人乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)定量检测试剂盒(ELISA)
电化学发光法和ELISA法检测HBsAb的结果分析_赵秀丽
·医学检验·2012年10月第19卷第28期乙型肝炎（hepatitis B，简称乙肝）是一种严重危害人类健康、传播广泛的病毒传染性疾病，据世界卫生组织报道，全球约有20亿人感染乙型肝炎病毒，每年有超过60万人死于乙型肝炎病毒所致肝硬化或肝癌[1]。
乙型肝炎病毒侵入人体后，刺激人体免疫系统中的B淋巴细胞分泌出一种特异的免疫球蛋白G，也就是常说的乙型肝炎病毒表面抗体（HB-sAb），它可以与表面抗原特异地结合，与人体的其他免疫功能共同作用消除掉病毒，保护人体不再受HBV的感染[2]。
所以，乙型肝炎表面抗体（HBsAb）是一种中和抗体，具有保护作用，它的检测是判断疫苗接种效果的重要指标[3]。
目前，乙型肝炎表面抗体的检测主要还依赖于酶联免疫吸附试验（ELISA）来判断是否阳性，并不能说明HBsAb是否能达到对机体的保护作用。
电化学发光法（ECLIA）作为一种新型标记免疫分析技术，在临床工作中也得到了越来越广泛的应用。
笔者2011年8～11月对本院536例HBsAb阳性的标本分别使用电化学发光法和ELISA方法进行检测，并对检测结果进行分析比较。
1材料与方法1.1标本来源选取沈阳医学院奉天医院2011年8～11月门诊和住院患者HBsAb为阳性的血液标本536份。
1.2仪器及试剂ECLIA采用Roche E170型全自动电化学发光免疫分析仪，HBsAb试剂盒、校准品、质控品均由Roche公司提供。
严格按照仪器和试剂说明书进行校准、质控、检测等操作。
ELISA法采用上海科华HBsAb试剂盒检测，实验仪器为安图酶标仪和洗板机。
所有试剂均在有效期内使用。
1.3阳性标准ECLIA法≥10IU/L为阳性；ELISA法按照说明书确定临界值：为2.1×阴性对照（阴性对照<0.05按0.05计算），每次标本测定值（S/CO）≥临界值为阳性。
1.4统计学处理数据采用SPSS11.0软件进行四格表分析。
乙肝表面抗体定性和定量两种检测方法相关性分析
乙肝表面抗体定性和定量两种检测方法相关性分析目的通过分析比较两种检测方法（ELISA法定性与电化学发光法定量）检测乙肝表面抗体（抗-HBs）的结果差异，探讨测定乙肝表面抗体（抗-HBs）的浓度值与定性检测结果s/co值之间的关系及对临床工作的指导意义。
方法用ELISA法定性与电化学发光法定量分别对96份标本进行检测分析。
结果电化学发光法结果在10mIU/ml判为阳性。
两种方法对乙肝表面抗体的对比检测结果分别见表1，表2。
由表1 、表2可以看出，HBsAb浓度值小于10mIU/ml和大于100mIU/ml 时，电化学发光法和ELISA法检测结果相近，用ELISA法基本能准确判定阳性和阴性。
但在10～100mIU/ml之间的标本电化学发光法共检测的36例阳性样本，ELISA法只有26例是阳性。
以10～50mIU/ml区段尤为显著。
整体来看电化学发光法检出阳性率为68.8%，ELISA法检测阳性率为59.3%。
2种方法检测差异显著，有统计学意义（P＜0.05）。
3 讨论在我国乙肝的感染率较高，由于HBsAb是一种保护性抗体，一旦人体受到隐性感染或经急性感染乙肝病毒并清除后，会产生HBsAb。
若人群接种乙肝疫苗后，机体也可产生HBsAb。
人体内的较高浓度的HBsAb可有效清除机体感染的乙肝病毒。
同时乙型肝炎又与肝癌的发生有密切的关系，因此，为防止乙肝的蔓延，要想达到控制乙型肝炎的的目的，就应该采用减少易感人群的方式。
据相关资料报道，HBsAb含量在10mIU/ml以上的人群并不都具有较强的免疫力。
HBsAb含量在10-100mIU/ml之间的人群对乙型肝炎的免疫力相对较弱，甚至不能预防乙肝病毒的感染。
相关资料表明只有HBsAb的含量大于100mIU/ml时，才具有抵抗乙肝病毒入侵的能力。
但也有研究者认为大于10mIU/ml可以用于个体免疫力强弱的评价[3]。
正是由于乙肝抗体定量检测的重要性，现在，很多实验室都开展了该项目的检测，它不仅能够判断是否需要接种乙肝疫苗还能对疫苗接种后的效果进行评估。
乙型肝炎的病毒抗原与抗体的检测方法
乙型肝炎的病毒抗原与抗体的检测方法乙型肝炎（Hepatitis B，HBV）是一种由乙型肝炎病毒引起的肝脏感染性疾病。
乙型肝炎病毒抗原与抗体的检测方法是诊断和监测乙型肝炎感染的重要手段。
本文将介绍乙型肝炎病毒抗原与抗体的检测方法及其临床应用。
乙型肝炎病毒感染主要通过血液和其他体液传播，包括性传播、母婴传播和血液传播等。
乙型肝炎病毒感染后，人体免疫系统会产生一系列抗原和抗体反应。
乙型肝炎病毒抗原与抗体的检测方法可以帮助医生确定感染状态、评估疾病的严重程度以及指导治疗方案。
一、乙型肝炎病毒抗原的检测方法乙型肝炎病毒抗原（HBsAg）是乙型肝炎病毒感染的标志物之一。
HBsAg的检测方法主要包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫分析（RIA）和化学发光免疫分析（CLIA）等。
这些方法通过检测血清中HBsAg的存在与否来确定感染状态。
二、乙型肝炎病毒抗体的检测方法1. 乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）的检测方法HBsAb是人体对乙型肝炎病毒感染产生的抗体，也是乙型肝炎疫苗接种后产生的抗体。
HBsAb的检测方法主要包括ELISA、RIA和CLIA等。
这些方法通过检测血清中HBsAb的水平来判断人体对乙型肝炎病毒的免疫状态。
2. 乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）的检测方法HBcAb是乙型肝炎病毒感染过程中产生的抗体，可以分为IgM型和IgG型。
HBcAb的检测方法主要包括ELISA、RIA和CLIA等。
这些方法通过检测血清中HBcAb的存在与否以及IgM和IgG的水平来判断感染的阶段和免疫状态。
3. 乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）的检测方法HBeAb是乙型肝炎病毒感染过程中产生的抗体，主要与病毒复制活动相关。
HBeAb的检测方法主要包括ELISA、RIA和CLIA等。
这些方法通过检测血清中HBeAb的水平来判断病毒复制活动的程度。
三、乙型肝炎病毒抗原与抗体检测方法的临床应用乙型肝炎病毒抗原与抗体的检测方法在乙型肝炎的诊断和监测中起着重要的作用。
乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂盒说明书
乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂盒说明书
乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂盒是一种用于检测乙型肝
炎病毒（HBV）表面抗原的工具。
以下是一般使用说明书
的一般内容：
1. 产品简介：介绍产品的名称、规格、用途和原理等信息。
2. 试剂准备：说明如何准备试剂，包括溶液的配制和标准
品的制备。
3. 样本采集：描述如何采集适当的样本，例如血清、血浆
或全血。
同时，还提供了适当的采样量和采样方法。
4. 实验操作步骤：详细描述了实验操作的步骤，包括试剂
的添加、混合、孵育和洗涤等。
还包括重要的注意事项和
操作提示。
5. 结果解读：提供了结果的判定标准和解读方法。
通常会提供阳性对照、阴性对照和无效样本的标准结果，以供参考。
6. 敏感性和特异性：列出了该测试剂盒的敏感性和特异性数据，以评估其准确性和可靠性。
7. 注意事项：列出了使用该测试剂盒时需要注意的事项，包括保存条件、过期日期、交叉反应和干扰因素等。
8. 应急处置：提供了在实验操作中遇到问题时可以采取的相应措施，例如设备故障、试剂失效或结果不明确等。
9. 弃液处置：指导用户如何正确处理实验产生的废液、废弃物和污染材料，以防止污染环境。
10. 参考文献：提供了与该测试剂盒相关的科学文献和研究论文，供用户进一步了解相关知识。
以上仅为一般而言，具体的说明书内容和格式可能会有所不同，用户在使用之前应仔细阅读说明书，并按照其中的操作步骤进行实验操作。
如有疑问，建议咨询生产厂家或相关专业人员。
乙肝表面抗体定量测定诊断试验系统评价
乙肝表面抗体定量测定诊断试验系统评价乙肝表面抗体（HBsAb）是对乙肝病毒免疫的保护性抗体。
它的阳性表明既往感染过乙肝病毒，但是已经排除病毒，或者是接种过乙肝疫苗，产生了保护性的抗体。
血清中乙肝表面抗体滴度越高，保护力则越强。
我国人口众多，乙型肝炎病毒感染数量多，人群发病率较高。
根据相关调查统计得出，乙型肝炎病毒的携带率可达到15%左右。
乙肝疫苗的主动免疫是预防乙肝最有效的途径。
只有乙肝表面抗体（HBsAb）在血中保持一定的含量，机体才能有能力抵抗乙肝病毒的入侵。
酶联免疫吸附法（ELISA）因为其操作简便、快速、费用较低，成为现阶段检测HBV标志物中最常用的方法，但是其具有无法定量的缺点。
在近些年来，因为检验技术的不断发展，电化学发光法成为定量检测乙肝抗体的方法之一，但是其具有检测时间相对较长，费用较高的特点，本文主要对乙肝表面抗体定量测定诊断试验系统评价进行简要的分析探讨。
标签：乙肝表面抗体；酶联免疫吸附法；电化学发光法前言乙型肝炎病毒感染是我国主要的传染性疾病之一，将严重危害到人群的健康，给患者及社会带来沉重的负担。
及时的诊断及治疗是预防和控制该疾病的有效途径。
在现阶段，诊断乙肝感染的主要方法是检测病毒血清标志物及乙肝病毒核酸。
一、资料和方法（一）纳入与排除标准1、研究对象：门诊或住院患者的血清标本。
2、标本来源：收集2014年9月至2015年3月期间我院门诊及住院乙型肝炎患者155例，其中有男患者86例，女患者69例，年龄18～72岁。
在患者空腹时采静脉血3毫升，在促凝管中自然凝固后采用离心法取得血清。
上海科华提供的乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（ELISA 法）测定HBsAg结果为阳性，阳性血清标本在-20℃冰箱内低温保存。
所有患者均符合我国病毒性肝炎防治方案的相关诊断标准。
3、诊断试验方法：可定量测定乙肝抗体的诊断方法，包括电化学发光免疫技术、微粒子酶免分析法、时间分辨荧光免疫分析法、化学发光微粒子酶免分析法、时间分辨荧光免疫分析法、化学发光微粒子免疫分析法及化学发光法等。
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(化学发光法)
【药品名称】乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（化学发光法）【英文或拉丁名】CLIA Diagnostic Kit for Hepatitis B Surface Antigen【汉语拼音】YI XING GAN YAN BING DU BIAO MIAN KANG YUAN HUA XUE FA GUANG ZHEN DUAN SHI JI HE【试剂盒组成】1.检测HBsAg用发光固相板 8孔×12条2.检测HBsAg用发光标记物12ml×1瓶3.HBsAg阴性对照1ml×1瓶4.HBsAg阳性对照1ml×1瓶5.发光底物A液6ml×1瓶6.发光底物B液6ml×1瓶7.浓缩洗涤液（使用前用纯化水稀释至700ml）35ml×1瓶【用途】适用于体外血清、血浆中乙肝表面抗原定性检测。
【检测原理】采用单克隆抗-HBs包被发光固相板加入待检样品反应后，再加发光标记多克隆抗-HBs应用双抗体夹心法原理检测人血清或血浆中的HBsAg。
用鲁米诺化学发光系统做发光底物进行发光反应。
【仪器】1. 化学发光测定仪2. 微孔洗板机【样本要求】血清或血浆应新鲜，无溶血，无微生物污染，如不能及时检测样本可在零下18-25℃储存6个月。
【操作步骤】1.取出试剂盒，平衡至室温。
按1:1比例混合发光底物A、B液，避光待用。
混合后底物放置时间不超过8小时。
2.加阴性对照3孔，阳性对照2孔及待检标本至预包被发光固相板各相应孔内，100μl/孔，置37℃水浴箱中温育30分钟。
3.用自动洗板机，洗涤5次，在干净吸水纸上拍干。
4.每孔加检测HBsAg用发光标记物100μl，置37℃水浴箱中温育30分钟。
5.用自动洗板机，洗涤5次，在干净吸水纸上拍干。
6.每孔加混合发光底物液100μl，在室温中避光放置10分钟读取各孔RLU。
【结果判定】Cutoff＝RLU阴性对照×2.1。
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定
一、目的：规范乙型肝炎病毒表面抗体测定的标准操作程序，确保乙型肝炎病毒表面抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒表面抗体。
三、临床意义乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病，据估计全球范围内目前大约有3亿乙肝病毒携带者。
感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝脏疾病，流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。
表面抗体(Anti-HBs)是一种保护性抗体，是乙肝感染后痊愈或趋向治愈的象征；全程（3针）疫苗接种结束后1个月检测保护性表面抗体(Anti-HBs) 的浓度，能够判定免疫效果。
关于表面抗体与保护力的关系，世界标准未完全统一，目前普遍认为普通人群表面抗体浓度值≥10mIU/ml，就有足够的保护作用；高危人群表面抗体浓度值≥100mIU/ml，具有足够的保护作用。
肝移植、血液透析及免疫抑制等病人定期检测表面抗体浓度值，每次检测值≥ 100mIU/ml为宜。
四、方法原理本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。
用表面抗原包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记表面抗原制备酶结合物。
通过免疫反应形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与表面抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样本，离心前样本应37℃孵育至少1h；对于使用促凝管采血的样本，离心前样本应37℃孵育至少0.5h，离心条件10000g/min，10min；对于使用抗凝管采血的样本，离心条件10000g/min，10min。
抗凝管推荐使用肝素钠作为抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。
5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.3.溶血或脂血的样本不能用于测定。
5.4.样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
【实验诊断学】乙肝两对半检查实验
我国HBV感染概况
• 一般人群HBsAg携带率高达7.18%；现有慢性HBV感染者约9 300万 人，占全世界的1/4；
• 其中慢性乙型病毒性肝炎患者超过 2 000万例，占全世界慢性乙 肝患者的1/3；
• 15岁以下儿童HBsAg携带率下降显著，1-4岁组仅为0.96%；1~ 4岁 组HBsAb阳性率由1992年15.75%升至72.25%; 抗HBcAb阳性率由 1992年30.08%降至3.76%
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乙型肝炎病毒病毒标志物检测
✓乙型肝炎表面抗原（HBsAg）✓乙肝核心抗体（抗-HBc）
✓乙肝病毒前S1抗原
【实验原理】
• 酶联免疫吸附试验（ELISA） • 一种固相酶免疫测定技术：先将抗体或抗原包被到
某种固相载体表面，与待测样品中的抗原或抗体发生 反应，再加入酶标抗体或抗原与免疫复合物结合，最 后加入酶反应底物，根据底物被酶催化产生的颜色及 其吸光度（A）值的大小进行定性或定量分析。
ELISA检测类型
• HBcAg(核心抗原)： 是乙肝病毒存在的直接标志， 与HBV复制呈正相关。存在于肝细胞内，血中 检测不出。
• 当肝细胞破坏,HBcAg释放出来，被酶水解成 HBeAg,所以HBeAg提示肝细胞损伤，HBeAg阳性 标志着较强的感染和传染性
结果报告
• HBsAg: 阴性（阳性） • HBsAb: 阴性（阳性） • HBeAg: 阴性（阳性） • HBeAb: 阴性（阳性） • HBcAb: 阴性（阳性）
注意事项
• HBcAb测定：待测标本稀释后的检测结果为临 床意义；不作稀释的检测结果为流行病学意义。
elisa检测hbsab实验报告
elisa检测hbsab实验报告ELISA 检测 HBsAb 实验报告一、实验目的本实验旨在通过酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测血清中乙型肝炎表面抗体（HBsAb）的水平，以评估个体对乙型肝炎病毒（HBV）的免疫状态。
二、实验原理ELISA 是一种基于抗原抗体特异性结合反应的免疫测定技术。
在本实验中，将纯化的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）包被在微孔板上，形成固相抗原。
待检血清中的 HBsAb 与固相抗原结合后，加入酶标记的抗人免疫球蛋白（通常为辣根过氧化物酶标记的抗人 IgG），形成抗原抗体酶标抗体复合物。
通过加入底物显色，根据显色的强度来定量测定血清中 HBsAb 的含量。
三、实验材料与设备1、试剂HBsAg 包被微孔板样品稀释液酶标记的抗人 IgG 试剂显色剂 A、B 液终止液阳性对照血清阴性对照血清洗涤液2、仪器设备酶标仪移液器恒温箱离心机四、实验步骤1、样本采集与处理采集受检者空腹静脉血 3-5ml，室温静置 30 分钟后，以 3000rpm 离心 10 分钟，分离血清。
将血清样本用样品稀释液按一定比例稀释。
2、加样分别在微孔板的相应孔中加入稀释后的血清样本、阳性对照血清、阴性对照血清，每孔100μl。
3、温育将微孔板放入 37℃恒温箱中孵育 30 分钟。
4、洗涤取出微孔板，甩掉孔内液体，用洗涤液洗涤5 次，每次浸泡30 秒，然后甩干。
5、加酶标抗体每孔加入100μl 酶标记的抗人 IgG 试剂。
6、温育再次将微孔板放入 37℃恒温箱中孵育 30 分钟。
7、洗涤重复洗涤步骤。
8、显色每孔加入显色剂 A、B 液各50μl，轻轻振荡混匀，室温避光孵育15 分钟。
9、终止反应每孔加入50μl 终止液，终止显色反应。
10、测定吸光度使用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔的吸光度（OD 值）。
五、结果判断1、阳性判断值（cutoff 值）的确定计算阴性对照孔的平均 OD 值（NC）和阳性对照孔的平均 OD 值（PC）。
酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒表面抗原
xx医科大学附属第五医院 xx
乙肝五项报告单
教学目标
• 掌握ELISA检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的原理
酶联免疫吸附试验
技术简介
• 酶联免疫吸附试验：ELISA • 是一种固相酶免疫分析技术 • 即可检测抗原，又可检测抗体 • 广泛地应用于临床和科研检测 • 反应类型：双抗体夹心法、双抗原夹心法、竞争法…
固相载体（聚苯乙烯塑料） E E 酶标记乙肝表面抗体
乙肝表面抗体 血清中待测乙肝表面抗原
底物（底物缓冲液+ 底物液）
水浴箱37℃温育
血清中其他非待测抗原
双抗体夹心法
检测HBsAg反应原理示意图 1、特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体
包被 固相乙肝表面抗体
双抗体夹心法
检测HBsAg反应原理示意图 2、加入待测标本，温育，形成固相抗体-待测抗原复合物
抗原抗体反应具有高度的特异性
酶联免疫吸附试验
如何应用双抗体夹心法检测HBsAg?
双抗体夹心法
方法简介
• 是ELISA检测抗原最常用的方法 • 适用于检测含有至少两个抗原决定簇的多价抗原
双抗体夹心法
检测HBsAg三个必要试剂
• 固相化的抗体 • 酶标记的抗原 • 酶反应的底物
双抗体夹心法
反应基本原理
课后思考题
• 试着分析乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）的检测原理？
提示：双抗原夹心法
EE
EE
EE
EE
固相乙肝表面抗体-待测乙肝表面抗原-酶标乙肝表面抗体复合物
双抗体夹心法
检测HBsAg反应原理示意图
6、加底物，固相载体结合的酶催化底物显色
两种检测乙肝表面抗体方法的比较
两种检测乙肝表面抗体方法的比较摘要】目的了解两种检测乙型肝炎方法的优缺点，为实验室提供快速、准确的检验方法。
方法先后采用胶体金免疫层析测试条法和做血清学检测乙型肝炎表面抗体，然后，将资料整理、分析。
结果胶体金免疫层析法检出阳性250份, 阳性率为54.82%；ELISA法检出阳性275份，阳性率为60.31%。
两法检测结果的总符合率为94.52%。
以ELISA法为常规法验证胶体金免疫层析法的敏感性，敏感性为90.91%，特异性为100%。
结论胶体金免疫层析法敏感性较酶联免疫法（ELISA）差，认为检测HBsAb仍然以ELISA法为主。
【关键词】乙肝表面抗体胶体金免疫层析酶联免疫法Compare of twodetecting methods forhBsAbGaofeng (JinZhou Railway of Center fordisease Control JinZhon 121000, China) 【Abstract】 Aim To understand relative merits of twodetectinghepatitis B and offer a rapid and accurate method for laboratory. Method Use colloidal gold chromatography test and serologicallydefinedhBsAb, then collate and analyze thedate. Resultdetect 250 positive using the method of colloidal gold chromatography test, positive rate54.82%;detect 275 positive using the method of ELISA, positive rate 60.31%. The general coincidence rate of two methods is 94.52%. The sensitivity of colloidal gold chromatography test is 90.91% and the specificity is 100% using the method of ELISAas the routine method to validate. Conclusion Colloidal gold chromatography test isnot better than ELISA, the method of ELISA should be recognized as the main method ofdetectinghBsAb.【Keywords】 hBsAb colloidal gold chromatography ELISA乙肝表面抗体检测是幼儿体检的必检项目，也是判断抵抗乙型肝炎感染能力的重要指标。
1.2乙肝表面抗体检测操作规程1
乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA）1原理在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗原（HbsAg），配以酶标记抗体（HbsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。
2试剂：2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司2.3包装规格：96Test/Kit2.4试剂盒组成：HbsAg预包被微孔板（包被HbsAg），HbsAb酶标抗体（含HRP标记HbsAg）, HbsAb阳性对照（含HbsAbde 阳性血清），HbsAb阴性对照血清（正常人血清），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含2M H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。
2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。
3样本采集：取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。
高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。
4所需仪器4.1全自动酶免分析仪4.2新鲜蒸馏水或去离子水4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm）4.4微量移液器4.5 37℃恒温箱或水浴箱4.6洗板机或洗瓶5检验方法5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。
5.2配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。
5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。
5.4加样：分别在相应孔中加入50ul阴、阳性对照血清或待测样本。
5.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul；轻拍混匀。
5.6温育：置37℃温育25min。
5.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干（每次应保持30~60s的浸泡时间）。
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)
核准日期：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)说明书【药品名称】通用名称：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)英文名称：Diagnostic Kit for Antibody to Hepatitis C Virus(ELISA)汉语拼音：Bingxing Ganyan Bingdu Kangti Zhenduan Shijihe(Meilian Mianyifa)【成份】1.可拆孔HCV抗原包被板 96人份2.抗HCV阳性对照血清1ml/瓶 1瓶3.抗HCV阴性对照血清1ml/瓶 1瓶4.样品稀释液15ml/瓶 1瓶5.酶结合物15ml/瓶 1瓶6.显色剂A液8ml/瓶 1瓶7.显色剂B液8ml/瓶 1瓶8.终止液8ml/瓶 1瓶9.20×浓缩洗涤液60ml/瓶 1瓶10.一次性封口胶片 3X11.封板用塑料袋 1个12.使用说明书 1份【适应症】用于人血清或血浆样本中丙型肝炎病毒抗体检测。
【试验原理】本试剂盒系由基因重组表达的丙型肝炎病毒（HCV）融合抗原包被的酶联板，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG（γ链）单克隆抗体，以及丙型肝炎病毒抗体阳性、阴性对照血清等组成，以间接法原理（ELISA）检测人血清或血浆样本中的丙型肝炎病毒抗体。
【适用仪器】1.温育器（干式或湿式）或恒温水浴，37±1℃2.具有双波长检测能力的酶标仪3.洗板机4.微孔板振荡器【样本要求】1.样本采集前对受检者无特殊要求，不需禁食。
2.应按规X的采血技术采集样本，并按标准程序进行样本的预处理。
3.可以使用血清或血浆样本进行检测，柠檬酸、肝素、EDTA等常用抗凝剂在正常使用剂量下对检测结果无影响，但使用特殊种类或不适宜比例抗凝剂的样本，不能用于检测。
4.轻度溶血、轻度乳糜血及轻度黄疸的样本一般不影响检测结果。
5.已经进行加热处理的样本及使用叠氮钠作为防腐剂的样本不能用于检测。
6.应尽量使用新鲜的样本进行检测。
乙肝抗体的检测实验报告
一、实验背景乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球范围内重要的公共卫生问题。
乙肝抗体检测是临床诊断和预防乙型肝炎的重要手段。
本次实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙型肝炎表面抗体（HBsAb），了解实验对象的免疫状态，为乙型肝炎的防控提供依据。
二、实验目的1. 掌握乙型肝炎表面抗体ELISA检测方法；2. 评估实验对象的免疫状态；3. 为乙型肝炎的防控提供依据。
三、实验原理乙型肝炎表面抗体ELISA检测原理基于抗原抗体特异性结合反应。
将乙型肝炎表面抗原（HBsAg）包被于微孔板，加入待测血清，若血清中存在HBsAb，则与包被的HBsAg结合。
再加入酶标记的二抗，若HBsAb与HBsAg结合，则酶标记的二抗与HBsAb结合。
最后加入底物显色，根据颜色深浅判断HBsAb的存在。
四、实验材料1. 乙型肝炎表面抗原（HBsAg）包被微孔板；2. 待测血清；3. 酶标记的二抗；4. 底物；5. 洗涤液；6. 酶标仪；7. 移液器；8. 试剂盒说明书。
五、实验方法1. 标准曲线绘制：将不同浓度的HBsAb标准品按试剂盒说明书操作，检测吸光度（A值），以A值为纵坐标，HBsAb浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 实验操作：a. 将微孔板置于酶标仪上，调整波长为450nm；b. 向微孔板每孔加入50μl待测血清，置于酶标仪上，37℃孵育30分钟；c. 向微孔板每孔加入50μl酶标记的二抗，置于酶标仪上，37℃孵育30分钟；d. 向微孔板每孔加入底物，置于酶标仪上，37℃孵育15分钟；e. 向微孔板每孔加入终止液，终止反应；f. 测量各孔的A值。
3. 结果判断：a. 根据标准曲线，计算待测血清的HBsAb浓度；b. 以HBsAb浓度≥10mIU/ml为阳性，低于10mIU/ml为阴性。
六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据标准曲线绘制结果，A值与HBsAb浓度呈正相关。
2. 实验结果：本次实验共检测30份血清样本，其中18份样本HBsAb浓度为10mIU/ml以上，12份样本HBsAb浓度低于10mIU/ml。
ELISA检测乙肝抗体HBsAb
结果观察
结果观察
乙型肝炎病毒采用ELISA检测法具有操作简便、灵敏度高、试 剂成本低、环保和适用于大批量人群抗原、抗体筛查等优点, 目前在国内实验室被广泛使用。 缺点易产生假阳性结果。
酶标仪洗板机
排枪加样
酶标仪
乙肝病毒（hepatitis B virus, HBV）
抗原,抗体: 1、表面Ag（HBsAg） HBsAb 2、核心抗原（HBcAg） HBcAb 3、e抗原（HBeAg） HBeAb
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、 HBeAg、AFP等。只要获得针对受检抗原的特异性抗体， 就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。
竞争法
用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。 以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体表面， 经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和待测抗原的混 合液，而另一组只加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底 物显色，这两组底物降解量之差，即为所要测定的未知 抗原的量。 这种方法所测定的抗原只要有一个结合部位就可， 因此，对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此 法。该法的优点是快，因为只有一个保温洗涤过程， 但需用较多量的酶标记抗原。
酶
酶具有高效催化性：可以加快化学反应的速度 ；在反应前后， 没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用。
Y
DH2 + H2O2 无色
酶
D + 2H2O 有色
酶联免疫吸附试验 用于检测可溶性抗 原或抗体
酶免疫技术
酶免疫组化法 用于检测组织中或 细胞表面的抗原
酶联免疫吸附试验-ELISA
ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）。
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定 方法中有三个必要的试剂：
1.1乙肝表面抗原检测操作规程
乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1原理：在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HbsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。
2试剂：2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司2.3包装规格：96Test/Kit2.4试剂盒组成：HbsAb预包被微孔板（包被HbsAb），HbsAg 酶标抗体（含HRP标记HbsAb）, HbsAg阳性对照（含基因工程HbsAg），HbsAg阴性对照（正常人血清），HbsAg样品稀释液（含BSA缓冲液），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。
2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。
3样本采集：取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。
高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。
4所需仪器4.1全自动酶免分析仪4.2新鲜蒸馏水或去离子水4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm）4.4微量移液器4.5 37℃恒温箱或水浴箱4.6洗板机或洗瓶5检验方法5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。
5.2配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。
5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。
5.4稀释：每孔加入20ul样品稀释液。
5.5加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。
5.6温育：置37℃温育60min。
5.7加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。
试剂盒使用说明书
人抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）水平。
用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb），再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）含量。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：270IU/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
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仅供科研使用，不得用于临床检验。
人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）定量检测试剂盒
（ELISA）
说明书
【产品名称】
通用名称：人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）定量检测试剂盒（ELISA）
英文名称：Human Hepatitis B surface Antibody（HBsAb）ELISA KIT
【包装规格】
48人份/盒，96人份/盒
【预期用途】
仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）的浓度。
【检验原理】
本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
在预包被抗人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）校准品和待测样本，再加入HRP标记的人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的复合物。
加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）的浓度正相关。
拟合校准品曲线，可以计算出样本中人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb））的浓度。
【主要组成成分】
主要成分
抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶标仪
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、500ml量筒
7、无粉一次性乳胶手套
8、质控品
【储存条件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。
3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
【适用仪器】
半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。
【样本要求】
样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南。
所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。
在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。
样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。
【检验方法】
1、使用前，所有的组分都要至少复温120min，确保充分复温到室温。
2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。
浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。
1、所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
4、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，样本孔加待测样本50μL，空白孔不加。
5、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗原100μL。
6、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
7、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。
8、如此重复4次（共洗板5次）。
若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。
洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
9、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。
用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。
10、所有孔加入终止液50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD值）。
【检验结果的解释】
检测完成后，以标准品浓度做为纵坐标，对应的吸光度（OD值）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数Logistic曲线拟合（4-pl），创建标准曲线方程，通过样本的吸光度（OD值），利用方程计算样品的浓度值。
如果样品被稀释，通过上述方法测的的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。
【检验方法的局限性】
1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。
2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。
3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。
4、使用试剂盒配套的样品稀释液。
5、如果样本值高于最高标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。
6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排除该因素。
7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。
【产品性能指标】
1、物理性能
试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。
微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。
2、剂量反应曲线线性
校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。
3、精密度
批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。
批内变异系数CV%小于10%。
批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。
批间变异系数CV%小于15%。
4、灵敏度
最低检出剂量小于0.1ng/ml。
5、回收率
三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次回收率评估，回收率在85%-115%之间。
6、特异性
本试剂盒识别天然和重组人乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb），与结构类似物无交叉。
7、稳定性
2℃-8℃保存，有效期6个月。
【注意事项】
生物安全
1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。
戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。
技术提示
1、混合蛋白溶液时，避免起泡。
2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。
3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。
4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。
5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。
6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
废物处理
所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。
【说明书批准日期及修改日期】
批准日期：2013.05.12
第一次修改日期：2016.02.16。