6-介绍几种新的感染性标志物1218太工讲课

发热反应
白细胞反应
内毒素血症（ETM）与内毒素休克（ETS）
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弥漫性血管内凝血（DIC）
Shwartzman现象
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内毒素血症与临床疾病的相关性
内毒素检测
革兰阴性菌败血症的诊断
溃疡性结肠炎 细菌性感染的辅助性诊 断、治疗和预后判断
呼吸道感染
肝脏感染及肝硬化
原因不明的发热
胆道疾病 急性胰腺炎
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外源性输注的内毒素血症 的诊断
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内毒素检测的临床意义
体液内毒素水平增高是严重细菌性感染（尤 其是革兰染色阴性菌）的一个重要的特异性指 标，而且，也是脓毒血症和全身炎症反应综合
症的可靠指标。内毒素水平不仅可用于感染类
别的鉴别诊断，也可用于感染控制和病情转归 的参数。因此，建议在适当的时候可对内毒素 的水平作一系列连续动态的监测。
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仪器检测原理：G试验、内毒素
北京金山川- MB-80检测仪（动态比浊法）
动态定量检测革兰阴性菌可溶性抗原（脂多 糖），真菌可溶性抗原（1-3）-β -D葡聚糖， 通过连续检测浊度变化建立时间（T）与微生 物含量（C）关系的标准曲线，再经过光电转 换原理，由软件系统分析得出样品中含真菌可


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内毒素检测
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内毒素研究背景
据统计，我国每年各种感染病人达到2亿人次， 发热病人达到3亿人次，其中G-菌感染占很大比 1. 例。
2.
由革兰氏阴性菌所引起的内毒素血症及脓毒 血症是目前临床上的主要死亡原因之一。
3.
早期的数小时内作为临床上抢救感染性休克的关 键，因此，早期体液中内毒素的正确、快速定量 检测及相应的对症治疗就显得格外重要。 内毒素的快速定量测定有助于对G-菌感染的早期 诊断、治疗方法的选择及疗效的判断。

放射免疫学分析法 透射免疫浊度法
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不同人群中血浆PCT的值
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PCT 与其它感染性指标的比较。

PCT PS WBC :特异性高：全身性感染既可导致白细胞升高, 也可以引起白细胞减少。 PCT PS CRP：灵敏度好：PCT可在感染后2个小时后检测； CRP在炎症过程开始8～12h 后，才能从血清中检测出。 PCT PS IL- 1、IL- 6、TNF- α :稳定性好： PCT 的半衰 期较长( 20～24h) ；IL半衰期很短( 数分钟至几小时)。 E66851108
讲者介绍

胡锡池，硕士，毕业于苏州大学病原生物学专 业。无锡二院“青年人才库”培养对象，长期 从事微生物的鉴定与耐药性的监测工作。现为 无锡市第二人民医院临床微生物室专业主管， 同时也是无锡耐药监测平台主要成员。近三年 在省级核心期刊上发表细菌耐药方面的专业论 文近十篇，获省级新技术引进奖两项，在研市 级立项课题一项。
溶性抗原或内毒素含量。
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PCT，G试验，GM试验，内毒素检测


早期诊断 快速诊断 指导用药 评价效果 动态观察
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呼吸道病毒7项检测（直接免疫荧光）
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呼吸道病毒感染

概述

呼吸道病毒是指一大类 能侵犯呼吸道引起呼吸 道局部病变或仅以呼吸 道为入侵门户，主要引 起呼吸道外组织器官病 变的病毒。 据统计，90%以上的急 性上呼吸道感染由该类 病毒引起。


跟踪研究发现，肾功能严重受损也会影响GM抗原血症 的清除。
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半乳甘露聚糖（GM试验）-美国伯乐



曲霉菌细胞壁上一种多聚糖抗原 可以从血清、脑脊业、胸水、BALF检测到 方法： ELISA（BioRad）：敏感性高1ng/ml Latex agglutination： 15ng/ml
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降钙素原（ProcalcitominPCT）
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降钙素原概述





降钙素原是正常人血清中存在，含116个氨基酸组成的 糖蛋白，最初由甲状腺C细胞产生; 在非感染或病毒性感染疾病时保持非常低的血清水平， 在细菌性感染时含量升高，并与感染程度和预后呈正相 关; 目前国外认为PCT为一种新的具有创新意义、可用于诊 断和监控严重细菌感染及脓毒血症、败血症等疾病的理 想指标，具有高度的敏感性和特异性; PCT含量的变化稳定，并出现在疾病的早期（3-4h）。 半衰期(24h); 正常血清水平:100-150pg/ml。
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真菌感染的诊断


深部真菌感染的临床表现 深部真菌感染影像学特征 微生物学检查 主要包括两方面: 直接涂片镜检和真菌 培养. 分子生物学检测 -- 真菌DNA的检测 真菌细胞壁组分检测 (1,3)-β- D-葡聚糖(G试验) 真菌抗原检测 半乳甘露聚糖(GM试验)，分布于大多数 曲霉属真菌胞壁中
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(1→3)--D-葡聚糖(G试验)
半乳甘露聚糖(GM试验)
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当前侵袭性真菌感染(IFI)检测的现状



发病率呈逐年上升趋势，且漏诊率居高不下。据尸 检研究发现，75%的IFI病例在生前漏诊，主要原因 是IFI的临床表现不典型易被基础疾病所掩盖，导致 诊断困难。 目前常规微生物学检查（直接涂片镜检和真菌培养） 耗时长，干扰因素多。而分子生物学检查（真菌 DNA的检测）门槛过高，且不能提示现症感染。病 理检查常因患者的病情所限难以实施。 因此寻找有效的感染性标志物对于快速诊断侵袭性 真菌感染、制定正确的治疗方案、争取最佳治疗时 间，意义重大。
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1-3-ß-Ð 葡聚糖的检测(G试验)



真菌在自然界中分布很广,其细胞壁主要成分 为(1-3)-ß-D-Glucan(葡聚糖). 当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细 胞的吞噬、消化等处理，1-3-β-D葡聚糖可从 胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液（如 尿、脑脊液，腹水，胸水等）中1-3--β-D葡 聚糖含量增高。 浅部真菌感染中，1-3--β-D葡聚糖未被释放 出来，故其在体液中的量不增高。
G ＋ ＋ － ＋ － ＋ ＋
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P
G试验在以下情况可出现假阳性


使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布 或其他含有葡聚糖的材料； 静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液 制品；使用多糖类抗癌药物。服用多粘菌素B,厄他培
能,头孢噻肟,吡肟,优力欣,磺胺等药物


链球菌血症； 操作者处理标本时存在污染、标本溶血；
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呼吸道病毒感染
病毒分类
呼吸道病毒包括：
正粘病毒科： 副粘病毒科： 流感病毒 副流感病毒、呼吸道合胞病毒、 麻疹病毒、腮腺炎病毒
其他病毒科：
腺病毒、风疹病毒、鼻病毒、 冠状病毒、呼肠病毒
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呼吸道病毒感染
症状
流感 假膜性喉炎 细支气管炎 支气管肺炎 卡他性鼻炎
病毒分类
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1-3-ß-Ð 葡聚糖的临床意义

快速检测血液等体液中酵母菌、丝状真菌等细胞 壁成分，不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、 镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属。


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另据文献报道，检测葡聚糖含量不能用于隐球菌 感染的诊断，可能因为隐球菌在免疫缺陷患者体 内生长缓慢，并形成厚荚膜。有体外实验表明， 新生隐球菌产生的1-3--β-D葡聚糖量比念珠菌 和曲霉菌少。 是早期真菌感染的敏感生物标志 可鉴别致病菌和定植菌
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G试验与GM试验比较
三种方法检测真菌 曲霉菌属A. fumigatus 镰刀霉Fusarium 接合菌纲Zygomycetes 念珠菌属Cadida 隐球菌Cryptococcus 青霉菌Penicillium 拟青霉菌Paecilomyces
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GM ＋ － － － ＋ ＋ ＋
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GM试验在以下情况可出现假阴性


释放入血循环中的曲霉GM（包括甘露聚糖） 并不持续存在而是会很快清除； 以前使用了抗真菌药物； 粒细胞缺乏的患者。
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G试验、GM试验结果与临床诊断不符合时 的原因分析

患者是不是粒缺的状态 患者饮食或药物的干扰 操作是否规范(分析前,分析中,分析后等) 试剂和仪器是否状态良好
疗效的监测。
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GM检测的临床意义

GM检测有助于IPA的早期诊断，而且还有助于抗曲霉治 疗的疗效以及疾病转归的判断
血清中GM的量伴随IPA的进展会增加，也会随着药物的 有效治疗而下降。如果在IPA的治疗期间，其GM抗原血 症持续保持较高水平者，其预后则较差，此时试着更 改治疗方案。相反，GM抗原血症清除早且明显者，其 预后则较理想，应正确判定病情后及时撤药。
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介绍几种新的感染标志物
无锡二院 胡锡池
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几种新的感染标志物



1、降钙素原（ProcalcitominPCT） 2、内毒素 3、(1→3)--D-葡聚糖（G试验） 4、半乳甘露聚糖（GM试验） 5、呼吸道病毒7项检测（直接免疫荧光法）
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PCT 的实验室检测

免疫发光法( ILMA) –法国梅里埃公司、美国罗氏
该方法敏感性高, 特异性强，此法测定的低限值为0.1ng/ml, 检 测耗时约2h。

SPCT- Q- 半定量快速实验-德国评细替、武汉海特
该方法操作简单、结果易观察的特点。其低限值为0.5ng/ml。 检测耗时约0.5h。（无锡雷赛公司）
不常见相关病毒
副流感病毒，腺病毒 流感病毒，RSV，腺病毒 流感病毒，腺病毒，副流感 病毒 副流感病毒，麻疹，CMV， VZV 流感，副流感，肠道和腺病 毒
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定义

细菌内毒素（ Endotoxin ）是G菌细胞壁上的特有结构，内毒素为外 源性致热原，它可激活中性粒细胞等， 使之释放出一种内源性热原质，作用 于体温调节中枢引起发热。内毒素的 主要化学成分为脂多糖（LPS）中的 类脂A。
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内毒素的生物学效应
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1-3-ß-Ð 葡聚糖（G试验）-北京金山川


酵母菌、丝状真菌细胞壁成分； 不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、镰刀菌、 毛孢子菌、支顶孢属； 不能检测：隐球菌和接合菌； 美国FDA已批准，欧洲部分国家已注册； 敏感性、特异性：90％左右
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半乳甘露聚糖(GM试验)

半乳甘露聚糖（galactomannan，GM）是曲霉菌细胞壁 的组成成分，当曲霉在组织生长时可释放进入血循环。 检测的是半乳甘露聚糖，主要适于侵袭性曲霉菌感染

的早期诊断。当菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的
菌丝顶端释放，是最早释放的抗原。GM释放量与菌量 成正比，可以反映感染程度。连续检测GM可作为治疗
放化疗造成的粘膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的 念珠菌经胃肠道进入血液等
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G试验在以下情况可出现假阴性

之前使用过抗真菌药物、 标本放置时间过长，导致分解代谢。 试验操作过程中离心时间过长。
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GM试验在以下情况可出现假阳性


饮用牛奶或高蛋白食物； 血液透析； 自身免疫性肝炎等； 食用污染的大米等。
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哪些情况下降钙素原会升高


全身性细菌感染； 严重休克、SIRS和MODS。 真菌、寄生虫、立克次体、结核感染； 病毒感染、肿瘤、过敏、自身免疫性疾病及局 部感染患者中，PCT水平可轻度升高；
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PCT的临床意义




早期诊断 在感染发生2-3h血浆PCT浓度就会升高. 病情监测 在脓毒性休克时PCT含量最高，可达1000ng/ml，是正常人的2000倍。随着 感染的恢复PCT也随着下降。PCT升高幅度依次为Sirs（全身性炎症反应综合 症）+/—， Sepsis（败血症）2+、Severe Sepsis（严重败血症）3+、 Sepsis Shock （败血症休克）4+ 预后判断 动物实验证明，PCT是一个潜在的致死因子，本身不会启动脓毒性反应，但可 放大并加重脓毒性的病理反应，当PCT含量升高时死亡率也升高。 鉴别诊断 细菌感染和非细菌性炎症反应（自身免疫性疾病等）的鉴别诊断 细菌感染和病毒感染的鉴别诊断（脑脊膜炎等） 器官移植术后鉴别诊断（细菌感染、病毒感染、吸收热、排斥反应、真菌感 染等） 脓毒性休克和非脓毒性休克的鉴别诊断