维生素C的定量测定实验报告

生物化学实验报告
维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）
一、实验目的
掌握2，6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理和方法
二、实验原理
维生素C又称抗坏血酸。

在1928年从牛的肾上腺皮质中提出的结晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。

还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。

在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。

因此，可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。

当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。

如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。

三、实验器材
1、松针、菜椒、大枣；
2、取液器
3、容量瓶100ml
4、微量滴定管5ml
5、电子天平
6、研钵、烧杯数只
7、漏斗两个
四、实验试剂
1、2%草酸溶液：称取草酸8.0311g，溶于400ml蒸馏水中；
2、1%草酸溶液：称取草酸4.0254g，溶于400ml蒸馏水中；
3、标准抗坏血酸溶液；
4、1%HCl；
5、0.1% 2，6-二氯酚靛酚溶液。

五、实验操作
1、样品的提取
松针：从南京大学教学楼前摘取的新鲜松针，用水清洗干净，吸去表面的水。

准确称取2.0004g，放在研钵中加入1%HCl溶液5ml一起研磨，研细。

放置片刻，将提取液转入100ml容量瓶中，如此反复几次加入提取液。

最后用1%HCl溶液定容，混匀，（每10ml样液中含松针0.20004g）静置10min，过滤，备用；
菜椒和大枣：用水洗净，吸去表面水分。

准确称取得大枣 2.0025g、菜椒1.9963g。

分别加2%草酸10ml于研钵中，研细，转移提取液于100ml容量瓶中并用2%草酸溶液定容。

（这样，每10ml样液中含有枣0.20025g，或者菜椒1.9963g）静置10min，过滤，弃去最初几毫升滤液，备用；
2、滴定
标准抗坏血酸溶液：准确吸取标准抗坏血酸溶液 1.0ml加9ml 1%草酸在100ml锥形瓶中，微量滴定管以0.1%2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s 即终点；
样品滴定准确称取10.0ml样品溶液，放入100ml锥形瓶中，用与标准抗坏血酸溶液滴定相同的方法滴定；
六、数据记录
七、数据计算
由标准液滴定数据求出1ml染料相当于多少mg抗坏血酸：
T = 0.1mg / 0.26ml = 0.385 mg/ml
计算每100g样品中含抗坏血酸的质量
公式：1000
⨯=m VT m 其中：m 100g 样品中含抗坏血酸的质量；
V 滴定时所用去染料的体积数；
T 每毫升染料能氧化抗坏血酸质量数，0.385mg/ml ；
0m 10ml 样液相当于含样品之质量数。

松针：g mg m 100/7.10810020004.0385.0565.0=⨯÷⨯=
大枣：g mg m 100/4.21410020025.0385.0115.1=⨯÷⨯=
菜椒：g mg m 100/6.9210019963.0385.048.0=⨯÷⨯=
八、实验讨论与注意事项
1、维生素C 是人体必需的营养素，其生理功能首先是作为酶的辅因子或辅助底物参与多种重要的生物合成过程，目前已知至少有8种酶保持高度活性需要维生素C 。

其次，维生素C 作为抗氧化剂可清除O2-、OCl3-、OH-、NO-、NO2-等自由基，在保护DNA 、蛋白质和膜结构免遭损伤方面起着重要作用。

因为维生素 C 可以医治坏血病，因此又叫抗坏血酸。

维C 主要存在于蔬菜和水果中，通常水果大都以生食为主，维C 损失甚少，而蔬菜绝大多数在食用前需加热熟制，会导致维C 不同程度的丢失。

在所有维生素中，水溶性的维C 最不稳定，在收获、加工、烹饪及贮藏期间容易被破坏，特别是在有O2存在或光、热、碱性环境中极易被破坏。

近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌物的阻断作用。

维生素C 是具有L 系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。

它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。

2、维生素C 具有很强的还原性。

它可分为还原性和脱氢型。

金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C 氧化为脱氢型。

根据它具有还原性质可测定其金属含量。

3、整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。

滴定过程一般不超过2min 。

滴定所用的染料不应小于1ml 或多于4ml ，如果样品含维生素C 太高或太低时，要酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。

4、干扰滴定因素有：
若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色，或加1ml 氯仿，到达终点时，氯仿层呈现淡红色。

Fe 2＋可还原二氯酚靛酚。

对含有大量Fe 2＋的样品可用8%乙酸溶液代替草酸溶液提取，此时Fe 2＋不会很快与染料起作用。

样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于15s内不消退为终点。

5、本实验必须在酸性条件下进行。

在此条件下，干扰物反应进行得很慢。