ch02柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝详解
亚甲基蓝-甲基橙混合指示剂测定三次采油用石油磺酸盐有效物含量
亚甲基蓝-甲基橙混合指示剂测定三次采油用石油磺酸盐有效物含量李柏林;牛瑞霞;程杰成【期刊名称】《大庆石油地质与开发》【年(卷),期】2004(023)003【摘要】以海明1622为滴定剂,以亚甲基蓝-甲基橙混合物为指示剂,采用两相滴定法,测定了三次采油用石油磺酸盐中有效物的含量.通过对影响滴定因素的考查,确定了滴定分析条件.结果表明:当亚甲基蓝与甲基橙的质量比为5:1,配成含有0.1%亚甲基蓝和0.02%甲基橙的混合指示剂,加量在4～8滴,可以明显地观察到终点颜色变化,其变化特点为上相由粉红色至蓝色,下相由蓝色至绿色.用该方法测定三次采油用石油磺酸盐有效物含量,终点清晰,干扰小,操作简便,重现性好,其相对标准偏差小于1.0%.【总页数】2页(P75-76)【作者】李柏林;牛瑞霞;程杰成【作者单位】大庆石油学院,黑龙江,大庆,163318;大庆石油学院,黑龙江,大庆,163318;大庆石油学院,黑龙江,大庆,163318;大庆油用有限责任公司技术发展部,黑龙江,大庆,163453【正文语种】中文【中图分类】TE357.46【相关文献】1.甲基橙-靛红混合指示剂测定总碱度 [J], 唐晓岚2.柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法 [J], 张枫;宋学英;卢映霞;朱莹;刘锰;刘永利3.百里酚蓝—亚甲基蓝混合指示剂测定十二烷基苯磺酸钠活性物含量 [J], 任苏明4.水质硫化物的测定:亚甲基蓝分光光度法和流动注射-亚甲基蓝分光光度法的比较[J], 梁时军;黄银春;夏亮;陈巧5.三维花形层状双金属氢氧化物对甲基橙和亚甲基蓝的去除 [J], ZHANG Ping;PAN Xuemei;WANG Qinyuan;SUN Zhaoyi;MA Ruonan因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中学生奥赛化学实验培训-柱色谱
柱色谱一、基本原理：甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂，它们的结构式如下： N N NaO 3S N(CH 3)2甲基橙 S N(H 3C)2N N +(CH 3)2Cl -亚甲基蓝由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同，极性不同，吸附剂对它们的吸附能力不同，洗脱剂对它们的解析速度也不同。
极性小、吸附能力弱、解吸速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解吸速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。
本实验以中性氧化铝作为吸附剂，95％乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用氨水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
二、实验步骤:取口径10mm ，长200mm 的层析柱一根，固定在铁架上，向柱中倒入95％乙醇至柱高的1/2处，通过一个干燥的玻璃漏斗慢慢地加入层析用的中性氧化铝（约8g ），待氧化铝粉末在柱内有一定沉积高度时，打开活塞，用锥形瓶作接收瓶，控制液体流速约为1滴／秒，并用木棒或带有橡皮管的玻棒轻轻敲打柱身下部，使氧化铝装填紧密，装满100mm 高度后在上面加一层石英砂（约5mm ）。
操作时要注意吸附剂始终不能露出液面。
当乙醇液面刚好流至石英砂平面相切时，立即关闭活塞，向柱内滴加10滴甲基橙和亚甲基蓝的混合物（乙醇溶液），打开活塞，待液面降至石英砂层时用少量95％乙醇洗下附在管壁的色素（少量多次），然后用95％乙醇作为洗脱剂，控制流速约为1滴／秒，当亚甲基蓝色带刚洗出时，立即更换锥形瓶收集洗脱液，直至洗脱液无色。
更换锥形瓶，并改用3%氨水继续洗脱，当甲基橙色带刚洗出时，立即更换锥形瓶收集洗脱液，待甲基橙全部被洗脱下来，即分离完全。
量出不同颜色组分的体积，记录数据。
实验报告实验台号姓名一、实验步骤、实验现象、实验记录:二、数据记录：记录监考老师签字亚甲基蓝溶液的体积/mL甲基橙溶液的体积/mL三、思考题：1．.装柱不均匀或者有气泡、裂缝，将会造成什么后果？如何避免？2．极性大的组分为什么要用极性较大的溶剂洗脱？3．在氧化铝柱子上若分离下列各组混合物，哪一个组分先被洗脱下来？NH2NO2O2N NH2和(1)N N N N N N和(2)。
精细化工实验-柱层析分离甲基橙与亚甲基蓝
柱层析分离甲基橙与亚甲基蓝目的：1．理解柱层析分离有机化合物的原理及在精细有机分离中的应用；2．掌握柱层析分离的操作步骤；3．了解有机化合物层析分离的原理及应用。
原理：二十世纪初，人们就开始应用柱色谱法来分离复杂的有机物。
目前，仍是一种分离复杂有机化合物的有效方法。
柱色谱法涉及到被分离的物质在液相和固相之间的分配。
因此，可以把它看是一种固—液吸附色谱法。
固定相是固体，液体样品通过固体时，由于固体表面对液体中各组分的吸附能力不同而使各组分分离开。
图1 柱色谱柱法示意图柱色谱法是通过色谱柱(如图l)来实现分离的。
色谱柱内装有固体吸附剂(固定相)，如氧化铝或硅胶。
液体样品从柱顶加入，在柱的顶部被吸附剂吸附。
然后，从柱的顶部加入有机溶剂(作洗提剂)。
由于吸附剂对各组分的吸附能力不同，各组分以不同的速率下移，被吸附较弱的组分在流动相(洗提剂)里的百分含量比被吸附较强的组分要高，以较快的速率向下移动。
此过程与气相色谱过程相似。
各组分随溶剂以不同的时间从色谱柱下端流出，用容器分别收集之。
如各组分为有色物质则可以直接观察到不同颜色谱带，但如为无色物质，则不能直接观察到谱带。
有时一些物质在紫外光照射下能发出荧光，则可用紫外光照射。
有时则可分段集取一定体积的洗提液，再分组签定。
吸附剂选择吸附剂时，需考虑到以下几点：它不溶于所使用的溶剂；与要分离的物质不起化学反应，也不起催化作用等；具有一定的组成；一般要求是无色的；颗粒大小均匀。
颗粒越小，则混合物的分离程度越好，但溶液或溶剂流经柱子的速度也就越慢，因此要根据具体情况选择吸附剂。
最广泛使用的吸附剂是活性氧化铝，非极性的一些物质通过氧化铝的速率较极性物质为快。
有一些物质由于被吸附剂牢牢吸附，将不能通过。
活性氧化铝不溶解于水，也不溶于有机溶剂，含水的与无水的物质都可使用这种吸附剂。
吸附剂的吸附能力不仅取决于吸附剂本身，也取决于在色谱分离中所用的溶剂。
因此，对不同物质，吸附剂按其相对的吸附能力可粗略分类如下：(1) 强吸附剂：低水含量的氧化铝，活性炭。
介绍一个零排放的有机化学实验-柱色谱分离亚甲基蓝和甲基橙
介绍一个零排放的有机化学实验-柱色谱分离亚甲基蓝和甲基
橙
尹庚明;杨园园;陈汝萍
【期刊名称】《广东化工》
【年(卷),期】2018(045)012
【摘要】以层析用中性氧化铝为吸附剂,95％乙醇、蒸馏水为洗脱剂,分离亚甲基蓝和甲基橙,实验用时约15 min.实验结束后,所用试剂除蒸馏水外均可回收重复使用.【总页数】1页(P245)
【作者】尹庚明;杨园园;陈汝萍
【作者单位】五邑大学化学与环境工程学院,广东江门 529020;五邑大学化学与环境工程学院,广东江门 529020;五邑大学化学与环境工程学院,广东江门529020
【正文语种】中文
【中图分类】O62
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柱色谱分离实验PPT课件
璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱, 使其逐渐沉入底 部。用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型 瓶承接, 控制滴速为1 滴／秒,装完后在上面加一层脱脂棉（ ，操作时要注意吸附剂始终不能露出液面）。
2021
装柱
加样 洗脱
收集
鉴定
•1mL样品 •加样操作 •0.5mL×2乙醇洗涤
2021
•组分颜色
三、实 验 内 容 装柱 干法装柱 湿法装柱
吸附剂装填紧密，排除 气泡。最终应使吸附剂的上 端平整，无凹凸面，无断层。
装柱
2021
• 装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝 ，否则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影 响样品的分离，应用质软的物体如吸耳球 等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密， 排除气泡。最终应使吸附剂的上端平整， 无凹凸面．
2021
三、实 验 内 容 收集
试样有色，在层析柱上可直接观察。洗脱后 分别收集各个组分。
试样无色，收集洗脱液时，多采用等份收 集，每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样 的分离情况而定。收集的每份洗脱剂的体积越小， 分离效果越好。
2021
三、实 验 内 容
鉴定
试样有色 依据颜色直接鉴定
试样无色 可结合薄层色谱结果
基橙、亚甲基蓝。
• H2O∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (A 液) • 0. 2mol·L -1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液)
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装置图
洗脱
装柱
2021
实验步骤
• 装柱：
• 1、装色谱柱： • （1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂
实验3 柱色谱分离染料和薄层色谱鉴定阿司匹林与咖啡因
实验三、柱色谱分离染料和薄层色谱鉴定阿司匹林与咖啡因自我实践实验：旋光度的测定一、目的1． 了解柱色谱和薄层色谱的原理2． 练习柱色谱和薄层色谱的操作二、原理 (略，见实验指导。
P72-74, P53-60)三、实验仪器色谱柱，50ml 烧杯（二只），10ml 量筒，短颈漏斗，长颈滴管(二支)，铁架台，烧瓶夹，双联球，高效薄层板（每组二块），层析缸，毛细管，镊子，紫外分析仪。
四、药品石英砂，氧化铝，95%乙醇，无水乙醇，混合染料(甲基橙、亚甲基蓝)，0.2mol/L 盐酸，咖啡因，阿斯匹林。
1,2-二氯乙烷/乙酸（12:1）展开剂。
五、实验操作步骤（一）甲基橙和亚甲基蓝两种染料的分离1.装柱固定色谱柱加约6克氧化铝 用双联球压实 加少量石英砂覆盖 打开活塞 2.加样加6滴混合染料 打开活塞 加少量乙醇 淋洗 （重复2-3次）（用长滴管） （短滴管约1管）3.洗脱用乙醇洗脱（速度慢可用双联球压出）直到蓝色物质全部洗出 小烧杯接收。
（约10mL ）待蓝色带完全洗脱后加少量0.2mol/L 盐酸 淋洗 （重复2-3次）用0.2mol/L 盐酸洗脱 （短滴管约1管） （约25mL ）小烧杯接收，直到红色物质全部洗出，速度慢用双联球压出。
4.注意事项：(1)柱要装的均匀，石英砂少量即可（约2-3毫米厚度）(2)缓慢加样，尽量不要碰在柱壁上。
(3)洗脱时，洗脱剂加入速度要慢，每次加入的量不要太多（二）薄层色谱1.点样距薄板一端约0.5cm处，用毛细管在一块薄层板上等距离分别点上乙酰水杨酸标样、咖啡因标样和阿加片提取液（乙酰水杨酸与咖啡因的混合样液）。
如图所示2.展开在层析缸中加入约5ml展开溶剂（1,2-二氯乙烷/乙酸（12:1））后，将薄板放入层析缸中，展开剂液面不得超过点样线。
当溶剂前缘距薄板顶端0.5cm时，取出薄板，作好标记，放在空气中自然晾干。
3.检出在紫外分析仪上，观察荧光的斑点，并描出斑点的位置，计算各样品的R f值。
柱色谱法分离甲基橙和碱性湖蓝BB
柱色谱法分离甲基橙和碱性湖蓝BB一、实验目的1、学习柱色谱法技术的原理和方法；2、掌握柱色谱技术分离甲基橙和碱性湖蓝BB的方法；3、掌握甲基橙的定量方法。
二、实验原理柱色谱有吸附色谱和分配色谱两种。
实验室中最常用的是吸附色谱，其原理是利用混合物中各组分在固定相上的吸附能力和流动相的解吸能力不同，让混合物随流动相流过固定相，发生反复多次的吸附和解析过程，从而使混合物分离成两种或多种单一的纯组分。
甲基橙为橙黄色的鳞状晶体或粉末，稍溶于水而成黄色，不溶于乙醇，用作pH值指示剂，变色范围3.1~4.4，其结构式为：碱性湖蓝BB又称为亚甲基蓝，可含有3~5个结晶水，三水合物是暗绿色结晶，其稀的乙醇溶液为蓝色，其结构时为：1、柱色谱装置色谱柱是一根下端具塞的玻璃管，柱高和直径比应为8：1。
在柱底部塞脱脂棉，上盖石英砂，中间是固定相，最上层再铺一层石英砂。
（如没有色谱柱，可用一根25mL酸式滴定管代替。
）2、装柱装柱前应先将色谱柱洗干净，进行干燥，在柱底铺一小块脱脂棉，再铺约0.5cm厚的石英砂，然后进行装柱。
装柱分为湿法装柱和干法装柱两种。
（1）湿法装柱将吸附剂（氧化铝或硅胶）用洗脱剂中极性最低的洗脱剂调成糊状，在柱内先加入约3/4高的洗脱剂，再将调好的吸附剂边敲边倒入柱中，同时，打开下旋活塞，在色谱柱下面放一个干净并且干燥的锥形瓶或烧杯，接收洗脱剂。
当装入的吸附剂有一定的高度时，洗脱剂下流速度变慢，待所有吸附剂全部装完后，用流下来的洗脱剂转移残留的吸附剂，并将柱内壁残留的吸附剂淋洗下来。
（注意若填装不紧密或留有气泡层等现象，会影响渗透速度和显色均匀。
但如果填装时过分敲击，又会因太紧密而流速太慢。
）在此过程中，应不断敲打色谱柱，以使色谱柱填充均匀并没有气泡。
柱子填充完成后，在吸附剂上端覆盖一层约0.5cm厚的石英砂。
在整个色谱柱过程中，柱内洗脱剂的高度始终不能低于吸附剂最上端，否则柱内会出现裂痕和气泡。
（加沙子目的是在加料时不致把吸附剂冲起，影响分离效果，若无沙子也可用玻璃毛或剪成比柱子内径略小的滤纸压在吸附剂下面。
ch02柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝详解
思考题 1.薄层色谱的铺板要领是什么？ 2涂层的均匀度对实验有何影响？
柱色谱与薄层色谱之间的区别与联 系（答2）
薄层色谱和柱色谱不同点：固定相的形 状和展开剂的移动方向 薄层色谱和柱色谱相同点：在分离原理 上基本相同。
3、柱色谱（柱层析） （1）在薄层色谱的基础上，进行混合物的分离 （2）分类：吸附型（Al2O3、硅胶G等作吸附剂） 分配型（硅藻土、纤维素等作支持剂）（答6） （3）吸附柱色谱 1）吸附剂：一般采用表面积很大，经过活化的多孔 性或粉状的固体 氧化铝（酸性、中性、碱性）3种（答7） a、用前应纯化并在105-110℃活化0.5h，于烘 箱中自然冷却 (答8) b、吸附剂用量 被分离样品的量与吸附剂用量之比 被分离样品：吸附剂量=1：30-40或100倍(答9）
洗脱时应注意：（答10） （1）向柱内加入95%乙醇溶液洗脱（可以通过注射器沿管 壁或安装滴液漏斗）在恒压或加压条件下进行洗脱。控制 流出速度1滴/秒。逐渐出现色层带分离。 （2）第一色层带到达色谱柱底部时，立即用锥形瓶收集第 一色层的溶液，直到其完全被洗出。【注意】洗脱时切勿 使溶剂流干！ （3）然后，改用水溶液作为洗脱剂，当第二色层带到达色 谱柱底部时，立即收集第二色层的的溶液，直到其完全被 洗出。 （4）用量筒分别量取所分离出来的两种溶液的体积后，倒 入指定的回收瓶中。 （5）分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸 耳球从活塞 向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出。使 用过的吸附剂倒入垃圾桶里。
常用洗脱剂的极性：
石油醚＜ 环己烷＜ 四氯化碳＜ 甲苯＜ 苯 ＜ 二氯甲烷＜ 氯仿＜ 乙醚＜乙酸乙酯＜ 丙酮＜ 乙醇＜甲醇＜ 水＜ 乙酸
装柱时应该注意的问题（答4）
柱色谱分离实验讲解
Column Chromatography
精品资料
一、实 验 目 的
了 解： 1. 柱色谱法分离有机物的 原理(yuánlǐ)。 2．固定相和流动相的选择 原则。
掌 握： 1. 色谱柱的填充方法。
2．柱色谱分离的基本操作。
精品资料
色谱法简介
色谱法亦称色层法，层析 法等，是分离，纯化和鉴定有 机化合物的重要方法(fāngfǎ) 之一，还可定量分析。
吸附剂装填紧密，排除气 泡(qìpào)。最终应使吸附剂的上 端平整，无凹凸面，无断层。
精品资料
• 装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝，否 则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影响样品的 分离，应用(yìngyòng)质软的物体如吸耳球等 轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排除气 泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面．
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三、实实验 验步 骤内: 容
柱色谱操作：
•干法：10g 硅胶
(ɡuī jiāo)
•
+乙醇
•先用乙醇 (yǐ chún)
• 后用水 •操作
•组分颜色
装柱
加样
洗脱
收集
鉴定
•1mL样品 •加样操作 •0.5mL×2乙醇洗涤
精品资料
•组分颜色
仪器(yíqì)和试剂
• 1.仪器 • 锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱 • 2.试剂(shìjì) • 柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲 • 基橙、亚甲基蓝。 • H2O∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (A 液) • 0. 2mol·L -1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液)
洗脱剂的极性：溶解度 适中、不反应、易获取回 收
吸附剂的性质(xìngzhì)： 均匀、表面积大、不反 应、吸附能力不同
实验项目柱层析分离甲基橙和次甲基蓝染料
九、实验方法指示及注意事项
1．色谱柱一定要装填紧密。若柱中装填时留有气泡或各部分松紧不匀时，会
影响渗滤速度和显色的均匀。
2．加料时须沿柱壁绕圈加入，防止局部样品过多，或者把吸附剂冲起而影响分离效果。
3．在分离过程中，自始至终须使整个吸附剂浸泡在溶剂中。否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显色的均一性。
装柱可以采用湿法或干法，干法装柱是将干吸附剂倒入ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ内，填装均匀，
然后加入少量溶剂。无论采用哪种装柱都不要使吸附剂有裂缝或气泡，否则影响
分离效果，一般说来湿法装柱较干法紧密均匀。
本实验采用湿法装柱。
1、色带有重叠现象，即柱内出现彩色色带，这是由于样品进入带较宽，扩散现象严重之故，但由于甲基橙与次甲基兰极性相差甚大，随着洗脱进行，基本上可以得到单一化合物。
1．从分子结构看出,甲基橙中含—SO3Na基团,它具有比次甲基兰更大的极性，因此在用乙醇洗脱时只有次甲基兰可被洗脱下来，极性较大的甲基橙必须用水作洗脱剂。
2．装柱的紧密与否,样品吸收带是否狭对柱层析分离影响颇大.
加入样品量不宜过大,否则会引起过载,分离效果不好,将含样品的溶液进入吸附柱时,必须待样品液全部被吸附剂吸附后,才能用少量洗脱剂洗涤,洗涤液又全部进入柱后,才能开始用大量溶剂洗脱,否则样品色带宽大,在洗脱过程中,会因扩散现象造成色带彼此重叠,使分离难以进行。色谱柱装填要紧密、均匀,疏松或不均匀的柱子均会引起涌流扩散现象,导致分离效果欠佳。
酸>醇,胺,硫醇>酯,醛,酮>烃 >卤化物,醚>烯>饱和烃
强吸附性的化合物要用强极性溶剂来洗脱。
作为洗脱剂的溶剂要求其具有一定极性,适合于被分离物的分离,体积尽量要小,此外要求易挥发,易除去(乙醚等挥发性太大的溶剂不合适)。
柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝==
柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法柱色谱是色谱分析方法中的一种,由于柱色谱能够较大量地有效分离和提纯有机化合物,所以广泛应用在化学分析,药物研究,天然物质提取,医学研究等领域。
在大学有机实验教学中,往往都设有柱色谱实验课。
在实验教材中,一般采用中性氧化铝为固定相分离甲基橙和亚甲基蓝的混合物[1～3 ],但此方法分离的色谱带有扩散现象,影响分离效果;且实验中只有定性观察,不进行定量操作。
在本实验中,我们改用硅胶为固定相,选用了新的样品溶剂和洗脱剂,在很大程度上抑制了色带扩散,而且色谱带分明,大大提高了分离效果。
在实验中还增加了定量测定的内容,通过计算回收率,可对同学们的实验情况进行评判,使你们能够认真收集分离物质,不断地提出问题,调动了你们做实验的积极性。
1 实验材料和方法1. 1 材料分光光度计(岛津UV22201) ,玻璃色谱柱。
柱色谱用硅胶(100～140 目) ,甲基橙(指示剂) ,亚甲基蓝(指示剂) ,H2O∶95 %乙醇= 1∶1 (A 液) ,0. 2mol·L - 1HCl∶95 %乙醇= 1∶1 (B 液) 。
1. 2 甲基橙标准曲线的绘制用A 液做溶剂,配制甲基橙系列标准溶液,在λmax = 450nm处测得甲基橙吸光度(表1) 。
1. 3 亚甲基蓝标准曲线的绘制用B 液做溶剂,配制亚甲基蓝系列标准溶液,在λmax = 661nm 处测得亚甲基蓝吸光度(表1) 。
1. 4 甲基橙和亚甲基蓝的分离在玻璃色谱柱( d = 1cm , l = 10cm)底部用脱脂棉轻轻塞紧,称取4g 硅胶于小烧杯中,加入15mL 蒸馏水,用玻璃棒调好。
在柱中先加入1/ 2 柱高的蒸馏水,打开活塞,在搅动下把糊状硅胶加入柱中,同时调整活塞使流速为1 滴/ s。
当柱中液面将要露出硅胶面时,加入5mL左右的A 液,当硅胶面又将要露出时,关紧活塞,用移液管准确加入0. 50mL 以A 液做溶剂的混合液(含甲基橙和亚甲基蓝各为0. 400 g·L -1) 。
柱色谱——次甲基蓝与甲基橙的分离
4.当溶剂面刚好到达滤纸表面1mm时，立即用滴管加入1ml次甲基蓝和甲基醇的混合液。 当混合液面降至滤纸面1mm时用滴管吸取少量乙醇，淋洗粘附在柱壁上的溶液。用滴管 加入乙醇洗脱，控制流出速度。在整个洗脱过程中不要使柱干裂。在淋洗过程中可看 到色带的形成和分离。当蓝色的次甲基蓝色带到达柱底时，更换干净的接收器，收集 蓝色的色带。然后改为蒸馏水为洗脱剂更换接收器。当黄色的甲基橙色带到达柱底时， 再更换接收器，收集黄色的色带。
三、实 验 装 置
层析柱装置
四、实 验 步 骤
1.选用直径1.5cm,长15cm的层析柱，垂直固定在铁架台上，夹子夹在柱的顶端。向柱 中加入乙醇至柱高的1/2，从柱的顶端用玻璃棒将少许棉花推到柱的底部，在棉花上可 加入一薄层石英砂
2.在小烧杯中称取约10g的氧化铝加入10-15ml乙醇调匀。 另外，预先将2g甲基橙和0.25g次甲基蓝溶于110ml乙醇中，备用。
3.吸附-解吸-吸附交替进行，使不同吸附能力的化合物按不同速度沿柱向下 移动，形成不同层次的色带，每一个色带代表一个组分，分别收集每个色带 即可得到各组分的溶液，将洗脱剂蒸去后可得到单一纯净的物质
4.甲基橙和次甲基蓝（亚甲基蓝）的结构式如上图，可以看到, 它们结 构中既有极性部分,又有非极性部分,亚甲基蓝溶于乙醇,而甲基橙不溶于 乙醇等有机溶剂, 但它们都可溶于水，实验室通常是用乙醇做溶剂进行 分离
实验六 柱色谱—次甲基蓝与甲基橙的分离
实验项目柱层析分离甲基橙和次甲基蓝染料
吸附剂的活性根据其含水量而定。
吸附剂活性等级 含水量
Ⅰ 0%
Ⅱ 3%
Ⅲ 6%
Ⅳ 10%
Ⅴ 15%
所以为了提高吸附剂活性,可以用加热脱水的方法来获得。
⒉溶剂
化合物的吸附能力与它的极性成正比，具有较大极性基团的化合物，其在吸附剂上吸附能力较强。
氧化铝对各化合物的吸附性按以下次序递减：
装柱可以采用湿法或干法，干法装柱是将干吸附剂倒入柱内，填装均匀，
然后加入少量溶剂。无论采用哪种装柱都不要使吸附剂有裂缝或气泡，否则影响
分离效果，一般说来湿法装柱较干法紧密均匀。
本实验采用湿法装柱。
1、色带有重叠现象，即柱内出现彩色色带，这是由于样品进入带较宽，扩散现象严重之故，但由于甲基橙与次甲基兰极性相差甚大，随着洗脱进行，基本上可以得到单一化合物。
3．洗脱速度要保持在1滴/秒，速度过快，物料还来不及平衡，影响分离效果；过慢，会导致柱内扩散现象严重，均会影响分离效果。
六、实验数据记录
1．用95%乙醇洗脱分出蓝色色带，得次甲基兰
2．然后改用水洗脱分出黄色色带，得甲基橙
七、实验结果计算及曲线
⒈吸附剂
柱层析常用吸附剂有氧化铝,硅胶, 氧化镁,碳酸钙及活性炭等, 吸附剂要求颗粒大小均匀,越细分离效果越佳,但此时洗脱阻力也会增大,所以要选择颗粒大小合适的吸附剂.
4．一旦样品加入开始过柱后，必须保持洗脱剂的流速恒定，不得关闭活塞，否则将会造成被分离样品在分离过程中重新混合，严重影响分离效果。
实验项目：柱层析分离甲基橙和次甲基蓝染料
一、实验目的
1．了解柱色谱分离有机化合物的原理；
2．初步掌握色谱柱装填和洗脱的操作方法。
实验四柱色谱
实验四柱色谱3学习柱色谱的操作方法。
柱色谱（柱上层析）常用的有吸附色谱和分配色谱两类。
吸附色谱常用氧化铝和硅胶作固定相；而分配色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收较大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作用。
吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。
1常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等。
吸附剂一般要经过纯化和活性处理，颗粒大小应当均匀。
对于吸附剂而言，粒度愈小表面积愈大，吸附能力就愈高，但颗粒愈小时，溶剂的流速就太慢，因此应根据实际分离需要而定。
供柱色谱使用的氧化铝有酸性、中性、碱性三种，本实验选择中性氧化铝。
2化合物的吸附性与它们的极性成正比，化合物分子中含有极性较大的基团时，吸附性也较强。
各种化合物对氧化铝的吸附性按以下次序递减：3溶剂的选择是重要的一环，通常根据被分离物中各化合物的极性、溶解度和吸附剂的活性等来考虑。
先将要分离的样品溶于一定体积的溶剂中，选用的溶剂极性要低，体积要小。
如有的样品在极性低的溶剂中溶解度很小，则可加入少量极性较大的溶剂，使溶液体积不致太大。
色层的展开首先使用极性较小的溶剂，使最容易脱附的组分分离。
然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗脱剂，将极性较大的化合物自色谱柱中洗脱下来。
常用洗脱剂的极性按如下次序递增：己烷和石油醚 < 环己烷 < 四氯化碳 < 三氯乙烯 < 二硫化碳 < 甲苯 < 苯 < 二氯甲烷 < 氯仿 < 乙醚 < 乙酸乙酯 < 丙酮 < 丙醇 < 乙醇 < 甲醇 < 水 < 吡啶 < 乙酸所用溶剂必须纯粹和干燥，否则会影响吸附剂的活性和分离效果。
4（1）柱中的吸附剂用量为被分离样品量的30—40倍，若需要可增至100倍；（2）柱高和直径之比一般是10:1-20:1；（3）装柱有湿法和干法两种，本实验采用湿法装柱，无论采用哪种方法装柱，都不用使吸附剂有裂缝或气泡。
(柱色谱法分离荧光黄和亚甲基蓝)
XXXX大学
实验报告
柱色谱法分离荧光黄和亚甲基蓝
姓名：
班级：环境XXX
开放性化学实验
课程名称
开放基蓝
1．吸附剂
常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙等。吸附剂应经过纯化和活性处理，颗粒大小均匀。对吸附剂来说粒子越小、表面积越大，吸附能力就越高，但是颗粒小时，溶剂的流速就太慢，因此应根据需要确定。
大多数吸附剂都能强烈地吸水，而且水分易被其它化合物置换，而使吸附剂的活性降低，通常用加热的方法使吸附剂活化。
化合物的吸附性与它们的极性成正比，即极性大吸附力强，后洗脱。
色谱柱的装填分为：干法和湿法两种
柱高和柱直径之比=7.5：1
实验效果如图：
六、注意事项
1.吸附剂的选择和活化
常用洗脱剂的极性：
石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水＜乙酸
2.洗脱剂的选择：对未知样品先用极性小的溶剂洗脱，再用极性大的溶剂洗脱
2．溶剂
色层的展开首先使用极性较小的溶剂，使最容易脱附的组分分离，然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗脱剂，将极性较大的化合物洗脱下来。
三、仪器试剂
20cm×1cm层析柱；
吸附剂：中性氧化铝100-200目；石英砂；
荧光黄和亚甲基蓝的混合液；95％乙醇；
四、实验步骤
1.装柱（干法）：在色谱柱内添加厚1cm左右的石英砂，然后添加100-200目的氧化铝约18cm左右，再在上面加一层1cm厚的石英砂。
3.装柱的技术：松紧度
柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法
柱色谱试验教授教养中甲基橙和亚甲基蓝的分别和测定办法柱色谱是色谱剖析办法中的一种 ,因为柱色谱可以或许较大量地有用分别和提纯有机化合物 ,所以普遍运用在化学剖析 ,药物研讨 ,自然物资提取 ,医学研讨等范畴.在大学有机试验教授教养中 ,往往都设有柱色谱试验课.在试验教材中 ,一般采取中性氧化铝为固定相分别甲基橙和亚甲基蓝的混杂物[1～3 ],但此办法分别的色谱带有集中现象 ,影响分别后果;且试验中只有定性不雅察 ,不进行定量操纵.在本试验中 ,我们改用硅胶为固定相 ,选用了新的样品溶剂和洗脱剂 ,在很大程度上克制了色带集中 ,并且色谱带分明 ,大大进步了分别后果.在试验中还增长了定量测定的内容 ,经由过程盘算收受接管率 ,可对同窗们的试验情形进行评判 ,使你们可以或许卖力收集分别物资 ,不竭地提出问题 ,调动了你们做试验的积极性.1 试验材料和办法1. 1 材料分光光度计(岛津 UV22201) ,玻璃色谱柱.柱色谱用硅胶(100～140 目) ,甲基橙(指导剂) ,亚甲基蓝(指导剂) ,H2O∶95 %乙醇 = 1∶ 1 (A 液) ,0. 2mol· L - 1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液) .1. 2 甲基橙尺度曲线的绘制用 A 液做溶剂 ,配制甲基橙系列尺度溶液 ,在λmax = 450nm处测得甲基橙吸光度(表 1) .1. 3 亚甲基蓝尺度曲线的绘制用 B 液做溶剂 ,配制亚甲基蓝系列尺度溶液 ,在λmax = 661nm 处测得亚甲基蓝吸光度(表1) .1. 4 甲基橙和亚甲基蓝的分别在玻璃色谱柱( d = 1cm , l = 10cm)底部用脱脂棉轻轻塞紧 ,称取 4g 硅胶于小烧杯中 ,参加 15mL 蒸馏水 ,用玻璃棒调好.在柱中先参加 1/ 2 柱高的蒸馏水 ,打开活塞 ,在搅动下把糊状硅胶参加柱中 ,同时调剂活塞使流速为 1 滴/ s.当柱中液面将要露出硅胶面时 ,参加 5mL阁下的 A 液 ,当硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用移液管精确参加 0. 50mL 以 A 液做溶剂的混杂液(含甲基橙和亚甲基蓝各为 0. 400 g· L -1) .待此混杂液将要渗入柱内时 ,立刻用 A 液洗脱 ,此时可以不雅察到有光鲜的黄. 蓝两条色带形成.黄色的甲基橙色带随洗脱剂的参加不竭下移 ,而其顶部蓝色带不移动 ,当黄色带到达柱底部时 ,改换接收器 ,全体收集此黄色带 ,洗脱时光约 10 min.此后改用B 液做洗脱剂 ,这时可看到蓝色带开端下移 ,当亚甲基蓝色带到达底部时 ,改换接收器 ,全体收集此蓝色带 ,洗脱时光约 30 min.表 1 甲基橙尺度曲线数据和亚甲基蓝尺度曲线数据甲基橙亚甲基蓝ρ/ mg· L– 1A ρ / mg· L – 1A0. 000 0. 000 0. 000 0. 0001. 9700. 1651. 110 0. 2923. 939 0. 326 1. 666 0. 4205. 909 0. 477 2. 221 0. 5477. 878 0. 635 2. 776 0. 6789. 848 0. 784 3. 331 0. 799甲基橙的吸光度&浓度方程为 A = kρ.个中 k = 0. 0804mg - 1· L.亚甲基蓝的吸光度&浓度方程为 A = kρ,个中 k = 0. 2445mg - 1· L.2 数据处理把收集到的甲基橙溶液用 A 液定容到 25mL 的容量瓶中 ,并在450nm 处测定吸光度 A值,甲基橙的收受接管率可从下公式盘算得到:收受接管率% = ( A ×25 ×10 - 3) / ( km) .个中 k = 0.0804mg - 1· L , m 为甲基橙在混杂物上样中的现实量(mg) . 把收集到的亚甲基蓝溶液用 B 液定容到 100mL 的容量瓶中 ,并在 661nm 处测定吸光度 A 值,亚甲基蓝的收受接管率可从下公式盘算得到:收受接管率% = ( A ×100 ×10 - 3) / ( km) .个中 k = 0. 2445mg - 1· L , m 为亚甲基蓝在混杂物上样中的现实量(mg) .平行 5 次试验的数据成果见表 2.表 2 甲基橙和亚甲基蓝收受接管率试验号甲基橙A 收受接管率亚甲基蓝A 收受接管率1 0. 629 97. 8 % 0. 47697. 3 %2 0. 628 97. 6 % 0. 474 96. 9 %30. 630 97. 9 % 0. 478 97. 8 %4 0. 63398. 4 %0. 476 97. 3 %5 0. 629 97. 8 %0. 479 98. 0 %平均值 97. 9 %97. 5 %3 评论辩论(1) 柱色谱在分别样品时 ,一般请求柱高和直径之比是8∶ 1.分别同样量的甲基橙和亚甲基蓝混杂物需中性氧化铝 6g[1 ]采取本试验办法需硅胶 4g就能达到同样的分别后果.(2) 在进行此试验前 ,需把待分别的混杂物甲基橙和亚甲基蓝溶于溶剂中 ,下面是它们的构造式:可以看到 ,它们构造中既有极性部分 ,又有非极性部分 ,平日试验教材供给的办法是用乙醇做溶剂 ,在现实试验时 ,导致甲基橙色带疏散.原因之一是 ,虽亚甲基蓝溶于乙醇 ,而甲基橙不溶于乙醇等有机溶剂 ,但它们都可溶于水[4 ].本试验改用A液消融样品的利益是:一方面能使混杂物样品充分有用地消融;另一方面 ,柱色谱试验时请求消融样品的溶剂极性和消融度不克不及太大 ,也不克不及太小 ,前者影响样品与吸附剂的吸附 ,后者使柱中样品色带疏散.试验证实:用 A 液为溶剂 ,既增长了消融度 ,又调剂了极性 ,使甲基橙和亚甲基蓝能分散洗脱下来.(3) 试验教材中以中性氧化铝做固定相 ,起首用95 %乙醇做洗脱剂洗脱出亚甲基蓝 ,然后换用 0. 1 mol· L - 1HCl 把甲基橙洗脱下来[1 ],或者换用水洗脱[2 ,3 ].成果它们的色带疏散 ,不清楚 ,洗脱体积大.原因是甲基橙(p k a = 3. 4)和亚甲基蓝(p k a1 = 4.52 ,p k a2 = 5. 85)[4 ]都属于偏酸性物资 ,氧化铝对它们的吸附性大 ,需较长时光才干洗脱下来 ,因而产生集中现象 ,使色带难于不雅察 ,也影响了分别后的处理工作.本试验换用实用于分别酸性物资的硅胶做固定相 ,用 A 液做洗脱剂 ,洗脱次序被从新调剂 ,起首分散洗脱出甲基橙 ,之后改用B 液做洗脱剂 ,分散洗脱亚甲基蓝 ,从而包管这两种物资充分有用地分别.(4) 亚甲基蓝被硅胶吸附后 ,只能用乙醇-水的电解质溶液方可使亚甲基蓝从硅胶柱上洗脱.这一现象的说明为:亚甲基蓝分子中有一部分构造相当于季铵盐 ,以离子态消失 ,仅用水或极性较强的有机溶剂洗脱不克不及使它从偏酸性硅胶上解吸 ,而单独用电解质水溶液固然加强了电解质的离子与亚甲基蓝分子中的季铵离子部分的感化力 ,但与亚甲基蓝构造中的非极性部分感化力衰 ,故洗脱才能衰 ,如许单独用电解质水溶液也达不到有用洗脱的目标 ,所以只有在有机溶剂中加些电解质水溶液 ,才干同时知足上述请求.电解质可以选用HCl. NH4Cl.NH4NO3. (NH4) 2SO4. NaCl. Na2SO4. ZnSO4. Na2CO3等物资 ,因为亚甲基蓝构造中有 Cl-,斟酌到不带入杂质离子 ,所以选用B 液做亚甲基蓝的洗脱剂.(5) 在柱色谱试验教授教养中 ,因为缺乏对学生试验情形的评判尺度 ,学生试验开端时较卖力 ,当混杂物在柱中被分别开 ,以为达到了试验请求 , 往往就不细心收集柱平分别出的物资.我们针对这一方面的缺乏 ,设计用移液管定量上样 ,对收集到的物资测定吸光度 ,然后依据标我们针对这一方面的缺乏 ,设计用移液管定量上样 ,对收集到的物资测定吸光度 ,然后依据尺度曲线 ,盘算每一种物资的收受接管率.因为本试验在装柱. 上样. 洗脱和收集等项操纵之外还练习学生的定量操纵 ,对于造就他们试验中千锤百炼的科学立场 ,起到了较好的后果.参考文献1 燕福生,张鲁雁.有机化学试验.哈尔滨:黑龙江科学技巧出版社,19952 谷珉珉,贾韵仪,姚子鹏.有机化学试验.上海:复旦大学出版社,19913 周科衍,吕俊平易近.有机化学试验.北京:高级教导出版社,19784 张孙玮,汤福隆,张泰,等.现代化学试剂.第二分册,化学剖析试剂.北京:化学工业出版社,1987。
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六、注意事项
1、吸附剂的选择和活化 2、洗脱剂的选择： 对未知样品先用极性小的溶剂洗脱， 再用极性大的溶剂洗脱 3、装柱的技术：松紧度 4、吸附剂的用量： 5、柱高：柱子太高洗脱慢
思考题 （1）装柱不均匀或有气泡，裂缝，将会造成什么后 果？如何避免？ （2）极性大的组分为什么要用极性较大的溶剂洗脱？ （3）在氧化铝柱子上若分离下列各组混合物，哪一 个组分先被洗脱下来？
柱色谱与薄层色谱之间的区别与联 系（答2）
薄层色谱和柱色谱不同点：固定相的形 状和展开剂的移动方向 薄层色谱和柱色谱相同点：在分离原理 上基本相同。
3、柱色谱（柱层析） （1）在薄层色谱的基础上，进行混合物的分离 （2）分类：吸附型（Al2O3、硅胶G等作吸附剂） 分配型（硅藻土、纤维素等作支持剂）（答6） （3）吸附柱色谱 1）吸附剂：一般采用表面积很大，经过活化的多孔 性或粉状的固体 氧化铝（酸性、中性、碱性）3种（答7） a、用前应纯化并在105-110℃活化0.5h，于烘 箱中自然冷却 (答8) b、吸附剂用量 被分离样品的量与吸附剂用量之比 被分离样品：吸附剂量=1：30-40或100倍(答9）
洗脱时应注意：（答10） （1）向柱内加入95%乙醇溶液洗脱（可以通过注射器沿管 壁或安装滴液漏斗）在恒压或加压条件下进行洗脱。控制 流出速度1滴/秒。逐渐出现色层带分离。 （2）第一色层带到达色谱柱底部时，立即用锥形瓶收集第 一色层的溶液，直到其完全被洗出。【注意】洗脱时切勿 使溶剂流干！ （3）然后，改用水溶液作为洗脱剂，当第二色层带到达色 谱柱底部时，立即收集第二色层的的溶液，直到其完全被 洗出。 （4）用量筒分别量取所分离出来的两种溶液的体积后，倒 入指定的回收瓶中。 （5）分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸 耳球从活塞 向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出。使 用过的吸附剂倒入垃圾桶里。
操作步骤
粘合薄层板的铺制：
称取羧甲基纤维素钠(CMC-Na) 0.75g，加 入100ml水中加热使溶解，放冷，放置后取 13ml,再分次加入硅胶5g，调成糊状后倒在清 洁的玻璃板上，可幌动或转动玻板，使其均 匀流布于整块玻板上，而获得均匀的液层。 将玻璃平放晾干，然后于110℃活化40分钟， 置干燥器中贮存备用。
实验二 柱色谱法分离甲基橙和 亚甲基蓝＆硅胶粘合薄 层板的铺制
指导老师 黄红霞
色谱法是分离纯化和鉴定有机物的重 要方法之一。 色谱法可分为柱色谱、纸色谱、薄层色 谱、气相色谱及高效液相色谱等类型。
思考题：
1、色谱法的基本原理? 2 、柱色谱与薄层色谱之间有怎样的区别与联系 3 、如何选择洗脱剂？ 4 、装柱时，应该注意哪些问题？ 5、 色谱柱一般的直径和高度比例是多少? 6 、柱色谱分为几类?分别用什么作吸附剂? 7、 常用的三氧化二铝吸附剂分为几种? 8、 吸附剂在使用前必须如何处理? 9、 被分离样品的量与吸附剂用量之比是多少? 10、 洗脱时要注意些什么 ?
三、仪器和试剂 1.仪器 锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱 2.试剂 中性氧化铝、石英砂、乙醇（95%）、 甲基橙、亚甲基蓝
四、装置图
洗脱
装柱
五、实验步骤
装柱：
（1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱 脂棉花将色谱柱垂直固定在铁架台上，关闭活塞
(2) 填固定相：向柱中加入已经润湿的 Al2O3 （7g Al2O3+95%乙醇拌匀）至柱体积的1/2 （3）用洗耳球敲打柱身使氧化铝装填紧密，打开 活塞，用小锥型瓶承接, 控制滴速为1 滴/秒,装完 后在上面加一层石英沙（约5mm）。操作时要注 意吸附剂始终不能露出液面。
实验步骤（续）
加样：当乙醇液面刚好流至石英砂平面相切时， 立刻关闭活塞，向柱内滴加10滴甲基橙和亚甲基 蓝的混合物（乙醇溶液），打开活塞。 洗脱：待液面降至石英砂层时用少量95%乙醇洗 下附在管壁的色素（少量多次），然后用95%乙 醇作为洗脱剂，控制流速（约为1滴/秒），当亚 甲基蓝色带洗出时，更换锥形瓶收集洗脱液，直 至洗脱液无色。更换锥形瓶，并改用蒸馏水继续 洗脱，用另外的锥形瓶收集，直到甲基橙全部被 洗脱下来。
2）样品： 3）洗脱剂：溶剂的结构与吸附能力的关系 化合物的吸附性与它们的极性成正比即
极性大吸附力强，后洗脱。
洗脱剂的选择（答3） 第一，先极性小的，再极性大的 可以是单一溶剂，也可是混合溶剂 第二，溶剂纯度要高并经干燥过的 4）色谱柱的装填分为： 干法和湿法两种（今天用湿法） 柱高和柱直径之比=7.5 ：1（答5）
思考题 1.薄层色谱的铺板要领是什么？ 2涂层的均匀度对实验有何影响？
和
Hale Waihona Puke 和完！硅胶粘合薄层板 的铺制
薄层色谱基本原理
薄层色谱（Thin Layer Chromatography） 常用TLC表示，它是将固定相均匀地涂 在薄板（如玻璃板）上，依靠毛细作用 力或重力，使流动相通过固定相的一种 色谱。
特点：
快，需十至几十分钟，同时展开多个 试样。 试样预处理简单，对试样限制少。 载样量比较大，适用于制备。 仪器简单，操作方便。 分离能力较强。 灵敏度较高。
柱色谱：1905 年俄科学家茨维持首次采用 装有碳酸钙的柱子，分离叶绿素获得成功 而创立了柱色谱法。 分类：常用的有吸附色谱和分配色谱两类。 前者常用氧化铝或硅胶为吸附剂。后者以 硅胶、硅藻土等为支持剂，以吸收大量的 液体为固定相。（答1）当加入洗脱剂时，由 于不同化合物吸附能力不同，因而以不同 的速度沿柱向下流动，继续洗脱时，吸附 能力弱的组分随溶剂首先流出。在连续洗 脱过程中，不同组分或不同色带就能分别 收集，从而达到分离纯化的目的。
实验二 柱色谱法分离甲基橙和甲基 蓝
一、实验目的
1. 了解柱色谱的分离原理。 2．掌握柱色谱法的实验操作技术。
二、实验原理
甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示: 甲基橙 亚甲基蓝
由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂 对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不 同,极性小、吸附能力弱、解析速度快的亚甲基蓝先被 洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解析速度慢的甲基 橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。本实验以 中性氧化铝为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚 甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
常用洗脱剂的极性：
石油醚＜ 环己烷＜ 四氯化碳＜ 甲苯＜ 苯 ＜ 二氯甲烷＜ 氯仿＜ 乙醚＜乙酸乙酯＜ 丙酮＜ 乙醇＜甲醇＜ 水＜ 乙酸
装柱时应该注意的问题（答4）
装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝， 否则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影响 样品的分离，应用质软的物体如吸耳球等 轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排 除气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无 凹凸面．
薄层色谱法的主要类型和吸附色谱原理
吸附薄层色谱法
原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、 再吸附、再解吸附的过程。 吸附系数不等实现分离。
一般极性强的组分K大，Rf值小；极性弱的组分
K小，Rf值大。
分配薄层色谱法
吸附薄层色谱的吸附剂
吸附剂 硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。 原理：硅醇基(吸附中心)与极性基团形成氢键 （吸附性）。 组分与硅醇基形成氢键（被吸附）的能力不同 而分离。 应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、 醛类等 硅胶活度与含水量的关系：含水量高，活性级高， 活度低。 活化：加热至105℃左右，除去吸附水提高活度。 （注意温度不可过高）