水提醇沉提取银杏叶多糖工艺浸提温度的试验研究

山东畜牧兽医2019年第40卷
10
水提醇沉提取银杏叶多糖工艺浸提温度的试验研究
刘奕辰（山东省泰安第一中学271000）
摘要本研究对水提醇沉法提取银杏叶多糖工艺中浸提温度分别为55℃、65℃、75℃、85℃、95℃时的粗多糖得率
进行测定，结果表明：水提醇沉法提取银杏叶多糖最佳温度为85℃。

关键词银杏叶粗多糖水提醇沉法浸提温度
中图分类号：S816.7+6 文献标识码：A 文章编号：1007-1733(2019)02-0010-02
银杏(学名：Ginkgo biloba L.)，为银杏科、银杏属落叶乔木，中生代孑遗的稀有树种，中国特产，随着社会进步和园林技术的发展，已成为随处可见的园林绿化、观赏树种，人们对银杏的开发利用也越来越广泛。

除树干、果实以外，银杏叶提取物也已被用于药物、保健品、食品添加剂、功能性饮料、化妆品等领域，带来很大的经济效益。

但目前银杏叶应用技术较成熟的成分主要是黄酮和内酯类化合物等脂溶性提取物[1]，对其水溶性提取物活性成分如银杏叶多糖的开发利用还很少。

植物多糖是一种天然植物大分子，具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等生物学活性，且毒副作用小、残留少。

有研究证明，植物多糖是良好的动物免疫增强剂和免疫佐剂[2, 3]，如能将银杏叶多糖提取、研究，用于畜牧业生产，将开发银杏叶新的应用领域，带来新的经济效益。

目前，植物多糖的提取方法很多，主要有溶剂提取法、酸提法、碱提法、超滤提取法、超声提取法等等[4]，其中水提醇沉法提取法不需要特殊设备，技术简单易操作，成本较低。

本试验旨在寻找水提醇沉提取银杏叶多糖的最佳水浸提温度。

1 材料与方法
1.1 银杏叶7月份采自山东农业大学校园，全叶。

1.2 试剂去离子水，正丁醇，氯仿，95%乙醇。

1.3 仪器设备 202型电热恒温干燥箱，北京市永光明医疗仪器厂；FA1004型分析电子天平，常州市幸运电子设备有限公司；HH-S4数显恒温水浴锅，国华电器有限公司；冰箱，中国海尔制造；TDL-5000bR型低速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂。

1.4 工艺流程新鲜银杏叶60“
℃杀青”烘干至恒重，粉碎机粉碎，过260目筛，用水提醇沉法提取多糖，工艺流程如下：银杏叶粉末称重→与去离子水按照1:10的比例混合搅拌→热水浸提8h(此过程中伴随蒸发要随时补充添加去离子水，每0.5h搅拌一次)→置于4℃冰箱沉淀过夜→取上清液用6层纱布过滤℃
→4离心，得上清液→上清液85℃水浴浓缩→浓缩液与Sevage试剂混合、震荡、离心除蛋白(重复2次)，得上清液→上清液加6倍量无水乙醇沉淀多糖，-20°C过夜→弃上清液，收集絮状沉淀→置于55℃干燥箱中干燥至恒重(每天要注意观察、搅拌)→粗多糖。

1.5 试验分组试验分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组，上述工艺流程中热水浸提环节温度分别设定为55、65、75、85、95℃，其余工艺流程相同。

1.6 粗多糖得率计算银杏叶粗多糖得率=粗多糖重量/银杏叶粉末重量X100%。

1.7 数据分析所有试验数据用SPSS17.0软件进行单向ANOV A分析，数据用平均值(Mean)±标准误差(SD)表示。

Duncan’s多重分析表示各组间的差异显著性，P<0.05表明差异显著。

鼠经口染毒LD50大于5000mg/kg体重，根据外源性化学物毒性分级标准，可以确定烯丙孕素属于实际无毒化合物，可开发为临床使用制剂，用于控制后备母猪同期发情，便于规模化猪场的统一管理。

参考文献
[1] Gaggini T S, Perin J, Arend L S, et al. Altrenogest treatment associated with a farrowing induction protocol to avoid early parturition in sows[J]. Reprod Dom Anim, 2013, 48(3): 390-395.
[2] van Leeuwen J JJ, Martens M R T M, Driancourt M A, et al. Effects of altrenogest treatments before and after weaning on follicular development, farrowing rate, and litter size in sows[J].J.Anim.Sci,2011,89:2397-2406.
[3]Werlang R F, Argenti L F, Fries H C C, et al. Effects of breeding at the second oestrus or after post-weaning hormonal treatment with altrenogest on subsequent reproductive performance of primiparoussows[J]. Reprod Dom Anim,2011,46:818-823.
[4] EMA/CVMP/487477/2011 European public MRL assessment report (EPMAR) Altrenogest(equidae and porcine species). 2012. 2. 14.
[5] Vm 05653/4136 VIRBAGEST Summary of product characteristics, 2012.12.
[6] FR/V/0199/001/DC Suifertil 4mg/ml oral solution Summary of product characteristics, 2016.07.
[7] 农业部兽药审评中心. 兽药研究技术指导原则汇编(2006-2011年) [M]. 北京: 化学工业出版社, 2012(1): 84-87.
[8]《化学药物急性毒性试验技术指导原则》课题研究组. 化学药物急性毒性试验技术指导原则[S]. 2005.
[9] EMEA/MRL/904/04-FINAL Committee for medicinal products for veterinary use Altrenogest summary report (3), 2004.06.
（收稿日期：2018–11–01）
2019年第2期（总第259期） 畜牧生产
11
青贮玉米优质高产种植及加工技术
王 莉 （山东省郓城县畜牧兽医局 274700）
中图分类号：S816.5+3 文献标识码：B 文章编号：1007-1733(2019)02-0011-02
青贮玉米是按收获物和用途来进行划分的玉米三大类型(籽粒玉米、青贮玉米、鲜食玉米)之一，是指在适宜收获期内收获包括果穗在内的地上全部绿色植株，并经切碎、加工，并适宜用青贮发酵的方法来制作青贮饲料以饲喂牛、羊等为主的草食牲畜的一种玉米。

与一般普通(籽粒)玉米相比具有生物产量高，纤维品质好，持绿性好、干物质和水分含量适宜用厌氧发酵的方法进行封闭青贮的特点。

玉米青贮料营养丰富、气味芳香、消化率较高，鲜样中含粗蛋白质可达3%以上，同时还含有丰富的糖类。

用玉米青贮料饲喂奶牛，每头奶牛一年可增产鲜奶500kg 以上，而且还可节省1/5的精饲料。

1 种植模式
青贮玉米种植模式主要有单种、复种和套种。

规模化生产提倡以单种和复种为主。

在山东地区两季有余的生态条件下，复种是解决粮草争地矛盾的有效途径。

6月上旬小麦收获后播种，提早播种是提高青贮玉米复种干物质和营养物质积累的有效措施。

选用早熟品种有利于提高灌浆程度，增加复种青贮玉米的干物质产量。

复种青贮玉米往往种植密度过大，这不利于个体发育和营养积累，亩种植密度在5000株左右较为适宜。

2 品种选择
青贮玉米以收获全株玉米为目标，讲究的是提高全株营养和生物产量。

因此，在品种选择上主要坚持以下几个原则：（1）生育期适中，生长发育快；（2）株高在3m 以上，叶片22片以上，保绿性好，蜡熟前期绿叶数13~15片，枯叶2~3片，穗大粒多；（3）茎秆健壮，抗倒伏能力强；（4）果穗大，苞叶绿，籽粒均匀，灌浆好；（5）全株生物产量4.5t/亩以上，干物质产量2t/亩以上；（6）全株营养价值高:全株粗蛋白不低于7.0%，粗脂肪不低于2.0%，中性洗涤纤维低于55.0%，酸性洗涤纤维低于30.0%，消化率大于55.0%。

普通玉米中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量偏高，青贮消化率低，全株粗蛋白、粗脂肪含量低，生物产量和营养价值均不能与专用青贮玉米相比。

因此，选用优质专用型品种，不但具有较高的生物产量，同时具有较高的营养价值。

3 科学播种
科学播种对青贮玉米保全苗、促壮苗很关键，产量的高低与播种质量有直接的关系，为了提高播种质量，一定要在耕作、整地、播期、保全苗、壮苗上做文章，严把播种质量。

主要措施为：
3.1 深耕翻晒，底肥深施 青贮玉米根系发达，80%根 2 结果
表1 不同浸提温度下银杏叶粗多糖得率 (%)
项目 Ⅰ组 Ⅱ组 Ⅲ组 Ⅳ组 Ⅴ组
粗多糖得率 3.02±0.03a 3.39±0.21b 4.985±0.05c 5.65±0.33d
5.62±0.06d 注：字母相同者表示差异未达显著水平(P>0.05)，字母不同者表示差异达显著水平(P<0.05)。

表1显示，随着浸提温度的上升，银杏叶粗多糖的得率均由一定幅度的提高。

Ⅰ组显著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组(P<0.05)；Ⅱ组显著高于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组(P<0.05)；Ⅲ组显著高于Ⅳ、Ⅴ组(P<0.05)；Ⅳ组高于Ⅴ组，但差异不显著(P>0.05)。

3 讨论
（1）随着浸提温度的上升，银杏叶粗多糖的得率也随之上升，这与温度越高，细胞壁被破坏程度越大释放粗多糖越多有关；温度越高，物质的分子运动越快，从而导致在相同的浸提时间内温度越高粗多糖释放越多。

但是，当温度超过一定范围时，释放出的多糖有一部分会被分解，导致粗多糖得率提升幅度不大。

另外，温度
越高，生产成本越高。

因此，以85℃作为浸提温度最适宜。

（2）在乙醇沉淀多糖的操作中，要注意应将乙醇慢慢加入上清液中，边加边顺着同一方向搅拌，否则会造成部分其它成分如鞣质、蛋白质等被多糖包合或螯合生成沉淀，导致提取多糖的纯度下降，从而使测得粗多糖得率偏高，误差增大。

（3）本试验显示，水提醇沉法提取银杏叶多糖最佳温度为85℃。

参考文献
[1] 张鹏飞, 廖丽君, 邓祯等. 银杏叶提取物的药理作用及其临床应用
研究进展[J]. 辽宁中医杂志, 2017, 44(2): 426-429.
[2] 于翠莲. 泰山松花粉多糖抗J 亚型禽白血病病毒的作用研究[D]. 山
东农业大学: 泰安, 2016.
[3] 袁艳梅, 彭军, 胡莉萍等. 泰山松花粉多糖对PRRSV GP5亚单位
疫苗免疫增强作用的研究[J]. 中国预防兽医学报, 2017, 39(9): 740-745. [4] 芦莲, 戴余军, 李长春. 银杏叶多糖提取工艺的研究[J]. 中国酿造, 2012, 31(10): 106-108.
（收稿日期：2018–11–01）
畜牧生产。