布氏杆菌病的检测

布氏杆菌病的检测

牛布氏杆菌病的检测

1 传统的检测方法

1.1 细菌学检测

布氏杆菌需在实验室里进行。初步分离时, 须在5%~10%二氧化碳环境中方能生长, 而且标本中必须存在大量活菌才能分离到该菌, 培养细菌的周期长,需要花费大量的时间才能得出结果。因此在布病的检测中已经逐渐被淘汰。

1.2 血清学检测

该法同样要在实验室才能操作, 虽然凝集试验(agglutination test)操作简便, 且所需时间短, 但由于IgM 在pH 为中性或弱酸性时凝集最活跃, 所以凝集试验会因为抗体交叉反应而易出现假阳性反应。判断结果有很大的误差, 在2000 年被OIE 取消了其作为布氏杆菌病的检测方法[2]。沉淀试验(Precipitationtests)是可溶性抗原与相应抗体结合, 在适量电解质存在下, 形成肉眼可见的白色沉淀, 由于是人为的观察结果, 因此存在很大的主观性, 有时会因出现交叉反应而

误判结果, 且有很大的局限性, 不是一种理想的检测布病的方法。补体结合试验( complement

fixation test,CFT) 主要用于检测牛、绵羊、山羊和猪的布氏杆菌病,在操作过程中对温度和滴加试剂的量有很高的要求,需要很多控制条件, 结果也无法避免假阳性的影响。放射免疫试验是1977 年Parratt[3]建立起来的, 由于在该实验中要用大量的放射性元素会对人体和环境造成很大的威胁, 因此该法一直没有得到广泛运用。

1.3 变态反应检测

临床上可用布氏杆菌水解素0.2ml 注射于动物根皱褶处, 24h 及48h 各观察一次, 若注射部位发红肿胀即判为阳性反应。此法对慢性病例检出率较高, 并且注射水解素后无抗体产生, 不妨碍以后的血清学检查。此法主要用于山羊和绵羊检疫, 但山羊的变态反应试验不如绵羊变态反应试验那样易读取结果, 对中、后期病山羊的诊断意义较大, 适用于山羊布氏杆菌病的筛检, 不作个体山羊的诊断依据。

2 酶联免疫吸附试验

ELISA 是免疫技术中应用最广的一种, 在适合的载体上, 酶标记抗体或抗原与相应的抗原或抗体形成酶标记的抗原- 抗体免疫复合物, 在一定的底物参与下, 复合物上的酶催化底物, 使

其水解、氧化或还原成另外一种带色物质。由于在一定条件下, 酶的降解底物和呈现色泽是成正比的, 因此, 可以应用酶测定仪进行测定, 从而计算出参与反应的抗原和抗体的种类和含量。自从1971 年Engvall 等和Van Weemen 等分别报道酶联免疫吸附试验( enzyme linked immunoassay

assay, ELISA) 以来, ELISA 得到了很大的发展, 到目前其类型也很多, 在此对常用的两种介绍如下。

2.1 间接酶联免疫吸附试验__

1976 年Carlsson 第一次建立间接ELISA( indirectenzyme linked immunoassay assay, IELISA) 法检测人布氏杆菌病, 之后在多种动物上用该法检测布氏杆菌病。1995 年F.Bianciflori 等用间接ELISA 从羊奶中检测布氏杆菌病, 其特异性和敏感性都特别高; 1996 年F.A.Uza 等人用抗IgG1 的单克隆酶轭合物间接ELISA诊断牛布氏杆菌病, 检测了三组血清, 第一组是没有注射疫苗的阴性血清, 第二组是注射了疫苗的阴性血清,第三组是来自阳性牛的血清。间接ELISA 检测的特异性前两组分别是

99.2%和99.6%, 间接ELISA 检测阳性血清的敏感性是99.5%; 得出IELISA 的敏感性和特异性都很高; 1998 年V.R. Vanzini 等评价了间接ELISA 在阿根廷奶牛中用奶和血清检测诊断布氏杆菌病的效果, 在来自相同奶牛的奶和血清中间接ELISA 检测的特异性和敏感性分别为: 奶样敏感性为99.6%特异性为99.1%; 血清的敏感性为99.6%特异性98.6%。奶和血清的敏感性相同而奶的特异性比血清的高[3]。说明可以在检测奶牛布氏杆菌病的时候可以用奶代替血样, 排除了采血带来的麻烦, 大大地提高了检测效率。2004 赵云玲等人分别通过琥红凝集试验( RBPT) 、试管凝集试验( SAT) 、和酶联吸附( ELISA)试验检测某牛厂送检202 份血清和129 份乳清, 所得的实验结果说明乳清完全可以代替血清用于牛布氏杆菌病的血清学检测; 2001 年V.R. Vanzini[4]等人比较了在大量奶样中用间接ELISA 和用乳汁环状试验检

测流产性布氏杆菌抗体的差异, 最后得出间接ELISA的敏感性( 98.1%) 高于乳汁环状试验( 72.2%) , 而间接ELISA 的特异性( 88.1%) 低于乳汁环状试验( 90.5%) ,间接ELISA 的敏感性

比乳汁环状试验的高出很多, 特异性和乳汁环状试验的差不多。2004 年C.Saegerman[5]等人评价了用单克隆抗体和蛋白G 作为过氧化轭合物的三种血清间接ELISA 诊断牛布氏杆菌病的效果,得出间接ELISA 的敏感性和特异性都非常的高。2004年刘耀兴等人对牛布氏杆菌病间接ELISA 与血清试管凝集试验( SAT) 、琥红平板凝集试验( RBPT) 、缓冲平板凝集试验( BPAT) 进行了临床运用比较。结果表明间接ELISA 和其他三种检测方法阳性和阴性符合率为100%, 但间接ELISA 法较SAT、RBPT、BPAT 方法先进、快速、结果客观可靠。根据使用的不同抗原、抗球蛋白酶结合物和底物或色原体产生了多种间接ELISA。有几种商用间接ELISA 在广泛的田间试验中得到验证并推广使用。虽然间接ELISA 是高度敏感的方法, 但是它不能把S19 疫苗免疫产生的抗体与致病株感染引起的抗体区别开来。因此, 更多地把间接ELISA 作为普查检测方法而不是作为免疫家畜的检测方法。

2.2 竞争酶联免疫吸附试验

传统的血清学检测方法和间接ELISA 方法无法