验顺利进

行，防止被动物咬伤、准确辨别动

物性别、准确标识动物，要学会

用正确方法捉拿实验动物、掌握

辨别动物性别的方法以及掌握标识

动物的方法。

【实验对象】SD大鼠，KM小鼠，雌雄各半，体

重180-250g。

【实验器材和药品】

器材：鼠笼、大小鼠固定器、方木板、美式图钉、细绳、防护手套

药品：苦味酸80%〜90酒精饱和溶液、20%乌拉坦【实验步骤】

一、小鼠的捉拿

1、徒手固定：用右手提起尾巴中部，放在鼠笼盖或其他粗糙面上。向后上方轻拉，此时，小鼠前肢

紧紧抓住粗糙表面。左手拇指和食指迅速捏住小鼠颈背部皮肤，再置小鼠于左手心，并以左手掌心和中指夹住小鼠背部皮肤，无名指压住小鼠尾根部，将其固定于手中。右手可行注射或其它操作。

2、固定器固定：尾静脉注射或给药时，将小鼠放进固定器中或者大小和重量适当的容器（如烧杯），只露出尾巴，该类容器能够压住尾部，避免其活动。勿固定过紧造成窒息死亡。进行腹腔手术或心脏采血时，先准备一个15-20cm的方木板，边缘钉入五颗钉子。将小鼠四肢分别用20-30cm的线绳捆绑，线的另一头分别绑在方木板的钉子上，并且在头部上颚切齿牵引一根线绳，也固定在钉子上，达到完全固定。

二、大鼠的捉拿

4-5 周内的大鼠，方法同小鼠。周龄较大的，^V: 1、首先戴好防护手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上。3、左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取保定。

三、性别判定小鼠、大鼠性别判定

(1)幼鼠外生殖器与肛门间隔短的是早，夕卜生殖器与肛门间隔长的是£。

(2)成年动物可直接肉眼辨认，雄性有膨起的阴囊和阴茎，雌性动物有阴道口。

四、动物的标记

小鼠的短期标记法：苦味酸80%〜90酒精饱和溶液

(黄色)，标出属于自己的编号

【注意事项】

1、实验人员要有精神准备：掌握方法，胆大心细，做好防护。

2、动物兴奋的时候不要抓取，待其安静下来。

3、根据受试动物的给药部位或采血方法的不同，事先选择徒手固定还是固定器固定。

4、固定时把握好力度，过分用力会使小鼠颈椎脱臼或窒息死亡，若用力过轻头部能反转过来咬伤实验者的手。

【思考题】

1.在固定实验动物时如何才能快、准、稳？动物

实验基本操作二（给药途径、采血）

【实验目的】在做动物试验时，为确保给药、采血实验顺利进行，要掌握根据不同的情况进行动物给药以及采血的正确方法。

【实验对象】SD大鼠（180-250g），KM小鼠（18-22g），雌雄各半。

【实验器材和药品】

器材：鼠笼、大小鼠固定器、方木板、长钉、细绳、防护手套,灌胃针，注射器（1ml,5ml ）、棉球，剪毛剪、手术剪、手术刀、采血管、弯头镊子药品：生理盐水、75%酒精棉球，一次性采血管，

一次性EP管

【实验步骤】

一、给药途径

1、大、小鼠的灌胃法

用左手固定鼠，右手持灌胃器（安好灌胃针

并已吸好药物），将灌胃针从鼠的嘴角插入口腔，压迫鼠的头部，使口腔和食管成一直线，轻轻转动针头刺激鼠的吞咽，将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食管，如果动物挣扎厉害，退出灌胃针，待动物安静下来，重新插入。

灌胃针前端达到膈肌水平，即可慢慢推灌药液，如很通畅，则说明已进入胃内。如不通畅，且动物挣扎厉害，须拔出重新操作。

2、皮下注射左手拇指和食指轻轻提起动物皮肤，右手持注射器，将注射针刺入皮下，若针头容易摆动则证明针头已在皮下，推送药液，缓慢拔出注射针，稍微用手指压片刻针刺部位，以防药物外漏。

3、肌肉注射选用肌肉发达，无大血管经过的部位，如臀部或股部。（肌肉注射比皮下和腹腔注射用得较少，但当给动物注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时，常采用肌肉注射）

4、腹腔注射A、左手抓取并固定好动物，将腹部朝上。B、右手持注射器将针头在下腹部腹白线稍左或偏右的位置，从下腹部朝头方向几乎平行地刺入皮下，进针3-5mm C再使针头与皮肤呈45°角

斜穿过腹肌，当针尖穿过腹肌进入腹腔时，有落空感，然后固定针头，保持针尖不动，回抽，无回血，无肠液、尿液，便可缓缓推入药液。

5、静脉注射（尾静脉注射）A、大、小鼠尾静脉共有3根（左、中、右），一般常选用两侧的静脉。注射前，先把动物固定在暴露尾部的鼠尾固定器内（可用烧杯、铁丝罩或粗试管等物代替）.B、拔去尾部静脉走向的毛，用75%酒精棉球反复擦拭鼠尾，以达到消毒、血管扩张及软化表皮角质的目的。C、尽量从静脉的远心端刺入血管，回一下血，将药液缓慢注入。D注射完毕，用棉球压住针眼，拔去针头，继续压迫数分钟。

二、米血

1、心脏米血将动物仰卧固定在鼠板上，剪去胸前区部位的被毛，消毒。在左侧第3-4肋间，用左手食指摸到心搏处，右手持注射器选择心搏最强处穿刺。当针穿刺入心脏时，血液由于心脏搏动的力量自动进入注射器。如不需保留动物存活时，也可麻醉后切开动物胸膛，直接用注射器刺入心脏内采血，也可剪破心脏直接用注射器或吸管吸血。

2、摘眼球采血用左手抓住动物颈部皮肤，并将动物轻压在实验台上，稍微侧卧，左手拇指尽量将动物眼周围皮肤往眼后压，使动物眼球突出并充血，用弯头镊子迅速摘除眼球，眼眶内很快流出血液。

3、眶静脉丛（窦）采血将动物麻醉，采用侧眼

向上固定体位，用左手拇指和食指从背部较紧地握住大（小）鼠颈部。取血时，左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，是头部静脉血液回流困难，眼球充分外突，眶静脉丛充血。

【注意事项】

1、掌握方法，胆大心细，做好防护。

2、常用灌胃量：小鼠：0.2〜1ml,大鼠1〜4m

3、摘取眼球采血法一般可取约为小鼠体重4-5% 的血液量。

【思考题】

1.如何熟练掌握大小鼠的给药途径和采血方法?

动物实验基本操作三（安乐死）

【实验目的】在科学应用和教学实验中，因实验终结、研究所需提供血液或其他组织脏器、不适合繁殖或者是当动物的疼痛与窘迫程度超过预期等情况下，需

要我们以人道的方式使动物死亡，使动物在最低程度的疼痛、恐惧，并在最短的时间内失去知觉和痛觉。

【实验对象】KM小鼠，雌雄各半，体重18-22g。【实验器材和药品】

器材：鼠笼、大小鼠固定器、注射器（1ml）、棉球，剪毛剪、手术剪、手术刀、采血管、弯头镊子、烧杯100ml、方木板

药品：吸入性麻醉剂、注射型麻醉剂、75%酒精棉